大鼠主动脉睾酮和胆固醇血管扩张与l型钙通道抑制有关

抽象的

睾酮具有快速的非基因组血管扩张作用，可参与心血管保护行动。一些作者提出了具体的机制来解释这一效应，但这一问题尚未澄清。我们研究了睾酮和胆固醇对大鼠主动脉内皮剥离的作用及其对l型的影响电流()及钾电流()．睾酮(1 - 100M)完全放松，以快速且浓度依赖的方式，主动脉环被KCl或()湾K8644(湾)。胆固醇还能完全放松氯化钾引起的收缩。所有钾通道拮抗剂(格列本脲、四乙基铵和4-氨基吡啶)均未显著改变睾酮的松弛作用。经典睾酮受体拮抗剂氟他胺不能改变睾酮的血管舒张作用。此外，睾酮和胆固醇抑制基础和baye刺激对A7r5细胞没有影响．综上所述，我们的结果表明，胆固醇和睾酮可以通过抑制LTCC来放松大鼠主动脉。睾酮的这种作用不是由经典的激素受体或钾通道激活介导的。这些结果表明，胆固醇和睾酮的血管扩张机制是相同的。

1.导言

心血管健康问题发生率的性别差异归因于妇女和男性中发现的不同性激性模式。一些研究和临床试验表明，女性和男性性荷尔蒙的血管功能直接调节[1］．睾酮与心血管系统的负面影响有关，如心血管疾病风险增加、血栓形成、心脏肥厚和可疑的致动脉粥样硬化效应[2，3.］．然而，最近的研究表明，睾酮有一些有益的心血管作用，一些流行病学研究也表明，心血管疾病患者的睾酮水平较低[4- - - - - -7］．另一方面，高胆固醇血症与心血管疾病的增加有关。一些试图将高胆固醇血症与异常血管平滑肌(SMC)收缩联系起来的研究集中在内皮细胞上。

在过去的几年里，睾酮引起的血管扩张已经在不同物种的不同血管中得到证实[8，9］．经典雄激素受体阻滞剂氟他胺预处理并没有减弱这种血管扩张[10- - - - - -12和非基因组睾酮类似物也被证明比基因组作用类似物诱发更大的血管舒张[12，13］．另一方面，对大鼠不同血管进行的研究表明，去除内皮细胞会轻微降低主动脉中的睾酮松弛作用[13]和肠系膜动脉[11，14］．然而，Yue et al.(1995)指出睾酮可诱导家兔离体冠状动脉和主动脉内皮独立舒张[12］．此外，睾酮诱导的猪冠状动脉舒张与cGMP的积累通过一种内皮无关的机制相关[15］．

关于睾酮对血管平滑肌细胞膜离子通量的调节，有人认为在大鼠主动脉中，这种激素的生理浓度会抑制LTCC[16，17]而T型电流仅在较高浓度时被阻断[17］．另一方面，已经提出了钾通道在睾丸素诱导的不同种类动脉血管扩张中的功能含义[10，11，18- - - - - -20.］．血管平滑肌钾通道的激活可能引起质膜的超极化，从而导致LTCC的关闭和血管的舒张。Honda等人认为，这种机制在系统性高血压的情况下可能更相关[18］．

胆固醇的作用最初被认为是由内皮介导的，一些作者认为，胆固醇降低了内皮衍生因子(主要是NO)的产生和/或可用性，导致内皮功能障碍和血管反应性异常[21］．最近，有人提出胆固醇:通过增加钙离子来增加血管敏感性^2＋磁导率(22，通过rho激酶(ROCK)介导的途径增加钙致敏[21]，影响血管对内皮素-1和5-HT的反应性[22，23，降低LTCC的表达[24]并调节特定的内整流器和ATP敏感钾通道亚型的表达水平[25］．另一方面，来自胆固醇合成途径的非固醇甲戊酸衍生物法尼醇被报道可抑制血管平滑肌细胞中的l型钙通道(LTCC) [26，27]，还可使收缩的大鼠主动脉和人肠系膜动脉舒张[28］．

