水提液的保护作用Baillonella toxisperma地塞米松诱导的大鼠胰岛素抵抗的研究

摘要

这项研究的目的是评估的水提取物的影响Baillonella toxisperma地塞米松诱导的大鼠胰岛素抵抗的研究。对其水提液进行了植物化学定量研究Baillonella toxisperma对总酚、黄酮、黄酮醇进行测定。口服不同剂量(提取剂60、120、240 mg/kg，二甲双胍40 mg/kg)前1小时腹腔注射地塞米松(1 mg/kg) 8天诱导胰岛素抵抗。在试验期间，在第1天和第8天评估体重和血糖水平。在治疗的最后一天，对大鼠进行糖耐量试验;然后采血检测甘油三酯、总胆固醇、LDL、HDL胆固醇、转氨酶(ALT、AST)、总蛋白水平。同时收集器官(心脏、肝脏、胰腺和肾脏)进行相对器官重量测定。结果表明，该水提物具有较好的稳定性b . toxisperma含有丰富的总酚，黄酮类，黄酮醇类和。这种提取物显著逆转大鼠地塞米松代谢改变（血脂，蛋白水平和转氨酶活性）。At doses of 120 and 60 mg/kg,Baillonella toxisperma亦大幅减少( ; ）胰岛素抵抗大鼠餐后高血糖。结果表明Baillonella toxisperma可以控制胰岛素抵抗，可能对2型糖尿病的治疗有用。

1.介绍

糖尿病(Diabetes mellitus, DM)是指一组以高血糖为主要特征的慢性代谢性疾病，其最终会导致机体多个系统的损伤[1]。它属于导致全球死亡的五大主要疾病，仍然是非洲的一个主要健康问题[2]。糖尿病主要有两种类型:1型糖尿病(T1DM)和2型糖尿病(T2DM)。T1DM是由胰岛素分泌受损引起，而T2DM是由遗传和环境因素共同引起，导致胰岛素抵抗和胰岛素分泌受损。2型糖尿病是糖尿病最常见的一种，其特征是由于胰岛素产生或作用缺陷导致高血糖和碳水化合物、蛋白质和脂代谢改变。每个国家患有2型糖尿病的人数都在增加，据估计，到2030年将有4.39亿人患有2型糖尿病[3]。使用合成药物治疗糖尿病已经取得了许多进展，但这些药物有许多不良反应。此外，许多当地人口往往无法获得这些药物，因为它们在分配方面存在困难。这些人群一般利用植物进行初级卫生保健。因此，传统的植物治疗方法似乎增强了一种有趣的潜力，通过适当的科学程序，其发展过程可以为社区提供一种可靠的替代方法。

Baillonella toxisperma，属于家庭山榄科，是一棵大树整个喀麦隆分布广泛，主要集中在杜阿拉和Yabassi [4，五]。传统上它叫做“莫阿比。”这是一个大的树主导着茂密的湿润森林。It can exceed 60 m in height. Its very straight and cylindrical bole has no shoulder, and its bark is cracked. The elongated leaves have many secondary veins and are grouped at the ends of the branches. The moabi fruit is a drupe sometimes containing several seeds [6]。干浸软树皮Baillonella toxisperma用于局部治疗糖尿病[五，但是没有科学证据支持这种说法。本研究旨在从科学的角度验证其保护作用Baillonella toxisperma茎皮水提物对地塞米松诱导的大鼠胰岛素抵抗的影响。

2。材料和方法

2.1。化学制品

所有的试剂都是商业获得的。地塞米松磷酸钠、福林- ciocalteu试剂、碳酸钠、亚硝酸钠、氯化铝、氢氧化钠、醋酸钠、没食子酸、槲皮素、儿茶素购自美国圣路易斯Sigma-Aldrich。d-glucose购自英国Norfolk Bexwell教育实验室生物试剂盒PE389GA。用于估算总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、总蛋白、丙氨酸转氨酶(ALAT)和天冬氨酸转氨酶的诊断试剂盒购自Inmesco, innovation for medical lab, L-S 04/2009德国。所有化学品和试剂均为分析级。

