文摘

从活性成分莽草酸(SA)的中药和北半球₂(CH₂)_n哦,(6),合成了一系列新的水溶性Pt (II)配合物PtL^安妮Cl₂,我^安妮螯合二胺配体与碳链共价连接到SA (L^安妮= SA-NH (CH₂)_nNHCH₂CH₂NH₂;l^一个,;l^b,;l^c,;l^d,;l^e,)。元素分析的结果,但是,毛细管电泳,¹H,¹³C核磁共振表明,只有一个产品(同分异构体)在目前的实验条件下,形成PtL的协调模式^安妮Cl₂是two-amine双齿。他们的在体外细胞毒性行为通过MTT法评价,向BEL7404只这些化合物表现出较低的细胞毒性,这应该与低亲油性。五Pt的交互(II)配合物与DNA琼脂糖凝胶电泳进行调查,这表明工党(II)配合物能诱导DNA改变。我们还研究了Pt (II)配合物的相互作用gmp和质¹H NMR和发现PtL^bCl₂,PtL^cCl₂,PtL^dCl₂可能会与gmp mono-GMP和bis-GMP形成加合物。此外,细胞循环分析表明PtL^bCl₂,PtL^cCl₂导致细胞G₂步孵化后被捕,72 h。总的来说,这些水溶性Pt (II)配合物与DNA相互作用主要通过共价绑定,这阻碍了DNA合成和复制,从而诱发细胞毒性减弱随着碳链的长度增加。

1。介绍

Pt (II)配合物已经证明成功的临床应用顺铂的抗癌效果,新的铂类抗癌药物是高度期望的(1- - - - - -12]。到目前为止,已经有五个铂类抗癌药物在临床应用中,包括三个fda批准的铂化合物:顺铂、卡铂,铂,nedaplatin用于日本和lobaplatin批准用于中国。此外,新的、非传统化合物picoplatin (AMD473) [13]和ProLindac [14)以及铂(IV)复合物,如satraplatin [15,tetraplatin tetrachloro-trans-R、R-cyclohexane-1 2-diamine铂(IV)和ipropltin (dichlorodihydroxobis(异丙胺)铂(IV) [16,17),被评估的临床试验。然而,它们的有效性仍然是阻碍了临床问题,如收购或固有电阻限制了频谱的癌症是可以治疗的,和高毒性导致的副作用和限制剂量,可以注册(18]。在过去的三十年里,巨大的努力已经针对策略可以提高细胞积累,口服生物利用度,在血,和肿瘤靶向13]。

在过去的二十年里,水溶性铂(II)配合物被合成,也不能只保留抗癌活性但有效口服后吸收(19]。最常见的方法来准备这些化合物是一种结构方法,氯化的配体被螯合取代羧酸盐,草酸,羧甲20.- - - - - -22]。除此之外,还有许多其他方法,如铂terpyridine复合物与糖化乙炔化物和arylacetylide配体(23),水溶性高分子铂配合(24,25),水溶性porphyrin-Pt (II)配合26,27),形成水溶性有机金属铂的类似物28),或超分子nanoencapsulation技术(29日]。然而,水溶性铂配合物存档通过胺配体,而不是氨是最有趣的,因为承运人配体提供广谱的抗肿瘤活性30.]。例如,水溶性铂(II)配合物的二胺螯合配体轴承氨基酸取代基类型(31日carbohydrate-metal复合物),已经被证明是一个潜在的有效方法(32- - - - - -36]。但是这个复杂的合成非常费力,也缺乏临床资料。相比之下,莽草酸(3 r 4 s 5 r-trihydroxy-1-cyclohexane-1-carboxylic酸,SA),中药的活性成分分离八角verum钩。f。生长在中国广西,已表现出良好的水溶性。它被用作DNA疫苗载体(37]和[]标记蛙皮素减少肝摄取和肾保留(38- - - - - -40]。尽管法雷尔和合作者报道莽草酸复合物铂(41),二胺耦合莽草酸铂配合物仍有待研究。在这项工作中,我们合成了一系列的铂配合物莽草酸配体与二胺耦合(;,;,;,;,;,),调查他们的细胞毒性和dna结合特性。

2。材料和方法

2.1。材料

所有化学品都从商业来源和购买作为收到。所有溶剂均为分析纯,使用前未经纯化除非另有说明。合成Pt (II)配合物的配体溶解在H₂O浓度的5.0毫米为股票的解决方案准备DNA结合的研究。二钠盐的guanosine-5′一磷酸(5′gmp)购买从σ。pUC19质粒DNA从豆类生物技术有限公司,购买中国的大连。癌症细胞系来源于中国的上海生命科学研究院。

2.2。仪器和方法

¹H和¹³C NMR光谱被记录下来的力量av - 500核磁共振光谱仪与化学位移相对于四甲基硅烷(ppm)。元素分析(C、H、N)进行一系列珀金埃尔默II中文/ O 2400年分析仪器。应急服务国际公司质谱测定力量HCT电喷雾质谱仪。铂(II)配合物的纯度进行热费希尔科学Exactive质谱计。毛细管电泳是记录在安捷伦HP3D高性能毛细管电泳。Flow-cytometric分析由使用FACScan fluorescence-activated细胞分选仪(流式细胞仪)。

2.3。合成

的化合物1 e ~,2 e ~,3 e ~准备在霍姆斯等报道的方法。42,43]。数据与文献吻合较好。的化合物~ 4 e,5 e ~,6 ~ e(),7 ~ e()通过改进合成方法,为其它斯et al。37- - - - - -40,44- - - - - -47)(见方案1)。

复合1。¹H NMR (500 MHz, CDCl₃):(m, 5 h, C₆H₅),5.39 (br年代,1 H, H (a)), 5.11 (2 H, CH₂),3.69 (t)赫兹,2 H, H (c)), 3.35 (m, 2 H, H (b));质217.84 [M + Na)⁺。

复合1 b。¹H NMR (500 MHz, CDCl₃):(m, 5 h, C₆H₅),5.47 (br年代,1 H, H (a)), 5.12 (2 H, CH₂),3.66 (t)赫兹,2 H, H (c)), 3.32 (m, 2 H, H (b)), 1.70 (m, 4 H, 2×CH₂);质209.85 [M + H]⁺。