综上所述，睾酮具有血管非基因组作用，包括血管扩张，而胆固醇在这一水平的影响尚不确定。睾酮引起的血管扩张可能涉及多种离子通道的调节。本研究的目的是分析睾酮和胆固醇对大鼠主动脉平滑肌的影响，比较在每个病例中涉及的机制。本文分析了睾酮和胆固醇对大鼠主动脉内皮剥离收缩的影响。采用膜片钳技术分析睾酮和胆固醇对A7r5细胞钙钾电流的影响

2.方法

２.１.大鼠主动脉收缩性实验

体重400-500克的成年雄性Wistar大鼠(Charles-River, Barcelona, Spain)被饲养并适应至少一周，然后在适当的实验室设施中进行实验，光照周期为12小时:12小时黑暗，食物和水随意这个rats were used in accordance with the European regulations about protection of animals (Directive 86/609) and the Guide for the Care and Use of Laboratory Animals promulgated by the US National Institutes of Health (NIH Publication No. 85–23, revised 1996).

将大鼠斩首处死。开胸术后，取主动脉，置于恒温(37℃)Krebs改良溶液中，清洗脂肪和结缔组织。用棉签通过动脉管腔轻轻摩擦，机械地去除血管内皮。将动脉环置于器官浴(LE01.004, Letica)中，该器官浴中含有krebs -碳酸氢盐溶液，温度为37°C，连续与碳气体混合。Krebs改性溶液的组成为(mM): NaCl 119、KCl 5、CaCl₂ 2 h₂0.5 O, MgSO₄ 7小时₂1.2 O, KH₂阿宝₄1.2, NaHCO_3.25，EDTA-NA₂0.03，L-（+）-抗坏血酸0.6和葡萄糖11（pH值7.4）。用两根平行不锈钢丝悬挂环，并使用等距传感器（TRI201，西班牙Panlab SA），放大器（ML118/D四桥，ADInstruments），接口PowerLab/4SP（ML750，ADInstruments）进行张力测量，以及使用Chart5 PowerLab软件（ADInstruments）的计算机化系统。在休息期间，每15分钟更换一次器官浴液。

最初，将这些环平衡60分钟，直到静息张力为1.0 g。在平衡期之后，主动脉环首先在高等渗KCl浓度下收缩(60 mM)，而对乙酰胆碱缺乏松弛反应证实内皮功能缺失(1在那之后，动脉被清洗，并让其在下一次诱导收缩前至少休养45分钟。使用KCl (60 mM)或(-)-Bay K 8644 (BAY;0.1M)和睾酮引起的血管舒张(1-100对这些收缩进行了分析。

主动脉环与主动脉瓣合并收缩(0.1M） 增加到10后 mM表示Krebs溶液中的KCl浓度。Krebs KCl浓度增加至10 mM，以便于打开Ca^2＋通道位于K8644湾。胆固醇的影响(1-100也分析了KCl (60 mM)收缩的动脉环。在一些实验中，使用氟他胺(一种典型激素受体的特异性拮抗剂)研究了典型激素受体参与睾酮血管舒张作用的情况。在这些病例中，动脉收缩后用氟他胺(10并分析了睾酮在这种拮抗剂存在下的作用。为了确定钾通道激活在睾酮效应中的作用，我们在一些实验中使用了几种钾通道抑制剂:四乙基铵(TEA;1 mM)，抑制剂；格列本脲(10M)，一种抑制剂；和4-aminopyridine (4-AP;1 mM)，抑制剂．在这些病例中，收缩后，动脉与钾通道抑制剂共孵育15分钟，并分析这些药物存在时睾酮的作用。用乙醇(用来溶解药物的载体)进行对照实验。

