古生菌 1472 - 3654 1472 - 3646 Hindawi出版公司 513231年 10.1155 / 2012/513231 513231年 研究文章 合成含Triglycosylarchaeols Archaeosome疫苗可以提供添加剂Archaetidylserine和持久的免疫反应增强 Sprott g·丹尼斯 安琪拉 Dicaire 尚塔尔J。 Siu H。 Whitfield 丹尼斯·M。 Corcelli 安琪拉 生物科学研究所 加拿大国家研究委员会 100年苏塞克斯开车 渥太华, 加拿大 K1A 0 r6 nrc-cnrc.gc.ca 2012年 30. 09年 2012年 2012年 06 07年 2012年 23 08年 2012年 2012年 版权©2012 g·丹尼斯Sprott et al。 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。

古细菌脂质结构之间的关系和他们的活动作为佐剂可以定义和探索合成新的头团体共价链接到archaeol (2, 3-diphytanyl-sn-glycerol)。饱和archaeol,适当稳定作为化学合成的前体,是获得高收益 Halobacterium salinarum。Archaeosomes组成的脂质合成的各种组合,与抗原裹入,随后被用来接种小鼠和确定CD8+和CD4+- t细胞免疫反应。添加45摩尔%的糖脂gentiotriosylarchaeol, mannotriosylarchaeol或maltotriosylarchaeol archaetidylglycerophosphate-O-methyl archaeosome, CD8明显增强+抗原T细胞反应,但减少外周血中的抗体滴定度。Archaeosomes组成的所有三个triglycosyl archaeols结合archaetidylglycerophosphate-O-methyl(15/15/15/55摩尔%)导致大约添加剂CD8+T细胞反应和抗体反应没有显著不同archaetidylglycerophosphate-O-methyl孤单。合成archaetidylserine发挥了作用,进一步提高CD8+T细胞反应的最佳内容是20 - 30 mol %。疫苗给最好的防止固体肿瘤的生长与archaeosome佐剂成分最高,免疫小鼠的免疫活动。 1。介绍<gydF4y2Ba/title> <p>总极性脂质提取各种古生菌水合物形成脂质体(archaeosomes [<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B1"> 1<gydF4y2Ba/xref>]),最初是改善传统脂质体的药物输送的应用程序(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B2"> 2<gydF4y2Ba/xref>- - - - - -<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B4"> 4<gydF4y2Ba/xref>]。这些总极性脂质archaeosomes随后被发现有一个增强的能力超过传统脂质体作为佐剂,这不仅促进了一种裹入蛋白质抗原的抗体反应(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B5"> 5<gydF4y2Ba/xref>而且CD8<gydF4y2Basup>+<gydF4y2Ba/sup>T细胞反应(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B6"> 6<gydF4y2Ba/xref>]。作用方式可能与一个增强archaeosomes比脂质体通过各种吞噬细胞的吞噬作用[<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B7"> 7<gydF4y2Ba/xref>]。这导致总极性脂质各古生菌的观察,与他们特有的脂质结构,形成archaeosomes不同受体介导的内吞作用和adjuvanticity<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B8"> 8<gydF4y2Ba/xref>]。<gydF4y2Ba/p> <p>最近archaeol从水解分离极性脂质提取的<gydF4y2Baitalic> Halobacterium salinarum<gydF4y2Ba/italic>使用的化学合成各种极性脂质,脂质前体包括糖脂(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B9"> 9<gydF4y2Ba/xref>,<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B10"> 10<gydF4y2Ba/xref>]。产生的脂质,所以被称为合成半合成或更确切地说,由于脂质与特定的古细菌sn-2一半,3和生物性R-methyl组立体化学,而极性头组可能是共轭的自由sn-1羟基甘油骨架给一个新的极性脂质结构。以这种方式chemically-defined,合成archaeosome理论上可以为每个应用程序进行了优化。可行性证明了合成一系列diglycosylarchaeols和测试他们的交互与抗原呈递细胞产生免疫反应<gydF4y2Baitalic> 在活的有机体内<gydF4y2Ba/italic>(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B9"> 9<gydF4y2Ba/xref>]。<gydF4y2Ba/p> <p>持久的CD8<gydF4y2Basup>+<gydF4y2Ba/sup>记忆T细胞反应所需的通常被认为是保护细胞内病原体和癌症疫苗是由某些总极性脂质archaeosomes和已经相关archaeosomes有高比例的membrane-spanning caldarchaeol(四醚)脂质<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B6"> 6<gydF4y2Ba/xref>,<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B11"> 11<gydF4y2Ba/xref>]。在这项研究中,我们探索合成archaeosome佐剂是否基于archaeol没有caldarchaeols脂质,可以提供这种长期反应。进一步,我们探索如果合成archaetidylserine,先前发现积极互动抗原递呈细胞的磷脂酰丝氨酸受体(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B8"> 8<gydF4y2Ba/xref>,<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B12"> 12<gydF4y2Ba/xref>),可以增加糖脂类archaeosomes合成的辅助活动。<gydF4y2Ba/p> </sec> <sec id="sec2"> <title>2。材料和方法<gydF4y2Ba/title> <sec id="sec2.1"> <title>2.1。古生菌的增长<gydF4y2Ba/title> <p> <italic> Halobacterium salinarum<gydF4y2Ba/italic>(写明ATCC 33170)是增加耗氧在37°C中修改是个另所有起源中包括:15 g / L Phytone蛋白胨佛罗里达大学(210931年产品从VWR国际);220 g / L氯化钠;6.5 g / L氯化钾;10 g / L MgSO<gydF4y2Basub>4<gydF4y2Ba/sub> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M1"> <mml:mrow> <mml:mo> ·<gydF4y2Ba/mml:mo> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>7小时<gydF4y2Basub>2<gydF4y2Ba/sub>O;10毫升的0.2 g / 100毫升CaCl<gydF4y2Basub>2<gydF4y2Ba/sub>;10毫升的0.2 g / 100毫升FeSO<gydF4y2Basub>4<gydF4y2Ba/sub>。的增长<gydF4y2Baitalic> Haloferax volcanii<gydF4y2Ba/italic>(写明ATCC 29605)是在974年中写明ATCC 30°C和氯化钠含量12.5%<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B13"> 13<gydF4y2Ba/xref>]。使用的抗泡剂是妈祖DF 204(巴斯夫加拿大)。生物量生长在20 L介质在28 L新布伦瑞克科学发酵罐和72 h后收获成长。脂质提取的生物量与氯仿/甲醇/水和总极性脂质沉淀从脂质提取冷丙酮(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B14"> 14<gydF4y2Ba/xref>]。<gydF4y2Ba/p> </sec> <sec id="sec2.2"> <title>2.2。净化Archaeol<gydF4y2Ba/title> <p>通常,3.5 g的极性脂质<gydF4y2Baitalic> h . salinarum<gydF4y2Ba/italic>溶解在45毫升氯仿/甲醇(2:1,v / v)和190毫升甲醇补充道。这种混合物在冰浴冷却到0°C,和10毫升乙酰氯添加drop-wise搅拌磁。水解是通过回流3 h的62°C。混合物冷却,体积减少了旋转蒸发至100毫升。在转移到分液漏斗,12毫升水和石油醚加入100毫升。混合物混合并被允许分开。顶部醚相含有脂质与第二个乙醚萃取池,和蒸发。<gydF4y2Ba/p> <p>上述archaeol石油获得被硅胶柱层析法进一步纯化。石油溶解在氯仿/甲醇(2:1,v / v)加载在硅胶60(默克公司)列和archaeol筛选了压力使用己烷/ t-butylmethylether /醋酸(80/20/0.5,v / v / v)。收集分数被迷你薄层色谱法检测archaeol使用洗脱溶剂,包含纯archaeol汇集和干和分数。收益率的archaeol总极性脂质从43 - 53%不等。结构的身份和纯度archaeol证实了核磁共振光谱和电喷雾电离质谱。<gydF4y2Ba/p> </sec> <sec id="sec2.3"> <title>2.3。化学合成<gydF4y2Ba/title> <p>根据[Archaetidylethanolamine合成<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B15"> 15<gydF4y2Ba/xref>]。Mannotriosylarchaeol、maltotriosylarchaeol gentiobiosylarchaeol, gentiotriosylarchaeol合成(根据我们前面的描述<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B10"> 10<gydF4y2Ba/xref>,<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B16"> 16<gydF4y2Ba/xref>)和结构细节图所示<gydF4y2Baxref ref-type="fig" rid="fig1"> 1<gydF4y2Ba/xref>。