复合1 c。¹H NMR (500 MHz, CDCl₃):(m, 5 h, C₆H₅),5.20 (br年代,1 H, H (a)), 5.12 (2 H, CH₂),3.67 (m, 2 H, H (c)), 3.25 (m, 2 H, H (b)), 1.91 (br年代,1 H, H (d)), 1.61 (m, 4 H, 2×CH₂);质223.85 [M + H]⁺。

复合1 d。¹H NMR (500 MHz, CDCl₃):(m, 5 h, C₆H₅),5.12 (2 h, CH₂),3.66 (t)赫兹,2 H, H (c)), 3.23 (m, 2 H, H (b)), 1.57 (m, 4 H, 2×CH₂),1.42 (m, 2 h, CH₂);质259.92 [M + Na)⁺。

复合1 e。¹H NMR (500 MHz, CDCl₃):(m, 5 h, C₆H₅),5.09 (2 h, CH₂),3.62 (t)赫兹,2 H, H (c)), 3.20 (m, 2 H, H (b)), 1.66 (br年代,1 H, H (d)), 1.54 (m, 4 H, 2×CH₂),1.36 (m, 4 h, 2×CH₂);质274.01 [M + Na)⁺。

复合2。¹H NMR (500 MHz, CDCl₃):(m, 5 h, C₆H₅),5.02 (2 h, CH₂),3.24 (m, 2 H, H (a)), 2.90 (m, 4 H, H (b)和H (c)), 2.69 (m, 2 H, H (d));质238.10 [M + H]⁺。

复合2 b。¹H NMR (500 MHz, CDCl₃):(m, 5 h, C₆H₅),5.04 (2 h, CH₂),3.45 (m, 2 H, H (a)), 3.30 (m, 4 H, H (b)和H (c)), 2.89 (m, 2 H, H (d)), 1.89 (m, 2 H, CH₂);质251.95 [M + H]⁺。

复合2摄氏度。¹H NMR (500 MHz, CDCl₃):(m, 5 h, C₆H₅),5.09 (2 h, CH₂),3.27 (t)赫兹,2 H, H (a)), 2.96 (m, 2 H, H (c)), 2.86 (m, 4 H, H (b)和H (d)), 1.90 (m, 4 H, 2×CH₂);质266.91 [M + H]⁺。

复合二维。¹H NMR (500 MHz, CDCl₃):(m, 5 h, C₆H₅),5.10 (2 h, CH₂),3.20 (m, 2 H, H (a)), 2.82 (t)赫兹,2 H, H (c)), 2.67 (m, 2 H, H (b)), 2.41 (m, 2 H, H (d)), 1.53 (m, 4 H, 2×CH₂),1.36 (m, 2 h, CH₂);质280.01 [M + H]⁺。

复合2 e。¹H NMR (500 MHz, CDCl₃):(m, 5 h, C₆H₅),5.09 (2 h, CH₂),3.16 (m, 2 H, H (a)), 2.40 (m, 6 H, H (b), H (c)和H (d)), 1.50 (m, 4 H, 2×CH₂),1.33 (m, 4 h, 2×CH₂);质294.06 [M + H]⁺。

复合3。¹H NMR (500 MHz, CDCl₃):(m, 5 h, C₆H₅),5.11 (2 h, CH₂),3.33 (m, 8 H, H (a), H (b), H (c)和H (d)), 1.47(年代,9 H, 3×CH₃),1.44 (9 h, 3×CH₃);质460.23 [M + Na)⁺。

复合3 b。¹H NMR (500 MHz, CDCl₃):(m, 5 h, C₆H₅),5.09 (2 h, CH₂),3.25 (m, 8 H, H (a), H (b), H (c)和H (d)), 1.46 (m, 11 H, CH₂和3×CH₃),1.43 (9 h, 3×CH₃);质486.21、488.16 (M + Cl)⁻。

复合3 c。¹H NMR (500 MHz, CDCl₃):(m, 5 h, C₆H₅),5.11 (2 h, CH₂),3.23 (m, 8 H, H (a), H (b), H (c)和H (d)), 1.55 (m, 4 H, 2×CH₂),1.47 (9 h, 3×CH₃),1.44 (9 h, 3×CH₃);质500.21、502.18 (M + Cl)⁻。

复合3 d。¹H NMR (500 MHz, CDCl₃):(m, 5 h, C₆H₅),5.08 (2 h, CH₂),3.26 (m, 8 H, H (a), H (b), H (c)和H (d)), 1.51 (m, 4 H, 2×CH₂),1.44 (9 h, 3×CH₃),1.42 (9 h, 3×CH₃),1.28 (m, 2 h, CH₂);质514.22、516.17 (M + Cl)⁻。

复合3 e。¹H NMR (500 MHz, CDCl₃):(m, 5 h, C₆H₅),5.08 (2 h, CH₂),3.27 (m, 8 H, H (a), H (b), H (c)和H (d)), 1.49 (m, 4 H, 2×CH₂),1.45 (9 h, 3×CH₃),1.42 (9 h, 3×CH₃),1.27 (m, 4 h, 2×CH₂);质528.24、530.21 (M + Cl)⁻。

复合4。的合成和表征4已经完善(42),但在这部作品中,合成常规修改(44- - - - - -47]。10% Pd / C(0.4克)和甲酸铵(5.04克,80.0更易)悬挂在30毫升甲醇被添加到解决方案3(4.37克,10.0更易)甲醇(50毫升)氮。反应混合物大力搅拌2.5 h在40°C。这个解决方案是允许冷却和过滤c盐然后蒸发减少压力。通过反复蒸发残余甲酸铵被CH₂Cl₂。由此产生的石油。收益率:98%。¹H NMR (500 MHz, CDCl₃):(br年代,1 H, H (a)), 3.52 (t)赫兹,2 H, H (b)), 3.34 (m, 2 H, H (c)), 3.25 (m, 2 H, H (d)), 3.11 (m, 2 H, H (e)), 1.46(年代,9 H, 3×CH₃),1.42 (9 h, 3×CH₃);¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃):,155.8,47.3,46.1 NCH₂CH₂NH NH, 38.9, 38.1₂CH₂CH₂N, 80.4、78.8 C (CH₃)₃27.9 CH₃;质::304.10 (M + H)⁺。