2.2。收集植物材料

Baillonella toxisperma2014年5月，在姆巴尔梅(喀麦隆中部)采集了茎吠。该植物在喀麦隆国家植物标本室通过与数字6608/HNC比较鉴定。茎的树皮被荫凉干燥，然后用机械研磨机磨粉，通过筛子，储存在一个密封的容器中。

2.3。水提取物的制备

粉状茎树皮(150克)b . toxisperma室温下，在1.5 L蒸馏水中浸泡48小时。然后将混合物通过滤纸过滤，滤液根据传统专家的建议留作发酵24小时。将滤液在40℃的干燥炉中蒸发浓缩。该提取物的收率为11.21%。

2.4。植物化学的分析

2.4.1。总酚的测定

提取物中总酚含量用改良的Folin-Ciocalteu法测定[7]。反应混合物是200μ提取的升，200 μl·ml 2N福林- ciocalteu试剂，400μl 20%碳酸钠溶液。搅拌混合物，在40℃的水浴中孵育20分钟。该实验进行了三次。吸光度在760 nm处读取。总酚含量以mg/g没食子酸当量(mg EAG/gE)表示，公式由没食子酸( ; )。

2.4.2。总黄酮的测定

Padmaja等采用铝比色法测定总黄酮含量[8]。总之,1500年μ蒸馏水和30升 μ在5％的亚硝酸钠的升加入到100 μl的提取物。室温孵育5分钟后，30μ的氯化铝（10％）和200升 μ向混合液中加入l氢氧化钠(1M)。该实验进行了三次。在510nm处测量吸光度。测定总黄酮含量，以儿茶素当量(mg EC/gE)计算( ; )。

2.4.3。测定黄酮醇含量

黄酮醇含量的测定采用Almaraz-Abarca等的方法[9]。在试管中含有1280 μ每公升蒸馏水40公升μl提取物(2 mg/ml)， 40μl的氯化铝(20%)和40μ加入l的醋酸钠(5%)。该实验进行了三次。30分钟后在415nm处测定吸光度。黄酮醇含量以槲皮素当量(mg EQ/gE)计算，由校准曲线( ; )。

2.5。实验动物

Wistar白化大鼠雌雄(180-250 g)取自喀麦隆德尚大学科学系动物生物学系动物舍。动物被饲养在室温(22-28℃)、自然光度和随意给予标准实验室饲料和水。所有实验均按照实验室动物护理和使用伦理指南进行。有关动物是按照欧洲共同体准则所述的国际认可的实验室动物使用和护理标准道德准则处理的[10]。

2.6。口服葡萄糖耐量试验

本实验使用30只禁食(14 h)过夜大鼠，分成5组，每组6只。第1组给予蒸馏水，第2组给予二甲双胍(40 mg/kg体重)，第3、4、5组用Baillonella toxisperma(AEBT)的剂量分别为每公斤体重60、120和240毫克。不同处理后1小时，所有大鼠口服d -葡萄糖(3 g/kg体重)。使用ACCU-CHEK动态血糖仪在尾静脉收集的血液中估计血糖。记录给药前和d -葡萄糖治疗后30、60、90、120分钟的血糖。

2.7。地塞米松诱导的胰岛素抵抗

腹腔注射地塞米松(1 mg/kg)引起胰岛素抵抗8天。36只大鼠在治疗前称重，然后分成6组，每组6只。按照Mahendran和Devi的描述，动物在地塞米松治疗前禁食一夜(14小时)[11]。第1组为正常对照组，按os (订单。蒸馏水和腹腔注射氯化钠(0.9%);第2组作为胰岛素抵抗的对照组，给予蒸馏水订单。和腹腔注射地塞米松;3组为阳性对照，给予二甲双胍(40 mg/kg，订单。)和地塞米松注射液;4、5、6组分别给予AEBT 60、120、240 mg/kg剂量，订单。+地塞米松注射。在治疗的第一天和最后一天评估血糖和体重。在治疗结束时，对大鼠进行糖耐量试验。