2．2.血管平滑肌细胞的培养

本研究中使用的A7r5细胞系是一种商业血管平滑肌细胞系，取自胚胎大主动脉(Promochem，西班牙)。细胞在Dulbecco 's Modified Eagle 's medium / nutrition Mixture F-12 Hams (DMEF-F12;Sigma-Aldrich，葡萄牙)补充NaHCO3 (1.2 g/L)， L-抗坏血酸(20 mg/L;Sigma-Aldrich)，牛血清白蛋白(0.5%;热灭活胎牛血清(FBS;10%;生物色素)，青霉素(100 u/mL)，链霉素(100g/mL)和两性霉素B (250ng /mL) (Sigma-Aldrich)。细胞在37°C、5% CO的湿化气氛中培养₂在空气中。汇合后，将细胞置于不含FBS（无FBS培养基）的培养基中24-48小时。使用胰蛋白酶（0.3%）溶液在Ca^2＋毫克^2＋- 用EDTA（0.025％）的磷酸盐缓冲溶液。随后，将细胞保持在4℃的FBS的培养基中直至实现电生理实验。

2．3.电生理实验

采用膜片钳全细胞构型技术分析l型钙电流()及钾电流()．

分析，对照外用溶液含（mM）：NaCl 124.0，CaCl₂5.0, HEPES 5.0，四乙基铵钠盐(TEA) 10.0, KCl 4.7，葡萄糖6.0,NaOH调节pH 7.4。贴片电极(2-4 M)填充内溶液(mM): CsCl 119.8, CaCl₂0.06, MgCl₂4.0，Na-ATP 3.1，Na-GTP 0.4，EGTA 5.0，HEPES 10.0和TEA 10.0，pH 7.3用CSOH调整。CS的存在⁺而不是K⁺溶液中的钾离子阻断了钾的电流。细胞保持在-80 mV的保持电位，并在500 ms测量期间每8秒常规去极化至0 mV测试电位．

分析，对照外液含(mM): NaCl 134.3, CaCl₂1.0, HEPES 5.0, KCl 5.4，葡萄糖6.0,pH 7.4用NaOH调节。贴片电极(2-4 M)填充内部溶液（mM）：KCl 125.0，MgCl₂1.0, Na-ATP 5.0, Na-GTP 0.5, EGTA 0.1, HEPES 20.0，葡萄糖10.0,pH 7.3与KOH调节。为分析中，我们使用相同的保持电位和去极化到60 mV，每8秒进行300 ms。

基底和在贴片破裂后3-5分钟进行测量，以使移液管和细胞内溶液达到平衡。电容和泄漏电流不补偿电流。所有实验均在室温（21-25°C）下进行在给定的实验中，温度变化不超过1°C。使用膜片钳放大器Axopatch 200B（Axon instruments，USA）对细胞进行电压钳制。电流采样频率为10 kHz，并以0.1进行滤波 使用模拟数字接口Digidata 1322A（Axon Instruments，USA）连接到带有Pclamp8的兼容计算机上的kHz 软件（Axon Instruments，USA）。通过将细胞放置在一个250 mm的开口处，将外部溶液应用于细胞附近 M的内径毛细管以20的速率流动l /分钟。基底和湾刺激（10nm）在不同浓度的睾酮(1-100M)和胆固醇(1-100m）溶解在外部溶液中。

２.４.药物

所有药物和化学品均从Sigma-Aldrich Química（葡萄牙辛特拉）购买，但从Biogen Scientifica（西班牙马德里）购买的4-氨基吡啶除外。

氟他胺、(-)-Bay K 8644 (BAY)、硝苯地平(NIF)、胆固醇和睾酮最初溶解在乙醇中。将4-氨基吡啶(4-AP)、格列本脲、阿帕明和四乙基铵钠盐(TEA)溶于去离子水中。实验前每天在Krebs改性溶液或相应的电生理外溶液中配制适当的稀释剂。实验中乙醇的最终浓度从未超过0.1%。

2．5．统计分析

使用Sigmastat统计分析系统，1.00（1992）进行数据的统计处理。结果表示为平均值±SEMn实验。在收缩性实验中n表示使用的环的数量，至少从3只动物获得。在电生理实验中n是被分析的细胞数量。多组间比较采用单因素方差分析，然后采用Dunnet事后检验，以确定平均值之间的显著差异。两组比较采用Students进行分析t以及。概率水平低于5%被认为是显著的()．