复合4 b。这个过程是类似的4除了3 b是使用。收益率:95%。¹H NMR (500 MHz, CDCl₃):(br年代,1 H, H (a)), 3.19 (m, 4 H, H (b)和H (c)), 3.12 (t)赫兹,2 H, H (d)), 2.82 (m, 2 H, H (e)), 1.81 (m, 2 H, CH₂),1.34 (9 h, 3×CH₃),1.31 (9 h, 3×CH₃);¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃):,155.6,46.3,43.6 NCH₂CH₂NH NH, 38.7, 36.3, 25.6₂CH₂CH₂CH₂N, 79.9、78.5 C (CH₃)₃,27.8 6×CH₃;质::318.16 (M + H)⁺。

复合4摄氏度。这个过程是类似的4除了3 c是使用。收益率:98%。¹H NMR (500 MHz, CDCl₃):(br年代,1 H, H (a)), 3.22 (m, 4 H, H (b)和H (c)), 3.13 (m, 2 H, H (d)), 2.67 (m, 2 H, H (e)), 1.41 (m, 4 H, 2×CH₂),1.29 (9 h, 3×CH₃),1.26 (9 h, 3×CH₃);¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃),155.5,46.6,46.0 NCH₂CH₂NH, 39.5, 38.8, 27.1, 24.7 NH₂CH₂CH₂CH₂CH₂N, 79.9、78.5 C (CH₃)₃,27.7 6×CH₃;质::332.17 (M + H)⁺。

复合4 d。这个过程是类似的4除了3 d是使用。收益率:94%。¹H NMR (500 MHz, CDCl₃):(br年代,1 H, H (a)), 3.15 (m, 4 H, H (b)和H (c)), 3.09 (m, 2 H, H (d)), 2.68 (m, 2 H, H (e)), 1.39 (m, 4 H, 2×CH₂),1.31 (9 h, 3×CH₃),1.28 (9 h, 3×CH₃),1.18 (m, 2 h, CH₂);¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃),155.5,46.7,45.9 NCH₂CH₂NH, 39.5, 38.8, 27.0, 23.1, 22.3 NH₂CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂N, 79.0、78.3 C (CH₃)₃,27.7,6×CH₃;质::346.21 (M + H)⁺。

复合4 e。这个过程是类似的4除了3 e是使用。收益率:96%。¹H NMR (500 MHz, CDCl₃):(br年代,1 H, H (a)), 3.06 (m, 6 H, H (b), H (c)和H (d)), 2.60 (t)赫兹,2 H, H (b)), 1.39 (m, 4 H, 2×CH₂),1.28 (9 h, 3×CH₃),1.25 (9 h, 3×CH₃),1.19 (m, 2 h, CH₂),1.12 (m, 2 h, CH₂);¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃),155.4,46.9,45.8 NCH₂CH₂NH, 40.1, 38.9, 29.9, 27.3, 25.7 NH₂CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂N, 78.9、78.3 C (CH₃)₃,27.7 6×CH₃;质::360.19 (M + H)⁺。

复合5。这种化合物合成的改性方法报道Bowen et al。48]。SA的溶液(1.65克,9.50更易),DCC(2.17克,10.5更易)和HOBT(1.42克,10.5更易)在DMF(20毫升)搅拌在0°C 1 h。复合4(0.288克,9.50更易)在CH₂Cl₂(10毫升)随后补充道。在室温下搅拌后24 h,混合物被过滤和蒸发压力减少给原油产品由色谱纯化使用CHCl硅胶₃/甲醇20:1作为洗脱液生产所需的产品5。收益率:58%。¹H NMR (500 MHz, CDCl₃):(br年代,1 H, H (1)), 4.35 (m, 1 H, H (2)), 3.96 (m, 1 H, H (3)), 3.60 (m, 1 H, H (4)), 3.37 (m, 4 H, H (d)和H (e)), 3.30 (m, 2 H, H (a)), 3.22 (m, 2 H, H (b)), 2.75 (m, 1 H, H (5)), 2.18 (m, 1 H, H (5)), 1.43 (18 H, 6×CH₃);¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃):,155.9,155.6,133.2,130.3 C = CH, 72.2, 66.2, 65.7 CH-OH, 31.5 CH CH(哦)₂45.5 NCH₂CH₂NHCH NH, 38.9, 38.3₂CH₂N, 80.0、78.7 C (CH₃)₃27.7 CH₃;质::494.26,496.20 (M + Cl)⁻。

复合5 b。这个过程是类似的5除了4 b是使用。收益率:60%。¹H NMR (500 MHz, CDCl₃):(br年代,1 H, H (1)), 4.28 (m, 1 H, H (2)), 3.90 (m, 1 H, H (3)), 3.54 (m, 1 H, H (4)), 3.14 (m, 8 H, H (a), H (b), H (d)和H (e)), 2.67 (m, 1 H, H (5)), 2.14 (m, 1 H, H (5)), 1.62 (m, 2 H, CH₂),1.35 (18 h, 6×CH₃);¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃)C = CH, 155.6, 133.4, 130.1, 72.1, 66.2, 65.8 CH-OH, 31.5 CH CH(哦)₂,46.1,44.0 NCH₂CH₂NHCH NH, 38.9, 36.2, 31.5₂CH₂CH₂N, 79.7、78.6 C (CH₃)₃,27.9 6×CH₃;质::474.19 (M + H)⁺,508.21,510.21 (M + Cl)⁻。

