丹参酮IIA联合阿霉素对人肝癌BALB/C裸鼠移植瘤的协同抗肿瘤作用及其对细胞色素P450 CYP3A4的影响在活的有机体内

抽象的

客观的．肝细胞癌是最常见的疾病之一，严重威胁人类生活和健康。在这项研究中，我们评估了丹参酮IIA（Tan IIa）与Adriamycin（ADM）对人肝癌（ADAN）的抑制作用，并开发了一种评估功能的平台，如果中草药成分联合化疗药物具有协同抗肿瘤作用在活的有机体内．方法．在裸鼠中建立了人肝癌HepG2细胞的动物模型。小鼠分为模型对照组，谭Iia组，ADM组和Tan Iia + Adm Group。观察到一般情况，重量，肿瘤体积和抑制率的变化。从血清AST水平和组织病理学变化收集数据。通过分光光度分析确定细胞色素P450的含量和活性。通过蛋白质印迹分析CYP3A4蛋白表达。通过Discovery Studio 2.1评估Tan Iia和妊娠X受体（PXR）的Tan IIA和ADM的结合模型晶体结构。结果．Tan IIA联合ADM可减轻ADM毒性，降低肿瘤体积，降低血清AST水平，改善荷瘤小鼠肝脏病理切片，改善生活质量。谭IIA、ADM和联合治疗的抑制率分别为32.77%、60.96%和73.18%。谭IIA组细胞色素b5、P450、红霉素-含量显著升高N- 甲基酶活性。Tan IIA + ADM组显然增强了CYP3A4蛋白表达。虚拟分子对接表明，Tan IIA和ADM都可以稳定地与PXR但不同的相互作用的相同结合位点对接。结论．Tan IIA与ADM相结合可以改善携带肿瘤小鼠的寿命，并增强抗肿瘤效果。TAN IIA组增加了细胞色素P450酶和活性的浓度。组合Tan IIA与ADM可以通过虚拟对接使CYP3A4蛋白表达与CYP3A4蛋白表达进行相关的与蛋白质PXR相互作用。

1.介绍

肝细胞癌（HCC）是最严重的人类肿瘤类型之一，其特征在于高死亡率和侵袭性转移性潜力[1那2］．手术切除是HCC的一线治疗;然而，全身化疗对患有先进的HCC患者发挥积分作用，该患者手术不是可行的选择[3.］．然而，化疗药物有许多副作用，如骨髓抑制、胃肠道毒性和免疫系统紊乱。因此，预防HCC治疗是一个重要问题。此外，耐药也极大地限制了肝癌化疗的进展[4.］．已证明许多草药含有许多抗癌组分，但是当中草药单独使用时，它们发现它们的抗癌活性不如抗肿瘤药物[5.-7.］．

目前，在许多治疗领域，越来越多的草药被视为与抗肿瘤药物联合使用的辅助药物[8.那9.］．我们的初步工作[10那11表明中药在化疗过程中可能具有增强疗效和减轻毒性的优势。阿霉素(ADM)是治疗各种癌症的著名化疗药物。但ADM有许多副作用，包括骨髓抑制、心脏毒性、血液系统损害等不良反应。此外，耐药性的出现和这些潜在的副作用突出了目前单独使用ADM在临床应用中的主要局限性[12那13］．

丹参酮IIA (Tan IIA: 1,6,6-三甲基-6,7,8,9-四氢菲[1,2-b]呋喃-10,11-二酮)是我国常用中草药“丹参”中菲醌的主要抗肿瘤活性成分。近期研究表明，Tan IIA可抑制肿瘤细胞增殖，诱导凋亡和细胞周期阻滞，扰乱肿瘤细胞周期，抑制肿瘤细胞侵袭或转移[10那14-17］．有研究报道，Tan IIA也能保护阿霉素诱导的细胞凋亡[18那19］．不幸的是，与其他中药的抗肿瘤活性成分一样，Tan IIA的抗肿瘤活性被证实较目前使用的化疗药物弱。在我们的初步工作中，Xie等人[10发现Tan Iia和ADM都对A5​​49细胞进行了抗增殖作用，但ADM具有比Tan Iia更强的抗肿瘤效果。在以下研究中，谢等人。[13发现Tan IIA和ADM对NSCLC A549、PC9和HLF细胞的增殖具有时间和剂量依赖性，而Tan IIA对细胞增殖的抑制作用远弱于ADM。

