犬利什曼病疫苗

摘要

婴儿利什曼虫是哺乳动物巨噬细胞必需的胞内寄生虫，可引起人畜共患病内脏利什曼病(ZVL)。被感染犬的存在作为ZVL的主要宿主被认为是人类感染的最重要的潜在风险。因此，预防犬内脏利什曼病(CVL)对于阻止目前地中海内脏利什曼病的增加至关重要。最近在实现犬保护性免疫方面取得了相当大的进展，并在实现有效的抗狂犬病疫苗方面进行了几次重要的尝试，这使得科学家们对其在根除ZVL方面的重要作用产生了信任。这篇论文强调了从2007年到现在在预防犬内脏利什曼病疫苗接种方面的最新进展。

1.介绍

1．1.搜索策略

按照这个顺序，对MEDLINE(使用PubMed)和Scopus数据库发表的文章进行分析，提取2007年至今所做的所有研究信息。犬利什曼病，疫苗和l . infantum是查找记录的主要关键词。虽然一些记录无法获得全文格式，但作者试图购买全文副本。本研究旨在通过CVL和角色开启新的态度利什曼虫犬用疫苗控制人内脏利什曼病。

1．2．犬内脏利什曼病(CVL)的重要性

利什曼病是一种从皮肤到内脏具有重要临床多样性的复杂疾病，目前正在除大洋洲以外的所有大洲传播[1］．内脏利什曼病(VL)是世界范围内最重要的传染病之一，至少在88个国家流行。每年的发病率约为50万例[2］．由于它对全球公共卫生的重大影响，亦被世界卫生组织列为六大热带疾病之一[3.］．

l . infantum，是引起CVL的主要原因，Nicolle和Comte于1908年在狗身上进行了描述[4］．这种专性细胞内原生动物寄生虫也被描述为地中海VL的代理人。然而，它并不仅仅局限于上述盆地，而是分布在中东和亚洲国家[5，6］．此后，通过发展灵敏和特异的诊断技术，狗被强调为VL的自然宿主，是流行地区人类VL和CVL传播的最重要原因[1］．因此，CVL被认为是一种具有兽医和公共卫生重要性的疾病。这种病媒传播的寄生虫病是通过沙蝇属的叮咬传播的Phlebotomus(在旧世界)和Lutzomyia(在美国)。此外，找到可行的l . infantum提示犬体表寄生虫在CVL传播中可能扮演的角色[7- - - - - -9］．虽然内脏利什曼病在许多犬宿主中仍然是常见的，但它已经出现了不同的临床表现，包括局部或全身淋巴结肿大、体重减轻、肝脏和脾脏肿大、眼部病变、鼻出血、甲状斑秃和跛足[10］．

流浪狗根据当地情况和缺乏适当的预防措施可能在流行病地区维持CVL方面发挥潜在作用[11］．在这方面，疾病的预防极其复杂，但预防措施更多地集中在控制动物疾病上[11］．由于犬类利什曼病流行地区的犬只被领养及运送至其他地方，以及感染在人类中传播，故引起新的流行病学关注[12- - - - - -14］．CVL在地方性地中海地区的流行率达到67-80% [15，16］．CVL在犬类中的传播在人类感染中起着重要作用[17］．犬类感染的流行程度可能与人类疾病的严重感染率有关[18，19］．所以,存在的l . infantum受感染的狗只可能是VL高发地区的良好指标[20.，21］．

1．3．CVL的主要控制策略

当局已采取措施，例如使用杀虫剂、药物治疗及消灭受感染的狗只[22］．不幸的是，化疗并不是一种成功的措施，复发的病例经常出现在接受治疗的狗中[23］．此外，有时药物不能抑制沙蝇的传染性[24］．与症状宿主相似，无症状宿主也可作为寄生虫传播的宿主宿主发挥重要作用。此外，清除受感染的狗在道德上是不可接受的。鉴于不成功的控制策略，建立有效的控制方法，如接种疫苗，对控制寄生虫感染具有显著的作用[25，26］．诱导保护性抗利什曼虫狗的免疫反应是一个可行的、重要的和具有成本效益的目标，它高度影响人类利什曼病的控制[26］．

