合成含Triglycosylarchaeols Archaeosome疫苗可以提供添加剂Archaetidylserine和持久的免疫反应增强gydF4y2Ba

文摘gydF4y2Ba

古细菌脂质结构之间的关系和他们的活动作为佐剂可以定义和探索合成新的头团体共价链接到archaeol (2, 3-diphytanyl-sn-glycerol)。饱和archaeol,适当稳定作为化学合成的前体,是获得高收益gydF4y2BaHalobacterium salinarumgydF4y2Ba。Archaeosomes组成的脂质合成的各种组合,与抗原裹入,随后被用来接种小鼠和确定CD8gydF4y2Ba^+gydF4y2Ba和CD4gydF4y2Ba^+gydF4y2Ba- t细胞免疫反应。添加45摩尔%的糖脂gentiotriosylarchaeol, mannotriosylarchaeol或maltotriosylarchaeol archaetidylglycerophosphate-O-methyl archaeosome, CD8明显增强gydF4y2Ba^+gydF4y2Ba抗原T细胞反应,但减少外周血中的抗体滴定度。Archaeosomes组成的所有三个triglycosyl archaeols结合archaetidylglycerophosphate-O-methyl(15/15/15/55摩尔%)导致大约添加剂CD8gydF4y2Ba^+gydF4y2BaT细胞反应和抗体反应没有显著不同archaetidylglycerophosphate-O-methyl孤单。合成archaetidylserine发挥了作用,进一步提高CD8gydF4y2Ba^+gydF4y2BaT细胞反应的最佳内容是20 - 30 mol %。疫苗给最好的防止固体肿瘤的生长与archaeosome佐剂成分最高,免疫小鼠的免疫活动。gydF4y2Ba

1。介绍gydF4y2Ba

总极性脂质提取各种古生菌水合物形成脂质体(archaeosomes [gydF4y2Ba1gydF4y2Ba]),最初是改善传统脂质体的药物输送的应用程序(gydF4y2Ba2gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba4gydF4y2Ba]。这些总极性脂质archaeosomes随后被发现有一个增强的能力超过传统脂质体作为佐剂,这不仅促进了一种裹入蛋白质抗原的抗体反应(gydF4y2Ba5gydF4y2Ba而且CD8gydF4y2Ba^+gydF4y2BaT细胞反应(gydF4y2Ba6gydF4y2Ba]。作用方式可能与一个增强archaeosomes比脂质体通过各种吞噬细胞的吞噬作用[gydF4y2Ba7gydF4y2Ba]。这导致总极性脂质各古生菌的观察,与他们特有的脂质结构,形成archaeosomes不同受体介导的内吞作用和adjuvanticitygydF4y2Ba8gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

最近archaeol从水解分离极性脂质提取的gydF4y2BaHalobacterium salinarumgydF4y2Ba使用的化学合成各种极性脂质,脂质前体包括糖脂(gydF4y2Ba9gydF4y2Ba,gydF4y2Ba10gydF4y2Ba]。产生的脂质,所以被称为合成半合成或更确切地说,由于脂质与特定的古细菌sn-2一半,3和生物性R-methyl组立体化学,而极性头组可能是共轭的自由sn-1羟基甘油骨架给一个新的极性脂质结构。以这种方式chemically-defined,合成archaeosome理论上可以为每个应用程序进行了优化。可行性证明了合成一系列diglycosylarchaeols和测试他们的交互与抗原呈递细胞产生免疫反应gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba(gydF4y2Ba9gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

持久的CD8gydF4y2Ba^+gydF4y2Ba记忆T细胞反应所需的通常被认为是保护细胞内病原体和癌症疫苗是由某些总极性脂质archaeosomes和已经相关archaeosomes有高比例的membrane-spanning caldarchaeol(四醚)脂质gydF4y2Ba6gydF4y2Ba,gydF4y2Ba11gydF4y2Ba]。在这项研究中,我们探索合成archaeosome佐剂是否基于archaeol没有caldarchaeols脂质,可以提供这种长期反应。进一步,我们探索如果合成archaetidylserine,先前发现积极互动抗原递呈细胞的磷脂酰丝氨酸受体(gydF4y2Ba8gydF4y2Ba,gydF4y2Ba12gydF4y2Ba),可以增加糖脂类archaeosomes合成的辅助活动。gydF4y2Ba

