体外转录/翻译系统的优化硫化叶菌solfataricus细胞溶解产物

含16S/23S rRNA启动子质粒的体外转录。(a) pBS-rRNA的示意图_p构造。水平箭头表示用于RT-PCR分析的引物的位置。(b)对S30的总RNA进行RT-PCR检测美国solfataricus之前和2 4 8一起孵化过μ克pBS-rRNA_p质粒和相应的，分别到图像的第4、6、8道。反应产物为346 bp的扩增片段。还显示了编码翻译因子aIF1A的mRNA的RT-PCR，用作内源性控制来使反应正常化。(c) pBS-rRNA的示意图_p-104个质粒。SD基序以斜体显示，而起始密码子则以粗体显示。(d) pBS-rRNA转录的相对RNA量_p-104质粒培养成美国solfataricusS30在70°C提取1小时。(e) pBS-rRNA的绝对定量_p-104的标准曲线法。通过测定体外转录的pBS-rRNA中T7的浓度得到标准品的绝对数量_p-104 RNA。获得体外转录本的连续稀释，并将其Ct值(红点)与那些未知的(蓝点)进行比较，推断表达的拷贝数。