复合5度。这个过程是类似的5除了4摄氏度是使用。收益率:62%。¹H NMR (500 MHz, CDCl₃):(br年代,1 H, H (1)), 4.86 (m, 1 H, H (2)), 3.86 (m, 1 H, H (3)), 3.50 (m, 1 H, H (4)), 3.10 (m, 8 H, H (a), H (b), H (d)和H (e)), 2.63 (m, 1 H, H (5)), 2.07 (m, 1 H, H (5)), 1.39 (m, 4 H, 2×CH₂),1.29 (18 h, 6×CH₃);¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃),155.5,155.0,133.4,129.9 C = CH, 72.1, 66.2, 65.8 CH-OH, 31.6 CH CH(哦)₂,46.4,46.1 NCH₂CH₂NHCH NH, 38.9, 36.2, 31.5₂CH₂CH₂CH₂N, 79.2、78.5 C (CH₃)₃,27.9 6×CH₃;质::488.16 (M + H)⁺,522.21,524.24 (M + Cl)⁻。

复合5 d。这个过程是类似的5除了4 d是使用。收益率:61%。¹H NMR (500 MHz, CDCl₃):(br年代,1 H, H (1)), 4.23 (m, 1 H, H (2)), 3.85 (m, 1 H, H (3)), 3.49 (m, 1 H, H (4)), 3.10 (m, 8 H, H (a), H (b), H (d)和H (e)), 2.63 (m, 1 H, H (5)), 2.05 (m, 1 H, H (5)), 1.39 (m, 4 H, 2×CH₂),1.29 (18 h, 6×CH₃)1.14 (m, 2 h, CH₂);¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃),155.5,155.0,133.4,129.9 C = CH, 72.1, 66.2, 65.8 CH-OH, 31.6 CH CH(哦)₂,46.7,46.0 NCH₂CH₂NH, 39.1, 29.0, 28.5, 27.2, 23.6 NHCH₂CH₂CH₂CH₂CH₂N, 79.1、78.4 C (CH₃)₃,27.8 6×CH₃;质::502.21 (M + H)⁺,536.23,538.20 (M + Cl)⁻。

复合5 e。这个过程是类似的5除了4 e是使用。收益率:61%。¹H NMR (500 MHz, CDCl₃):(br年代,1 H, H (1)), 4.26 (m, 1 H, H (2)), 3.89 (m, 1 H, H (3)), 3.52 (m, 1 H, H (4)), 3.14 (m, 8 H, H (a), H (b), H (d)和H (e)), 2.67 (m, 1 H, H (5)), 2.10 (m, 1 H, H (5)), 1.42 (m, 4 H, 2×CH₂),1.33 (18 h, 6×CH₃),1.22 (m, 4 h, 2×CH₂);¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃),155.6,155.0,133.7,129.7 C = CH, 72.3, 66.2, 65.8 CH-OH, 31.7 CH CH(哦)₂,46.7,46.0 NCH₂CH₂NH, 39.2, 29.0, 28.7, 27.4, 26.1, 25.9 NHCH₂CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂N, 79.1、78.4 C (CH₃)₃,27.8,6×CH₃;质::516.21 (M + H)⁺,550.25,552.24 (M + Cl)⁻。

复合6 ()。复合5(0.688克,1.50更易)溶解在CH₂Cl₂/ EtOH(8: 1、25毫升),盐酸和6 mol / L(3毫升)添加了大力搅拌20分钟。然后,解决方案是蒸发减压下给无色油固体。这是溶解在蒸馏水和CH(30毫升),洗₂Cl₂(3×30毫升),水层集中生产所需的化合物6。收益率:83%。¹H NMR (500 MHz, CD₃SOCD₃):(br年代,2 H, H (a),和2哦),8.31 (br年代,3 H, H (c), H (f),和3-OH), 8.04 (br年代,1 H,哦),6.33 (br年代,1 H, H (1)), 4.12 (m, 1 H, H (2)), 3.76 (m, 1 H, H (3)), 3.44 (m, 3 H, H(4),和CH₂),3.14 (m, 4 H, H (d)和H (e)), 2.99 (t)赫兹,2 H, H (b)), 2.50 (m, 1 H, H (5)), 1.98 (dd,赫兹,赫兹,1 H, H (5));¹³C NMR (125 MHz, D₂O):有限公司,132.2,132.0,C = CH, 71.2, 66.4, 65.7 CH-OH, 30.8 CH CH(哦)₂,47.8,44.3 NHCH₂CH₂NH₂,36.0,35.5 NHCH₂CH₂NH;质::260.02 (M + H)⁺,294.02,296.00 (M + Cl)⁻。

复合6 b ()。这个过程是类似的6除了5 b是使用。收益率:84%。¹H NMR (500 MHz, CD₃SOCD₃):(br年代,2 H, H (a),和2哦),8.38 (br年代,3 H, H (c), H (f),和3-OH), 8.07 (br年代,1 H,哦),6.32 (br年代,1 H, H (1)), 4.17 (m, 1 H, H (2)), 3.82 (m, 1 H, H (3)), 3.50 (m, 1 H, H (4)), 3.18 (m, 6 H, CH₂、H (d)和H (e)), 2.91 (m, 2 H, CH₂),2.80 (m, 2 H, H (b)), 2.46 (m, 1 H, H (5)), 2.00 (dd,赫兹,赫兹,1 H, H (5));¹³C NMR (125 MHz, CD₃SOCD₃):有限公司,132.5,131.3 C = CH, 71.2, 66.3, 65.6 CH-OH, 30.9 CH CH(哦)₂,45.6,44.1 NHCH₂CH₂NH₂,36.1,35.5,25.4 CH₂CH₂CH₂;质:274.01 (M + H)⁺,308.12,310.00 (M + Cl)⁻。

复合6摄氏度()。这个过程是类似的6除了5度是使用。收益率:88%。¹H NMR (500 MHz, CD₃SOCD₃):(br年代,2 H, H (a),和2哦),8.23 (br年代,3 H, H (c), H (f),和3-OH), 7.85 (br年代,1 H,哦),6.22 (br年代,1 H, H (1)), 4.11 (m, 1 H, H (2)), 3.75 (m, 1 H, H (3)), 3.42 (m, 3 H, H (4)), 3.09 (m, 4 H, H (d)和H (e)), 3.04 (m, 2 H, CH₂),2.86 (m, 2 H, H (b)), 2.39 (m, 1 H, H (5)), 1.93 (dd,赫兹,赫兹,1 H, H (5)), 1.53 (m, 2 H, CH₂),1.42 (m, 2 h, CH₂);¹³C NMR (125 MHz, CD₃SOCD₃):有限公司,132.8,130.6 C = CH, 71.0, 66.1, 65.5 CH-OH, 30.6 CH CH(哦)₂,47.5,43.7 NHCH₂CH₂NH₂,38.4,35.2,25.1,22.6 CH₂CH₂CH₂CH₂;质:288.02 (M + H)⁺,322.12,324.07 (M + Cl)⁻。