2。材料和方法gydF4y2Ba

2.1。古生菌的增长gydF4y2Ba

Halobacterium salinarumgydF4y2Ba(写明ATCC 33170)是增加耗氧在37°C中修改是个另所有起源中包括:15 g / L Phytone蛋白胨佛罗里达大学(210931年产品从VWR国际);220 g / L氯化钠;6.5 g / L氯化钾;10 g / L MgSOgydF4y2Ba_4gydF4y2Ba 7小时gydF4y2Ba_2gydF4y2BaO;10毫升的0.2 g / 100毫升CaClgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba;10毫升的0.2 g / 100毫升FeSOgydF4y2Ba_4gydF4y2Ba。的增长gydF4y2BaHaloferax volcaniigydF4y2Ba(写明ATCC 29605)是在974年中写明ATCC 30°C和氯化钠含量12.5%gydF4y2Ba13gydF4y2Ba]。使用的抗泡剂是妈祖DF 204(巴斯夫加拿大)。生物量生长在20 L介质在28 L新布伦瑞克科学发酵罐和72 h后收获成长。脂质提取的生物量与氯仿/甲醇/水和总极性脂质沉淀从脂质提取冷丙酮(gydF4y2Ba14gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

2.2。净化ArchaeolgydF4y2Ba

通常,3.5 g的极性脂质gydF4y2Bah . salinarumgydF4y2Ba溶解在45毫升氯仿/甲醇(2:1,v / v)和190毫升甲醇补充道。这种混合物在冰浴冷却到0°C,和10毫升乙酰氯添加drop-wise搅拌磁。水解是通过回流3 h的62°C。混合物冷却,体积减少了旋转蒸发至100毫升。在转移到分液漏斗,12毫升水和石油醚加入100毫升。混合物混合并被允许分开。顶部醚相含有脂质与第二个乙醚萃取池,和蒸发。gydF4y2Ba

上述archaeol石油获得被硅胶柱层析法进一步纯化。石油溶解在氯仿/甲醇(2:1,v / v)加载在硅胶60(默克公司)列和archaeol筛选了压力使用己烷/ t-butylmethylether /醋酸(80/20/0.5,v / v / v)。收集分数被迷你薄层色谱法检测archaeol使用洗脱溶剂,包含纯archaeol汇集和干和分数。收益率的archaeol总极性脂质从43 - 53%不等。结构的身份和纯度archaeol证实了核磁共振光谱和电喷雾电离质谱。gydF4y2Ba

2.3。化学合成gydF4y2Ba

根据[Archaetidylethanolamine合成gydF4y2Ba15gydF4y2Ba]。Mannotriosylarchaeol、maltotriosylarchaeol gentiobiosylarchaeol, gentiotriosylarchaeol合成(根据我们前面的描述gydF4y2Ba10gydF4y2Ba,gydF4y2Ba16gydF4y2Ba)和结构细节图所示gydF4y2Ba1gydF4y2Ba。archaetidylserine合成方法可以发现在网上补充材料gydF4y2Bahttp://dx.doi.org/10.1155/2012/513231gydF4y2Ba。gydF4y2Ba

图1gydF4y2Ba

_{pgydF4y2Ba pgydF4y2Ba pgydF4y2Ba pgydF4y2Ba pgydF4y2Ba pgydF4y2Ba pgydF4y2Ba pgydF4y2Ba pgydF4y2Ba pgydF4y2Ba pgydF4y2Ba} 半合成glycoarchaeol结构显示头组的细节。“一”是archaeol脂用于合成前体。gentiobiosyl-A (gydF4y2Ba、相关(1gydF4y2Ba→6)gydF4y2Ba、相关gydF4y2Ba- (1→O) -archaeol);Gentiotriosyl-A (gydF4y2Ba、相关(1gydF4y2Ba→6)gydF4y2Ba、相关(1gydF4y2Ba→6)gydF4y2Ba、相关gydF4y2Ba- (1→O) -archaeol);mannotriosyl-A (gydF4y2Ba男人gydF4y2Ba- (1→2)gydF4y2Ba男人gydF4y2Ba- (1→2)gydF4y2Ba男人gydF4y2Ba- (1→O) -archaeol);maltotriosyl-A (gydF4y2Ba、相关(1gydF4y2Ba→4)gydF4y2Ba、相关(1gydF4y2Ba→4)gydF4y2Ba、相关gydF4y2Ba- (1→O) -archaeol)。gydF4y2Ba

