文摘

microrna的表达变化可以影响肿瘤细胞的生存能力和行为,对癌症治疗的影响。在这项研究中,mir - 155 - 5 - p的表达,mir - 203 - a - 3 - p,和mir - 223 - 3 - p MCF7癌症细胞系研究暴露在氧化锌纳米颗粒通过绿色合成路线。提到ZnO-NPs是紫外可见光谱的特征,DLS、XRD、红外光谱,FE-SEM, EDX,电动电势,AFM分析。细胞进行了研究使用ZnO-NPs microrna的调查包括麻省理工对MCF7细胞毒性测试,mda - mb - 231和高频电炉细胞系。此外,细胞凋亡进行了化验使用形态分析,荧光染料、流式细胞术、和评价caspase-3 caspase-8基因表达。生物学性质等的抗氧化和抗菌活性ZnO-NPs被认为是这些小说。MTT检测表明,抑制浓度(IC50)ZnO-NPs 24 h后是11.16μ60.08 g / mL,μ26.3 g / mL,μMCF7 g / mL, mda - mb - 231,分别和高频电炉细胞。的存在结果显示减少表达mir - 155 - 5 - p, mir - 203 - a - 3 - p,和mir - 223 - 3 - p MCF7细胞治疗时的IC50浓度ZnO-NPs (11.16μg / mL)。抗氧化活性结果显示EC50值为57.19μ和31.5克/毫升μ分别在DPPH g / mL, abt化验。的抗菌活性ZnO-NPs决心对革兰氏阴性和革兰氏阳性细菌和真菌菌株使用麦克风和MBC化验。这些NPs有一个显著的影响在减少microrna的表达在乳腺癌细胞。最后,ZnO-NPs施加抗氧化和抗菌的活动。

1。介绍

生物医学纳米材料最近欢迎更多的关注,因为他们的明显的生物学特性和生物利用率(1]。纳米粒子被合成多个令人兴奋和新奇的特性,帮助他们开发的完全不相关的领域,如nanodiagnostics [2,纳米3,抗真菌4),抗氧化剂(5),发光6],抗癌药物/基因传递[7,光催化潜力(8]。

氧化锌纳米颗粒(ZnO-NPs)是必不可少的金属氧化物由于其令人印象深刻的特性和各领域的完整的应用程序9]。与其它金属氧化物相比,ZnO-NPs很简单,低成本,无毒,biosafe,和生物相容性,被用作化妆品、显示的生物医学的目的,如药、抗菌、抗癌,和糖尿病治疗,伤口愈合,抗炎,bioimaging [10,11]。这些亮点ZnO-NPs已经引入了更多的关注在生物医学的利用率。此外,氧化锌通常被认为是安全的建议作为一个被FDA (GRAS)材料(7,12]。此外,它还可以生成活性氧(ROS)在紫外线照射下辐射破坏细菌细胞膜(13]。

Saponaria officinalis (s . officinalis),也被称为肥皂草,属于石竹科的家庭(14]。的根Saponaria植物含有碳水化合物,色氨酸糖苷:saponarozidy saponarozid, A, D,等等。然而,生物碱,抗坏血酸、黄酮类化合物、牡荆素,saponarin, saponaretin发现在树叶15]。

皂苷具有多种生物活性,包括抗氧化、免疫刺激剂,王亚南,抗溃疡的,止泻剂,抗癌,抗肿瘤,抗血小板治疗糖尿病药,抗生素效果(16,17]。

小分子核糖核酸(microrna)非编码RNA序列估计有20 - 25个核苷酸长度已经保存在各种各样的物种(18,19]。microrna能控制生物功能的多样性,包括细胞分裂、增殖,凋亡,入侵,转移,发展,代谢,肿瘤发生[20.]。这些分子调控基因表达的转录后的主要通过绑定到目标mrna(3′端非翻译区21]。

几个microrna被发现控制乳腺癌肿瘤的形成和发展,因此作为oncomiRs,肿瘤抑制大鹏展翅,或转移mir - 155等大鹏展翅,mir - 203, mir - 223 (21- - - - - -25]。

一个重要的近期发现关于mir - 155在乳腺癌的作用是与BRCA1的关系(26]。乳腺癌敏感性基因BRCA1,参与DNA损伤修复和细胞周期进程。修改的BRCA1相关改善乳腺癌的高风险(26]。Smad4 NMuMG细胞中,一个关键信号分子TGF -β通路,可以绑定到BIC启动子和丰富mir - 155的表达水平,从而增加了TGFβemt过程(27]。