为了研究中药抗肿瘤活性成分与化疗药物之间的相互作用，我们的研究已经建立了一个结合的平台在体外在以前的研究中采用虚拟实验室工作的实验室实验[10那11那13那20.］．在本研究中，我们进一步开发该平台基于在活的有机体内棕褐色IIA的研究和虚拟计算，证明先前有一个明显的抗肿瘤效应。与此同时，ADM是一种经典的抗肿瘤药，被选为本研究的主要目的。为了探讨中草药和化疗药物之间的抗肿瘤机制和相互作用，Tan IIa与ADM关于肿瘤携带动物，药物代谢酶，蛋白质表达和药物虚拟筛选的影响。

2.材料和方法

2.1。细胞系，细胞培养和试剂

人肝肝细胞癌HepG2细胞是从中国科学院（CAS，上海，中国CAS）的小区银行购买，并在补充了10％胎牛血清的DMEM（纽约，纽约州纽约）（犹他州，Hyclone，美国）在37°C的潮湿培养箱中，5％CO₂的气氛。Tan IIA(磺酸丹参酮钠注射液，5 mg/mL)为上海生化制药有限公司市售。盐酸阿霉素注射液由深圳美瑞制药公司提供。冻干粉，纯度99.99%，如钠₂S.₂O._4.(Thermo, Waltham, USA)，红霉素和NADPH (Solarbio，北京，中国)，Ba(OH)₂（Sigma-Aldrich，美国圣路易斯）在该研究中使用。99.99％的一氧化碳气体是从中国广州市悦杜获得的。所有化学品都是分析级，可用纯度最高。

２.２.动物模型和实验方案

雄性4-6周龄BALB/c裸鼠20只，购自中国广州广东省实验动物中心(动物证书编号44007200004290)，饲养于特定的无病原体(SPF)房间，标准饲养条件(温度25-27℃，相对湿度45-50%)。的在活的有机体内研究议定书由第一个附属医院，孙中山大学，广州，中国的动物伦理委员会批准，并遵守相关法规和道德规范进行了所有实验。小心进行实验以避免对小鼠的压力。

将HepG2细胞收集在指数相中并消化成单细胞悬浮液。壳后1周后，裸鼠皮下接种1×10^7.在右侧上肢近端背侧放置0.2 mL磷酸盐缓冲盐水。对小鼠进行消毒，并将其置于层流架中，同时监测其身体体征。当肿瘤大小达到100mm时^3.在肿瘤体积,老鼠被随机分为四组:模型对照组(0.2毫升的生理盐水,1∼7天,一天17∼23),谭花絮组(15毫克/公斤的体重,1∼7天,一天17∼23),ADM组(4毫克/公斤体重,一天1∼3天17∼19),和cotreatment集团(Tan花絮15毫克/公斤+ ADM 4毫克/公斤)。每种药物都是由尾部静脉注射。实验设计的原理图如图所示1．

在整个过程中，每5天称重一次小鼠，测量肿瘤大小(长度和宽度)。第23天处死小鼠，完全剥除肿瘤，解剖小鼠肝脏进一步检查。实验结束时计算肿瘤大小(肿瘤重量和肿瘤体积)，公式如下[21]：肿瘤量（V.,毫米^3.) = 0.5 ×长×宽[2］．本研究计算肿瘤生长抑制率为:抑制率(IR， %) =(模型组肿瘤平均重量-治疗组肿瘤平均重量)/模型组肿瘤平均重量× 100%。

