文摘

客观的。血清总抗氧化能力是由抗氧化物质的总质量和抗氧化能力每单位质量(平均活动)。本研究的目的是开发一种方法来确定质量的抗氧化物质在人类血清和平均活动。方法。血清标本收集从100年主题分别来自两个不同的年龄组:超过75岁,20 - 40岁。测试血清稀释成一系列浓度,标准氧化代理(KMnO之后₄对高锰酸钾法和我₂iodimetry)被添加到每个血清浓度和吸光度的混合物(光密度、OD)测量。的OD值和对数稀释系数(lgT)滴定得到的最后,lgT的可以被认为是质量(M)的抗氧化物质,总抗氧化能力(Ta)计算方程Ta = 100 / (OD1 + 2 * OD2 + 2 * OD3 + 2 * OD4 + OD5),和平均活动(一)是计算=助教/ M。结果。高锰酸钾法生成iodimetric方法相似的结果。与年轻组相比,总抗氧化能力- 75年年龄段被发现显著降低,随着抗氧化物质质量的下降和平均活动水平在人类血清。结论。本文描述的方法适用于确定的平均质量活动和人类血清抗氧化物质。

1。介绍

人体的抗氧化能力与健康密切相关,在人类血清总抗氧化能力是由酶和非酶的组件。氧化应激之间的平衡是中断发生在生产活性氧(ROS)和内源性抗氧化机制来对抗活性氧的影响或修理造成损坏(1]。大多数研究都集中在组织的抗氧化能力通过确定身体的活动的主要antioxidases或水平的低分子量非酶的抗氧化剂2- - - - - -4]。抗氧化功能降低时,自由基损伤的程度更严重。氧化应激是严重心血管疾病的一个关键特性,ROS参与所有疾病阶段,从内皮功能障碍与动脉粥样硬化斑块形成5]。越来越多的证据表明,抗氧化能力异常在人类密切相关心血管和肾脏疾病、痛风、肥胖,糖尿病2型(5- - - - - -10]。因此,确定身体的抗氧化能力已成为主要的医学研究的兴趣。

血清中抗氧化物质是一个混合的组件,总抗氧化能力通常是作为身体的抗氧化能力的一个指标,反映的总和血清中的抗氧化物质(11- - - - - -13]。抗氧化能力可获得每单位质量的总质量除以总抗氧化能力的物质。在这里,我们定义了抗氧化能力每单位质量的平均活性抗氧化物质。因此,血清总抗氧化能力的下降可能是由于降低血清中的抗氧化物质的总质量,减少他们的平均活动,或两者的结合。因此,有必要确定人类血清总抗氧化能力,抗氧化物质的质量,以及这些物质的平均活动。

存在一些接受了抗氧化能力评价方法在体外,如铁离子还原/氧化电阻测量,测量氧自由基吸收能力,和化学发光14]。然而,这些最受欢迎的方法测量血清抗氧化能力的质量不能确定抗氧化剂或这些物质的平均活动。本文提出了一种方法来确定质量活动和血清中抗氧化物质使用氧化还原滴定法和恒定的标准的氧化剂。高锰酸钾和iodimetric方法是合适的氧化还原滴定的方法。抗氧化剂的质量会逐渐减少在一系列的稀释测试标本;抗氧化剂原现在几乎消失后第一稀释,稀释,这可以被看作是一个指标的抗氧化物质。的平均活性抗氧化物质可以从总抗氧化能力除以获得抗氧化物质的质量。我们还包括主题从两个不同的年龄组在我们的研究中测试这种方法确定总抗氧化能力,大量的抗氧化剂,平均活动。这种技术潜在的应用在临床研究关于抗氧化防御和氧化应激。

2。材料和方法

2.1。血清标本

血清标本从50岁以上的健康人群随机收集75年(25岁男性和25名女性;平均年龄年)和另一组50名健康受试者年龄在20到40年(25个男性和25名女性;平均年龄年)。这些团体治疗,分别为- 75(旧)组和控制(年轻)。所有受试者北方汉族。本研究协议是大连医科大学的伦理委员会批准。