小分子核糖核酸,mir - 223超表达负责downmodulating STAT5, ITGA3,国家管制当局方面表达的蛋白质水平。符合mir - 223的作用,有证据表明整合蛋白,特别是ITGA3和ITGB1,由外而内的重要介质,由内向外信号在癌症,和他们的损耗会导致减少细胞迁移和转移(28]。相反,国家管制当局方面是一种已知的致癌基因,既定的活跃在乳腺癌和其他预测mir - 223的目标,比如PI3K成员和监管机构(29日]。

在许多microrna量化,mir - 203是在转移性细胞中表达下调与nonmetastatic乳腺癌细胞(23]。各种差别基因表达分析显示,对这些基因与细胞活性和附着力,如CD44、ROCK1, PTK2 mir - 135和mir - 203细胞治疗。mir - 203还有一个重要的角色在Runx2的表达在乳腺癌细胞和影响他们的致瘤的特征,两者兼而有之在体外和在活的有机体内(23]。值得注意的是,重建与Runx2恢复细胞的迁移能力交付mir - 203 (23]。

考虑到大量的预后,大鹏展翅的诊断和治疗效果30.),我们研究了氧化锌纳米颗粒特征的影响,合成的水提物美国officinalis,在改变大鹏和相关生物效应的表达在乳腺癌细胞。

2。材料和方法

2.1。生物合成的ZnO-NPs

新鲜的Saponaria officinalis收集从Hezar Masjed山脉(36°59′04.0 N, 59°21′21.4 E)。树叶被用自来水洗多次清洗,脱水十天25°C。实验室实验用双蒸馏水。(ddw)中所描述的Saponaria officinalis树叶(10 g的干叶)在100毫升的ddw准备。然后,他们被放置在70°C的加热器搅拌器30分钟。提取过滤,储存在4°C。

准备50毫升1更易与L二水醋酸锌的解决方案,0.0097克锌(CH3首席运营官)2.2H2O(默克公司、德国、CAS编号:5970-45-6)溶解在去离子水。固体完全溶解后,解决方案是最终的体积与去离子水稀释。

叶提取物加入50毫升的二水醋酸锌锌(CH3首席运营官)2.2H2在35°C O 3 h磁搅拌器pH值调整到11被缓慢的增加1 M氢氧化钠(默克公司、德国)。沉淀NPs是干和存储即将发表的研究。

2.2。描述

分析了生物ZnO-NPs由DLS (Cordouan Vasco3,法国),uv - 2550分光光度计(日本岛津制作所2600年我),FE-SEM + EDX (TESCAN MIRA3,布尔诺,捷克共和国),x射线衍射(意大利GNR分析仪器),傅里叶变换红外光谱法(美国的那些时光阿凡达370热Nicolet),电动电势(CAD、ζ紧凑、法国)和原子力显微镜(JPK,德国)。

2.3。在体外细胞毒性试验
2.3.1。细胞培养和生存能力

MCF7、mda - mb - 231和高频电炉细胞系是购买的巴斯德研究所(德黑兰,伊朗)和在rpmi - 1640培养基培养(Biosera、法国)补充10%胎牛血清(抗生素的边后卫,Biosera,法国)和1%低于5%股份有限公司2在37°C。

在体外细胞毒性ZnO-NPs MTT试验研究。细胞被播种在乘96孔板(5×103一夜之间)和孵化。24小时后,各种ZnO-NPs浓度(0,7.8,15.6,31.2,62.5,125年,250年和500年μg / mL)被添加到井和随后在37°C孵化24日,48和72 h。年底的潜伏期,20μL MTT的解决方案(5毫克/毫升在中,Sigma-Aldrich)添加到井,板是孵化4 h。上层清液取代了DMSO (150μuL / Sigma-Aldrich),吸光度测量在545海里。试验进行了一式三份,重复三次。集成电路50(half-maximal抑制浓度)样本的浓度,抑制细胞的50%。集成电路50被用来评估ZnO-NPs的细胞毒性细胞上使用以下公式:

2.3.2。吖啶橙/ Propidium碘染色(AO / PI)

足够的细胞数量在培养24小时37°C湿润有限公司2孵化器。组织目标是处理ZnO-NPs,而对照组治疗0.1% DMSO溶液。使用胰岛素的细胞分离。荧光显微镜是由AO /π染料添加到解决方案在一个平等的比率(10μL)。生存能力评估是基于染料的吸收的细胞。AO染料只是附加的双链DNA可行和早期凋亡细胞,而坏死,坏死细胞只吸收π染料。