2.4。PGP的净化gydF4y2Ba

Archaetidylglycerolphosphate-O-CHgydF4y2Ba_3gydF4y2Ba(PGP)纯化的总极性脂质gydF4y2BaHaloferax volcaniigydF4y2Ba描述(gydF4y2Ba13gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

2.5。Archaeosome疫苗gydF4y2Ba

Archaeosomes是由保湿20 - 30毫克干脂质在40°C 2毫升PBS缓冲(10毫米磷酸钠,160毫米氯化钠,pH值7.1)与卵清蛋白类型VI(卵子,σ)作为检测抗原溶解在10毫克/毫升。泡大小减少到约100 - 150 nm直径通过短暂的声波降解法声波浴(费舍尔科学)和卵子不裹入了由7毫升离心PBS后跟2洗(200000 x g max 90分钟)。泡球团在2 - 2.5毫升resuspended PBS和过滤消毒通过0.45gydF4y2Ba米微孔过滤器。无菌条件和pyrogen-free水使用。gydF4y2Ba

量化的抗原是由分离卵从脂质使用[描述SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳和微gydF4y2Ba14gydF4y2Ba]。加载是基于gydF4y2Ba克蛋白质/毫克盐纠正脂质干重。基于强度的平均直径测量使用的莫尔文纳米Zetasizer他/ Ne激光器(加拿大安大略省光谱研究Corp .)。gydF4y2Ba

2.6。动物试验gydF4y2Ba

雌性小鼠C57BL / 6(6 - 8周大)皮下注射免疫尾巴基地附近有0.1毫升含有相当于20的疫苗gydF4y2Bag卵子,经常在archaeosomes裹入各种成分。组成相同的疫苗和助推器的路线在星期3。所有协议和动物保健委员会和委员会批准的操作规程进行了在加拿大的动物保护协会的指导方针。gydF4y2Ba

2.7。免疫反应gydF4y2Ba

作为一个衡量Th2 CD4的手臂gydF4y2Ba^+gydF4y2BaT细胞辅助活动,免疫球蛋白抗体针对的抗原疫苗和收集小鼠的血清中(5 - 6小鼠/组)量化了Elisa根据先前的描述(gydF4y2Ba17gydF4y2Ba]。CD8gydF4y2Ba^+gydF4y2BaT细胞的反应被牺牲量化复制小鼠脾细胞/组获得。这些脾细胞化验一式三份有关酶联免疫斑点和溶细胞的抗原反应的标准T淋巴细胞(CTL)方法(gydF4y2Ba18gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

2.8。树突状细胞(DC)成熟化验gydF4y2Ba

骨髓是刷新C57BL / 6小鼠股骨和胫骨内孤立DCs。在RPMI培养基培养细胞获得补充8%胎牛血清(R8)(美国热科学HyClone UT)和5 ng / mL的粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(ID实验室,Inc .)。、加拿大)[gydF4y2Ba19gydF4y2Ba]。不依从细胞被天2和4,提供新鲜的培养基。骨髓DCs是收获的不依从细胞7天。直流纯度大于90%是基于细胞的流式细胞术贴上PE-Cy7共轭anti-CD11c马伯(BD生物科学,。、加拿大)。激活,7天DCs (3×10gydF4y2Ba^5gydF4y2Ba细胞/毫升)刺激了25gydF4y2Bag各种antigen-free archaeosomes或1gydF4y2BaggydF4y2Ba大肠杆菌gydF4y2Ba脂多糖(LPS、Sigma-Aldrich有限公司。、加拿大)每毫升24-well板24 h。是成熟的测量FITC-dextran (Sigma-Aldrich有限公司。、加拿大)吸收测定使用流式细胞仪(gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba]。DCs R8介质和孵化停牌1毫克/毫升的FITC-dextran(= 40 000先生)4点30分钟或37°C。孵化后,细胞被洗了三次与冰冷的PBS叠氮化钠1%。定量计算了吸收的变化意味着荧光指数(MFI)之间的细胞样本孵化37岁和4°C。gydF4y2Ba