在收缩实验中，由睾酮和胆固醇引起的松弛反应以最大收缩的百分比(=100%)由相应的血管收缩剂产生。在这些实验中，血管松弛剂效应的浓度-响应曲线被拟合₅₀数值（即，引起50%松弛的浓度）经典雄激素受体拮抗剂氟他胺可自行放松由KCl收缩的动脉，在这种情况下，用于绘制浓度-反应曲线的最大效应是在氟他胺存在时获得的张力。

的在每8秒脉冲的最大电流峰值和稳定电流平台之间自动计算振幅。的使用不同药物引起的差异以基底或baye刺激的百分比表示这个变异以基部的百分数表示在没有任何药物的情况下去极化而得到的。

3.结果

３．１．睾酮和胆固醇在大鼠主动脉中的血管舒张作用

用等渗KCl (60 mM)溶液去极化，用钙通道开启剂BAY (0.1 mM)收缩无内皮的大鼠主动脉环M). KCl和BAY引起的最大收缩，毫克(n= 54)和毫克(n= 18)，差异无统计学意义(,学生的t以及)。用克雷布斯溶液冲洗后，这些收缩作用是可逆的。

在使用KCl和BAY获得稳定收缩后，睾酮的累积添加量（1-100 M)完全放松(100%)，这两种情况下的收缩与浓度有关(图1(一))．在10-15分钟后观察到每个浓度的睾酮诱导的血管插入。睾酮的使用没有损伤动脉的收缩性质，因为在洗涤后，第二次施用收缩剂引起了比前一个相似的收缩（，数据未显示)。在KCl或BAY收缩的动脉中，睾酮引起的最大舒张相似(图)1(一))．然而,集成电路₅₀从kcl收缩的动脉中获得的数据明显大于从bay收缩的动脉中获得的数据1)．

胆固醇(1 - 100M)也诱导了KCl收缩的大鼠主动脉环的浓度依赖性血管松弛。胆固醇的最大放松效果与睾酮相似()(图1 (b))．然而,集成电路₅₀睾酮(；)明显大于胆固醇(；） (,学生的t以及)。

用于溶解睾酮和胆固醇的乙醇，在使用的浓度下没有显著的松弛作用(图)1)．

睾酮在大鼠主动脉中的血管舒张作用可能是通过激活经典细胞内受体介导的。为了测试这种可能性，氟他胺(10对睾酮血管舒张进行了分析。起初，在KCl收缩后，动脉环暴露于氟他胺15分钟，这导致大鼠主动脉环明显松弛(%)。然而，氟他胺不影响睾酮的血管松弛作用，因为IC₅₀无此拮抗剂和有此拮抗剂时获得的值相似(,学生的t以及;表格1)．

我们还研究了三种不同钾通道(格列本脲、4-AP和TEA)的抑制剂的作用，以分析这些通道在睾酮松弛机制中的作用。格列本脲、4-AP或TEA的存在对KCl引起的收缩没有显著影响(数据未显示)，也没有显著改变睾酮的松弛作用(图)2） (，单因素方差分析与邓纳特事后检验)。的集成电路₅₀在任何K存在的情况下计算的睾酮值⁺通道抑制剂与IC没有显着差异₅₀在没有阻滞剂的情况下计算的值(桌子1)．

３.２．睾酮和胆固醇的影响在A7r5细胞

采用全细胞膜片钳技术通过LTCC ()。基值的平均值密度为0.93±0.05 pA/pF (n= 91)。BAY (10 nM;LTCC特异性刺激器)显著刺激钙电流74.8±5.7% (n= 36)在基础水平之上。相反，硝苯地平(1M;LTCC抑制剂)显著降低电流至20.6±2.2% (n= 8)的基底电流()．即便如此，BAY和/或硝苯地平的影响在洗脱后是完全可逆的(图)3.)这些结果表明所分析的电流为LTCC电流()．数字3.显示了BAY (10 nM)刺激基底的两个实验的时间过程(图3(一个))和硝苯地平(1M)抑制了baye刺激和基底(图3(一个)和3 (b)、职责)。