archaetidylserine合成方法可以发现在网上补充材料doi: 10.1155 / 2012/513231。<gydF4y2Ba/p> <fig id="fig1"> <label>图1<gydF4y2Ba/label> <p>半合成glycoarchaeol结构显示头组的细节。“一”是archaeol脂用于合成前体。gentiobiosyl-A (<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M2"> <mml:mrow> <mml:mi> β<gydF4y2Ba/mml:mi> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>、相关<gydF4y2Basub>p<gydF4y2Ba/sub>(1→6)<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M3"> <mml:mrow> <mml:mi> β<gydF4y2Ba/mml:mi> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>、相关<gydF4y2Basub>p<gydF4y2Ba/sub>- (1→O) -archaeol);Gentiotriosyl-A (<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M4"> <mml:mrow> <mml:mi> β<gydF4y2Ba/mml:mi> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>、相关<gydF4y2Basub>p<gydF4y2Ba/sub>(1→6)<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M5"> <mml:mrow> <mml:mi> β<gydF4y2Ba/mml:mi> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>、相关<gydF4y2Basub>p<gydF4y2Ba/sub>(1→6)<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M6"> <mml:mrow> <mml:mi> β<gydF4y2Ba/mml:mi> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>、相关<gydF4y2Basub>p<gydF4y2Ba/sub>- (1→O) -archaeol);mannotriosyl-A (<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M7"> <mml:mrow> <mml:mi> α<gydF4y2Ba/mml:mi> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>男人<gydF4y2Basub>p<gydF4y2Ba/sub>- (1→2)<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M8"> <mml:mrow> <mml:mi> α<gydF4y2Ba/mml:mi> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>男人<gydF4y2Basub>p<gydF4y2Ba/sub>- (1→2)<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M9"> <mml:mrow> <mml:mi> α<gydF4y2Ba/mml:mi> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>男人<gydF4y2Basub>p<gydF4y2Ba/sub>- (1→O) -archaeol);maltotriosyl-A (<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M10"> <mml:mrow> <mml:mi> α<gydF4y2Ba/mml:mi> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>、相关<gydF4y2Basub>p<gydF4y2Ba/sub>(1→4)<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M11"> <mml:mrow> <mml:mi> α<gydF4y2Ba/mml:mi> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>、相关<gydF4y2Basub>p<gydF4y2Ba/sub>(1→4)<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M12"> <mml:mrow> <mml:mi> β<gydF4y2Ba/mml:mi> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>、相关<gydF4y2Basub>p<gydF4y2Ba/sub>- (1→O) -archaeol)。<gydF4y2Ba/p> <graphic xlink:href="//www.newsama.com/downloads/journals/archaea/2012/513231.fig.001"></graphic> </fig> </sec> <sec id="sec2.4"> <title>2.4。PGP的净化<gydF4y2Ba/title> <p>Archaetidylglycerolphosphate-O-CH<gydF4y2Basub>3<gydF4y2Ba/sub>(PGP)纯化的总极性脂质<gydF4y2Baitalic> Haloferax volcanii<gydF4y2Ba/italic>描述(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B13"> 13<gydF4y2Ba/xref>]。<gydF4y2Ba/p> </sec> <sec id="sec2.5"> <title>2.5。Archaeosome疫苗<gydF4y2Ba/title> <p>Archaeosomes是由保湿20 - 30毫克干脂质在40°C 2毫升PBS缓冲(10毫米磷酸钠,160毫米氯化钠,pH值7.1)与卵清蛋白类型VI(卵子,σ)作为检测抗原溶解在10毫克/毫升。泡大小减少到约100 - 150 nm直径通过短暂的声波降解法声波浴(费舍尔科学)和卵子不裹入了由7毫升离心PBS后跟2洗(200000 x g max 90分钟)。泡球团在2 - 2.5毫升resuspended PBS和过滤消毒通过0.45<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M13"> <mml:mrow> <mml:mi> μ<gydF4y2Ba/mml:mi> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>米微孔过滤器。无菌条件和pyrogen-free水使用。<gydF4y2Ba/p> <p>量化的抗原是由分离卵从脂质使用[描述SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳和微<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B14"> 14<gydF4y2Ba/xref>]。加载是基于<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M14"> <mml:mrow> <mml:mi> μ<gydF4y2Ba/mml:mi> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>克蛋白质/毫克盐纠正脂质干重。基于强度的平均直径测量使用的莫尔文纳米Zetasizer他/ Ne激光器(加拿大安大略省光谱研究Corp .)。<gydF4y2Ba/p> </sec> <sec id="sec2.6"> <title>2.6。动物试验<gydF4y2Ba/title> <p>雌性小鼠C57BL / 6(6 - 8周大)皮下注射免疫尾巴基地附近有0.1毫升含有相当于20的疫苗<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M15"> <mml:mrow> <mml:mi> μ<gydF4y2Ba/mml:mi> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>g卵子,经常在archaeosomes裹入各种成分。组成相同的疫苗和助推器的路线在星期3。所有协议和动物保健委员会和委员会批准的操作规程进行了在加拿大的动物保护协会的指导方针。<gydF4y2Ba/p> </sec> <sec id="sec2.7"> <title>2.7。免疫反应<gydF4y2Ba/title> <p>作为一个衡量Th2 CD4的手臂<gydF4y2Basup>+<gydF4y2Ba/sup>T细胞辅助活动,免疫球蛋白抗体针对的抗原疫苗和收集小鼠的血清中(5 - 6小鼠/组)量化了Elisa根据先前的描述(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B17"> 17<gydF4y2Ba/xref>]。CD8<gydF4y2Basup>+<gydF4y2Ba/sup>T细胞的反应被牺牲量化复制小鼠脾细胞/组获得。这些脾细胞化验一式三份有关酶联免疫斑点和溶细胞的抗原反应的标准T淋巴细胞(CTL)方法(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B18"> 18<gydF4y2Ba/xref>]。<gydF4y2Ba/p> </sec> <sec id="sec2.8"> <title>2.8。树突状细胞(DC)成熟化验<gydF4y2Ba/title> <p>骨髓是刷新C57BL / 6小鼠股骨和胫骨内孤立DCs。在RPMI培养基培养细胞获得补充8%胎牛血清(R8)(美国热科学HyClone UT)和5 ng / mL的粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(ID实验室,Inc .)。、加拿大)[<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B23"> 19<gydF4y2Ba/xref>]。不依从细胞被天2和4,提供新鲜的培养基。骨髓DCs是收获的不依从细胞7天。直流纯度大于90%是基于细胞的流式细胞术贴上PE-Cy7共轭anti-CD11c马伯(BD生物科学,。、加拿大)。