2.9。EG.7固体肿瘤模型gydF4y2Ba

C57BL / 6小鼠免疫在0和3周皮下archaeosomes包含20gydF4y2Bag卵子。5×10组成的一个挑战gydF4y2Ba^6gydF4y2Ba如。7cells was introduced subcutaneously in the shaved lower dorsal region at either 4.5 weeks, or 14 weeks from the second immunization. Tumour progression was measured in two dimensions with a digital calliper, and values multiplied to give tumour sizes. When a tumour mass of 300 mm^2gydF4y2Ba是达到鼠标是安乐死。gydF4y2Ba

2.10。统计数据gydF4y2Ba

比较动物数据进行使用学生的手段gydF4y2Ba以及确定意义在95%信心,和两个跟踪gydF4y2Ba值计算GraphPad棱镜5。gydF4y2Ba

3所示。结果gydF4y2Ba

3.1。合成Glycosylarchaeols佐剂gydF4y2Ba

准备稳定醣脂类archaeosome佐剂与不带电glycosylarchaeols有必要包括脂质。这个函数可以由传统ester-phospholipid phosphatidylglycerol等。尽管小鼠接种archaeosomes组成的合成diglycosylarchaeols混合dipalmitoyl phosphatidylglycerol短期CD8抗原发达gydF4y2Ba^+gydF4y2BaT细胞介导免疫反应(gydF4y2Ba9gydF4y2Ba),长期失去了反应(gydF4y2Ba15gydF4y2Ba]。因此,我们避免了传统的脂质在这项研究旨在评估潜在的长期免于archaeol佐剂,并选择一个archaeol-based阴离子脂质,PGP,纯化gydF4y2Bah . volcaniigydF4y2Ba。的组合glycosylarchaeols PGP导致稳定的影响在100 nm平均直径范围从12-21裹入卵巢抗原gydF4y2Bag蛋白/毫克干重(表gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

首先,我们测试了CD8gydF4y2Ba^+gydF4y2Ba免疫小鼠T细胞反应使用glycosylarchaeol / PGP佐剂在短期实验化验从助推器免疫(图2.5周gydF4y2Ba2gydF4y2Ba)。Elispot化验证实gentiotriosylarchaeol比gentiobiosylarchaeol更好的辅助。虽然不是非常重要的数据所示(gydF4y2Ba),在其他试验的差异意味着是典型gydF4y2Ba。此外,gentiotriosylarchaeol和mannotriosylarchaeol明显更好地与PGP比maltotriosylarchaeol佐剂。当所有三个triosylarchaeol疫苗具有相同比例混合免疫CD8响应之前并没有很大的提高。然而,明显改善辅助活动,接近gydF4y2Bam . smithiigydF4y2Ba观察总极性脂质积极控制,当triglycosylarchaeols纳入同一archaeosome准备在水化。gydF4y2Ba