此外，还有一些关于猫利什曼病的报道l . infantum但是还需要更多的研究来证实猫在自然界中作为宿主的作用[23，27］．也有一些关于促真皮的报道l . infantum其中，应考虑由动物传染给人类的具体计划[28］．一些研究者报道了内脏化l . tropica。因此，应该推荐研究它们从狗到人的传播[29］．另一方面，合并感染利什曼虫人类免疫缺陷病毒(HIV)是20世纪最后几十年对人类的严重威胁[2］．近几十年来，有关于地方病流行区ZVL增加的报道，似乎内脏利什曼病与正在出现的人类免疫抑制条件(如HIV/艾滋病)的共同感染使CVL问题复杂化[11］．

理想的疫苗包括几个分子，这些分子在不同物种间较好地保守，并在组织无鞭毛体阶段大量表达，但在动物模型中，很少有抗原能对一种以上的物种起保护作用。免疫反应伴随IFN-γ和肿瘤坏死因子-α通过激活巨噬细胞和杀死与狗的保护性反应相关的细胞内寄生虫产生[30.］．犬的抗利什曼细胞和体液免疫已被认为是内脏利什曼病感染犬易感性/耐药性的明显指标[31，32］．通过本文的简要介绍，我们可以得出结论，为了获得一种方便有效的控制ZVL的方法，疫苗是最好的选择。

在过去几十年里，在了解犬利什曼病的免疫机制和创新新疫苗方面开展了重大活动。这些候选者包括活寄生虫(第一代)，纯化利什曼虫表达的抗原或活重组细菌利什曼虫质粒DNA编码抗原为第三代[33］．

2.第一代疫苗

尽管发展了利什曼虫疫苗，活疫苗利什曼虫sp仍然是产生强力保护的最有效方法之一。这些可以被认为是最常用的犬类之一利什曼虫疫苗。通过在不同的培养基中培养，可以获得减毒的寄生虫活疫苗在体外媒介(34]使用温度敏感性[35]，伽马辐射[36，或化学诱变[37］．然而，利什曼化在人身上已经被放弃，寄生虫转基因被成功地用于产生免疫原性但减弱的生物体。在这种情况下，可以产生各种毒性基因减弱的寄生虫。选择的目标基因通常负责编码毒力因子(或其合成酶)和代谢途径成分。此外，一些科学家已经使用了分泌宿主免疫介质的转基因寄生虫来提高抗寄生虫反应和促进寄生虫清除[38］．

Daneshvar等人比较了庆大霉素减毒接种l . infantum,培养l . infantum原鞭毛在庆大霉素的压力下，向野生型寄生虫。他们描述了免疫犬的单核细胞的免疫表型与减毒的原鞭毛l . infantum与10%庆大霉素共培养。CD4的百分比⁺和CD8⁺用庆大霉素减毒寄生虫接种的狗的T细胞比对照高。此外，在接受庆大霉素减毒原鞭毛的动物的多形核细胞中未发现寄生虫，而在接受野生型原鞭毛的动物的多形核细胞中有60%的原鞭毛寄生虫l . infantum作为疫苗。小组被安置在窗户上喷洒溴氰菊酯的室内场所。在这些狗身上没有发现任何临床症状或生化和血液学异常。在12个月的随访中，没有观察到狗的临床病理变化。他们得出的结论是，减毒线能够保护狗不受野生型的影响l . infantum［39］．在Daneshvar等人的一项类似研究中，用这些减毒菌株免疫14只健康的杂交犬，并检测IFN-水平γ在庆大霉素减毒组中，据报道其含量高于对照组。免疫动物感染后12个月BM吸液中未检测到寄生虫DNA [40］．针对CVL的疫苗配方包括中心蛋白缺失l . donovani寄生虫(Ld Cen−/−)，适用于健康的狗。这种缺失特别影响了巨噬细胞内复制的无鞭毛体阶段。动物被分为三组进行研究。用Ld Cen−/−皮下注射l . donovani静止期的原鞭毛。另一组接受Leishmune(商业疫苗)。第三组只接受PBS。在注射疫苗后15天测定细胞因子和抗体的产生水平以及增殖性淋巴细胞反应。Ld Cen−/−免疫组的抗体效价高于Leishmune免疫组。此外，Ld Cen−/−疫苗刺激T细胞和B细胞增殖，产生1型T辅助细胞和2型T辅助细胞平衡，以达到保护应答。TNF-的增加α培养上清中检测到IL-12，证实Ld Cen - / -减毒活疫苗对犬VL具有免疫原性和保护作用[2］．Ld Cen−/−的安全性早前已在小鼠和仓鼠中得到描述[41］．