2.3.3。赫斯特染色

赫斯特被公认为染色,同时显示DNA和其它细胞的形成或蛋白质(31日]。除此之外,新报告报道,暴露的赫斯特33258年,赫斯特33342年到紫外线导致漂白和photoconversion排序与激发/发射蓝色/绿色和绿色/红色范围。在这个实验中,MCF7和高频电炉细胞接种与ZnO-NPs 24 h。然后,细胞被收集和传播在清洁幻灯片。之后,幻灯片被风干,固定在甲醇和丙酮(3:1,v / v)染色与赫斯特33258年的20分钟(0.5 g / mL) 37°C,然后洗去除游离染料。核形态分析了荧光显微镜(日本尼康80 i Eclipse)认识到细胞凋亡。

2.3.4。细胞周期实验

流式细胞仪是用来检查动能细胞周期和凋亡细胞培养32]。为此,大约5×10324小时后细胞生长。接下来,这些细胞被呈现给不同浓度的ZnO-NPs RPMI媒介。24小时后,漂流和连接获得的细胞,PBS清洗后,然后向分裂超小型电子管,650年染色μLπ液体和孵化15分钟的黑暗。最终,证实了细胞死亡循环血细胞计数器设备(美国,正欲)。

2.3.5。中存在的mRNA和microrna的检测

caspase-3和caspase-8作为凋亡基因的表达和三个小分子核糖核酸的生物标志物的计算是通过中存在特殊的引物。β肌动蛋白和GAPDH是用作规范化还存在基因,和小核仁的RNA (SNORD 47)是用来看家基因microrna(表1)。

表1
正向和反向引物为目标设计的序列的基因。

总RNA是利用一起获得的总RNA净化设备(加拿大安大略省)。然后,互补dna(互补)生成与TruScript合成第一链cDNA工具包(加拿大安大略省)和BON-miR互补脱氧核糖核酸合成装备(Bonyakhteh、伊朗)。实时qPCR是由ABI设备第一步(美国应用生物系统公司)。

2.4。抗氧化活性
2.4.1。DPPH自由基清除活性

抗氧化活性进行了使用修改后的2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH)分析根据Brand-Williams描述的方法et al。33]。39.4毫克的DPPH(美国Sigma-Aldrich)溶解在100毫升乙醇96%准备DPPH 0.1毫米股票和存储在冰箱(2 - 8°C)进行进一步的评估。相反,3毫克的NPs了3毫升ddw达到1毫克/毫升的浓度。执行连续稀释浓度的氧化锌(0 - 500μ与500年g / mL)和混合μL(1毫米DPPH的解决方案。组合是在黑暗中在室温下孵化大约30分钟。叔丁基羟基茴香醚(BHA),一个强大的抗氧化剂,被认为是积极的控制,和乙醇被认为是消极的控制。吸光度是阅读在517海里。%抑制清除活动评估如下: 在哪里一个c和一个年代分别控制和样品的吸光度。

2.4.2。abt+自由基清除活性

abt+(2、2-azino-bis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic酸)的解决方案是由指令Giao et al。34]。abt+(加拿大Biobasic)与过硫酸钾混合(美国Sigma-Aldrich)在蒸馏水和孵化一天25°C在黑暗中。abt+脱色试验需要abt的生产+通过abt氧化发色团+以过硫酸钾(35]。abt ZnO-NPs的抑制+30分钟后自由基被估计为734海里。%抑制评估如下: 在哪里一个c和一个年代分别控制和样品的吸光度。

2.5。抗菌活性

不同浓度的抗菌活性ZnO-NPs (0 - 1250μ写明ATCC菌株g / mL)评估反对铜绿假单胞菌,大肠杆菌,枯草芽孢杆菌,金黄色葡萄球菌,答:baumannii,白念珠菌应用汤采用计划按照CLSI指南(36]。最低抑制浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)测量和报告如前所述37]。

2.6。统计分析

数据分析使用社会科学统计软件包(SPSS)软件版本21(美国IBM公司,芝加哥,IL)。所有的测试进行了三次,结果被当作平均值±标准偏差(SD)。创建图表使用GraphPad Prism 8.0(美国CA GraphPad软件Inc .)。每个样品的归一化基因被Livak计算方法(2−ΔΔCt)。计算组之间的基因表达差异,GenEX软件(Exiqon / MultiD分析)使用6.0版本。单向方差分析统计分析多个比较Dunn-Sidak事后测试。统计显著性水平是公认的 。