图2gydF4y2Ba

^+gydF4y2Ba m . smithiigydF4y2Ba m . smithiigydF4y2Ba γgydF4y2Ba m . smithiigydF4y2Ba 抗原CD8gydF4y2Ba脾细胞免疫小鼠T细胞活动有关酶联免疫斑点。化验的比摩尔%为各种成分的脂质archaeosomes: di或triglycosylarchaeols / PGP(45/55),和gentiotriosyl-A / maltotriosyl-A / mannotriosyl-A PGP(15/15/15/55),“一”是指archaeol。丙糖(1:1:1)/ PGP指混triglycosyl-A / PGP疫苗,这样每个贡献了等量的抗原。gydF4y2Ba代表OVA-loaded archaeosomes总极性脂质组成gydF4y2Ba积极的控制。小鼠皮下注射免疫在0和3周OVA-loaded archaeosome佐剂。没有免疫小鼠(天真)作为消极的控制。从复制小鼠脾脏收集5.5周后第一次注射来确定移行细胞的频率(点)(IFN -gydF4y2Ba)分泌脾细胞(点)酶联immunospot试验有关酶联免疫斑点)(。遗漏主要CD8抗原决定基的卵子(SIINFEKL)试验(没有肽控制)是用于检测非特异性反应。意味着明显不同(gydF4y2Ba)gentiotriosyl-A / PGP和maltotriosyl-A / PGP (gydF4y2Ba),mannotriosyl-A / PGP和maltotriosyl-A / PGP (gydF4y2Ba),maltotriosyl-A / PGP和PGP (gydF4y2Ba)。那些没有明显不同gentiotriosyl-A / PGP和mannotriosyl-A / PGP (gydF4y2Ba),gentiotriosyl-A / PGP和gentiobiosyl-A / PGP (gydF4y2Ba),mannotriosyl-A / PGP和gentiobiosyl-A / PGP (gydF4y2Ba),gentiotriosyl-A / maltotriosyl-A / mannotriosyl-A / PGP和gydF4y2Ba(gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

老鼠CD8的反应也可以衡量细胞溶解的T淋巴细胞(CTL)检测,测量能力的效应细胞免疫小鼠的脾脏溶解EG.7目标细胞系表达显性表位(SIINFEKL)的卵子。在这个试验(图gydF4y2Ba3gydF4y2Ba)相同的趋势中发现Elispots发生,尽管maltotriosylarchaeol / PGP不如纯PGP archaeosomes佐剂一样有效。结合triosylarchaeols / PGP(45/55摩尔%)再次产生一种佐剂相当于总极性脂质积极控制。因为这些结果,我们省略了maltotriosylarchaeol从进一步的研究,并继续与gentiotriosylarchaeol / mannotriosylarchaeol PGP的结合。gydF4y2Ba

图3gydF4y2Ba

1gydF4y2Ba ^51gydF4y2Ba 细胞毒性T淋巴细胞(CTL)细胞溶解试验被用来评估相同数量的脾细胞如图gydF4y2Ba。标准的gydF4y2BaCr试验进行了使用特定和非特异性的靶细胞(EG.7 EL-4, resp)。效应脾细胞对靶细胞的比率显示为E: T比率的图表。结果显示EG.7目标。EL-4目标仅低特异性的反应(没有显示)。gydF4y2Ba

评估的能力archaeosome佐剂直接通过MHC ii级表示CD4抗原通过抗原呈递细胞gydF4y2Ba^+gydF4y2BaT细胞(见图gydF4y2Ba1gydF4y2Ba(gydF4y2Ba9gydF4y2Ba]),我们检测抗卵巢抗体滴定度小鼠的外周血中(图gydF4y2Ba4gydF4y2Ba)。PGP archaeosomes最佳滴定度被发现,这表明这些archaeosomes支持一个mhc ii抗原表达与mhc i路线(以CD8衡量gydF4y2Ba^+gydF4y2BaT细胞反应)。PGP的抗体滴定度明显高于所有佐剂除了triosylarchaeols的组合相比,并没有显著差异(gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

图4gydF4y2Ba

1gydF4y2Ba 在小鼠的血清免疫抗体滴定度各种archaeosome佐剂。外周血收集在5.5周,之前的工作人员并没有小鼠脾切除(图gydF4y2Ba)。每个数据点显示代表个体的血清鼠标的滴定度。意味着更高的OVA-PGP archaeosome接种组(gydF4y2Ba)所有组相比,除了Gentiotriosyl-A / Maltotriosyl-A / Mannotriosyl-A / PGP (gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