复合6 d ()。这个过程是类似的6除了5 d是使用。收益率:86%。¹H NMR (500 MHz, CD₃SOCD₃):(br年代,2 H, H (a),和2哦),8.28 (br年代,3 H, H (c), H (f),和3-OH), 7.85 (br年代,1 H,哦),6.27 (br年代,1 H, H (1)), 4.17 (m, 1 H, H (2)), 3.82 (m, 1 H, H (3)), 3.50 (m, 1 H, H (4)), 3.15 (m, 4 H, H (d)和H (e)), 3.10 (m, 2 H, CH₂),2.91 (m, 2 H, H (b)), 2.45 (m, 1 H, H (5)), 1.96 (dd,赫兹,赫兹,1 H, H (5)), 1.62 (m, 2 H, H (b)), 1.44 (m, 2 H, CH₂),1.30 (m, 2 h, CH₂);¹³C NMR (125 MHz, CD₃SOCD₃):有限公司,132.6,132.1 C = CH, 71.3, 67.1, 66.0 CH-OH, 30.9 CH CH(哦)₂,47.4,44.5 NHCH₂CH₂NH₂,39.0,35.8,28.9,25.6,23.7 CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂;质:302.05 (M + H)⁺,336.09,338.06 (M + Cl)⁻。

复合6 e ()。这个过程是类似的6除了5 e是使用。收益率:85%。¹H NMR (500 MHz, CD₃SOCD₃):(br年代,2 H, H (a),和2哦),8.50 (br年代,3 H, H (c), H (f),和3-OH), 7.80 (br年代,1 H,哦),6.28 (br年代,1 H, H (1)), 4.18 (m, 1 H, H (2)), 3.83 (m, 1 H, H (3)), 3.50 (m, 1 H, H (4)), 3.20 (m, 4 H, H (d)和H (e)), 3.10 (m, 2 H, CH₂),2.88 (m, 2 H, H (b)), 2.48 (m, 1 H, H (5)), 2.00 (dd,赫兹,赫兹,1 H, H (5)), 1.66 (m, 2 H, CH₂),1.45 (m, 2 h, CH₂),1.34 (m, 2 h, CH₂),1.27 (m, 2 h, CH₂);¹³C NMR (125 MHz, CD₃SOCD₃)有限公司,131.9,131.7 C = CH, 71.0, 66.7, 65.6 CH-OH, 30.6 CH CH(哦)₂,46.8,44.1 NHCH₂CH₂NH₂,38.6,35.3,28.8,25.9,25.6,25.4 CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂。质:316.01 (M + H)⁺。

复合7一个()。复合6()(0.415克,1.25更易)溶解在EtOH(5毫升)和水(2毫升),和pH值调整到8 - 9和0.25米水Na₂有限公司₃。K的一个解决方案₂竞购₄(0.518克,1.25更易)水(3毫升)添加一滴一滴地,和由此产生的混合物在室温下搅拌12 h在黑暗中。溶剂被移除和残渣由硅胶色谱纯化使用甲醇作为洗脱液买得起的产品作为一个黄色固体。收益率:78%。元素分析(%)计算的。对于C₁₁H₂₁Cl₂N₃O₄Pt·H₂H O: C 24.32, 4.27, 7.73;4.20发现24.11 C, H, N 7.78;¹H NMR (500 MHz, CD₃SOCD₃):(m, 1 H, H (a)), 7.02 (br年代,1 H, H (c)), 6.32 (br年代,2 H, H (f)), 6.39 (br年代,1 H, H (1)), 4.82 (br年代,1 H, 2哦),4.57 (d,赫兹,1 H, 3-OH), 4.74 (br年代,1 H,哦),4.14 (m, 1 H, H (2)), 3.77 (m, 1 H, H (3)), 3.45 (m, 1 H, H (4)), 3.11 (m, 2 H, CH₂),2.87 (m, 2 H, H (b), Pt卫星观测到的肩膀),2.62 (m, 4 H, H (d)和H (e), Pt卫星观测到的肩膀),1.98 (m, 1 H, H (5)), 2.44 (m, 1 H, H (5));¹³C NMR (125 MHz, D₂O):有限公司,132.9,131.8 C = CH, 71.6, 66.6, 66.0 CH-OH, 31.1 CH CH(哦)₂,55.7,51.5 NHCH₂CH₂NH₂,46.7,36.8 NHCH₂CH₂NH;质::565.95,566.98,567.96,568.97,570.00 (M-Cl + DMSO)⁺。

复合7 b ()。这个过程是类似的7一个除了6 b()使用。收益率:82%。元素分析(%)计算的。对于C₁₂H₂₃Cl₂N₃O₄Pt·2 h₂H O: C 25.05, 4.73, 7.30;4.64发现25.12 C, H, N 7.39;¹H NMR (500 MHz, CD₃SOCD₃):(m, 1 H, H (a)), 6.96 (br年代,1 H, H (c)), 6.29 (br年代,2 H, H (f)), 6.24 (br年代,1 H, H (1)), 4.83 (d,赫兹,1 h, 2哦),4.73 (d,赫兹,1 h, 3-OH), 4.57 (d, 1 h,赫兹,哦),4.18 (m, 1 H, H (2)), 3.82 (m, 1 H, H (3)), 3.51 (m, 1 H, H (4)), 3.15 (t)赫兹,2 h, CH₂),2.84 (m, 2 H, H (b), Pt卫星观测到的肩膀),2.58 (m, 4 H, H (d)和H (e), Pt卫星观测到的肩膀),2.47 (m, 1 H, H (5)), 1.98 (m, 1 H, H (5)), 1.75 (m, 2 H, CH₂);¹³C NMR (125 MHz, D₂O):有限公司,133.4,131.1 C = CH, 71.7, 66.6, 66.0 CH-OH, 31.3 CH CH(哦)₂,55.7,50.5 NHCH₂CH₂NH₂,46.9,36.9,26.8 CH₂CH₂CH₂;质::572.08,573.16,574.09,575.09,576.07,577.01,578.09 (M + Cl)⁻。