3所示。结果

3.1。ZnO-NPs”特征
3.1.1。紫外可见光谱分析

烤箱的白色沉淀脱水生产氧化锌纳米颗粒。去离子水的粉添加记录的吸收峰在366 nm ZnO-NPs(图1(一))。先前的研究描述了ZnO-NPs给一个吸收峰340至380海里,暴露的表面等离子体共振(SPR) [5,38]。

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图1
绿色合成ZnO-NP特征数据。(a)的紫外可见光谱反应混合物美国officinalis介导的氧化锌纳米颗粒(ZnO-NPs)。(b)大小的分布美国officinalis分析了DLS ZnO-NPs。结果表明,纳米粒子的分散,纳米颗粒的平均尺寸是31.5海里。(c)的x射线衍射模式美国officinalisZnO-NPs。纳米粒子的XRD模式显示不同的峰值为31.73°,34.39°,36.22°,47.51°,56.56°,62.81°,66.29°,67.91°,和68.98°。因此,x射线衍射模式确认ZnO-NPs晶体结构。(d)的红外光谱美国officinalisZnO-NPs。纳米颗粒溶液中的峰值识别描述化合物的有效的组织美国officinalis减少锌生产纳米颗粒。(e)的场发射扫描电子显微镜(FE-SEM)的观点美国officinalisZnO-NPs。的形成ZnO-NPs与扫描电子显微镜观察,发现他们的形式和尺寸。基于显微图像,纳米粒子有一个球形。(f)能量色散x射线(EDX)光谱美国officinalisZnO-NPs。1 keV显示周围的吸收峰发现氧化锌纳米粒子的反应混合物中的配置和外观。(g)原子力显微镜(AFM)美国officinalisZnO-NPs。AFM的形象显示了合成氧化锌纳米颗粒直径为1.6 nm。(h)电动电势图的美国officinalisZnO-NPs。电动电势评估合成氧化锌纳米颗粒的稳定性。纳米粒子被发现的电动电势−23.5 mV,这表明纳米粒子几乎是稳定的。
3.1.2。DLS测量

动态光散射装置被估计金属纳米颗粒的厚度(基于)。的平均大小ZnO-NPs估计由DLS测量、和分布与强度图被显示在图1 (b)。合成ZnO-NPs的平均大小为31.5 nm。

3.1.3。XRD分析

x射线衍射模式山峰ZnO-NPs观察与2θ31.73°(1 0 0),34.39°(0 0 2),36.22°(1 0 1)47.51°(1 0 2),56.56°(1 1 0),62.81°(1 0 3),66.29°(2 0 0),67.91°(1 1 2)和68.98°(2 0 1)。因此,XRD模式匹配与所述规定的粉末衍射标准联合委员会(詹妮弗)(文件没有:36 - 1451)对金属锌(39]。

水晶大小估计从完整的峰值对应(1 0 1)平面通过应用德拜谢乐公式(40]。

谢乐公式是 ,0.89 =谢乐常数, = x射线波长(1.5418),β=应用(半宽度)θ=布拉格衍射的角。微晶的大小(1 0 0)、(0 0 2),(1 0 1)(1 0 2),(1 1 0)、(1 0 3)(2 0 0)、(1 1 2)和(2 0 1)峰被发现是18.58,18.71,18.80,19.52,20.29,20.94,21.34,21.54,和21.68 nm,分别和微晶尺寸计算的平均值为20.16 nm(图1 (c))。

3.1.4。红外光谱分析

红外光谱出现在峰值为3405.07,2933.48,1574.8,1425.65,1017.03,878.09,561.54,和424.52厘米−1(图1 (d))。峰值为3405.07厘米−1比赛地的水(41]。峰值为2933.48厘米−1指的是炔烃碳氢键的振动拉伸(42]。峰值为1574.8厘米−1指C = O官能团(42]。峰值为1425.65厘米−1表明在蛋白质酰胺胺nh联系(2]。峰值为1017.03厘米−1结果从碳氮的脂族胺(2]。峰值为878.09厘米−1对应于芳香族碳氢键。的山峰的范围400 - 600厘米−1被分配到氧化锌(42]。