3.2。Archaetidylserine()和Archaetidylethanolamine (AE)gydF4y2Ba

磷脂酰丝氨酸受体与促进吞噬凋亡细胞碎片(gydF4y2Ba21gydF4y2Ba]和archaeosomes [gydF4y2Ba12gydF4y2Ba]。此外,archaetidylserine和archaetidylethanolamine都可能fusogenic脂质,基于假设的类似活动酯类似物(gydF4y2Ba22gydF4y2Ba,融合内化archaeosomes吞噬溶酶体膜的机理提出了出口从archaeosomes抗原mhc i途径抗原递呈细胞(gydF4y2Ba12gydF4y2Ba,gydF4y2Ba23gydF4y2Ba]。因此,重要的或AE纳入mannotriosylarchaeol / gentiotriosylarchaeol PGP archaeosome评估辅助CD8gydF4y2Ba^+gydF4y2BaT细胞反应(图gydF4y2Ba5gydF4y2Ba)。增加30 mol % glycotriosylarchaeol / PGP佐剂导致显著高于CD8响应(gydF4y2Ba),没有明显不同于积极的控制(gydF4y2Bam . smithiigydF4y2Ba)。AE结合对adjuvanticity进一步影响很小。像其他老鼠试验,将CD8 glycoarchaeols PGP archaeosomes产生了太多改善gydF4y2Ba^+gydF4y2BaT细胞的反应。相比之下,在外周血抗卵巢抗体滴定度没有明显高于在包容(数据未显示)。gydF4y2Ba

图5gydF4y2Ba

Elispot试验显示之间的关系辅助活动glycosylarchaeol / PGP archaeosomes archaetidylserine(),和archaetidylethanolamine (AE)。摩尔%作品OVA-archaeosome疫苗mannotriosyl-A / gentiotriosyl-A PGP (22.5 / 22.5/55), mannotriosyl-A / gentiotriosyl-A /像/ PGP (22.5 / 22.5 / 30/25), mannotriosyl-A / gentiotriosyl-A / AE / PGP (22.5 / 22.5 / 5/50), mannotriosyl-A / gentiotriosyl-A / / AE / PGP (22.5 / 22.5 / 30/5/20)。化验对小鼠脾细胞进行了6周后第一次免疫。gydF4y2Ba

量化最优数量的辅助CD8gydF4y2Ba^+gydF4y2BaT细胞介导的反应,从0到30 mol %被纳入triglycosylarchaeol / PGP archaeosome。Elispot试验(图gydF4y2Ba6gydF4y2Ba)显示小的效果10%,优化效果> 20 - 30 mol %。Archaeosomes不能测试> 30 mol %,因为不稳定。这些发现证实了CTL化验(图gydF4y2Ba7gydF4y2Ba),证实一种佐剂活动30 mol %有点高于积极控制。如图gydF4y2Ba5gydF4y2Ba的AE,佐剂混合很少是积极的。gydF4y2Ba

图6gydF4y2Ba

m . smithiigydF4y2Ba Elispot试验显示摩尔%之间的关系在triglycosyl-A / PGP archaeosome和CD8辅助活动。Mannotriosyl-A和gentiotriosyl-A总是22.5 mol %。不一如图所示在0、10、20和30 mol %, PGP使每个成分的其余部分。相比之下,archaeosomes包含5摩尔% AE和gydF4y2Ba极性脂质archaeosomes总额包括在内。gydF4y2Ba

图7gydF4y2Ba

6gydF4y2Ba 细胞毒性T淋巴细胞(CTL)细胞溶解试验被用来评估相同数量的脾细胞如图gydF4y2Ba。载荷的卵巢抗原也在这个图所示。EL-4控制目标不表达SIINFEKL给< 10%溶菌作用在所有情况下(没有显示)。gydF4y2Ba

3.3。成熟的DCsgydF4y2Ba

丧失能力的葡聚糖被用来评估激活DCs暴露的程度gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba各种archaeosomes(缺乏抗原(图)gydF4y2Ba8gydF4y2Ba)。有限合伙人作为积极的控制。有限合伙人的激活是类似的,gydF4y2Bam . smithiigydF4y2Baarchaeosomes, gentiotriosylarchaeol / mannotriosylarchaeol PGP的结合有或没有。激活可以看到证据,然而,通过比较为/ PGP(30/70摩尔%)archaeosomes要么AE / PGP(5/95摩尔%),gentiotriosylarchaeol / PGP或mannotriosylarchaeol / PGP archaeosomes。gydF4y2Ba