3.第二代疫苗

利用不同犬种设计的第二代犬利什曼病疫苗的最新进展表明，用确定的寄生虫抗原免疫可提供对挑战的保护l . infantum。这一代包括培养寄生虫的全部粗抗原，根据寄生虫的丰度和表面定位或通过基因工程创造的以最佳方式刺激免疫反应的重组抗原从寄生虫中纯化的本地组分。这些类型的利什曼虫疫苗分为第二代疫苗[42］．

3．1.寄生虫的全粗抗原

根据Roatt等人在巴西的研究成果，将20只狗分为四组，分别皮下注射PBS，原虫原鞭毛蛋白、皂苷和原虫原鞭毛蛋白和皂苷在4周内3次。105天后，对动物进行皮内刺激，晚期log期为l . infantum原鞭毛和唾液腺提取物Lutzomyia longipalpis．动物在挑战后885天随访。原虫粗抗原加皂素疫苗(LBSap)能诱导明显的体液免疫应答，特异性抗体增加利什曼虫皮内接种后IgG及其亚类(IgG1和IgG2)的变化l . infantum和唾液腺提取物l . longipalpis．LBSap疫苗促进了混合免疫反应。同时在体液反应中观察到T4细胞和T8细胞水平的增加。有趣的是，IFN-水平升高γ是免疫原性和预防的生物标志物利什曼虫，在狗的脾细胞中显示;实时荧光定量PCR结果显示，脾脏内寄生虫数量明显减少。综上所述，本研究认为LBSap疫苗具有高免疫原性，并表现出对犬的持续体液和细胞免疫反应l . infantum感染(43］．在类似的研究中原虫原鞭毛体蛋白和皂苷佐剂(LBSap)诱导了持久的(885天后)l . chagasi(挑战)1型免疫反应l . chagasi挑战被感染的狗。这种免疫伴随着IFN-的大量产生γ和il - 1244，45］．

3．2．部分纯化的寄生虫

许多这些保护分子位于寄生虫的表面。在此背景下，人们进行了各种各样的研究，以确定狗的免疫力。不过，巴西市面上有两种第二代疫苗(Leishmune和Leish-Tec);在这一领域正在进行更多的试验[26］．

在一项研究中，约400只无CVL史的血清阴性健康犬接受了从培养上清中纯化的排泄/分泌抗原l . infantum原鞭毛菌(LiESAP)，以muramyl二肽(MDP)为佐剂。这种疫苗最近已在欧洲获得许可(CaniLeish, Virbac Animal Health)。在法国南部一个流行地区，所有的狗都被放在户外，暴露在沙蝇中。免疫犬对该抗原的抗体反应性经免疫荧光抗体(IFA)试验显示，经过两个季节的沙蝇活动后，免疫犬对该抗原的抗体反应较强。此外，根据利什曼DNA和骨髓标本中寄生虫的检测，疫苗有很强的疗效(92%)。此外,在体外对T细胞(Th1型)的研究和它们的反应被高产量的IFN-所证实γ在接种过疫苗的狗的共培养细胞上清液中[46］．

