古细菌脂质结构之间的关系和他们的活动作为佐剂可以定义和探索合成新的头团体共价链接到archaeol (2, 3-diphytanyl-sn-glycerol)。饱和archaeol,适当稳定作为化学合成的前体,是获得高收益
总极性脂质提取各种古生菌水合物形成脂质体(archaeosomes [ 最近archaeol从水解分离极性脂质提取的 持久的CD8
通常,3.5 g的极性脂质 上述archaeol石油获得被硅胶柱层析法进一步纯化。石油溶解在氯仿/甲醇(2:1,v / v)加载在硅胶60(默克公司)列和archaeol筛选了压力使用己烷/ t-butylmethylether /醋酸(80/20/0.5,v / v / v)。收集分数被迷你薄层色谱法检测archaeol使用洗脱溶剂,包含纯archaeol汇集和干和分数。收益率的archaeol总极性脂质从43 - 53%不等。结构的身份和纯度archaeol证实了核磁共振光谱和电喷雾电离质谱。
根据[Archaetidylethanolamine合成
Archaetidylglycerolphosphate-O-CH
Archaeosomes是由保湿20 - 30毫克干脂质在40°C 2毫升PBS缓冲(10毫米磷酸钠,160毫米氯化钠,pH值7.1)与卵清蛋白类型VI(卵子,σ)作为检测抗原溶解在10毫克/毫升。泡大小减少到约100 - 150 nm直径通过短暂的声波降解法声波浴(费舍尔科学)和卵子不裹入了由7毫升离心PBS后跟2洗(200000 x g max 90分钟)。泡球团在2 - 2.5毫升resuspended PBS和过滤消毒通过0.45 量化的抗原是由分离卵从脂质使用[描述SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳和微
雌性小鼠C57BL / 6(6 - 8周大)皮下注射免疫尾巴基地附近有0.1毫升含有相当于20的疫苗
作为一个衡量Th2 CD4的手臂
骨髓是刷新C57BL / 6小鼠股骨和胫骨内孤立DCs。在RPMI培养基培养细胞获得补充8%胎牛血清(R8)(美国热科学HyClone UT)和5 ng / mL的粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(ID实验室,Inc .)。、加拿大)[
C57BL / 6小鼠免疫在0和3周皮下archaeosomes包含20
比较动物数据进行使用学生的手段
准备稳定醣脂类archaeosome佐剂与不带电glycosylarchaeols有必要包括脂质。这个函数可以由传统ester-phospholipid phosphatidylglycerol等。尽管小鼠接种archaeosomes组成的合成diglycosylarchaeols混合dipalmitoyl phosphatidylglycerol短期CD8抗原发达 首先,我们测试了CD8 老鼠CD8的反应也可以衡量细胞溶解的T淋巴细胞(CTL)检测,测量能力的效应细胞免疫小鼠的脾脏溶解EG.7目标细胞系表达显性表位(SIINFEKL)的卵子。在这个试验(图 评估的能力archaeosome佐剂直接通过MHC ii级表示CD4抗原通过抗原呈递细胞
磷脂酰丝氨酸受体与促进吞噬凋亡细胞碎片( 量化最优数量的辅助CD8
丧失能力的葡聚糖被用来评估激活DCs暴露的程度
保护小鼠免疫与archaeosomes各种脂质成分的固体肿瘤模型。组(
本研究的目标是定义一个archaeosome佐剂成分适合人类应用程序通过使用合成archaeol-based脂质。过去的研究机制的archaeosomes由各种古生菌的总极性脂质已经表明,辅助活动发生在抗原递呈树突状细胞和巨噬细胞的水平( 糖脂卸货,双分子层不稳定时形成努力准备纯glycolipid-liposome基础疫苗。这可以实现,理由自然glyco和磷脂组成的极性脂质,包括磷脂的醣脂类配方( 一系列mannosylarchaeols合成糖从1到5单位,水分最好的,给最好的辅助活动3或4线性糖单位( Archaetidylserine()的一个组成部分gentiotriosylarchaeol / mannotriosylarchaeol PGP archaeosomes CD8增加 CD8的寿命
抗原的免疫反应可能被优先指向mhc i (CD8)或mhc ii (CD4)选择演讲的头组(s) archaeol-based佐剂。PGP archaeosomes直接主要抗原抗体的反应正如前面提出的(