图8gydF4y2Ba

在体外gydF4y2Ba 成熟的树突状细胞(dc)在治疗archaeosomes FITC-dextran吸收的减少来衡量。骨髓DCs archaeosomes对待gydF4y2Ba比较的能力FITC-dextran。结果描述的意思gydF4y2BaMFI常规赛的°C)。数据代表意味着±SD一式三份的文化。gydF4y2Ba

3.4。短期和长期的保护性免疫gydF4y2Ba

m . smithiigydF4y2Ba总极性脂质archaeosomes CD8能够辅助gydF4y2Ba^+gydF4y2BaT细胞反应,是持久的,并提供保护在固体肿瘤模型小鼠gydF4y2Ba11gydF4y2Ba,gydF4y2Ba18gydF4y2Ba]。在这里我们比较免疫反应与各种合成archaeosomes-OVA小鼠的免疫保护。短期免疫评估动物(gydF4y2Ba)通过挑战EG.7肿瘤细胞在第二次免疫(图4.5周gydF4y2Ba9(一个)gydF4y2Ba)。保护CD8可能相关gydF4y2Ba^+gydF4y2BaT细胞免疫反应(见以前的数据)来实现。天真的老鼠被认为是不受保护的,早死于肿瘤生长。PGP-OVA archaeosomes显示有限保护,与最好的保护取得了与mannotriosylarchaeol / gentiotriosylarchaeol / / PGP OVA-archaeosomes。长期的免疫细胞被注入EG.7评估14周后第二次免疫(图gydF4y2Ba9 (b)gydF4y2Ba)。没有免疫的小鼠和卵巢免疫(无佐剂)没有保护,而优化archaeosome给保护类似于积极的控制。gydF4y2Ba

(一)gydF4y2Ba

(b)gydF4y2Ba

(一)gydF4y2Ba
(b)gydF4y2Ba

图9gydF4y2Ba

保护小鼠免疫与archaeosomes各种脂质成分的固体肿瘤模型。组(gydF4y2Ba)未接种疫苗的老鼠(天真)或小鼠接种各种OVA-archaeosomes挑战EG.7皮下注射的细胞(0)4.5周(面板(a))或14周(面板(b))后接种疫苗。gydF4y2Ba

4所示。讨论gydF4y2Ba

本研究的目标是定义一个archaeosome佐剂成分适合人类应用程序通过使用合成archaeol-based脂质。过去的研究机制的archaeosomes由各种古生菌的总极性脂质已经表明,辅助活动发生在抗原递呈树突状细胞和巨噬细胞的水平(gydF4y2Ba19gydF4y2Ba,gydF4y2Ba24gydF4y2Ba]。糖脂在这些总极性脂质混合物可能可能作为有效的辅助成分,因为他们可以针对特定的抗原递呈细胞受体(gydF4y2Ba9gydF4y2Ba,gydF4y2Ba25gydF4y2Ba,gydF4y2Ba26gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

糖脂卸货,双分子层不稳定时形成努力准备纯glycolipid-liposome基础疫苗。这可以实现,理由自然glyco和磷脂组成的极性脂质,包括磷脂的醣脂类配方(gydF4y2Ba9gydF4y2Ba]。因为包容nonarchaeal脂质如dipalmitoyl phosphatidylglycerol archaeosomes导致长期CD8下降gydF4y2Ba^+gydF4y2BaT细胞介导免疫反应(gydF4y2Ba15gydF4y2Ba),我们使用了diacidic极端喜盐生物脂质,PGP,在我们合成glycoarchaeol配方。gydF4y2Ba