２.３.小鼠肝微粒体的制备

第23天，手术切除后立即处死小鼠，取肝脏冷冻。将肝脏在4°C下切成块，在−80°C下保存，直至微粒体制备。如前所述，肝微粒体是通过差速离心制备的[22］．然后加入肝脏样品并称重，并加入3体积的冰冷均化培养基（在4℃下含有0.25μm蔗糖的pH7.4的50mM Tris-HCl缓冲液。使用剪刀切碎组织并通过玻璃杵完全均化30分钟。将所得匀浆物转移到清洁离心管中，并在4°C下以15000g以15000g离心20分钟，使用Beckman离心机（Beckman Coulter，Inc.，Fullerton，Ca，USA）。使用最佳L-100 XP Beckman UltiCateRifuge收集上清液并在4℃下以100,000g以100,000g离心60分钟。用均质化培养基重悬了微粒体颗粒。将肝微粒体悬浮液液化（1mL）中成1.5mL试管并储存在80℃直至使用。使用洛数法测定蛋白质浓度的微粒体[23］．

2.4。分光光度分析

在日立（丹伯里，CT）U3300双光束分光光度计上记录了一氧化碳（CO）差异光谱，并使用UV Solutions 1.2软件（Hitachi）分析数据。简而言之，制备0.3ml温育（含1g / ml肝微粒体），制备5.7ml 0.1M磷酸钾缓冲液（pH7.4），在37℃下孵育2分钟后，通过添加40分钟减少等分试样 μL的10%二亚硫酸钠，然后均匀地分成两个1ml, 1cm径长试管。记录一个基线，然后将一氧化碳轻轻地泡进样品比色管(大约每秒1个泡，持续1分钟)。然后在400 ~ 500 nm处进行吸光度扫描，在450 nm和490 nm处测定吸光度峰值。

2．5．肝微粒体酶活性测定

测定小鼠肝微粒体中CYP3A酶活性及与CYP3A相关的红霉素活性N- 在37℃下通过分光光度分析测定甲基酶（ERND）。通过测量甲醛的形成来确定ERND酶活性。为了分析ERND活性，将0.1ml的1g / ml肝微粒体，1.7ml 0.1mol / L磷酸盐缓冲盐（PBS）和0.1ml 4mmol / L红霉素混合在0.1ml 10mmol / L Nadph中。达到2毫升的总体积。在37℃下30分钟后，通过加入1ml甲醇终止反应。在5000g离心10分钟后，荧光体测量超氧中的反应产物resorufin。基于先前的研究，通过在420nm处测试甲醛的形成来确定ERND活性[24那25］．

2.6。免疫印迹分析

western blot检测小鼠肝微粒体中CYP3A4活性。将蛋白样品与等体积的5 × SDS-PAGE上样缓冲液混合，在95℃加热4分钟后用SDS-PAGE凝胶分离，然后转移到PVDF膜(Millipore, Bedford, MA, USA)。用5%脱脂牛奶在吐温20 (0.05%)-PBS (pH 7.4)中封闭细胞膜2小时，室温下与兔CYP3A4多克隆抗体(1:800,ab克隆，波士顿，美国)在4°C下孵育过夜。然后，用TBST缓冲液冲洗膜三次，并与辣根过氧化物酶(HRP-)结合的二抗(1:1000;Cell Signaling Technology, Danvers, MA, USA)在室温下浸泡2小时，并在检测前广泛清洗。采用增强化学发光(Millipore, Bedford, MA, USA)开发了膜，并将膜暴露于柯达XAR-5薄膜(Sigma-Aldrich)中。内部参照GAPDH (1: 1000, Cell Signaling Technology, Danvers, MA, USA)。使用美国国立卫生研究院(NIH)图像软件(image J1.36b)定量每个印迹条带的相对光密度(与GAPDH的比值)。

2.7。分子对接研究

为了预测被试药物(Tan IIA, ADM)与靶蛋白(妊娠X受体，PXR)之间潜在的蛋白-配体相互作用，在准确性测试后，本研究将Discovery Studio (DS) 2.1 (Accelrys Software Inc.， San Diego, USA)中的两个模块(CDOCKER和LibDock)应用到分子对接算法中。通过计算均方根偏差(RMSD)验证ds2.1中分子对接模块选择的准确性。PXR的三维晶体结构取自PDB (http://www.rcsb.org/pdb/)，身份证号码为4NY9。Tan IIA和ADM的三维结构从PubChem项目下载(http://www.pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）分别为164676和123097261的CID。DS 2.1程序在LocalHost 9943服务器上运行。基本的对接程序如下进行。