激活,7天DCs (3×10<gydF4y2Basup>5<gydF4y2Ba/sup>细胞/毫升)刺激了25<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M16"> <mml:mrow> <mml:mi> μ<gydF4y2Ba/mml:mi> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>g各种antigen-free archaeosomes或1<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M17"> <mml:mrow> <mml:mi> μ<gydF4y2Ba/mml:mi> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>g<gydF4y2Baitalic> 大肠杆菌<gydF4y2Ba/italic>脂多糖(LPS、Sigma-Aldrich有限公司。、加拿大)每毫升24-well板24 h。是成熟的测量FITC-dextran (Sigma-Aldrich有限公司。、加拿大)吸收测定使用流式细胞仪(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B19"> 20.<gydF4y2Ba/xref>]。DCs R8介质和孵化停牌1毫克/毫升的FITC-dextran(= 40 000先生)4点30分钟或37°C。孵化后,细胞被洗了三次与冰冷的PBS叠氮化钠1%。定量计算了吸收的变化意味着荧光指数(MFI)之间的细胞样本孵化37岁和4°C。<gydF4y2Ba/p> </sec> <sec id="sec2.9"> <title>2.9。EG.7固体肿瘤模型<gydF4y2Ba/title> <p>C57BL / 6小鼠免疫在0和3周皮下archaeosomes包含20<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M18"> <mml:mrow> <mml:mi> μ<gydF4y2Ba/mml:mi> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>g卵子。5×10组成的一个挑战<gydF4y2Basup>6<gydF4y2Ba/sup>如。7cells was introduced subcutaneously in the shaved lower dorsal region at either 4.5 weeks, or 14 weeks from the second immunization. Tumour progression was measured in two dimensions with a digital calliper, and values multiplied to give tumour sizes. When a tumour mass of 300 mm<sup>2<gydF4y2Ba/sup>是达到鼠标是安乐死。<gydF4y2Ba/p> </sec> <sec id="sec2.10"> <title>2.10。统计数据<gydF4y2Ba/title> <p>比较动物数据进行使用学生的手段<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M19"> <mml:mrow> <mml:mi> t<gydF4y2Ba/mml:mi> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>以及确定意义在95%信心,和两个跟踪<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M20"> <mml:mrow> <mml:mi> P<gydF4y2Ba/mml:mi> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>值计算GraphPad棱镜5。<gydF4y2Ba/p> </sec> </sec> <sec id="sec3"> <title>3所示。结果<gydF4y2Ba/title> <sec id="sec3.1"> <title>3.1。合成Glycosylarchaeols佐剂<gydF4y2Ba/title> <p>准备稳定醣脂类archaeosome佐剂与不带电glycosylarchaeols有必要包括脂质。这个函数可以由传统ester-phospholipid phosphatidylglycerol等。尽管小鼠接种archaeosomes组成的合成diglycosylarchaeols混合dipalmitoyl phosphatidylglycerol短期CD8抗原发达<gydF4y2Basup>+<gydF4y2Ba/sup>T细胞介导免疫反应(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B9"> 9<gydF4y2Ba/xref>),长期失去了反应(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B15"> 15<gydF4y2Ba/xref>]。因此,我们避免了传统的脂质在这项研究旨在评估潜在的长期免于archaeol佐剂,并选择一个archaeol-based阴离子脂质,PGP,纯化<gydF4y2Baitalic> h . volcanii<gydF4y2Ba/italic>。的组合glycosylarchaeols PGP导致稳定的影响在100 nm平均直径范围从12-21裹入卵巢抗原<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M21"> <mml:mrow> <mml:mi> μ<gydF4y2Ba/mml:mi> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>g蛋白/毫克干重(表<gydF4y2Baxref ref-type="table" rid="tab1"> 1<gydF4y2Ba/xref>)。<gydF4y2Ba/p> <table-wrap id="tab1"> <label>表1<gydF4y2Ba/label> <p>OVA-archaeosomes的表征。<gydF4y2Ba/p> <table> <thead> <tr> <th align="left">Archaeosome脂质<gydF4y2Ba/th> <th align="center">平均直径(nm)<gydF4y2Ba/th> <th align="center">卵子的内容(<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M22"> <mml:mrow> <mml:mi> μ<gydF4y2Ba/mml:mi> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>g /毫克)<gydF4y2Ba/th> </tr> </thead> <tbody> <tr> <td align="left">Gentiobiosyl-A / PGP<gydF4y2Ba/td> <td align="center"> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M23"> <mml:mn> 153年<gydF4y2Ba/mml:mn> <mml:mi></mml:mi> <mml:mo> ±<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mi></mml:mi> <mml:mn> 54<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:math> </inline-formula></td> <td align="center">19.6<gydF4y2Ba/td> </tr> <tr> <td align="left">Gentiotriosyl-A / PGP<gydF4y2Ba/td> <td align="center"> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M24"> <mml:mn> 90年<gydF4y2Ba/mml:mn> <mml:mi></mml:mi> <mml:mo> ±<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mi></mml:mi> <mml:mn> 52<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:math> </inline-formula></td> <td align="center">21.1<gydF4y2Ba/td> </tr> <tr> <td align="left">Mannotriosyl-A / PGP<gydF4y2Ba/td> <td align="center"> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M25"> <mml:mn> 76年<gydF4y2Ba/mml:mn> <mml:mi></mml:mi> <mml:mo> ±<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mi></mml:mi> <mml:mn> 41<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:math> </inline-formula></td> <td align="center">16.9<gydF4y2Ba/td> </tr> <tr> <td align="left">Maltotriosyl-A / PGP<gydF4y2Ba/td> <td align="center"> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M26"> <mml:mn> 97年<gydF4y2Ba/mml:mn> <mml:mi></mml:mi> <mml:mo> ±<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mi></mml:mi> <mml:mn> 46<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:math> </inline-formula></td> <td align="center">14.7<gydF4y2Ba/td> </tr> <tr> <td align="left">PGP<gydF4y2Ba/td> <td align="center"> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M27"> <mml:mn> 92年<gydF4y2Ba/mml:mn> <mml:mi></mml:mi> <mml:mo> ±<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mi></mml:mi> <mml:mn> 54<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:math> </inline-formula></td> <td align="center">14.2<gydF4y2Ba/td> </tr> <tr> <td align="left"> <italic> m . smithii<gydF4y2Ba/italic></td> <td align="center"> <inline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M28"> <mml:mn> 88年<gydF4y2Ba/mml:mn> <mml:mi></mml:mi> <mml:mo> ±<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mi></mml:mi> <mml:mn> 51<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:math> </inline-formula></td> <td align="center">12.0<gydF4y2Ba/td> </tr> </tbody> </table> </table-wrap> <p></p> <p>首先,我们测试了CD8<gydF4y2Basup>+<gydF4y2Ba/sup>免疫小鼠T细胞反应使用glycosylarchaeol / PGP佐剂在短期实验化验从助推器免疫(图2.5周<gydF4y2Baxref ref-type="fig" rid="fig2"> 2<gydF4y2Ba/xref>)。