就像睾酮的血管扩张机制是对LTCC的抑制一样，我们测试了这种类固醇对图形4(一)显示了一个典型的实验，在不同的浓度(1-100M)睾丸素抑制基底细胞以可逆的方式。数字5(一个)总结了不同浓度睾丸激素(1,10,30和100)的实验结果米)抑制基底以依赖于浓度的方式。胆固醇对基础的影响也进行了分析(图5(一个))，和睾酮、胆固醇(1-100M)抑制基底．此外，胆固醇在基础上似乎与睾酮有相似的作用（,学生的t-测试)，即使睾丸激素的影响更大。

为了进一步研究睾酮对血管LTCC的抑制作用，我们分析了睾酮对血管LTCC的影响由LTCC激动剂湾刺激。数字4 (b)显示了一个典型的实验，在不同的浓度(1-100M)睾丸素可逆地抑制受BAY (10 nM)刺激。睾酮对bayy刺激的抑制作用取决于浓度。100年M浓度的睾酮完全抑制了BAY的刺激减少以下基级别（图5 (b))．为了进一步研究胆固醇对血管LTCC的抑制作用，我们也分析了胆固醇对血管LTCC的影响刺激的海湾。抑制胆固醇BAY-stimulated这个maximal concentration of cholesterol used inhibited on%的BAY-stimulated(图5 (b))．用于溶解睾酮和胆固醇的乙醇(0.001-0.1%)对基底激素和刺激激素均无影响(数据没有显示)。睾酮和胆固醇对bayo刺激的影响并无显著差异(,学生的t-测试)，即使对胆固醇的影响较低。

3．3.睾酮和胆固醇的影响在A7r5细胞

采用全细胞膜片钳技术分析钾电流()。基值的平均值密度是 pA/pF (n= 34)。为了确定负责测量总电流的钾通道的类型，我们使用了不同通道的选择性阻滞剂。的通道阻滞剂4-AP减少基底在％在+60 mV。茶（1毫米），用作a通道阻滞剂，减少净电流%在+60 mV(图6)．我们还测试了低电导的存在使用选择性阻滞剂apamin (10M)，导致基底上的小减少（%)。格列本脲，通常用作通道阻滞剂，也引起了小幅度的减少（%，)(图6)．钾通道阻滞剂的作用是完全可逆的药物洗脱。因此，我们的数据表明，测量的钾电流主要是由钾出口通过和频道。

为了进一步阐明睾酮的血管舒张机制，研究了该类固醇对A7r5的影响进行了分析。结果表明，不同浓度(1-100M)的睾丸素没有抑制当前(表2)．不同浓度的胆固醇也观察到类似的结果(见表)2)．

4.讨论

在本研究中，我们分析了睾酮和胆固醇对内皮剥离大鼠主动脉收缩动脉的影响和A7r5细胞全细胞电压箝位测量。

此前，其他研究大鼠主动脉的作者观察到睾酮松弛作用[14，18，29，30.和其他动脉，如狗的冠状动脉[31]来自人类[32或人类脐动脉[10］．睾酮在大鼠剥夺与KCl收缩的主动脉圈的血管内X效应浓缩依赖性，得到的最大松弛效果为100％，与TEP-areNan等人获得的数据一致。[14］．一些作者认为血管舒张作用部分依赖于内皮[11，13，14，18］．我们的数据显示，无论内皮内的角色如何，睾酮的效果都是在没有内皮的情况下诱导的，同时与其他作者一致[12，15，30.，33］．我们发现，睾酮完全放松了动脉，无论是KCl或BAY收缩，尽管IC₅₀在KCl收缩动脉时更大。细胞外高浓度的KCl可诱导质膜去极化。这种去极化可以激活电压依赖通道，其中ltcc的开放增加细胞内钙水平和肌肉收缩。BAY直接而特异地开启LTCC，同样通过细胞内钙离子的增加诱导血管平滑肌收缩。因此，这些结果表明，睾酮抑制KCl和baya引起的收缩，并指出LTCC抑制是导致这种效应的原因，正如其他作者先前提出的[34]为了证实这一点，我们在A7r5中进行了膜片钳研究，以分析睾酮对LTCC活性的影响。BAY是一种已知的此类通道激动剂，它明显刺激基底细胞硝苯地平是LTCC的选择性拮抗剂，可显著阻断基础或baye刺激的钙电流。这些数据证实钙电流测量是由于钙通过LTCC进入。我们的结果也显示睾酮在基础上有快速的浓度依赖性抑制作用．其他作者先前指出，在A7r5细胞中，睾丸激素抑制LTCC [16，17]及t型钙通道[17］．若干作者提出，在大鼠主动脉诱导的雄激素诱导的血管内膨胀可以由非LTCC诱导，因为当这些类固醇诱导的腺囊诱导的呼吸诱导的弛豫而不是KCl或去甲肾上腺素诱导的收缩时诱导35］．但是，我们的结果表明，睾酮诱导的睾丸激素引起的收缩，并首次表明睾丸激素抑制湾刺激，证实睾酮对大鼠主动脉LTCC的抑制作用。