首先，除去蛋白质中的水分子，并将氢原子加入蛋白质中。用尖端改进小分子和选定的蛋白质。其次，我们通过两种方法定义了PXR的活动站点，一个方法根据内部配体的绑定站点，而第二种方法是用DS 2.1自动定义的。第三，用Charmm精制后，将Tan Iia和Adm达到4Ny9的活性位点（PXR蛋白的PDBID），通过考虑静电能量和范德瓦尔斯（VDW）力来进行。

CDOCKER的对接步骤如下:网格原点位于PXR活性位点的中心，最小的为21.0 Å或最大的配体维数+5.0 Å为边长。网格间距为0.5 Å。每个vdW或静电探针被放置在这些网格点上。采用三线性插值法计算配体原子在网格点之间的能量。在网格边界外施加一个作用力常数为300千卡/摩尔的谐波势。利用Tan IIA和ADM对新配体的构型，随机生成一组10种不同的构型。这些方向与PXR蛋白(4NY9)对接，并通过执行一系列随机旋转移动到网格的中心。一旦随机配体与活性位点对接，就会进行MD模拟，其中包括从300到700 K的加热阶段(2000步)，然后是回到300 K(5000步)的冷却阶段。vdW力的能量阈值设置为300 K。最后，当MD末端包括50步陡坡下降和多达200步共轭梯度时，短时间的能量最小化用于改进模拟对接结果，如前面所述，能量容限为0.001千卡/摩尔[13那20.］．

2.8。统计分析

数据显示为平均值±标准偏差（SD），并使用SPSS 13.0软件进行分析。通过ANOVA分析评估连续变量组之间的差异。使用未配对的学生分析对照和实验动物组T.以及。一个值为0.05或小于被认为是显著的。

结果

３.１.HepG2荷瘤小鼠一般情况和体重的变化

在开始时，所有小鼠的一般情况都很好，没有死亡或厌食，更多的是，它们稳步地获得体重，保持闪亮的外套，具有更好的食欲，正常活动和排泄。然而，在第15天，小鼠的重量缓慢增加。四组显示出差异：模型对照组和Tan IIA组的小鼠几乎处于正常状态，具有活跃的行为和增加的饮食。虽然Adm和Tan Iia + Adm Group表现出较低的状态，精神较低，食欲越差，液体粪便和一点沉闷的活动。其中，ADM组是最糟糕的州之一，包括最严重的沉闷皮肤，蜷缩起来并透露。Tan IIA Plus ADM组反映了比ADM Group更好的普通州，但也具有更轻的重量。在第20天，ADM和TAN IIA + ADM组发生的恶病症状态，具有明显的解剖，嗜睡，畏光，噬菌体，胆怯，甚至具有溃疡和破裂的肿瘤组织（图2）.

在头15天，小鼠生长迅速，每天0.22 g - 0.36 g。有趣的是，在第15天之后，各组小鼠的体重开始下降。第23天，实验动物体重增加10%以上。与模型对照组比较，ADM组和Tan IIA + ADM组的权重有明显变化，且有统计学差异( ），但是之间没有差异W._0.和W.₂₃在其他群体中（ ）.按相关公式计算，模型对照组增重率最高，为27.24%，谭IIA组和ADM组增重率较低，分别为22.12%和21.78%。Tan IIA和ADM组的情况往往更好，水平最低，为17.30%(图3(一个)）.

３．２．肿瘤体积、肿瘤重量、抑制率的变化问：携带肿瘤小鼠的价值

结果表明（数字3 (b)-3 (d)）治疗组中的肿瘤起初速度快，但比模型对照组更慢。在第15天后，Tan Iia Plus ADM组的肿瘤比其他群体慢得多。在20和23天，一些肿瘤组织本身划伤;观察到这种现象，肿瘤组织在ADM组（一只小鼠样品）和Tan Iia + ADM组（两只小鼠样品）中变得溃疡并破裂，特别是在Tan Iia + ADM组中，所以3 (b)显示20-23天之间的急剧下降。因此，我们推测肿瘤体积变小，这可能与裸鼠中的溃疡肿瘤组织有关。分析统计数据时，在ADM和合并组中除去肿瘤溃疡的小鼠样品（图3 (b)-3 (d)）.