2.2。高锰酸钾法

测试血清与蒸馏水稀释成一系列浓度(1:10;1:20;1:40岁;1:80;和1:160)。对于每一个血清浓度,20μL整除拍摄和添加到96 - ELISA塑胶板。一个空白的控制(无血清)成立。

准备一个5更易/ L KMnO的解决方案₄,我们花了79毫克的KMnO₄并在100毫升蒸馏水溶解它。100年整除μ这个解决方案的L被添加到包含血清标本的塑胶板,摇晃混合均匀。

混合物在水浴加热30分钟在37°C,之后一个enzyme-labeling仪器被用来确定混合物的吸光度(570海里)的光学密度、OD。

2.3。Iodimetry

准备50更易与碘原液和0.25更易与L / L工作的解决方案,我们将碘片(6.5 g,升华)和碘化钾(17.5 g)溶解在去离子水(500毫升)股票的解决方案;解决方案被稀释股票的解决方案准备工作(1毫升)用去离子水(199毫升)。5 g / L淀粉溶液制备以0.5 g的可溶性淀粉和100毫升蒸馏水溶解。淀粉溶液的体积相同被添加到碘溶液为显色指示剂来获取一个深蓝色的碘溶液。

方法用于稀释测试血清是高锰酸钾的类似方法。对于每一个血清浓度,20μL整除拍摄和添加到96 - ELISA塑胶板。一个200μL整除的深蓝色的碘溶液被添加到每个血清样本的塑胶板,摇晃混合均匀。混合物在水浴加热30分钟在37°C,因此enzyme-labeling仪器被用来确定溶液的吸光度(OD 570海里)。

2.4。血清总抗氧化能力的计算

体积恒定的标准氧化剂(碘或高锰酸钾)被添加到一系列的稀释测试样品(两倍稀释),逐点和测量进行的方式。OD值的变化安排从最小到最大。OD值改变由于氧化代理反应降低血清样本。血清稀释因素(1:10;1:20;1:40岁;1:80;1:160)转换为对数刻度(1.0,1.30,1.6,1.9,和2.2)(图简单的计算1)。下的面积绘制线反向代表血清总抗氧化能力,如下解释。

总面积是求和得到的曲线下的一系列较小的区域形成。例如,10和20的区域代表稀释因素可以被视为由OD1梯形的面积有限,OD2, lgT1 lgT2,广场()可以计算如下:

对于这一系列的稀释,稀释间隔是常数,这意味着是一个常数,因此可以忽略。因此,= (OD1 + OD2)和总面积=

在这里,面积越大,血清总抗氧化能力越低。换句话说,总抗氧化能力表示为的倒数曲线下的面积。更好地介绍这个图中,分子乘以100如下: Ta代表总抗氧化能力;助教越大,越大的血清总抗氧化能力。

2.5。血清质量计算的抗氧化剂

体积恒定的标准氧化剂添加到一系列的稀释测试标本。吸光度值(OD值)的标本被安排从最小到最大。减去的OD值相邻浓度,最大的区别是绝对值定义为滴定跳范围内。线性回归分析得到较低和较高的值在范围和lgTx,分别和跳线之间的交叉角度范围和空白控制(图2)计算如下: 在哪里代表了滴定的抗氧化活性消失了,最大的对数稀释因子(值)隐含的大质量血清中抗氧化剂;ODcontrol代表空白的OD值控制;ODhigh ODlow代表更高和更低的OD值旁边跳范围;lgTlow代表最低的对数稀释旁边跳的范围。

对血清样本稀释浓度的1:10,1:20日1:40岁,1:80年,和1:160年,OD值分别为0.095,0.496,1.176,1.682,和1.986,分别;空白的OD值控制为2.07。跳的范围是1:20 - 1:40,抗氧化物质质量的计算