法国的另一项研究报告说，使用LiESAP-MDP疫苗可以在接种后2到8个月保护狗不受寄生虫的侵害。在接种组中发现与早期th1型细胞免疫应答相关的显著和持久的保护。此外，在感染后的第二个8个月，实验组观察到针对LiESAP的IgG2抗体单独增加[47］．

Leishvaccine(包括l . amazonensis菌株(IFLA/BR/1967/PH8)和Leishmune(由冻干l . donovani应用纯化的浓缩甘露糖配体(FML)对巴西24只健康犬进行免疫，每组12只(利什疫苗和利什免疫)，每21 d皮下接种3个剂量加卡介苗佐剂。Araújo等人观察到，Leishvaccine和Leishmune在先天性免疫反应中启动了一个明确的免疫表型变异。他们还表明Leishmune是吞噬细胞的选择性刺激因子。Leishmune和Leishvaccine可以被认为是对CVL具有高免疫效力的重要疫苗。这项研究表明，利什疫苗和利什mune在狗身上发展出一种独特的免疫谱。此外，IFN-水平增加的混合细胞因子模式γ利什疫苗组检测IL-4。Leishmune疫苗通过良好的IFN-诱导更有特征的细胞因子模式γ与NO浓度混合(IFN-γIL-4)细胞因子模式;高水平的反利什曼虫IgG1提示T细胞免疫增强。这一事实强调了这些疫苗配方在控制CVL中的实质性作用[48］．根据Araújo等人在2008年发表的文章，24只德国狗被分为两组。一组接种3次利什疫苗(包括l . amazonensis(株IFLA/BR/1967/PH8))，每21天加BCG佐剂一次。另一组接受Leishmune(包括l . donovani纯化FML)。利什疫苗同时激活T细胞和B淋巴细胞。CD4的早期激活⁺T细胞(CD4⁺MHCII)和随后B细胞(B细胞cd32)和CD8的活化⁺T细胞(CD8⁺CD18⁺)被认为是。Leishmune包括优先参与CD8⁺T细胞，在循环的B淋巴细胞中没有表型改变，表明抗原提呈细胞(APCs)和细胞毒性T细胞之间合作的选择性途径已经发生。在Leishmune中纯化的FML抗原证实了天然免疫细胞的选择性激活。另一方面，整个原油l . amazonensis抗原(利什疫苗)产生了更广泛的表型变化。然而，这两种疫苗在触发先天免疫细胞中显示了关键作用，可以被认为是针对CVL具有高质量免疫潜力的优先疫苗[49］．

在另一项尝试中，30只狗被接种FML (Leishmune)疫苗，每三个月注射一次。他们每年接受两次加强剂，并在最后一次加强剂后3至5个月进行调查，以发现抗利什曼虫VL流行地区的抗体。同时，30只未接种过利什mune疫苗的狗自然感染了l . chagasi作为对照组。研究表明，尽管发现了利什曼虫在皮肤中应用PCR，特异性抗利什曼虫免疫组采用FML-ELISA检测IgG。这些发现被认为是接种疫苗后的利氏寄生虫学保护[50］．在另一个类似的故事中，Leishmune在20只狗身上进行了测试。Leishmune每隔21次皮下注射动物。最后一次接种后10天、6个月和12个月采集血液和骨髓样本。与此同时，由20只狗组成的安慰剂组被注射了安慰剂并在整个研究中进行跟踪。这种疫苗对寄生虫有100%的体液反应。用FML刺激培养细胞的上清给予细胞应答(85%)[48，51］．