Elispot化验证实gentiotriosylarchaeol比gentiobiosylarchaeol更好的辅助。虽然不是非常重要的数据所示(<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M29"> <mml:mi> P<gydF4y2Ba/mml:mi> <mml:mo> =<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 0.055<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>),在其他试验的差异意味着是典型<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M30"> <mml:mi> P<gydF4y2Ba/mml:mi> <mml:mo> =<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 0.001<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>。此外,gentiotriosylarchaeol和mannotriosylarchaeol明显更好地与PGP比maltotriosylarchaeol佐剂。当所有三个triosylarchaeol疫苗具有相同比例混合免疫CD8响应之前并没有很大的提高。然而,明显改善辅助活动,接近<gydF4y2Baitalic> m . smithii<gydF4y2Ba/italic>观察总极性脂质积极控制,当triglycosylarchaeols纳入同一archaeosome准备在水化。<gydF4y2Ba/p> <fig id="fig2"> <label>图2<gydF4y2Ba/label> <p>抗原CD8<gydF4y2Basup>+<gydF4y2Ba/sup>脾细胞免疫小鼠T细胞活动有关酶联免疫斑点。化验的比摩尔%为各种成分的脂质archaeosomes: di或triglycosylarchaeols / PGP(45/55),和gentiotriosyl-A / maltotriosyl-A / mannotriosyl-A PGP(15/15/15/55),“一”是指archaeol。丙糖(1:1:1)/ PGP指混triglycosyl-A / PGP疫苗,这样每个贡献了等量的抗原。<gydF4y2Baitalic> m . smithii<gydF4y2Ba/italic>代表OVA-loaded archaeosomes总极性脂质组成<gydF4y2Baitalic> m . smithii<gydF4y2Ba/italic>积极的控制。小鼠皮下注射免疫在0和3周OVA-loaded archaeosome佐剂。没有免疫小鼠(天真)作为消极的控制。从复制小鼠脾脏收集5.5周后第一次注射来确定移行细胞的频率(点)(IFN -<gydF4y2Baitalic> γ<gydF4y2Ba/italic>)分泌脾细胞(点)酶联immunospot试验有关酶联免疫斑点)(。遗漏主要CD8抗原决定基的卵子(SIINFEKL)试验(没有肽控制)是用于检测非特异性反应。意味着明显不同(<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M31"> <mml:mi> P<gydF4y2Ba/mml:mi> <mml:mo> <<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 0.05<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>)gentiotriosyl-A / PGP和maltotriosyl-A / PGP (<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M32"> <mml:mi> P<gydF4y2Ba/mml:mi> <mml:mo> =<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 0.0204<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>),mannotriosyl-A / PGP和maltotriosyl-A / PGP (<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M33"> <mml:mi> P<gydF4y2Ba/mml:mi> <mml:mo> =<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 0.0135<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>),maltotriosyl-A / PGP和PGP (<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M34"> <mml:mi> P<gydF4y2Ba/mml:mi> <mml:mo> =<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 0.0032<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>)。那些没有明显不同gentiotriosyl-A / PGP和mannotriosyl-A / PGP (<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M35"> <mml:mi> P<gydF4y2Ba/mml:mi> <mml:mo> =<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 0.4238<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>),gentiotriosyl-A / PGP和gentiobiosyl-A / PGP (<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M36"> <mml:mi> P<gydF4y2Ba/mml:mi> <mml:mo> =<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 0.0550<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>),mannotriosyl-A / PGP和gentiobiosyl-A / PGP (<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M37"> <mml:mi> P<gydF4y2Ba/mml:mi> <mml:mo> =<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 0.0677<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>),gentiotriosyl-A / maltotriosyl-A / mannotriosyl-A / PGP和<gydF4y2Baitalic> m . smithii<gydF4y2Ba/italic>(<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M38"> <mml:mi> P<gydF4y2Ba/mml:mi> <mml:mo> =<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 0.0657<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>)。<gydF4y2Ba/p> <graphic xlink:href="//www.newsama.com/downloads/journals/archaea/2012/513231.fig.002"></graphic> </fig> <p>老鼠CD8的反应也可以衡量细胞溶解的T淋巴细胞(CTL)检测,测量能力的效应细胞免疫小鼠的脾脏溶解EG.7目标细胞系表达显性表位(SIINFEKL)的卵子。在这个试验(图<gydF4y2Baxref ref-type="fig" rid="fig3"> 3<gydF4y2Ba/xref>)相同的趋势中发现Elispots发生,尽管maltotriosylarchaeol / PGP不如纯PGP archaeosomes佐剂一样有效。结合triosylarchaeols / PGP(45/55摩尔%)再次产生一种佐剂相当于总极性脂质积极控制。因为这些结果,我们省略了maltotriosylarchaeol从进一步的研究,并继续与gentiotriosylarchaeol / mannotriosylarchaeol PGP的结合。<gydF4y2Ba/p> <fig id="fig3"> <label>图3<gydF4y2Ba/label> <p>细胞毒性T淋巴细胞(CTL)细胞溶解试验被用来评估相同数量的脾细胞如图<gydF4y2Baxref ref-type="fig" rid="fig1"> 1<gydF4y2Ba/xref>。标准的<gydF4y2Basup>51<gydF4y2Ba/sup>Cr试验进行了使用特定和非特异性的靶细胞(EG.7 EL-4, resp)。效应脾细胞对靶细胞的比率显示为E: T比率的图表。结果显示EG.7目标。EL-4目标仅低特异性的反应(没有显示)。