2.8。生化分析及器官重量测定

第9天麻醉动物，在抗凝血(肝素)下采集血液。随后，分离血浆，使用商业标准诊断试剂盒评估血脂、转氨酶(AST和ALT)和总蛋白水平。采血后，立即取出器官(心脏、肝脏、胰腺和肾脏)并称重，以测定相关器官的重量。

2.9。统计数据

所有结果均用均数±均数标准误差表示。数据分析采用单因素方差分析，Tukey后测(ALT、AST、脂质和蛋白水平)，双因素方差分析，Bonferroni后测(血糖变化和体重)，使用Graph Pad Prism version 5.03和SPSS逻辑植物化学分析。被认为是显著的。

3.结果

3.1。量化植物化学的测试

植物化学分析表明，其水提物为b . toxispermaContains a significant amount of phenols, flavonoids, and flavonols estimated at 23.09 ± 1.92 mg EAG/gE, 0.19 ± 0.02 mg EC/gE, and 0.37 ± 0.06 mg EQ/gE, respectively.

3.2。AEBT对正常大鼠口服糖耐量试验的影响

使用AEBT可显著降低餐后血糖浓度。在剂量为240 mg/kg时，观察到最佳效果，较90 mg/kg显著降低50.34%^th分钟( ）在120分钟后强调(69.31%; ）（数字1)。

3.3。AEBT对地塞米松诱导的胰岛素抵抗的影响

3.3.1。对体重的影响

地塞米松显著减少（ ）the body weight of rats after 8 days of administration, except on metformin-treated rats. Treatment with the aqueous extract ofb . toxisperma并不能阻止这种减肥（图2)。

3.3.2。AEBT对血糖水平的影响

There was no significant variation of the blood glucose level of rats after 8 days of dexamethasone administration. However, extract at dose of 120 mg/kg significantly reduced ( ）与地塞米松对照组相比，大鼠血糖水平提高29.62%(图)3)。

3.4。AEBT对地塞米松治疗的大鼠葡萄糖耐量试验的影响

二甲双胍(40 mg/kg)和AEBT在60 mg/kg剂量下显著降低( ; ）60例地塞米松大鼠餐后高血糖^th120年^th分钟(图4)。

3.5。AEBT对生化指标的影响

的影响b . toxisperma胰岛素抵抗大鼠的生化指标见表1。从表中可以看出，注射8天地塞米松明显减少( ）地塞米松对照组大鼠与正常对照组大鼠的总蛋白水平比较。AEBT和二甲双胍保护大鼠不受这种血浆蛋白水平的降低。

As shown in the same table, dexamethasone administration (1 mg/kg) significantly increased the levels of triglycerides ( ),总胆固醇和LDL胆固醇（ ）和减少( ）HDL胆固醇的水平。然而，二甲双胍和提取物试图扭转这种情况，特别是在血浆甘油三酯水平。

ASAT和ALAT活动显著增加( ）地塞米松对照组大鼠与正常对照组大鼠比较。使用AEBT(120和240 mg/kg)显著降低ASAT和ALAT活性。

3.6。AEBT对相对器官重量的影响

地塞米松引起的显著增加( ）大鼠肝脏重量比正常对照组，但并没有影响到其他脏器的重量（心脏，肾脏和胰腺）。Only the metformin (40 mg/kg) treatment significantly reduced ( ）肝脏重量增加（图五)。

4.讨论

地塞米松是一种合成糖皮质激素，长期高剂量暴露会导致胰岛素抵抗[12]。在目前的研究中,实验诱导胰岛素抵抗在剂量的地塞米松1毫克/公斤管理连续8天导致深远的改变代谢参数的特点是高水平的总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、甘油三酯和高密度脂蛋白胆固醇水平较低的情况下,总蛋白,小鼠体重。