此外，在一个类似的项目中，172只狗被分为如下4组。第1组为45只健康犬，在非CVL疫区饲养，作为阴性对照。第2组45只犬自然感染利什曼虫出现sp.和CVL症状。第三组为45只无症状犬利什曼虫sp．第4组为37只健康犬，每21天接种3次利什木免疫。在6个月的随访研究期间进行血清学检查、淋巴结和骨髓抽吸。第一个抗体高峰是在最后一次疫苗接种后48天发现的。接种疫苗的狗(第4组)的抗体反应先升高后降低。在最后一次加强注射后138天出现高水平的抗体。并在接种后6个月出现抗体高峰。这项研究表明，在接种过疫苗的犬只体内产生的抗体和6个月以上的阳性反应可以确定接种过疫苗的动物是自然感染的犬只[52］．在此背景下，至少推荐两种不同的血清学方法(间接免疫荧光抗体(IFAT)、反免疫电泳(CIE)或直接凝集试验(DAT))用于检测和提高实验室犬内脏利什曼病的特异性和敏感性。此外，淋巴结吸出物被认为是诊断内脏利什曼病侵袭性最小和最合适的样本[53］．

P-8抗原是另一个纯化的部分，从无菌培养的表面膜中提取l . pifanoi氮空化和差速离心分离无鞭毛虫[54，55］．在这个项目中,l . pifanoiP-8抗原诱导IFN-升高3-4倍γ表示l . infantum可溶性抗原在3- 4个月大的母犬l . infantum或l . chagasi寄生虫。TNF-的高表达αP-8抗原组与可溶性利什曼虫抗原(SLA)组。因此，对于较高的淋巴增生反应和IFN-水平γ， Carrillo等人认为该抗原可能是控制CVL的潜在候选疫苗[56］．

3．3.重组利什曼虫抗原

重组利什曼虫抗原作为第二代疫苗的另一种分支，可以被认为是一种可用且节省成本的疫苗接种方法。这些抗原能够产生强烈但短暂的保护作用。几个利什曼虫基因已被用于各种项目。它们可以作为制造纯化蛋白质和裸DNA的细菌(这是更先进的步骤)来传递。注射这类抗原可能具有佐剂效应，可刺激抗原提呈细胞[57］．

的重组l . infantum组蛋白H1和亲水性酰化表面蛋白B1 (HASPB1)单独或作为鸡尾酒与Montanide TM ISA 720佐剂联合应用于48只比格犬。的l . infantum将H1克隆到pGEX-KG载体中表达大肠杆菌。HASPB1克隆到pET15b载体中表达大肠杆菌．两种抗原的纯化方法也不同。组蛋白H1用GST树脂亲和树脂纯化，HASPB1用Ni-NTA和阴离子交换柱纯化。48只狗被分为7组。H1组、HASPB1组、H1 + HASPB组每月皮内接种3次。其他组包括辅助治疗组(MML和Montanide)和对照组。45天后最后一次接种加强剂的犬被感染l . infantumpromastigotes。在本研究中，鸡尾酒抗原疫苗(H1 + HASPB1)能够诱导可变的部分保护，而组蛋白H1抗原单独对犬产生更强的免疫效果。与对照组相比，HASPB1 + H1组接种犬的骨髓和淋巴结中也检测到寄生虫负担的减少，尽管是部分的[58］．在西班牙马德里的另一项研究中，这些狗被接种了三种重组疫苗利什曼虫抗原:热休克蛋白- (HSP-) 70、副鞭毛棒蛋白- (PFR-) 2、运动质体膜蛋白- (KMP-) 11作为常规免疫方案。实验结束后对动物进行随访l . infantum挑战在1.5年期间。在本研究使用的条件下，由于HSP-70、KMP和PFR接种犬的Th1反应中度，IFN-γ上述重组抗原的PBMC中mRNA表达均增加。提示这些重组抗原可能在预防CVL中发挥作用[59］．