结果显示，与模型对照组相比，治疗组肿瘤体积明显减小，差异有统计学意义( ）.Tan Iia + Adm Group是最小的。同时，Tan Iia + Adm Group中的肿瘤重量是最轻的。与模型对照组相比，Tan IIA组的抑制率为32.77％;第二次最低速率在ADM组（60.96％），最后，Tan IIA + ADM组的速率最低（73.18％）如表所示1．根据Jin的修正Bürgi的公式，计算出问：值约为0.988。

３．3.HepG2荷瘤裸鼠血清AST水平的测定

实验结束时从小鼠腹主动脉取血，检测血清AST水平。组织学异常与AST活性增加相一致(图)4.各组AST水平均有异常升高，可引起小鼠肝毒性反应。模型对照组小鼠血清AST水平较低，但ADM组AST水平明显升高，AST值较模型对照组、谭IIA组、谭IIA + ADM组分别升高约1 / 3。小鼠给药后AST有一定程度的降低;谭IIA联合ADM治疗可使AST平均水平较谭IIA组降低6.75%左右，差异无统计学意义。

3．4．Tan IIA改善adm诱导的HepG2荷瘤小鼠肝脏组织病理改变

肝组织经he和e染色观察组织病理学变化(图5.）.与模型对照组相比，发现棕褐色IIA组拥塞，肝叶片不明确，围绕中央小叶静脉浸润，局部肝细胞坏死症。ADM处理的小鼠在肝脏中显示出严重的组织损伤，包括一些坏死性肝细胞的区域，丢失正常的土穴建筑和肝细胞肿胀。此外，在ADM组中的充血比在TAN IIA和组合团体中稍微可见。在TAN IIA组中发现了拥塞和肝叶瓣。然而，Tan IIA的给药显着改善了肿瘤小鼠的ADM-诱导的肝脏损伤。此外，Tan IIA + ADM组中肝叶的结构具有比其他群体的结构性障碍较低。

3．5．小鼠肝微粒体细胞色素P450含量及活性的影响

在HepG2肿瘤患者小鼠的肝脏中，微粒蛋白质含量没有统计学差异（图6(一)）.细胞色素b5 (Cyt b5)、细胞色素P450和红霉素-N-去甲基化酶(ERND)活性在四组间均有差异。枸杞多糖中Cyt b5和P450含量均以Tan IIA组最高，ADM组最低。四组细胞色素P450/Cyt b5比值分别为1.855:1、1.236:1、1.598:1、1.572:1。与对照组比较，谭IIA组、ADM组、联合组差异均有统计学意义( 那数据6 (b)和6 (c)）.与Tan IIA组比较，ADM和联合组均有统计学意义。其中ADM + Tan IIA组与ADM组比较有统计学意义。

ERND结果显示，Tan IIA治疗组CYP3A活性高于其他各组，与ADM组比较有统计学意义，且ADM组活性最低。与模型对照组比较，Tan IIA组、ADM组差异有统计学意义。Tan IIA + ADM联合治疗与Tan IIA组比较，差异有统计学意义，但在ERND结果上，Tan IIA组与Tan IIA + ADM无统计学差异(图)6（d））.

3.6。谭IIA和ADM对小鼠肝微粒体CYP450 3A4蛋白表达的影响

如图所示7（a），联合组CYP3A4蛋白表达较其他组上调，提示Tan IIA与ADM联合可能促进CYP3A4通路的表达。通过Image Pro-Plus软件对灰度值进行分析，提示联合组与对照组蛋白表达存在显著差异( ）.ADM组、Tan IIA组、联合用药组与对照组比较，差异均有统计学意义( ）.与ADM组相比，Tan Iia + ADM组存在统计学差异（图7.）.

3.7。测试药物与PXR蛋白之间的相互作用

CDOCKER和LibDock的RMSD分别为0.6 Å和6.7 Å。因此，选择CDOCKER模块作为对接方法(表2）.结果表明，PDB数据库的PXR晶体结构分辨率为2.8Å，肽链包括316个氨基酸残基，在PXR的活性位点内发现的内源性配体（图8（a））.