一系列mannosylarchaeols合成糖从1到5单位,水分最好的,给最好的辅助活动3或4线性糖单位(gydF4y2Ba16gydF4y2Ba]。同样地,我们发现gentiotriosylarchaeol比gentiobiosylarchaeol更好的辅助。进一步,添加剂的效果得到包含gentiotriosylarchaeol和mannotriosylarchaeol显示多个积极与受体的相互作用,考虑到一个观察抗原递呈树突状细胞的激活增加(图gydF4y2Ba8gydF4y2Ba)。的累加效应glycosylarchaeols要求archaeosome准备水分脂质存在,这表明各负责人archaeosome表面同时提出了多个受体gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba。gydF4y2Ba

Archaetidylserine()的一个组成部分gentiotriosylarchaeol / mannotriosylarchaeol PGP archaeosomes CD8增加gydF4y2Ba^+gydF4y2BaT细胞免疫反应裹入抗原浓度依赖的方式,没有显著提高抗体反应(数字gydF4y2Ba6gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba7gydF4y2Ba)。gydF4y2Bam . smithiigydF4y2Ba极性脂质archaeosomes总含量和内吞作用与交互抗原递呈细胞的磷脂酰丝氨酸受体(gydF4y2Ba12gydF4y2Ba]。cross-presentation的途径抗原进行gydF4y2Bam . smithiigydF4y2Baarchaeosomes发生在吞噬溶酶体后期阶段(gydF4y2Ba12gydF4y2Ba)当钙内化(gydF4y2Ba27gydF4y2Ba),这表明也有助于膜融合促进钙的类比磷脂酰丝氨酸(gydF4y2Ba23gydF4y2Ba]。融合archaeosomes吞噬溶酶体膜将有助于出口的抗原细胞溶质和提供对MHC一级表示路径的访问。gydF4y2Ba

CD8的寿命gydF4y2Ba^+gydF4y2BaT细胞记忆总极性脂质archaeosomes引起的gydF4y2Bam . smithiigydF4y2Ba和gydF4y2Ba热原体属acidophilumgydF4y2Ba通常是没有发现在archaeosomes准备从总极性脂质极端嗜盐缺乏caldarchaeols [gydF4y2Ba6gydF4y2Ba]。由于这个原因,建议长期CD8gydF4y2Ba^+gydF4y2BaT细胞记忆可能需要的存在高比例的caldarchaeol membrane-stabilizing脂质。在这项研究中我们发现CD8保护gydF4y2Ba^+gydF4y2BaT细胞可以诱导小鼠的免疫记忆反应与antigen-archaeosomes缺乏caldarchaeols。这进一步表明的重要性头组脂质成分的所有archaeol-based佐剂(gydF4y2Ba9gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

5。结论gydF4y2Ba

抗原的免疫反应可能被优先指向mhc i (CD8)或mhc ii (CD4)选择演讲的头组(s) archaeol-based佐剂。PGP archaeosomes直接主要抗原抗体的反应正如前面提出的(gydF4y2Ba10gydF4y2Ba]。添加的glycoarchaeols PGP archaeosomes大大提高MHC类我途径生产CD8抗原呈递gydF4y2Ba^+gydF4y2BaT细胞的反应。结合gentiotriosyl——mannotriosylarchaeols CD8 archaeosome佐剂增强gydF4y2Ba^+gydF4y2Ba在单独的T细胞反应,archaetidylserine的额外的存在进一步的好处。最后,长期免疫力得到一个archaeol-based脂质archaeosome缺乏caldarchaeols。我们得出这样的结论:癌症或细胞内病原体疫苗CD8的地方gydF4y2Ba^+gydF4y2BaT细胞的反应是必要的,良好的archaeosome成分gentiotriosylarchaeol, mannotriosylarchaeol,,和PGP摩尔%比22.5 / 22.5 / 30/25。gydF4y2Ba

确认gydF4y2Ba

Halobacterium salinarumgydF4y2Ba生物质是由约翰先生Shelvey NRC细菌文化设施。畜牧业和小鼠的出血在NRC动物设施进行了克雷格Bihun博士的指导下。最后对数字艺术作品是由汤姆Devecseri先生。gydF4y2Ba

补充材料gydF4y2Ba

引用gydF4y2Ba

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