该嵌合蛋白“Q”由5个酸性核糖体蛋白(Lip2a、lip2b、lip2b Po)和组蛋白H2A的抗原片段组成。它是由l . infantumrrjpcm菌株序列(“rrjpcm5_q”)，并在两组犬配合不同佐剂进行检测。根据基因表达方法的差异设计分组。第1组基因序列表达于杆状病毒系统(28只犬)和第二组(16只犬)表达于大肠杆菌。活BCG、muramyl二肽(MDP)、氢氧化铝Al (OH)、基质C、杀菌剂丙酸菌属曼秀雷敦是作为辅助用药的吗杆状病毒和大肠杆菌冲击波重组抗原。动物接受两次皮下疫苗接种，间隔3周。最后一次给药后3 ~ 4周，动物实验感染静止期l . infantumpromastigotes。在10个月的随访期间，每周进行取样。除1只犬外，所有犬骨寄生虫培养和淋巴结活检均呈阳性。然而，没有一种候选疫苗能阻止寄生虫的形成或促进临床表现。两组都杆状病毒或大肠杆菌产生JPCM5 Q蛋白诱导细胞免疫应答。这些组接受了抗原加Al (OH)和抗原加ISCOMatrix治疗，与对照组相比，显示出明显的细胞增殖。因为单控犬在杆状病毒基因产生组，评价效果不明显。故障点与不同的辅助和这项研究声称,尽管卡介苗(BCG)并不是一个适当的佐剂犬疫苗的局部反应,它有一个强大的佐剂效应结合问蛋白质,能促进重要的保护性免疫力l . infantumCVL [60］．

在另一项研究中，22只未感染的幼犬被招募接种表达tryparedoxin-peroxidase (TRYP)的重组修饰病毒Ankara (MVA)利什曼虫激活的C激酶(LACK)。动物在第0天和第28天随机接受两次肌肉注射。接种疫苗的动物表现出较高的抗原特异性抗体水平。此外，与DNA/MVA- lack组相比，接受DNA/MVA- TRYP组产生了1型主导的促炎细胞免疫反应。换句话说，DNA/MVA同时诱导细胞免疫和体液免疫。本研究还提示，在没有再刺激或自然感染的情况下，接种后细胞免疫至少延长4个月。实际现场试验需要证实DNA/MVA TRYP疫苗预防CVL的效果[61］．

意大利南部3组犬(每组15只)皮下注射:第一组采用MML(多亚单位重组)利什曼虫)多聚蛋白+ MPL为佐剂，第二组采用MML +佐剂，第三组采用生理盐水，每月3次。动物暴露在沙蝇叮咬下。一年后，在接种最后一剂疫苗之后，在传播季节来临之前，幸存的狗又接种了三剂疫苗。抗mml IgG抗体在接种第二和第三步后下降，在2年的研究结束后，95%的接种犬显示利什曼病感染。他们证实，MML疫苗不能有效地保护该地区，无论是来自自然利什曼虫感染或疾病进展[62］．然而，MML疫苗已表现出保护性免疫l . infantum在另一项对老鼠和仓鼠的研究中[63］．

重组一个₂抗原(Leish-Tec)是一种无鞭毛体特异性抗原，范围从45到110 kDa，配制成疫苗，可产生1型免疫反应。14只动物经A₂重组蛋白加皂苷作佐剂;只有7只狗接受了挑战l . chagasipromastigotes。对照组分为皂素组和PBS组。疫苗接种情况包括:在研究第0天和第21天注射，在最后一次疫苗接种后4周进行挑战。总IgG和IgG水平升高₂在接种过疫苗的动物身上生产同时，检测到高水平的IFN-γ在接种疫苗的动物中与对照比较，证实了重组A的保护作用₂蛋白质加皂甙[64］．

的利什曼虫-衍生的重组多蛋白Leish-111f包括三种组成蛋白(硫醇特异性抗氧化剂(TSA)，l .主要胁迫诱导蛋白1 (LmSTI1)利什曼虫延伸起始因子(LeIF))是一种亚单位疫苗，已在人类临床试验中证明是安全的[65］．在另一项研究中，以稳定乳剂(MPL-SE)中单磷酰脂质A作为佐剂的Leish-111f配方可加速活性天然CVL中内脏利什曼病的治愈。据报道，该疫苗对轻度CVL病例有效[66］．