复合7 c ()。这个过程是类似的7一个除了6摄氏度()使用。收益率:85%。元素分析(%)计算的。对于C₁₃H₂₅Cl₂N₃O₄Pt·2 h₂H O: C 26.49, 4.96, 7.13;4.87发现26.63 C, H, N 7.24;¹H NMR (500 MHz, CD₃SOCD₃):(br年代,1 H, H (a)), 6.99 (br年代,1 H, H (c)), 6.43 (br年代,2 H, H (f)), 6.29 (br年代,1 H, H (1)), 4.88 (d,赫兹,1 h, 2哦),4.79 (d,赫兹,1 h, 3-OH), 4.63 (d,赫兹,1 H,哦),4.18 (m, 1 H, H (2)), 3.82 (m, 1 H, H (3)), 3.51 (m, 1 H, H (4)), 3.11 (t)赫兹,2 h, CH₂),2.84 (m, 2 H, H (b), Pt卫星观测到的肩膀),2.59 (m, 4 H, H (d)和H (e), Pt卫星观测到的肩膀),2.47 (m, 1 H, H (5)), 1.97 (dd,赫兹,赫兹,1 H, H (5)), 1.56 (m, 2 H, CH₂),1.43 (m, 2 h, CH₂);¹³C NMR (125 MHz, CD₃SOCD₃):有限公司,133.4,131.4 C = CH, 71.7, 66.8, 66.1 CH-OH, 31.5 CH CH(哦)₂,54.4,51.6 NHCH₂CH₂NH₂,45.6,39.3,26.3,24.6 CH₂CH₂CH₂CH₂;质::585.99,587.02,588.00,589.01,589.98,590.99,592.01 (M + Cl)⁻。

复合7 d ()。这个过程是类似的7一个除了6 d()使用。收益率:84%。元素分析(%)计算的。对于C₁₄H₂₇Cl₂N₃O₄Pt·H₂H O: C 28.72, 4.99, 7.18;4.78发现28.65 C, H, N 7.25;¹H NMR (500 MHz, CD₃SOCD₃):(br年代,1 H, H (a)), 6.95 (br年代,1 H, H (c)), 6.42 (br年代,2 H, H (f)), 6.23 (br年代,1 H, H (2)), 4.84 (d,赫兹,1 h, 2哦),4.76 (d,赫兹,1 h, 3-OH), 4.59 (d,赫兹,1 H,哦),4.13 (m, 1 H, H (2)), 3.76 (m, 1 H, H (3)), 3.50 (m, 1 H, H (4)), 3.04 (m, 2 H, CH₂),2.82 (t)赫兹2 H, H (b), Pt卫星观测到的肩膀),2.55 (m, 4 H, H (d)和H (e), Pt卫星观测到的肩膀),2.41 (m, 1 H, H (5)), 1.91 (dd,赫兹,赫兹,1 H, H (5)), 1.53 (m, 2 H, CH₂),1.38 (m, 2 h, CH₂),1.20 (m, 2 h, CH₂);¹³C NMR (125 MHz, CD₃SOCD₃):有限公司,132.4,132.2 C = CH, 71.5, 67.2, 66.1 CH-OH, 31.1 CH CH(哦)₂,54.3,51.5 NHCH₂CH₂NH₂,45.8,39.1,29.2,26.7,24.3 CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂;质::600.08,601.03,602.03,603.05,604.01 (M + Cl)⁻。

复合7 e ()。这个过程是类似的7一个除了6 e()使用。收益率:80%。元素分析(%)计算的。对于C₁₅H_29日Cl₂N₃O₄Pt·1.5 h₂4.77 O: 29.59 C, H, N6.90;4.89发现29.33 C, H, N 7.03;¹H NMR (500 MHz, CD₃SOCD₃):(br年代,1 H, H (a)), 6.86 (br年代,1 H, H (c)), 6.27 (br年代,2 H, H (f)), 6.21 (br年代,1 H, H (1)), 4.87 (d,赫兹,1 h, 2哦),4.77 (d,赫兹,1 h, 3-OH), 4.59 (赫兹,1 H,哦),4.18 (m, 1 H, H (2)), 3.80 (m, 1 H, H (3)), 3.57 (m, 1 H, H (4)), 3.08 (t)赫兹,2 h, CH₂),2.85 (m, 2 H, H (b), Pt卫星观测到的肩膀),2.59 (m, 4 H, H (d)和H (e), Pt卫星观测到的肩膀),2.41 (m, 1 H, H (5)), 1.96 (dd,赫兹,赫兹,1 H, H (5)), 1.56 (m, 2 H, CH₂),1.42 (m, 2 h, CH₂),1.26 (m, 4 h, 2×CH₂);¹³C NMR (125 MHz, CD₃SOCD₃)有限公司,132.4,132.2 C = CH, 71.4, 67.2, 66.0 CH-OH, 31.1 CH CH(哦)₂,54.3,51.5 NHCH₂CH₂NH₂,45.8,39.2,29.4,26.9,26.6,26.5 CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂;质::614.07,615.07,616.08,617.08,618.05,619.03,620.05 (M + Cl)⁻。

2.4。细胞毒性试验在体外

growth-inhibitory选择性合成化合物的影响,K₂竞购₄与顺铂BEL7404人类癌症细胞系,72 h孵化,用MTT法测定。详细的过程一直在我们之前的报道工作(49]。