<gydF4y2Ba/p> <graphic xlink:href="//www.newsama.com/downloads/journals/archaea/2012/513231.fig.003"></graphic> </fig> <p>评估的能力archaeosome佐剂直接通过MHC ii级表示CD4抗原通过抗原呈递细胞<gydF4y2Basup>+<gydF4y2Ba/sup>T细胞(见图<gydF4y2Baxref ref-type="fig" rid="fig1"> 1<gydF4y2Ba/xref>(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B9"> 9<gydF4y2Ba/xref>]),我们检测抗卵巢抗体滴定度小鼠的外周血中(图<gydF4y2Baxref ref-type="fig" rid="fig4"> 4<gydF4y2Ba/xref>)。PGP archaeosomes最佳滴定度被发现,这表明这些archaeosomes支持一个mhc ii抗原表达与mhc i路线(以CD8衡量<gydF4y2Basup>+<gydF4y2Ba/sup>T细胞反应)。PGP的抗体滴定度明显高于所有佐剂除了triosylarchaeols的组合相比,并没有显著差异(<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M39"> <mml:mi> P<gydF4y2Ba/mml:mi> <mml:mo> =<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 0.056<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>)。<gydF4y2Ba/p> <fig id="fig4"> <label>图4<gydF4y2Ba/label> <p>在小鼠的血清免疫抗体滴定度各种archaeosome佐剂。外周血收集在5.5周,之前的工作人员并没有小鼠脾切除(图<gydF4y2Baxref ref-type="fig" rid="fig1"> 1<gydF4y2Ba/xref>)。每个数据点显示代表个体的血清鼠标的滴定度。意味着更高的OVA-PGP archaeosome接种组(<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M40"> <mml:mi> P<gydF4y2Ba/mml:mi> <mml:mo> <<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 0.05<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>)所有组相比,除了Gentiotriosyl-A / Maltotriosyl-A / Mannotriosyl-A / PGP (<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M41"> <mml:mi> P<gydF4y2Ba/mml:mi> <mml:mo> =<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 0.0560<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>)。<gydF4y2Ba/p> <graphic xlink:href="//www.newsama.com/downloads/journals/archaea/2012/513231.fig.004"></graphic> </fig> </sec> <sec id="sec3.2"> <title>3.2。Archaetidylserine()和Archaetidylethanolamine (AE)<gydF4y2Ba/title> <p>磷脂酰丝氨酸受体与促进吞噬凋亡细胞碎片(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B20"> 21<gydF4y2Ba/xref>]和archaeosomes [<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B12"> 12<gydF4y2Ba/xref>]。此外,archaetidylserine和archaetidylethanolamine都可能fusogenic脂质,基于假设的类似活动酯类似物(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B21"> 22<gydF4y2Ba/xref>,融合内化archaeosomes吞噬溶酶体膜的机理提出了出口从archaeosomes抗原mhc i途径抗原递呈细胞(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B12"> 12<gydF4y2Ba/xref>,<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B22"> 23<gydF4y2Ba/xref>]。因此,重要的或AE纳入mannotriosylarchaeol / gentiotriosylarchaeol PGP archaeosome评估辅助CD8<gydF4y2Basup>+<gydF4y2Ba/sup>T细胞反应(图<gydF4y2Baxref ref-type="fig" rid="fig5"> 5<gydF4y2Ba/xref>)。增加30 mol % glycotriosylarchaeol / PGP佐剂导致显著高于CD8响应(<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M42"> <mml:mi> P<gydF4y2Ba/mml:mi> <mml:mo> =<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 0.0207<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>),没有明显不同于积极的控制(<gydF4y2Baitalic> m . smithii<gydF4y2Ba/italic>)。AE结合对adjuvanticity进一步影响很小。像其他老鼠试验,将CD8 glycoarchaeols PGP archaeosomes产生了太多改善<gydF4y2Basup>+<gydF4y2Ba/sup>T细胞的反应。相比之下,在外周血抗卵巢抗体滴定度没有明显高于在包容(数据未显示)。<gydF4y2Ba/p> <fig id="fig5"> <label>图5<gydF4y2Ba/label> <p>Elispot试验显示之间的关系辅助活动glycosylarchaeol / PGP archaeosomes archaetidylserine(),和archaetidylethanolamine (AE)。摩尔%作品OVA-archaeosome疫苗mannotriosyl-A / gentiotriosyl-A PGP (22.5 / 22.5/55), mannotriosyl-A / gentiotriosyl-A /像/ PGP (22.5 / 22.5 / 30/25), mannotriosyl-A / gentiotriosyl-A / AE / PGP (22.5 / 22.5 / 5/50), mannotriosyl-A / gentiotriosyl-A / / AE / PGP (22.5 / 22.5 / 30/5/20)。化验对小鼠脾细胞进行了6周后第一次免疫。<gydF4y2Ba/p> <graphic xlink:href="//www.newsama.com/downloads/journals/archaea/2012/513231.fig.005"></graphic> </fig> <p>量化最优数量的辅助CD8<gydF4y2Basup>+<gydF4y2Ba/sup>T细胞介导的反应,从0到30 mol %被纳入triglycosylarchaeol / PGP archaeosome。Elispot试验(图<gydF4y2Baxref ref-type="fig" rid="fig6"> 6<gydF4y2Ba/xref>)显示小的效果10%,优化效果> 20 - 30 mol %。Archaeosomes不能测试> 30 mol %,因为不稳定。这些发现证实了CTL化验(图<gydF4y2Baxref ref-type="fig" rid="fig7"> 7<gydF4y2Ba/xref>),证实一种佐剂活动30 mol %有点高于积极控制。如图<gydF4y2Baxref ref-type="fig" rid="fig5"> 5<gydF4y2Ba/xref>的AE,佐剂混合很少是积极的。<gydF4y2Ba/p> <fig id="fig6"> <label>图6<gydF4y2Ba/label> <p>Elispot试验显示摩尔%之间的关系在triglycosyl-A / PGP archaeosome和CD8辅助活动。Mannotriosyl-A和gentiotriosyl-A总是22.5 mol %。不一如图所示在0、10、20和30 mol %, PGP使每个成分的其余部分。相比之下,archaeosomes包含5摩尔% AE和<gydF4y2Baitalic> m . smithii<gydF4y2Ba/italic>极性脂质archaeosomes总额包括在内。<gydF4y2Ba/p> <graphic xlink:href="//www.newsama.com/downloads/journals/archaea/2012/513231.fig.006"></graphic> </fig> <fig id="fig7"> <label>图7<gydF4y2Ba/label> <p>细胞毒性T淋巴细胞(CTL)细胞溶解试验被用来评估相同数量的脾细胞如图<gydF4y2Baxref ref-type="fig" rid="fig6"> 6<gydF4y2Ba/xref>。载荷的卵巢抗原也在这个图所示。EL-4控制目标不表达SIINFEKL给< 10%溶菌作用在所有情况下(没有显示)。<gydF4y2Ba/p> <graphic xlink:href="//www.newsama.com/downloads/journals/archaea/2012/513231.fig.007"></graphic> </fig> </sec> <sec id="sec3.3"> <title>3.3。成熟的DCs<gydF4y2Ba/title> <p>丧失能力的葡聚糖被用来评估激活DCs暴露的程度<gydF4y2Baitalic> 在体外<gydF4y2Ba/italic>各种archaeosomes(缺乏抗原(图)<gydF4y2Baxref ref-type="fig" rid="fig8"> 8<gydF4y2Ba/xref>)。有限合伙人作为积极的控制。有限合伙人的激活是类似的,<gydF4y2Baitalic> m . smithii<gydF4y2Ba/italic>archaeosomes, gentiotriosylarchaeol / mannotriosylarchaeol PGP的结合有或没有。激活可以看到证据,然而,通过比较为/ PGP(30/70摩尔%)archaeosomes要么AE / PGP(5/95摩尔%),gentiotriosylarchaeol / PGP或mannotriosylarchaeol / PGP archaeosomes。<gydF4y2Ba/p> <fig id="fig8"> <label>图8<gydF4y2Ba/label> <p>成熟的树突状细胞(dc)在治疗archaeosomes FITC-dextran吸收的减少来衡量。