3.1.5。FE-SEM和EDX

氧化锌的FE-SEM形象图所示1 (e)。ZnO-NPs决心的直径在20 - 80纳米的范围与球形形式和粗糙的封面。这张图片确认XRD微晶的价值数据。的形态与我们的研究相比,biosynthesized ZnO-NPs Sujatha等。提出了相似的形状和大小介于80和130海里(43]。

EDX分析证实O和锌元素的出勤率表面的示例(图1 (f))。Vanathi等人报告了类似的山峰(44]。

3.1.6。原子力显微镜分析

原子力显微镜(AFM)是用来识别样本的外部形态和粗糙度。一百个随机粒子的直径是估计的Z设在(高度)。确定合成氧化锌纳米颗粒的直径是1.6海里。它可以观察到的完全图1 (g)ZnO-NP形态的三维图像是球形。

3.1.7。电动电势测量

电动电势(ZP)提供信息的表面电荷和ZnO-NPs的稳定。在这项研究中,有一个小ZnO-NPs电动电势的不同。一般来说,电动电势峰的后果为ZnO-NPs pH值约在−23.5 mV,这表明它是常数由于静电斥力(图1 (h))。

3.2。抗癌的研究
3.2.1之上。细胞生存能力

细胞毒性增加了氧化锌纳米颗粒的浓度增加。有一个修改的速度控制细胞的可行性。MCF7、mda - mb - 231,和高频电炉细胞治疗ZnO-NPs (0 - 500μg / mL)。集成电路50生物ZnO-NPs计算为11.16μ26.3 g / mL,μ60.08 g / mL,μg / mL MCF7、高频电炉和mda - mb - 231,分别后24 h孵化(图2)。由于高阻mda - mb - 231细胞株的纳米颗粒与对照组相比,它被排除在实验(表2)。

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图2
MTT测定分析。结果平均数±标准差(n= 3)。的集成电路50值被计算为11.16μ26.3 g / mL,μ60.08 g / mL,μg / mL MCF7、高频电炉和mda - mb - 231,分别与ZnO-NPs 24 h后孵化。图基的图表进行比较和显示的抗增殖能力ZnO-NPs对高频电炉(a), MCF7 (b)和mda - mb - 231 (c)细胞系后,24日,48和72小时。非线性回归s形剂量反应和氧化锌浓度的对数转换显示对数浓度测试细胞系后,24日,48和72小时(d-f)。双向方差分析显示不同时间和浓度之间的显著水平MCF7,高频电炉,mda - mb - 231细胞系(胃肠道)。
表2
非线性回归反曲的剂量反应曲线计算不同的IC50值的ZnO-NPs乳腺癌细胞系(MCF7和mda - mb - 231)和高频电炉。
3.2.2。测定Cytomorphological细胞系上修改

各种形态的修改被公认在ZnO-NP-treated MCF7和高频电炉细胞;然而,这样的效果没有说在未经处理的细胞。观察形态学变化,包括膜完整性的破坏,细胞生长抑制,细胞质密度,细胞收缩(图3)。结果还证实MCF7和高频电炉细胞受到ZnO-NPs死亡率,而未经处理的细胞活跃。

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图3
癌细胞暴露在IC的形态学改变50(24小时)的浓度ZnO-NPs与控制。(一)未经处理的MCF7细胞。(b) MCF7细胞的形态与IC ZnO-NP治疗后50剂量(集成电路50= 11.16μg / mL)。(c)未经处理高频电炉细胞形态。(d)高频电炉与IC ZnO-NP治疗后细胞的形态50剂量(集成电路50= 26.3μg / mL)。
3.3。细胞凋亡检测
3.3.1。AO /π形态学变化

已知细胞凋亡细胞的形态学差异形式和染色质减少。染色细胞被探测是可行的(浅绿色),作为最初的凋亡,凋亡晚期(橙色荧光),和不能存活的细胞(红色荧光(图)4)。此外,不同的核形态,包括凝结核,起泡,膜,和凋亡的身体在ZnO-NP-treated MCF7和高频电炉细胞。

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图4
氧化锌纳米颗粒对凋亡形态学变化的影响MCF7和高频电炉细胞株AO / PI染色。(一)未经处理的MCF7细胞。(b) MCF7细胞的形态与IC ZnO-NP治疗后50剂量(集成电路50= 11.16μg / mL)。(c)未经处理高频电炉细胞形态。(d)高频电炉与IC ZnO-NP治疗后细胞的形态50剂量(集成电路50= 26.3μg / mL)。
3.3.2。赫斯特染色