2.5。琼脂糖凝胶电泳分析

解除决心通过琼脂糖凝胶电泳检测DNA 1% (w / v)琼脂糖凝胶tris-acetate-EDTA (TAE)缓冲区,通过举办的19个质粒DNA (0.5μ20 ng / L,浓度μL)孵化与配体和各种浓度的化合物从20到260不等μ在黑暗中M在37°C 3 h。最后,凝胶与溴化乙锭染色(0.5μg / mL) 30分钟和可视化Bio-Rad凝胶成像系统。

2.6。质谱法

五Pt (II)配合物的反应模型化合物5′gmp利用ESI质谱研究。的铂配合物和二钠盐5′gmp喜忧参半的摩尔比率1:2水在37°C 48 h。质量范围是500 - 2000。

2.7。核磁共振光谱学

Pt (II)配合物的反应过度(1:3)5′D进行gmp₂O在一个核磁共振管。反应混合物被维持在37°C在黑暗中24 h,然后1 h NMR谱数据被记录在一个力量av - 500核磁共振谱仪。

2.8。细胞循环分析

BEL7404细胞系在杜尔贝科的修改维护鹰中有10%胎牛血清的5%股份₂在37°C。细胞被胰蛋白酶化和冲洗PBS收获。离心后,颗粒细胞(105 - 106)是悬浮在1毫升的PBS和保存在冰为5分钟。细胞悬液是由一滴一滴地固定增加9毫升预冷(4°C) 100%的乙醇在猛烈摇晃。混合样本保持在4°C到使用。染色、细胞离心resuspended在PBS,消化150毫升核糖核酸酶(250μg / mL),处理150毫升P1 (100μg / mL)然后在4°C孵化了30分钟。PI-positive细胞数与FACScan fluorescence-activated细胞分选仪(流式细胞仪)。细胞的数量在每个细胞循环阶段是决定使用细胞莫迪适合软件(正)。

3所示。结果与讨论

3.1。合成和表征

配体和铂配合物都准备好后,先前的报道方法(37- - - - - -40,42- - - - - -48]。在合成shikimic-carboxamide之前配体6 ~ e,侧链所示方案1是必需的。3-aminopropanol与benzyloxycarbonyl N-protected组和酒精组产生的化合物(1)被激活与甲磺酰氯反应过度,2-diaminoethane。新生成的胺组的三胺衍生物2然后与中行保护组,产生了不同的保护三胺衍生物3。胺选择性解封N-Cbz集团给了不稳定4,然后与莽草酸生产shimiccarboxamide反应选择性5。这是转换为莽草酰胺配体6通过解封N-Boc集团前身为所需的铂配合物配体(7)。的配体6 ~ e(很容易与K)的反应₂竞购₄在黑暗中在室温下,给相应的铂配合物7 ~ e()。复合物溶于水,溶解度的40.3,32.9,21.7,17.0,和12.6毫克/毫升至298 K,分别。这些化合物通过元素分析,¹H核磁共振,¹³C核磁共振和质谱。

所有氮配体包括三个潜在捐赠站点(两个胺和一个酰胺)。因此,在反应与K₂竞购₄配体可以与金属中心双齿的方式(两种异构体:2×胺,1×胺和1×aimde),甚至有三叉的方式。尽管结果铂(II)配合物的元素分析支持双配位基的约束力,它并不意味着异构体形成,或者是否形成。为了确认形成的异构体,毛细管电泳,质和详细的比较¹H,¹³C NMR进行了。网上如图S1,补充材料http://dx.doi.org/10.1155/2013/565032(见ESI __),只有一个峰值在毛细管电泳图观察,,,复合物,分别,这表明该产品(同分异构体)是纯粹的和独特的;此外,产品的纯度(同分异构体)证实了质谱分析的结果(参见图S2, ESI __)。确定配体协调模式在产品(同分异构体),我们详细研究了NMR区别Pt (II)配合物和自由配体。如表所示1的差异之间的配体和复合物是少;然而,这些的和是非常大的;伴随这种趋势,这些的;,是温和的。大质子化学位移不同的两个胺主要由两个胺配体的双齿协调模式。由于耦合相互作用,相邻质子的化学变化也产生适度的变化。这些观察结果进一步证实了¹³C NMR转变差异()之间的配体和复合物。如表所示2的差异和之间的配体和复合物非常少,然而,这些的;,是非常大的,这可能会导致两个胺配体的双齿协调模式。应该指出,铂金卫星观察的肩膀¹H NMR光谱配合物(50- - - - - -52]。

基于上述,我们可以得出这样的结论:只有一个异构体通过两个胺的双齿协调模式在目前的实验条件下和他们的化学结构方案1。

3.2。细胞毒性的活动在体外

在一个在体外试金,铂配合物与二胺耦合莽草酸配体弱积极反对BEL7404癌症细胞系(见表3化合物的数据7一个()不可用由于其低收益率)但不展览活动对国网公司- 7901,SK-OV-3 CNE-2,海拉癌症细胞系在测试浓度。因此,铂配合物与二胺耦合莽草酸配体显示某种程度上选择性细胞毒性。和相应的配体不展览活动。他们的活动取决于碳链接器长度、IC₅₀值增加较长碳链接器。虽然这些铂(II)配合物与莽草抗酸配体具有高水溶性,比顺铂他们不太活跃,Pt-shikimato复合物41],carbohydrate-metal复合物[32],carbohydrate-linked顺铂类似物(20.]。这些观察应该亲油性较低有关。最近,亲油性一直被视为一个关键的细胞毒性方面铂配合物(51- - - - - -56]。铂抗肿瘤制剂必须进入细胞之前他们的主要生物目标,即DNA。他们的体内分布,因此,他们的活动在很大程度上取决于他们的亲油性57]。相信亲脂性的一个复杂的越多,越高其细胞毒性(58]。自复合物附加高亲水性shikimato集团导致较低的亲油性的整体复合物。因此,预计这些铂配合物不能有效进入细胞并导致较低的活动(51- - - - - -58]。

3.3。DNA解除和乳沟的研究

由于DNA是Pt (II)的抗肿瘤的主要目标复合物,DNA的具有约束力的行为通过琼脂糖凝胶电泳研究了复合物。

图1和图S1的琼脂糖凝胶电泳结果显示pUC19质粒DNA,在这三种形式存在:超螺旋DNA(我)作为主要组件,刻痕或开放环状DNA (II)形式,和线性DNA (III)绑定与配体和同源Pt (II)配合物。的络合配体没有产生任何变化在琼脂糖凝胶电泳迁移率(为例,图S3, ESI __)。