骨髓DCs archaeosomes对待<gydF4y2Baitalic> 在体外<gydF4y2Ba/italic>比较的能力FITC-dextran。结果描述的意思<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M43"> <mml:mrow> <mml:mi mathvariant="normal"> Δ<gydF4y2Ba/mml:mi> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>MFI常规赛的°C)。数据代表意味着±SD一式三份的文化。<gydF4y2Ba/p> <graphic xlink:href="//www.newsama.com/downloads/journals/archaea/2012/513231.fig.008"></graphic> </fig> </sec> <sec id="sec3.4"> <title>3.4。短期和长期的保护性免疫<gydF4y2Ba/title> <p> <italic> m . smithii<gydF4y2Ba/italic>总极性脂质archaeosomes CD8能够辅助<gydF4y2Basup>+<gydF4y2Ba/sup>T细胞反应,是持久的,并提供保护在固体肿瘤模型小鼠<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B11"> 11<gydF4y2Ba/xref>,<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B18"> 18<gydF4y2Ba/xref>]。在这里我们比较免疫反应与各种合成archaeosomes-OVA小鼠的免疫保护。短期免疫评估动物(<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M44"> <mml:mi> n<gydF4y2Ba/mml:mi> <mml:mo> =<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 5<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>)通过挑战EG.7肿瘤细胞在第二次免疫(图4.5周<gydF4y2Baxref ref-type="fig" rid="fig9a"> 9(一个)<gydF4y2Ba/xref>)。保护CD8可能相关<gydF4y2Basup>+<gydF4y2Ba/sup>T细胞免疫反应(见以前的数据)来实现。天真的老鼠被认为是不受保护的,早死于肿瘤生长。PGP-OVA archaeosomes显示有限保护,与最好的保护取得了与mannotriosylarchaeol / gentiotriosylarchaeol / / PGP OVA-archaeosomes。长期的免疫细胞被注入EG.7评估14周后第二次免疫(图<gydF4y2Baxref ref-type="fig" rid="fig9b"> 9 (b)<gydF4y2Ba/xref>)。没有免疫的小鼠和卵巢免疫(无佐剂)没有保护,而优化archaeosome给保护类似于积极的控制。<gydF4y2Ba/p> <fig-group id="fig9"> <p>保护小鼠免疫与archaeosomes各种脂质成分的固体肿瘤模型。组(<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M45"> <mml:mi> n<gydF4y2Ba/mml:mi> <mml:mo> =<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 5<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>)未接种疫苗的老鼠(天真)或小鼠接种各种OVA-archaeosomes挑战EG.7皮下注射的细胞(0)4.5周(面板(a))或14周(面板(b))后接种疫苗。<gydF4y2Ba/p> <fig id="fig9a"> <label>(一)<gydF4y2Ba/label> <graphic xlink:href="//www.newsama.com/downloads/journals/archaea/2012/513231.fig.009a"></graphic> </fig> <fig id="fig9b"> <label>(b)<gydF4y2Ba/label> <graphic xlink:href="//www.newsama.com/downloads/journals/archaea/2012/513231.fig.009b"></graphic> </fig> </fig-group> </sec> </sec> <sec id="sec4"> <title>4所示。讨论<gydF4y2Ba/title> <p>本研究的目标是定义一个archaeosome佐剂成分适合人类应用程序通过使用合成archaeol-based脂质。过去的研究机制的archaeosomes由各种古生菌的总极性脂质已经表明,辅助活动发生在抗原递呈树突状细胞和巨噬细胞的水平(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B23"> 19<gydF4y2Ba/xref>,<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B24"> 24<gydF4y2Ba/xref>]。糖脂在这些总极性脂质混合物可能可能作为有效的辅助成分,因为他们可以针对特定的抗原递呈细胞受体(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B9"> 9<gydF4y2Ba/xref>,<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B25"> 25<gydF4y2Ba/xref>,<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B26"> 26<gydF4y2Ba/xref>]。<gydF4y2Ba/p> <p>糖脂卸货,双分子层不稳定时形成努力准备纯glycolipid-liposome基础疫苗。这可以实现,理由自然glyco和磷脂组成的极性脂质,包括磷脂的醣脂类配方(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B9"> 9<gydF4y2Ba/xref>]。因为包容nonarchaeal脂质如dipalmitoyl phosphatidylglycerol archaeosomes导致长期CD8下降<gydF4y2Basup>+<gydF4y2Ba/sup>T细胞介导免疫反应(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B15"> 15<gydF4y2Ba/xref>),我们使用了diacidic极端喜盐生物脂质,PGP,在我们合成glycoarchaeol配方。<gydF4y2Ba/p> <p>一系列mannosylarchaeols合成糖从1到5单位,水分最好的,给最好的辅助活动3或4线性糖单位(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B16"> 16<gydF4y2Ba/xref>]。同样地,我们发现gentiotriosylarchaeol比gentiobiosylarchaeol更好的辅助。进一步,添加剂的效果得到包含gentiotriosylarchaeol和mannotriosylarchaeol显示多个积极与受体的相互作用,考虑到一个观察抗原递呈树突状细胞的激活增加(图<gydF4y2Baxref ref-type="fig" rid="fig8"> 8<gydF4y2Ba/xref>)。的累加效应glycosylarchaeols要求archaeosome准备水分脂质存在,这表明各负责人archaeosome表面同时提出了多个受体<gydF4y2Baitalic> 在活的有机体内<gydF4y2Ba/italic>。<gydF4y2Ba/p> <p>Archaetidylserine()的一个组成部分gentiotriosylarchaeol / mannotriosylarchaeol PGP archaeosomes CD8增加<gydF4y2Basup>+<gydF4y2Ba/sup>T细胞免疫反应裹入抗原浓度依赖的方式,没有显著提高抗体反应(数字<gydF4y2Baxref ref-type="fig" rid="fig6"> 6<gydF4y2Ba/xref>- - - - - -<gydF4y2Baxref ref-type="fig" rid="fig7"> 7<gydF4y2Ba/xref>)。<gydF4y2Baitalic> m . smithii<gydF4y2Ba/italic>极性脂质archaeosomes总含量和内吞作用与交互抗原递呈细胞的磷脂酰丝氨酸受体(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B12"> 12<gydF4y2Ba/xref>]。cross-presentation的途径抗原进行<gydF4y2Baitalic> m . smithii<gydF4y2Ba/italic>archaeosomes发生在吞噬溶酶体后期阶段(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B12"> 12<gydF4y2Ba/xref>)当钙内化(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B27"> 27<gydF4y2Ba/xref>),这表明也有助于膜融合促进钙的类比磷脂酰丝氨酸(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B22"> 23<gydF4y2Ba/xref>]。融合archaeosomes吞噬溶酶体膜将有助于出口的抗原细胞溶质和提供对MHC一级表示路径的访问。<gydF4y2Ba/p> <p>CD8的寿命<gydF4y2Basup>+<gydF4y2Ba/sup>T细胞记忆总极性脂质archaeosomes引起的<gydF4y2Baitalic> m . smithii<gydF4y2Ba/italic>和<gydF4y2Baitalic> 热原体属acidophilum<gydF4y2Ba/italic>通常是没有发现在archaeosomes准备从总极性脂质极端嗜盐缺乏caldarchaeols [<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B6"> 6<gydF4y2Ba/xref>]。由于这个原因,建议长期CD8<gydF4y2Basup>+<gydF4y2Ba/sup>T细胞记忆可能需要的存在高比例的caldarchaeol membrane-stabilizing脂质。在这项研究中我们发现CD8保护<gydF4y2Basup>+<gydF4y2Ba/sup>T细胞可以诱导小鼠的免疫记忆反应与antigen-archaeosomes缺乏caldarchaeols。