4.DNA疫苗

寻找合适的DNA疫苗的新方法表明了防止病毒传播的理想政策利什曼虫从狗到其他哺乳动物宿主。在DNA疫苗中，不需要冷链所以它们在实验模型中有稳定的效果很多研究正在实验室中进行开发针对CVL的DNA疫苗[67］．通过这个过程，当一个外来抗原在质粒DNA中表达时，它可以导致强大的抗体产生以及完全的细胞介导免疫应答。这些类型的利什曼虫疫苗引起广泛的细胞反应和更有效的保护。文献表明，通过免疫可诱发体液和CD4和CD8 T细胞介导的免疫(CMI)反应，并实现长期免疫[68］．

健康犬皮内DNA免疫的四种不同质粒的鸡尾酒编码l . infantumGp63(主要表面乙二醇蛋白)，LACK (利什曼虫活化的C激酶)，KMP-11(动质体膜蛋白11)和TRYP (tryparedoxin-过氧化物酶)没有导致令人满意的结果。狗每15天和1个月接受4剂后，最后的助推器，他们静脉注射l . infantumpromastigotes。虽然多抗原质粒DNA疫苗对12只犬均具有良好的耐受性和安全性，但大多数犬在感染后3 ~ 4个月出现明显临床症状。免疫组与对照组在血清学试验和CMI反应方面无显著差异。换句话说，在淋巴结、肝脏和脾脏的高抗体浓度和大量DNA寄生虫表明疫苗的保护作用不强[69］．

在另一次尝试中，两种形式的DNA-LACK疫苗(重组疫苗病毒- lack (rVV-LACK)和改良病毒安卡拉- lack (MVA-LACK))在8只狗中触发了th1型免疫反应。动物被分为两组进行研究。皮下注射DNA-LACK的小鼠在15天后接受重组疫苗(rVV-LACK)病毒作为第二剂。另一组作为第一剂DNA-LACK, 15天后皮下注射改性病毒安卡拉(MVA-LACK)。所有的狗都接受了l . infantum两周后原鞭毛。在DNA-LACK/MVA-LACK组中，CVL的临床症状较少，这与非复制病毒促进提供更好的保护有关。此外，对照组靶器官(肝脏和脾脏)DNA含量高于接种组。该DNA疫苗能够建立与没有利什曼病症状相关的保护(接种组中62.5%的病例在290天后出现无症状)，较低水平利什曼虫-特异性igg(与对照组相比)，T细胞活化量增加，Th1细胞因子合成(IFN-γ和il - 12) (70］．

5.结论

由于有输入受感染犬只的风险，CVL被认为是一个全球性的问题，今天也受到兽医的关注。此外，犬类免疫可控制疫区人群感染该病。基于本文讨论的不同手段和方法，预计未来CVL疫苗将有突出的发展。考虑到广泛的抗原标记和广泛的物种覆盖，获得更多的犬免疫学的科学信息对于开发和创造令人信服的和可接受的CVL疫苗至关重要。研究表明，第一代疫苗产生持久免疫力的能力不足。这些疫苗诱导的免疫原性并没有起到保护作用。此外，第三代疫苗具有保护作用，但由于DNA抗原的不同性质，上述疫苗的真正影响尚不清楚。因此，第二代疫苗可能是犬类的最佳选择之一利什曼虫接种疫苗。为了找到一种商业化的犬类疫苗，巴西于2003年成为第一个批准利什穆疫苗商业化的国家。Leishmune由l . donovani糖蛋白(集中甘露糖配体)，以皂苷为佐剂。由A2抗原(一种来自无鞭毛体阶段不同的重组蛋白)组成的lesh - tec疫苗利什曼虫)和皂素已于2007年由巴西农业部注册[71］．在CVL疫苗方面取得的进展可能在控制人类VL方面发挥显著作用。

信息披露

本论文来源于伊朗设拉子市设拉子医学科学大学研究改进中心Faeze Foroughi-Parvar博士论文，由伊朗设拉子市医学院Faeze Foroughi-Parvar撰写。

利益冲突

作者声明本文的发表不存在利益冲突。

参考文献

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