胰岛素抵抗促进脂肪组织激素敏感性脂肪酶活性的增加和脂蛋白脂肪酶活性的降低。这导致脂肪细胞中脂肪酸动员的增加，以及肝脏中甘油三酯合成的增加，甘油三酯以VLDL胆固醇的形式释放到血液中[13]。根据Halimi [14血液循环中存在一种特殊的酶，即“胆固醇酯转移蛋白”(CETP)。在高甘油三酯血症条件下，这种酶将甘油三酯从VLDL胆固醇转移到HDL胆固醇。富含甘油三酯的HDL胆固醇被迅速水解，由于其分解代谢能力的增强，血液中HDL的水平下降。高胆固醇血症可能是由于肝脏中甘油三酯的增加，这将导致“甾醇调节元素结合蛋白”49 (SREBP)表达的增加，这是一个调节捕获和胆固醇合成的因素[13]。在这项研究中，各种治疗方法显著降低了甘油三酯、总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇，提高了高密度脂蛋白胆固醇水平。这些结果可以反映水提物的性能b . toxisperma提高组织对胰岛素的敏感性，从而降低激素敏感性脂肪酶活性，增加脂蛋白脂肪酶活性，导致脂解减少。水和甲醇提取物b . toxisperma因此具有降脂性质。黄酮类化合物已被证明可以改善血脂异常[15-17]。由此可见，降血脂的作用b . toxisperma可能是由于该植物中所含的黄酮类物质所致。这些提取物可以有效预防糖尿病血脂异常相关的心血管并发症。

谷草转氨酶和谷丙转氨酶是肝功能的标记物，由于肝细胞膜完整性丧失和细胞损伤而释放到血流中[18]。众所周知，糖皮质激素增加脂质分解代谢。脂肪分解的增加导致大量脂肪酸的释放，这些脂肪酸积累在肝脏中[19]。这种脂肪酸在肝脏的积累导致肝脂肪变性，并伴有炎症，导致肝脏肿块增加和长期组织坏死[20.]。因此，本研究中地塞米松大鼠ALT、AST活性及相对肝重的显著增加可能是由于地塞米松对肝脏的毒性作用所致。用水提物处理的动物转氨酶水平的下降表明b . toxisperma可逆转地塞米松对肝脏的肝毒性作用。这印证了Bomgning等人的研究结果[21他证明了水和甲醇提取物的肝保护特性b . toxisperma。这种肝保护作用可能与植物中的多酚类化合物有关，其肝保护作用已被证实[22，23]。

在本研究中，含水提取物b . toxisperma保护大鼠不受地塞米松诱导的总蛋白水平显著降低。这种效果反映了这些提取物的胰岛素增敏作用，因此，蛋白水解减少。提取物对大鼠体重和相对肝重的降低无明显影响。

从这项研究的结果，地塞米松没有显著改变老鼠的血糖。However, in animals treated with the aqueous extract at dose of 120 mg/kg, there was a significant decrease in blood glucose. These results suggest thatb . toxisperma提取物也可通过刺激胰岛素分泌而起到降糖作用。这些降糖作用可能与植物提取物中黄酮类和黄酮醇的存在有关。事实上，N 'diaye等人[24表明这些化合物具有抗糖尿病的特性。在正常和地塞米松处理的大鼠，水提液b . toxisperma为有效预防糖耐量受损。这些观察表明，b . toxisperma可以防止地塞米松诱发胰岛素抵抗。

5.结论

总之，我们的研究表明，水提物B.在地塞米松诱导的大鼠胰岛素抵抗中，毒蕈碱已被证明具有降血糖、降血脂和肝保护作用。这些效应可能是由于植物中存在的酚类和类黄酮。

数据可用性

支持本研究结果的数据可在合理要求下从通讯作者处获得。

的利益冲突

作者声明，本论文的发表不存在任何利益冲突。

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