诱导体外血管扩张所需的睾酮浓度是超病理学的。总的来说，在体内和体外产生效果所需的睾酮浓度之间存在很大的差异。一般来说，诱导松弛作用所需的雄激素浓度是超生理学的[8，12，35，36］．关于对离子通道的影响，以往对血管平滑肌细胞的研究表明，观察这些影响需要睾酮浓度的差异。在A7r5细胞中，Scragg等人观察到，在超aphysiological浓度下，睾酮抑制LTCC和t型钙通道[17］．在同一细胞中，Hall等人观察到纳米摩尔浓度的睾酮抑制LTCC [16］．在用人类心血管LTCC的α 1c亚单位转染的HEK293细胞中，显示睾酮浓度从0.1到100M抑制这些通道[37］．在新鲜大鼠主动脉肌细胞中，Montano等人也观察到生理浓度的睾酮抑制LTCC [36］．与其他亲脂物质一样，睾酮是通过血浆蛋白进行运输的，如性激素结合球蛋白(SHBG)。最近在一些细胞类型中发现了SHBG的膜受体，这提示激素-球蛋白复合物可能能够引起细胞反应，或者SHBG可能负责睾丸激素在细胞膜靶内的正确定位[38］．如果SHBG参与睾酮向细胞膜蛋白的呈递，我们实验中该信号机制的缺失可能导致这些研究中显著的效价损失。然而，升高的浓度似乎与类固醇的溶解度有关，因为在我们的实验条件下没有类固醇结合蛋白。

睾酮的抑制作用是快速且可逆的，药物洗涤后这种抑制作用消失。这些数据表明睾酮效应是由非基因组途径介导的。以前，一些作者描述了存在一种由性类固醇诱导的非基因组机制，它调节血管张力[39]此外，还提示存在一种未知受体，该受体尚未被识别并置于细胞表面或细胞内空间[38，40］．此外，睾酮可以通过直接与通道结合来阻断LTCC [41］．此外，最近Scragg等人观察到硝苯地平结合位点的LTCC突变导致睾酮血管舒张效应的丧失[37］．另一方面，其他作者表明，在猪冠状动脉肌细胞和大鼠主动脉肌细胞中，环核苷酸水平的增加与睾酮的血管扩张作用有关[15，36，提示睾酮与环核苷酸途径相互作用。

与钙通道抑制假说相反，其他研究者报道睾酮的血管扩张作用是由于刺激钾通道[13，18］．血管平滑肌钾离子通道的激活可能引起LTCC的复极化和关闭，从而促进血管舒张。文献中关于不同钾通道在睾酮血管松弛作用中的作用的数据是有争议的。激活在大鼠肠系膜动脉床中，通道与睾丸激素的作用有关[11，19]，在猪冠状动脉肌细胞中[15，在人体内乳动脉[20.]，以及人类脐动脉[10］．的参与睾酮放松效果中的频道在大鼠主动脉中报告[13，兔冠状动脉[19和人脐动脉[10］．最后,通道介导大鼠主动脉睾酮血管舒张[18，人体桡动脉[42和人类海绵体[43］．我们使用了不同类型的钾通道抑制剂，来测试这些通道在睾酮效应中的作用。茶、格列本脲和4-AP均未显著改变睾酮的血管舒张作用，提示钾通道开放与睾酮诱导的大鼠主动脉血管扩张无关。为了进一步研究睾酮对钾通道的影响，我们对A7r5进行了膜片钳研究。测量的电流被明显地抑制通道阻止（4-AP）和由此通道阻滞剂（茶），但低电线通道阻断剂(阿帕明)和通道阻滞剂(格列本脲)对钾电流的影响很小。因此，我们的结果表明，A7r5细胞中的钾电流主要是由于和.另一方面，我们的数据也表明睾丸激素不能刺激在A7R5细胞中，确认收缩性数据，并证明钾通道不涉及在大鼠主动脉中的睾丸激素血管内效应中。这些数据与猪前列腺小动脉中获得的数据相似[33]和大鼠胸主动脉[36］．事实上，睾酮对钾通道的影响在A7r5细胞中从未被证实。