这进一步表明的重要性头组脂质成分的所有archaeol-based佐剂(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B9"> 9<gydF4y2Ba/xref>]。<gydF4y2Ba/p> </sec> <sec id="sec5"> <title>5。结论<gydF4y2Ba/title> <p>抗原的免疫反应可能被优先指向mhc i (CD8)或mhc ii (CD4)选择演讲的头组(s) archaeol-based佐剂。PGP archaeosomes直接主要抗原抗体的反应正如前面提出的(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B10"> 10<gydF4y2Ba/xref>]。添加的glycoarchaeols PGP archaeosomes大大提高MHC类我途径生产CD8抗原呈递<gydF4y2Basup>+<gydF4y2Ba/sup>T细胞的反应。结合gentiotriosyl——mannotriosylarchaeols CD8 archaeosome佐剂增强<gydF4y2Basup>+<gydF4y2Ba/sup>在单独的T细胞反应,archaetidylserine的额外的存在进一步的好处。最后,长期免疫力得到一个archaeol-based脂质archaeosome缺乏caldarchaeols。我们得出这样的结论:癌症或细胞内病原体疫苗CD8的地方<gydF4y2Basup>+<gydF4y2Ba/sup>T细胞的反应是必要的,良好的archaeosome成分gentiotriosylarchaeol, mannotriosylarchaeol,,和PGP摩尔%比22.5 / 22.5 / 30/25。<gydF4y2Ba/p> </sec> <back> <ack> <title>确认<gydF4y2Ba/title> <p> <italic> Halobacterium salinarum<gydF4y2Ba/italic>生物质是由约翰先生Shelvey NRC细菌文化设施。畜牧业和小鼠的出血在NRC动物设施进行了克雷格Bihun博士的指导下。最后对数字艺术作品是由汤姆Devecseri先生。<gydF4y2Ba/p> </ack> <ref-list> <ref id="B1" content-type="article"> <label>1<gydF4y2Ba/label> <nlm-citation publication-type="journal"> <person-group person-group-type="author"> <name> <surname> Sprott<gydF4y2Ba/surname> <given-names> g D。<gydF4y2Ba/given-names> </name> <name> <surname> Dicaire<gydF4y2Ba/surname> <given-names> c·J。<gydF4y2Ba/given-names> </name> <name> <surname> 弗莱明<gydF4y2Ba/surname> <given-names> l . P。<gydF4y2Ba/given-names> </name> <name> <surname> 帕特尔<gydF4y2Ba/surname> <given-names> g . B。<gydF4y2Ba/given-names> </name> </person-group> <article-title> 脂质体的稳定性由archaeobacterial油脂和磷脂酰胆碱混合物<gydF4y2Ba/article-title> <source> <italic> 细胞与材料<gydF4y2Ba/italic> <year> 1996年<gydF4y2Ba/year> <volume> 6<gydF4y2Ba/volume> <issue> 1 - 3<gydF4y2Ba/issue> <fpage> 143年<gydF4y2Ba/fpage> <lpage> 155年<gydF4y2Ba/lpage> <pub-id pub-id-type="other"> 2 - s2.0 - 0030320274<gydF4y2Ba/pub-id> </nlm-citation> </ref> <ref id="B2" content-type="article"> <label>2<gydF4y2Ba/label> <nlm-citation publication-type="journal"> <person-group person-group-type="author"> <name> <surname> ·曲克<gydF4y2Ba/surname> <given-names> c·G。<gydF4y2Ba/given-names> </name> <name> <surname> 帕特尔<gydF4y2Ba/surname> <given-names> g . B。<gydF4y2Ba/given-names> </name> <name> <surname> 贝弗里奇<gydF4y2Ba/surname> <given-names> t·J。<gydF4y2Ba/given-names> </name> <name> <surname> Sprott<gydF4y2Ba/surname> <given-names> g D。<gydF4y2Ba/given-names> </name> </person-group> <article-title> pressure-extrudes脂质体的稳定性由archaeobacterial醚脂质<gydF4y2Ba/article-title> <source> <italic> 应用微生物学和生物技术<gydF4y2Ba/italic> <year> 1994年<gydF4y2Ba/year> <volume> 42<gydF4y2Ba/volume> <issue> 2 - 3<gydF4y2Ba/issue> <fpage> 375年<gydF4y2Ba/fpage> <lpage> 384年<gydF4y2Ba/lpage> <pub-id pub-id-type="other"> 2 - s2.0 - 0028171106<gydF4y2Ba/pub-id> <pub-id pub-id-type="doi"> 10.1007 / s002530050266<gydF4y2Ba/pub-id> </nlm-citation> </ref> <ref id="B3" content-type="article"> <label>3<gydF4y2Ba/label> <nlm-citation publication-type="journal"> <person-group person-group-type="author"> <name> <surname> 暗利<gydF4y2Ba/surname> <given-names> 一个。<gydF4y2Ba/given-names> </name> <name> <surname> Makabi-Panzu<gydF4y2Ba/surname> <given-names> B。<gydF4y2Ba/given-names> </name> <name> <surname> 阿格纽<gydF4y2Ba/surname> <given-names> b . J。<gydF4y2Ba/given-names> </name> <name> <surname> Sprott<gydF4y2Ba/surname> <given-names> g D。<gydF4y2Ba/given-names> </name> <name> <surname> 帕特尔<gydF4y2Ba/surname> <given-names> g . B。<gydF4y2Ba/given-names> </name> </person-group> <article-title> archaeosomes辅酶Q10对组织分布的影响,和聚乙二醇archaeosomes,接种到小鼠口服给药和静脉注射的路线<gydF4y2Ba/article-title> <source> <italic> 药物杂志》的目标<gydF4y2Ba/italic> <year> 2000年<gydF4y2Ba/year> <volume> 7<gydF4y2Ba/volume> <issue> 5<gydF4y2Ba/issue> <fpage> 383年<gydF4y2Ba/fpage> <lpage> 392年<gydF4y2Ba/lpage> <pub-id pub-id-type="other"> 2 - s2.0 - 0034014710<gydF4y2Ba/pub-id> </nlm-citation> </ref> <ref id="B4" content-type="incollection"> <label>4<gydF4y2Ba/label> <nlm-citation publication-type="book"> <person-group person-group-type="author"> <name> <surname> 环<gydF4y2Ba/surname> <given-names> K。<gydF4y2Ba/given-names> </name> <name> <surname> 德国汉高<gydF4y2Ba/surname> <given-names> B。<gydF4y2Ba/given-names> </name> <name> <surname> Valenteijn<gydF4y2Ba/surname> <given-names> 一个。<gydF4y2Ba/given-names> </name> <name> <surname> Gutermann<gydF4y2Ba/surname> <given-names> R。<gydF4y2Ba/given-names> </name> </person-group> <person-group person-group-type="editor"> <name> <surname> 施密特<gydF4y2Ba/surname> <given-names> k . H。<gydF4y2Ba/given-names> </name> </person-group> <article-title> 研究渗透率和脂质体的稳定性来源于膜生成双archaebacterial tetraetherlipid<gydF4y2Ba/article-title> <source> <italic> 脂质体作为药物载体<gydF4y2Ba/italic> <year> 1986年<gydF4y2Ba/year> <publisher-loc> 德国斯图加特<gydF4y2Ba/publisher-loc> <publisher-name> Georg蒂米<gydF4y2Ba/publisher-name> <fpage> 101年<gydF4y2Ba/fpage> <lpage> 123年<gydF4y2Ba/lpage> </nlm-citation> </ref> <ref id="B5" content-type="article"> <label>5<gydF4y2Ba/label> <nlm-citation publication-type="journal"> <person-group person-group-type="author"> <name> <surname> Sprott<gydF4y2Ba/surname> <given-names> g D。