赫斯特染色,后治疗MCF7 11.16μ26.3 g / mL和高频电炉μ克/毫升ZnO-NPs 24 h,凋亡等细胞收缩迹象,核合并,分裂是明显的。在对照组,细胞是常规的形状和揭示自然核结构(图5)。这些形态变化表明激活半胱天冬酶的级联。

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图5
氧化锌纳米颗粒的影响(ZnO-NPs)凋亡形态学变化MCF7由赫斯特染色和高频电炉细胞株。(一)未经处理的MCF7细胞。(b) MCF7细胞的形态与IC ZnO-NP治疗后50剂量(集成电路50= 11.16μg / mL)。(c)未经处理高频电炉细胞形态。(d)高频电炉与IC ZnO-NP治疗后细胞的形态50剂量(集成电路50= 26.3μg / mL)。
3.3.3。细胞周期阶段分布

流式细胞术结果显示增加sub-G1细胞治疗ZnO-NPs相比控制。人口sub-G1细胞MCF7细胞暴露于11.16μg / mL ZnO-NPs显示凋亡细胞增加61.6%,而在对照组,这个数据是6.4%。相似的百分比差异sub-G1人口26.3高频电炉细胞治疗μg / mL ZnO-NPs(36.9%)和参与(0.9%)被发现。ZnO-NP剂量的增加导致sub-G1高峰值的增量。在IC sub-G1峰值50浓度ZnO-NPs证实凋亡的死亡(图6)。

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图6
的影响美国officinalis介导ZnO-NPs在MCF7细胞周期进程和高频电炉细胞系。MCF7细胞周期分析和高频电炉细胞治疗24小时后为11.16μ和26.3克/毫升μ克/毫升ZnO-NPs分别显示sub-G1细胞阶段的人口增加而增加ZnO-NPs IC50与未经处理的细胞。
3.3.4。Caspase-3 Caspase-8基因表达

Caspase-3和caspase-8直接在细胞凋亡过程中的作用。实时定量PCR进行检查的影响ZnO-NPs caspase-3和caspase-8 MCF7和高频电炉细胞的基因表达。结果表明,这些基因的表达水平不同ZnO-NP-treated浓度(IC50)与HFF-1和参与细胞MCF7细胞, (图7)(表3)。

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图7
Caspase-3 Caspase-8基因表达在乳腺癌MCF7细胞和高频电炉24 h后孵化IC50剂量的ZnO-NP浓度。图基比较的褶皱变化值进行caspase-3和半胱天冬酶8基因表达ZnO-NP-treated和未经处理的细胞基础β肌动蛋白和GAPDH内部控制。图中分析,对照组被用作参考计算折叠变化。∗指的意义, 。
表3
的t以及执行caspase-3褶皱变化值和caspase-8 ZnO-NP-treated细胞基因表达分析。
3.3.5。MicroRNA的表达

mir - 155 - 5 - p的表达在高频电炉细胞治疗对照组(2.15±0.32倍 )。然而,mir - 155 - 5 - p的表达显著下调MCF7治疗细胞系相比控制( )。

mir - 223 - 3的表达在高频电炉- p细胞治疗为2.57±0.32倍:集团( )。然而,在MCF7, mir - 223 - 3 - p, mir - 155 - 5 - p,是表达下调与ZnO-NPs治疗后。有一个有意义的差异mir - 203 - 3 - p表达式之间的治疗和控制组织在高频电炉和MCF7细胞系( 和 ,)(表4)。mir - 203 - 3 - p表达式为0.40±0.32,0.14±0.12高频电炉和MCF7细胞治疗后,分别(图8)。

表4
的t之间的微rna表达的比较以及进行控制和治疗组MCF7和高频电炉细胞系。
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图8
图基多重比较显示x层次的表达mir - 155 - 5 - p (a), mir - 223 - 3 - p (b),和mir - 203 - 3 p (c)的治疗和控制组之间在高频电炉和MCF7细胞系。在这些图,对照组为每个细胞株作为参照组。每个单元格线分别进行了分析,只有他们的图并排显示。换句话说,它是不可能来比较不同的细胞系;例如,高频电炉对照组不能与MCF7对照组相比。∗指的意义 ,和∗∗指 。
3.4。抗氧化活性
3.4.1。DPPH自由基清除活性