一些作者认为，用经典的雄激素受体阻滞剂氟他胺预处理睾丸激素诱导的血管扩张也没有减弱[10- - - - - -12］．此外，极性、非渗透性睾酮类似物已被证明比非极性、非渗透性睾酮类似物诱发更大的血管扩张[13］．此外，睾酮介导的血管扩张在雄激素受体缺乏的血管中得以维持[41］．因此，效果似乎与经典基因组信号传导途径无关，并且这种效果由不同的信号通路或未知受体介导。关于大鼠主动脉，一些作者观察到氟胺不抑制睾酮诱导的血肠化[12，14］．Tep-areenan等人也证实米非司酮(一种非特异性类固醇受体拮抗剂)没有抑制睾酮效应[14］．我们的数据还表明，细胞内睾酮受体的阻断不会改变睾酮的血管舒张作用，证实睾酮的作用是独立于雄激素受体的。相反，Murphy和Khalil表明氟他胺抑制了睾丸激素在猪冠状动脉中的血管松弛作用[44］．另一方面，我们的数据显示氟他胺引起kcl收缩动脉的意外和直接舒张。从这个意义上说，Iliescu等曾在大鼠主动脉中发现氟他胺诱导的血管舒张作用，并认为这种作用独立于核受体的激活，涉及NO-cGMP通路的激活[45］．Ba等人还在大鼠动脉中观察到这种效应，雄鼠动脉中的氟他胺松弛比雌鼠更大，表明这是一种性别依赖的机制[46］．

几种调查人员观察到其他性类固醇具有比睾酮相同的血管扩张效果[47，48］．此外，一些机制被提出来解释这些类固醇的血管扩张作用类似于睾酮，例如在猪冠状动脉中通过17 -雌二醇和孕酮抑制钙进入[48，或雌激素对大鼠主动脉LTCC的抑制[49].这些数据可能表明这类物质具有非特异性作用。事实上，法尼醇，一种非甾醇甲戊酸衍生物和胆固醇合成途径的中间体，也被报道抑制血管平滑肌细胞的LTCC[26，27]还可诱导收缩的大鼠主动脉和人肠系膜动脉舒张[28］．为了探讨睾酮扩血管作用的特异性，我们分析了胆固醇对大鼠主动脉和A7r5细胞的影响。这是第一次，我们发现胆固醇，像睾酮一样，完全放松了动脉被氯化钾收缩，尽管睾酮是更大的。关于胆固醇对离子通道的影响，我们的结果也首次表明，增加胆固醇浓度抑制基底和baye刺激与睾酮一样，胆固醇也不能改变膜片钳测得的钾电流。这些结果表明，睾酮和胆固醇在大鼠主动脉中具有相同的机制，与抑制LTCC有关。

总之，我们的结果表明睾丸激素抑制在大鼠主动脉血管平滑肌细胞中却没有．此外，睾酮的作用不是由经典的激素受体或钾通道激活介导的。此外，我们的研究结果首次表明，在大鼠主动脉和A7r5细胞中，胆固醇与睾酮有相似的作用，这表明两种类固醇有共同的作用机制，其他类固醇也有共同的作用机制。

承认

作者感谢FCT (Fundação para a Ciência e a Tecnologia)支持了SFRH/ BPD/14458/2003和SFRH/BDE/15532/2004奖学金。

工具书类

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