<gydF4y2Ba/given-names> </name> <name> <surname> 押<gydF4y2Ba/surname> <given-names> d . L。<gydF4y2Ba/given-names> </name> <name> <surname> 帕特尔<gydF4y2Ba/surname> <given-names> g . B。<gydF4y2Ba/given-names> </name> </person-group> <article-title> Archaeosomes小说抗原递送系统<gydF4y2Ba/article-title> <source> <italic> 《微生物学字母<gydF4y2Ba/italic> <year> 1997年<gydF4y2Ba/year> <volume> 154年<gydF4y2Ba/volume> <issue> 1<gydF4y2Ba/issue> <fpage> 17<gydF4y2Ba/fpage> <lpage> 22<gydF4y2Ba/lpage> <pub-id pub-id-type="other"> 2 - s2.0 - 0030953382<gydF4y2Ba/pub-id> <pub-id pub-id-type="doi"> 10.1016 / s0378 - 1097 (97) 00294 - 2<gydF4y2Ba/pub-id> </nlm-citation> </ref> <ref id="B6" content-type="article"> <label>6<gydF4y2Ba/label> <nlm-citation publication-type="journal"> <person-group person-group-type="author"> <name> <surname> 克里希南<gydF4y2Ba/surname> <given-names> l<gydF4y2Ba/given-names> </name> <name> <surname> Sprott<gydF4y2Ba/surname> <given-names> g D。<gydF4y2Ba/given-names> </name> </person-group> <article-title> Archaeosomes作为癌症疫苗self-adjuvanting运载系统<gydF4y2Ba/article-title> <source> <italic> 药物杂志》的目标<gydF4y2Ba/italic> <year> 2003年<gydF4y2Ba/year> <volume> 11<gydF4y2Ba/volume> <issue> 8 - 10<gydF4y2Ba/issue> <fpage> 515年<gydF4y2Ba/fpage> <lpage> 524年<gydF4y2Ba/lpage> <pub-id pub-id-type="other"> 2 - s2.0 - 1942475301<gydF4y2Ba/pub-id> <pub-id pub-id-type="doi"> 10.1080 / 10611860410001670044<gydF4y2Ba/pub-id> </nlm-citation> </ref> <ref id="B7" content-type="article"> <label>7<gydF4y2Ba/label> <nlm-citation publication-type="journal"> <person-group person-group-type="author"> <name> <surname> 押<gydF4y2Ba/surname> <given-names> d . L。<gydF4y2Ba/given-names> </name> <name> <surname> 瑞斯<gydF4y2Ba/surname> <given-names> r·K。<gydF4y2Ba/given-names> </name> <name> <surname> 帕特尔<gydF4y2Ba/surname> <given-names> g . B。<gydF4y2Ba/given-names> </name> <name> <surname> Sprott<gydF4y2Ba/surname> <given-names> g D。<gydF4y2Ba/given-names> </name> </person-group> <article-title> archaeobacterial脂质体和传统脂质体的吞噬细胞<gydF4y2Ba/article-title> <source> <italic> 脂质体研究期刊》的研究<gydF4y2Ba/italic> <year> 1996年<gydF4y2Ba/year> <volume> 6<gydF4y2Ba/volume> <issue> 4<gydF4y2Ba/issue> <fpage> 755年<gydF4y2Ba/fpage> <lpage> 776年<gydF4y2Ba/lpage> <pub-id pub-id-type="other"> 2 - s2.0 - 0029860154<gydF4y2Ba/pub-id> </nlm-citation> </ref> <ref id="B8" content-type="article"> <label>8<gydF4y2Ba/label> <nlm-citation publication-type="journal"> <person-group person-group-type="author"> <name> <surname> Sprott<gydF4y2Ba/surname> <given-names> g D。<gydF4y2Ba/given-names> </name> <name> <surname> 悲伤的<gydF4y2Ba/surname> <given-names> 年代。<gydF4y2Ba/given-names> </name> <name> <surname> 弗莱明<gydF4y2Ba/surname> <given-names> l . P。<gydF4y2Ba/given-names> </name> <name> <surname> Dicaire<gydF4y2Ba/surname> <given-names> c·J。<gydF4y2Ba/given-names> </name> <name> <surname> 帕特尔<gydF4y2Ba/surname> <given-names> g . B。<gydF4y2Ba/given-names> </name> <name> <surname> 克里希南<gydF4y2Ba/surname> <given-names> l<gydF4y2Ba/given-names> </name> </person-group> <article-title> Archaeosomes不同脂质成分不同受体介导内吞作用和不同佐剂裹入抗原的免疫反应<gydF4y2Ba/article-title> <source> <italic> 古生菌<gydF4y2Ba/italic> <year> 2003年<gydF4y2Ba/year> <volume> 1<gydF4y2Ba/volume> <issue> 3<gydF4y2Ba/issue> <fpage> 151年<gydF4y2Ba/fpage> <lpage> 164年<gydF4y2Ba/lpage> <pub-id pub-id-type="other"> 2 - s2.0 - 0142070133<gydF4y2Ba/pub-id> </nlm-citation> </ref> <ref id="B9" content-type="article"> <label>9<gydF4y2Ba/label> <nlm-citation publication-type="journal"> <person-group person-group-type="author"> <name> <surname> Sprott<gydF4y2Ba/surname> <given-names> d·G。<gydF4y2Ba/given-names> </name> <name> <surname> Dicaire<gydF4y2Ba/surname> <given-names> c·J。<gydF4y2Ba/given-names> </name> <name> <surname> 象牙海岸<gydF4y2Ba/surname> <given-names> j . P。<gydF4y2Ba/given-names> </name> <name> <surname> Whitfield<gydF4y2Ba/surname> <given-names> d . 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H。<gydF4y2Ba/given-names> </name> <name> <surname> Dicaire<gydF4y2Ba/surname> <given-names> c·J。<gydF4y2Ba/given-names> </name> <name> <surname> Sprott<gydF4y2Ba/surname> <given-names> g D。<gydF4y2Ba/given-names> </name> </person-group> <article-title> 开发新的糖基化方法合成的archaeal-derived醣脂类佐剂<gydF4y2Ba/article-title> <source> <italic> 碳水化合物的研究<gydF4y2Ba/italic> <year> 2010年<gydF4y2Ba/year> <volume> 345年<gydF4y2Ba/volume> <issue> 2<gydF4y2Ba/issue> <fpage> 214年<gydF4y2Ba/fpage> <lpage> 229年<gydF4y2Ba/lpage> <pub-id pub-id-type="other"> 2 - s2.0 - 72649091322<gydF4y2Ba/pub-id> <pub-id pub-id-type="doi"> 10.1016 / j.carres.2009.10.011<gydF4y2Ba/pub-id> </nlm-citation> </ref> <ref id="B11" content-type="article"> <label>11<gydF4y2Ba/label> <nlm-citation publication-type="journal"> <person-group person-group-type="author"> <name> <surname> 克里希南<gydF4y2Ba/surname> <given-names> l<gydF4y2Ba/given-names> </name> <name> <surname> 悲伤的<gydF4y2Ba/surname> <given-names> 年代。<gydF4y2Ba/given-names> </name> <name> <surname> 帕特尔<gydF4y2Ba/surname> <given-names> g . 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