DPPH实验是用来评估ZnO-NPs的抗氧化活性。自由基清除活性是通过阅读吸光度测量使用紫外可见分光光度计在517海里。结果表明,氧化锌纳米颗粒抑制自由基与对照组(数字9(一个)和9 (b))。电子商务50确定在57.19μg / mL ZnO-NPs(表5),而在同一浓度的标准样品显示100%活动抑制。的最大ZnO-NPs清除活动是500年观察到μg / mL,抑制了91.07%。

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图9
ZnO-NPs abt和DPPH自由基的抑制效果。(一)非线性回归的s形剂量反应和对数变换ZnO-NP浓度显示,电子商务50abt和DPPH对数1.498和1.757,分别。(b)双向方差分析显示abt和DPPH测试之间的显著差异在不同浓度的ZnO-NPs。(c) Dunn-Šidak比较测试表明显著差异相比,abt和DPPH自由基的浓度。 ; 。
表5
非线性回归反曲的剂量反应曲线计算EC50对数和nonlogarithmic abt和DPPH自由基的浓度。
3.4.2。abt自由基清除活性

自由基清除效果与abt增加ZnO-NPs浓度上升。数据9(一个)和9 (b)证实了ZnO-NP abt自由基抑制影响。电子商务50计算了在31.5μ克/毫升(表5)。abt的最大清除活动是观察到500年的91.91%μZnO-NPs g / mL。总的来说,自由基清除的结果是提高了ZnO-NPs强度的上升。比较的数量在不同浓度的abt和DPPH自由基清除图所示9 (c)。

3.5。抗菌活性

根据当前的文章,绿色ZnO-NPs被发现拥有优秀的抗菌和抗真菌活性45]。麦克风和MBC ZnO-NPs(20 - 40海里)的平均粒径对写明ATCC菌株铜绿假单胞菌,大肠杆菌,枯草芽孢杆菌,金黄色葡萄球菌,答:baumannii,白念珠菌测量(图10)。50%以上的细菌细胞壁都失去了(表6)。接种麦克风井也决定了MBC值在营养琼脂培养基。因此,纳米粒子可以作为一个潜在的应用抗菌因子和支持来克服所带来的并发症发病细菌控制的改善抗常规杀菌剂。


图10
生长抑制的发生美国officinalis对革兰氏阳性菌株介导ZnO-NP浓度(枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌),革兰氏阴性菌株(a . baumannii大肠杆菌,和铜绿假单胞菌),白念珠菌。这个图表显示美国officinalis合成氧化锌纳米颗粒显示出强大的抗菌效果金黄色葡萄球菌和一个较弱的影响铜绿假单胞菌。
表6
对微生物的麦克风和MBC ZnO-NPs。

4所示。讨论

癌症细胞的大量已知的特征之一是他们逃避凋亡的能力,它允许无限和入侵扩散46]。31.5 nm ZnO-NPs合成利用绿色合成方法使用美国officinalis水叶提取物。可行性、形态学和癌细胞的凋亡特性与ZnO-NPs评估治疗后。我们的发现证实了凋亡之间存在显著的正相关死亡和无毒ZnO-NPs浓度。许多研究已经证明了各种金属纳米颗粒的细胞毒性效应,包括ZnO-NPs癌细胞。

Anitha et al。45)报道,集成电路50ZnO-NPs从面包果gomezianus水果是9.34μg / mL后24 h MCF7细胞线。他们也证实了ZnO-NPs的抗菌和抗真菌活性金黄色葡萄球菌和黑曲霉。

哈肯伯格et al。47]显示ZnO-NPs在鼻粘膜细胞的毒性评估通过MTT和台盼蓝化验,他们报道了50个细胞毒性μ克/毫升浓度。Mahdizadeh et al。48)确定集成电路50ZnO-NPs从Cucumis梅洛40μ在MCF7 20 g / mLμg / mL吐蕃细胞24小时后孵化。Umar et al。49)表明,ZnO-NPs含羞带有抗菌、抗氧化和细胞毒性的活动。他们报告说,在100年μ克/毫升的浓度ZnO-NPs抑制mda - mb - 231细胞数量和MCF7 76.8%和80.2%,分别。汉利et al。50)显示的细胞毒性效应ZnO-NPs正常和恶性乳腺上皮细胞,和前列腺细胞系,以及T和B淋巴细胞。T和B淋巴细胞正常显示最大阻力ZnO-NPs的毒性。发现粒子电荷可以影响细胞毒性感应,因为阳离子NPs比中性和阴离子微粒毒性更强,可以应用于癌症治疗。