2.6。计算平均血清中抗氧化剂的活性

平均活动()的抗氧化物质得到除以总抗氧化能力(Ta)质量的抗氧化物质():

2.7。统计分析

的独立样本t以及用于评估的两组之间的差异。两种方法的结果之间的关系的强度由皮尔森相关评估测试。上述分析是实现使用SPSS统计分析软件(SPSS Inc .,芝加哥,IL)。值小于0.05(双尾)被认为是重要的。

3所示。结果

高锰酸钾法,滴定跳范围之间的100试样1:10 - 1:20,而跳跃范围之间的iodimetric方法1:20 - 1:40。

总抗氧化能力、平均活动和大规模的抗氧化物质在- 75组和对照组如表所示1和2,分别。高锰酸钾法生成由iodimetric方法相似的结果。与对照组相比,血清总抗氧化能力的参与者- 75年集团被发现显著降低(),而抗氧化剂物质的平均活动显著减少(),抗氧化物质的质量也明显下降()。

总抗氧化能力的测定,平均活性的抗氧化物质,抗氧化物质的质量,高锰酸钾法被发现与iodimetry显著相关(图3)。

4所示。讨论

高锰酸钾和iodimetric方法是典型的氧化还原滴定技术与知名和可靠的滴定法的原则。测定血清标本,我们用中性滴定条件充分维护有机抗氧化剂的活动,以确保测试条件大致相符intracorporeal条件,虽然反应在中性条件这两个方法是复杂的。不同方法的分析原理和实验条件不同,从血清组件和干扰的程度是不同的。因此需要使用两种方法来实现交叉验证。比较分析使用高锰酸钾和iodimetric方法有紧密的关联,这意味着这些是有效的测量方法没有显著水平的血清成分的干扰。因为目前的抗氧化能力评价方法需要酸性条件下,我们建立了一个分析方法来衡量抗氧化物质的总质量和血清中抗氧化能力每单位质量基于经典高锰酸钾和iodimetric方法代替。特殊物质的测定方法,如氧自由基吸收能力,氢氧自由基清除剂活动,超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶,仍然不适合建立总质量的分析方法来衡量每单位质量的抗氧化物质和抗氧化能力。

一组示例包括一系列浓度的准备。OD值改变时被安排从最小到最大。与传统方法相比,我们的分析中同时考虑了五个OD值。因此,我们使用反向反应曲线下的面积代表血清总抗氧化能力。我们发现,血清总抗氧化能力在- 75组明显低于对照组。

连续稀释血清中的抗氧化剂含量逐渐减少。抗氧化剂最初出现在低水平消失后第一个稀释和抗氧化活性被发现是零。因此,滴定跳范围可以被理解为变化的活动主要抗氧化物质从低水平的血清浓度低于检测极限。然而,一些抗氧化剂最初出现在高水平保持在相对较高的水平在高稀释因素。因此,一个值之间的交叉点跳线范围和空白的控制设在表示质量的抗氧化剂。它是可行的获得的平均抗氧化活性物质血清总抗氧化能力除以质量的抗氧化剂。

在我们的实验中高锰酸钾法所产生的结果与由iodimetric方法显著相关。这两种方法有效地相互验证,表明计算模型是合理的和滴定技术是可靠的。

人体拥有复杂的抗氧化系统来防止氧化损伤(15- - - - - -17]。与对照组相比,血清总抗氧化能力在> 75岁年龄组明显减少和降低质量的抗氧化物质在人类血清和平均活动。这一发现表明,减少总抗氧化能力与抗氧化物质的总质量的下降和平均活动> 75岁年龄组。抗氧化物质减少的身份和潜在机制的细节都需要进一步研究。

抗氧化能力异常与心血管和脑血管疾病、肿瘤、动脉粥样硬化、糖尿病、中枢神经系统疾病在别人(18- - - - - -20.]。仅仅集中在总抗氧化能力可能会忽视一些抗氧化能力的重要构成要素。我们的方法提供了潜在的新措施和实验指标研究一系列疾病和潜在的临床应用。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。