由于这些铂(II)配合物具有相似的结构,在此,我们只选择其中4作为代表。如图1,尽管的存在不会降低电泳淌度的超螺旋DNA显然,deccreased超螺旋形式的比例明显增加100和200的浓度μm .而存在的,,,特别是,诱导显著降低电泳淌度的超螺旋DNA,他们有浓度依赖性。似乎所有铂(II)配合物具有高亲和力的DNA,这些复合物和共价结合模式提出了DNA。

3.4。与5′gmp

guanine-N7是更好的结合位点的DNA结合铂类药物(59),我们研究了复合物的反应,,5′gmp使用谱和1 h NMR谱。

3.4.1。谱分析

两座山峰在图1213.4和1192.42(一个)被分配到一个带负电荷的物种((5′gmp)²4 h + Na)⁻(C₃₂H₄₇N₁₃NaO_20.P₂Pt,计算的。1213.8)和[(5′gmp)₂3 h]⁻(C₃₂H₄₈N₁₃O_20.P₂Pt,计算的。分别为1191.8)。山峰在图1227.4和1205.42 (b)被分配到Pt-DNA加合物((5′gmp)₂4 h + Na)⁻(C₃₃H₄₉N₁₃NaO_20.P₂Pt,计算的。1227.8)和[(5′gmp)₂3 h]⁻(C₃₃H₅₀N₁₃O_20.P₂Pt,计算的。分别为1205.9)。图2 (c)显示了山峰1241.4和1218.4,这是归因于物种((5′GMP)₂4 h + Na)⁻(C₃₄H₅₁N₁₃NaO_20.P₂Pt,计算的。1241.9)和[(5′gmp)₂3 h]⁻(C₃₄H₅₂N₁₃O_20.P₂Pt,计算的。分别为1219.9)。这些结果表明,三种配合物的反应与5′gmp通过共价键,和两个氯配体被移除。

3.4.2。¹H NMR分析

我们把化合物的反应7 c()5′gmp为例,证实了协调的5′gmp¹H NMR光谱。在所有情况下,5′的典型人物H8 gmp调低速档(8.1 ppm H8免费5′gmp)和外观H8信号对应于铂加合物(8.5 ppm H8 bis-bound和8.6 - -8.8 ppm的H8 monobound 5′gmp) (60- - - - - -62年]。Dijt等人报道,N7位置表示没有质子化作用的影响在低pH值pH-dependent H8从最终产品的行为63年]。

与单个组件,¹H NMR光谱反应混合物的5′gmp和显示明显的变化在孵化后的24小时37°C(图3)。代表的作业高峰已经列在表中4。峰值为8.65 ppm和8.49 ppm观察24小时,在前场的从H8信号转变为8.11 ppm,这表明形成Pt-GMP mono-bound和bis-bound加合物。同时,糖H1的信号′5.83 ppm部分转移到5.78 ppm,和新的信号在6.31 ppm, 6.27 ppm分配孵化后出现5′gmp。这些变化表明,糖H1′和烯烃质子都盾由于platination N7 5′gmp。糖的在前场的转变H1′共振被观察到的¹H NMR谱的独联体——[葡文(GMP)₂(NH₃)₂]²⁻(64年- - - - - -66年]。结果表明,可以绑定5′gmp的platination N7鸟嘌呤,与上述质结果一致。

总之,这些水溶性铂(II)配合物与DNA结合和5′gmp、低细胞毒性应与低亲油性,但细胞吸收和详细作用机理需要进一步调查的继续工作。

3.5。s阶段细胞循环逮捕

确定细胞DNA是一种水溶性Pt (II)配合物的主要目标,我们研究了细胞循环的和治疗癌症细胞(因为化合物7 ~ e有类似的结构;在这里,只有选择和调查他们的细胞循环配置文件)。细胞循环分析,流式细胞仪是用来评估细胞的DNA含量与propidium碘染色,这使我们能够量化的总细胞数量在细胞周期的不同阶段(G₀/ G₁,S, G₂/ M)。的flow-cytometric数据BEL7404细胞治疗和提出了在表5。在治疗细胞和(250μ72 h M),细胞循环逮捕增强在G₂阶段,导致伴随增加G₂阶段的人口和人口减少S期。的直接互动和DNA琼脂糖凝胶电泳检测了。结果发现,和能改变DNA的配置。鉴于所有这些结果,DNA细胞的目标可能是至关重要的和诱导其细胞毒性。

4所示。结论的话

我们合成了五种水溶性铂(II)配合物:(,6)通过反应Pt (II)与中药活性成分、莽草酸、耦合的脂肪胺与不同碳连接器(,6)。这些Pt (II)配合物与DNA相互作用通过共价结合,阻止DNA合成和复制从而诱导低细胞毒性与细胞像BEL7404。低细胞毒性应与低亲油性。此外,,,可以反应5′gmp形成monoGMP和bisGMP通过水解加合物。细胞循环分析显示和因为G₂步细胞逮捕。

缩写

BEL7404:	肝癌细胞
BSA:	牛血清白蛋白
CDDP:	顺铂
CNE-2:	人类鼻咽癌细胞
质:	电喷雾电离质谱
5′gmp:	鸟嘌呤核苷一磷酸
海拉:	人类宫颈癌细胞
麻省理工:	3 - 4,5-dimentylthiazole-2-yl 2, 5-diphenpyltetra-zolium溴离子
PBS:	磷酸盐
国网公司- 7901:	人类胃细胞腺癌
SK-OV-3:	人类卵巢癌细胞
此种:	三、硼酸、EDTA。

确认

这项工作是由中国国家基础研究项目(没有。2012 cb723501),中国国家自然科学基金(没有。21271051),广西自然科学基金(2012号。2012 gxnsfda053005 gxnsfda385001)以及广西BAGUI学者计划,中国。

补充材料