在这项研究中,在MCF7细胞毒性诱导,mda - mb - 231,高频电炉是评估治疗后ZnO-NPs叶提取物的合成美国officinalis,这是化验在24、48和72小时。结果显示显著抑制NPs对乳腺癌细胞的生长的影响。与对照组相比,美国officinalisZnO-NPs细胞的大小和数目减少,并导致细胞变形。这是发现,随着浓度增加,ZnO-NPs对癌细胞的细胞毒性效应是增加了。

Alarifi和同事探讨了细胞毒性、氧化和proapoptotic ZnO-NPs的影响在人类皮肤黑色素瘤A375细胞。结果显示细胞凋亡的诱导证实了染色体致密化和caspase-3激活测试。同时,更可观的观察DNA损伤细胞治疗ZnO-NPs浓度最高。这些结果表明,ZnO-NPs基因毒性的潜力A375细胞和可能诱发氧化应激。短期调查基因毒性和诱导的凋亡反应ZnO-NPs需要进一步调查,以确定是否有可能接触ZnO-NPs的长期后果51]。

在人类角质细胞的一项研究中,ZnO-NPs被发现增加活性氧(ROS)生产和氧化应激。这项研究的结果表明,ZnO-NPs有可能刺激ROS的产生。因此,nanotoxicity是次要的活性氧产量的机理,氧化应激和细胞凋亡52]。不同治疗策略已被用于针对Cas检测3蛋白在乳腺癌细胞53]。研究已经证实ZnO-NPs proapoptotic属性。在目前的研究中,在细胞凋亡过程中相关基因的表达分析(caspase-3和caspase-8)表示,ZnO-NPs准备使用的叶子美国officinalis了proapoptotic影响相比,控制细胞因为浓度为11.16μg / mL,显示MCF7细胞程序性细胞死亡的50%,以及诱导caspase-8表达式。我们所知,这是第一个研究评估的影响绿色合成ZnO-NPs apoptosis-effector基因的表达,中科院高3,中科院8在人类乳腺癌细胞MCF7和包皮成纤维细胞(高频电炉)。Mahdizadeh et al。48)报道,ZnO-NPsCucumis梅洛inodorus还存在钝化通过诱导癌症细胞生长的活性,引发细胞凋亡。他们的数据表明,ZnO-NPs可以增加细胞的数量sub-G1阶段和诱导DNA破坏和细胞凋亡,与目前的结果一致。白等。54]显示,proapoptotic ZnO-NPs通过诱导活性氧的影响生产和随后的氧化应激在人类卵巢癌细胞(SKOV3)。

氧化应激是由激活细胞凋亡诱导的还存在,可以达到高潮。Endonova et al。15显示的叶子美国officinalis抗氧化类黄酮含量最高(53.39毫克/克)相比,根和花集群。我们比较ZnO-NPs BHA的抗氧化能力。我们的结果显示显著的抗氧化能力为ZnO-NPs 500 (91.91%)μ克/毫升浓度,abt为91.07%,DPPH(图9)。

ZnO-NPs抗真菌和抗菌特性(55,56]。他们有生物效应等微生物链球菌,昙花,大肠杆菌,铜绿假单胞菌,增加细菌细胞膜的通透性(57]。在这方面,我们的研究表明,ZnO-NPs等致病菌的抗菌效果大肠杆菌,铜绿假单胞菌,金黄色葡萄球菌,枯草芽孢杆菌,a . baumannii和白念珠菌。本研究的发现,首次提出了使用mir - 155 - 5 - p, mir - 223 - 3 - p, mir - 203 - a - 3 - p的潜在效应物ZnO-NPs-synthesized使用绿色方法在高频电炉和MCF7细胞线。总之,mir - 155的表达水平——5 - p, mir - 223 - 3 - p, mir - 203 - a - 3 - p与ZnO-NPs治疗后表达下调。

5。结论

目前的研究显示一个使用水性环保合成ZnO-NPs叶中提取的美国officinalis第一次。合成NPs展出一个球形20 - 40纳米尺寸范围。合成ZnO-NPs显示潜在的自由基清除能力,由DPPH证实和abt化验。绿色合成ZnO-NPs证明对病原菌的抑制效应。此外,ZnO-NPs有效抑制MCF7癌细胞的增长下在体外条件和表达下调大鹏展翅的表达。根据最近的研究显示,合成ZnO-NPs可能潜在的生物医学和制药应用。

数据可用性

与本研究相关的数据可以从第一作者访问在一个合理的请求。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。