经过自动搜索，总共发现了11个适当的活动场所。其中，位点1与内源性配体结合区重叠较大。因此，我们选择1号位点和内源性配体结合区域作为我们的目标结合位点(图)8 (b)）.其次，Tan IIA可以稳定地对接到两个具有相似相互作用的位点，例如与相同的Ser247残基形成氢键(图)8 (c)和8 (d)）.第三，ADM也可以稳定地停靠在两个地点，而是用不同的互动（数字8 (e)和8（f））.综上所述，我们推测Tan IIA和ADM都可以稳定的对接在PXR分子内配体结合区域，但分子间相互作用不同。

4.讨论

多年来，我们的研究小组致力于研究草药化合物和传统抗癌医学的活性成分之间的相互作用。现在，我们正在开发一个有效的平台，以评估草药与化疗药物的可能抗肿瘤效果，为寻找新的有效敏感剂提供实验证据和理论参考。在我们之前的前面在体外在研究中，我们探索了Tan IIA联合ADM在多种癌细胞系中的作用机制，发现Tan IIA可能抑制A549增殖，诱导细胞凋亡，细胞周期阻滞在S期[10］．我们还发现，Tan IIA和ADM均能抑制A549、PC9和HLF细胞的生长，且呈剂量和时间依赖性，而ADM的增殖抑制作用强于Tan IIA [13］．

因此，进行结果在体外更有效的是，我们进一步研究中药的有效成分与化疗药物联合抗肿瘤治疗是否具有协同作用在体外和在活的有机体内学习。我们在裸鼠中建立了人肝癌HepG2异种移植肿瘤的模型，观察Tan Iia与ADM的潜在抗癌机制。在初步研究中，我们发现Tan IIa与ADM的组合可以降低小鼠中异种移植肿瘤的体积（这里未显示的数据）。在这项研究中，表明Tan Iia可能会缓解ADM的毒性和其他副作用。同时，组合组中的肿瘤体积和重量低于其他组。因此，我们得出结论，Tan Iia与Adm相结合，不仅改善了携带肿瘤小鼠的一般条件，而且还降低了肿瘤体积并增加了抗肿瘤率。

在本研究中，我们还发现Tan IIA (IR = 32.77%)的抑制率低于ADM (IR = 60.96%)，说明Tan IIA的抗肿瘤作用弱于ADM。这一发现与其他研究一致[26-30.]包括我们先前的研究[11］．虽然中药中活性成分的抗癌活性不及抗肿瘤药物，但临床上普遍认为，中药中具有抗肿瘤作用的活性成分毒性较小[9.］．考虑到这一点，我们假设Tan Iia与ADM相结合可能协同作用，导致改善抗癌效果，以及减少可能预防不利副作用并改善患者的生活质量的必要药物。

基于我们之前的工作，我们的研究强调了Tan IIA和ADM的联合作用在活的有机体内．结果表明，联合用药不仅能影响肿瘤体积和抑制率，而且能改善荷瘤裸鼠的外观变化。这说明由于这两种药物均具有抗肿瘤的作用，降低ADM联合中草药的剂量可减少副作用的发生。因此，作为中药的有效成分之一，谭IIA作为联合治疗的一部分，增强了肿瘤的治疗，并促进了我们利用中药的活性化合物作为抗肿瘤成分的知识。然而，我们的研究研究仍然不足。由于药物干预的方法是基于我们之前的研究(数据未在这里显示)，谭IIA组与ADM组治疗时间的差异不具有说服力。此外，如果有一个药物浓度实验，就像谭IIA组有不同的剂量浓度:低、中、高在活的有机体内，尽管参与了药物浓度实验在体外[13］．因此，我们打算在下一阶段改进工作。

近几十年来的研究表明，中药联合化疗药物可降低肿瘤的不良反应，克服肿瘤的多药耐药，提高患者的免疫功能，与高剂量化疗药物相比，可达到类似甚至更好的疗效[31.］．泰等。[32.[表明，具有顺铂的抗增殖活性的迷迭香提取物在人卵巢癌A2780上显示出显着的抗溶解活性。Okamoto等人。[33.[表明，在顺铂存在下，培养人外周血单核细胞（0-1.0 μg / ml）或5-fu（0-5.0 μg/mL)导致自然杀伤细胞和淋巴因子激活的杀伤细胞活性显著增强，并产生干扰素- γ、肿瘤坏死因子- α、-白介素(IL)-1 - β、IL-6和IL-12在体外．我们的结果发现，Tan IIA不仅与ADM具有协同抗肿瘤作用，而且降低了ADM的毒性，改善了荷瘤小鼠的生活质量，这与我们之前的假设一致。

药物与临床实践结合使用，特别是在癌症管理中非常常见。在中国，中医结合西医是常见的，这可能会通过药物代谢酶增加代谢药物相互作用的机会。因此，我们研究了Tan Iia和ADM在Balb / C裸鼠中对人肝细胞癌异种移植物的影响。细胞色素P450酶被称为参与药物代谢的关键酶。P450酶是一个超家族，其肝脏微粒含有许多同工酶。记录了有57个功能基因和58个假性引起的，其在P450酶中代谢了许多内源性底物，例如类固醇，籽糖苷和异恶素[34.-36.］．同时，CYP1、CYP2、CYP3是95%以上临床药物氧化代谢的主要亚家族酶，肝脏中cypp的浓度和活性变化较大在活的有机体内药物反应差异[37.-40.］．CYP3A亚家族是所有CYP亚型中含量最丰富的，并催化各种临床药物的氧化代谢。因此，评估肝脏CYP3A的代谢功能至关重要[41.］．近年来，人们发现P450酶参与各种代谢激活，包括预肾上腺素和原生蛋白，与肿瘤形成密切相关。许多在体外研究表明，Tan Iia和丹参酮Iia磺酸钠可能抑制细胞色素P450酶的活性[42.-47.]但报道了更多的归纳效果而不是抑制作用在活的有机体内[48.-50.］．

基于之前的P450酶研究[11那51.-54.[我们的结果表明，Tan IIA组中，细胞色素B5和P450酶和CYP3A活性的含量下降。然而，在ADM组中存在显着的抑制作用，TAN IIA PLUS ADM组接近对照组的水平。差异是统计学意义的，表明Tan IIa可能是P450酶的有前途的凋亡诱导剂。因此，我们推测Tan IIa与ADM药物组合可能会增加P450酶和HepG2小鼠中的活性的含量。通过加速药物代谢速率并减少小鼠中药物的代理时间来减少弱反应。这可能部分解释为什么当单独使用Tan Iia时观察到弱抗肿瘤效果。另一方面，ADM表明该研究中对异种移植物的抑制作用。研究人员发现ADM是P450酶的基材，并参与CYP3A代谢反应[41.那55.那56.］．我们发现ADM对P450酶有一定的抑制作用，说明这种抑制作用可能通过增加ADM血药浓度而增强抗肿瘤活性。血液中高浓度ADM可能对小鼠健康造成危害。ADM组小鼠健康状态下降可能与ADM对P450酶的抑制作用有关。

此外，我们的实验结果表明，Tan IIA和ADM联合使用可以诱导荷瘤小鼠的P450酶活性。更有趣的是，我们发现细胞色素P450/b5的比值比其他组接近1:1(1.236:1)。细胞色素b5与细胞色素P450相互作用形成紧密的1:1配合物(Kd = 275 nM)，其中高自旋细胞色素P450的比例从7增加到30%。提高P450酶的浓度，可以防止药物浓度因代谢而迅速下降，增强抗肿瘤活性，缩短化疗时间，降低毒性。因此，Tan IIA可作为化疗的辅助药物，提高疗效，降低毒性。

CYP3A4是细胞色素P450酶最重要的亚组之一，是人类肝脏中表达的主要CP，占总肝CYP蛋白的50％[57.］．众所周知，PXR是一种重要的调节因子，它可以调节大量的、不断增长的药物靶向基因，这些基因与药物代谢的各个阶段相对应。许多物质，内源性和外来物质，激活参与CYP3A4活性的核受体，包括妊娠X受体(PXR)，它是CYP3A4基因表达的重要调节因子。PXR被许多配体激活，并导致抑制或诱导药物相互作用[58.那59.］．许多药物通过调节PXR来影响CYP3A4的表达，影响CYP3A4底物的药物代谢。随后，PXR被认为是CYP3A4蛋白的关键调控因子[11那60.-62.］．

以前，已经确定中药的活性成分可以激活PXR / CYP3A4途径。例如，吴伟子的提取物，GaN Cao，海胆亚紫癜， Byakangelicin可激活PXR诱导HepG2细胞中CYP3A4的转录表达[63.-65.］．其他论文提出了令人信服的证据，谭IIA是一种有效的PXR激动剂在体外．例如，yu等人。[60.[丹氏乙醇提取物可以激活人PXR，并诱导HepG2细胞中的CYP3A4报告构建体，并将Tan IIA鉴定为有效的PXR激动剂。张等人。[66.[揭示了Tan Iia可以以剂量依赖的方式防止LCA诱导的肝毒性和胆汁淤积物质在活的有机体内使用PXR siRNA的实验。张等人。[62.[展示Tan IIa是一种有效的PXR激动剂，能够增加CYP3A4 mRNA水平，其蛋白质表达是通过PXR在炎性肠病疾病中的转移来介导的。这些研究表明，PXR可能在TAN IIA和CYP3A4的关系中发挥重要作用。

此前已有研究表明，中药、原儿茶醛、丹酚酸B、丹参素钠可显著诱导LS174T细胞中PXR mRNA的表达，而丹参IIA可显著下调LS174T细胞中PXR mRNA的表达，提示中药可显著调控PXR和CYP3A4。这在草药与药物的相互作用中有着重要的意义[11］．我们的结果显示，联合用药组CYP3A4蛋白表达明显上调。我们的成员还发现，Tan IIA可以诱导HepG2荷瘤小鼠PXR重组蛋白的表达(数据未显示)。因此，我们推测Tan IIA作为一种有效的PXR激动剂，可能联合PXR增强ADM底物，提高HepG2细胞异种移植瘤小鼠CYP3A4蛋白的表达。

PXR是与CYP3A4肝酶相对应的大量和不断增长的靶向药物基因的关键调控因子。它有一个大而灵活的配体结合域(LBD)，允许PXR被各种各样的化合物激活。我们之前的研究表明，Tan IIA和其他被测试的草药化合物可以很容易地通过氢键和与Ser247、Gln285、His407和Arg401的芳香相互作用，对接到PXR的配体结合腔[11］．然而，ADM与PXR蛋白虚拟对接的研究与应用尚未见报道。结合前面的研究，我们推测Tan IIA联合ADM可能作为PXR的激活剂，与PXR形成复合物，诱导下游蛋白CYP3A4的产生，从而抑制肿瘤进展。

考虑到我们以前的研究[11那20.那51.那52.]，通过虚拟筛选，探讨中药配方与人细胞色素P450的相互作用。我们还探索了与Tan IIA的互动。Xie et al. [10]发现TaN IIa可以稳定地将VEGFR2蛋白的激酶结构域达到VEGFR2蛋白的激酶结构域，形成氢键与Cys917和π-π与Val848堆叠相互作用。谢等。推测TaN IIa可以作为VEGFR2的竞争性抑制剂，随后抑制肿瘤血管生成，细胞迁移和致瘤性。在进一步的研究中，谢等人。[13与ADM相比，发现TAN IIa可以将TAN IIA与氢键和芳族相互作用的所有测试蛋白质的活性位点停靠在一起。

在研究的最后阶段，我们通过虚拟对接研究平台模拟靶向药物与PXR蛋白的相互作用。利用分子生物学实验结果对方法进行优化后，我们重点分析了Tan IIA和adm可能的结合模型。在PDB数据库中，我们的分子对接分析结果发现了PXR的三维结构(PDB- id: 4NY9)，包括PXR蛋白激酶结构域(分辨率为2.80 Å)，采用ds2.1自动搜索。我们发现位点1可以覆盖内源性配体所包含的结构域。通过两种方式的分子对接，Tan IIA和ADM都能靶向PXR的蛋白激酶结构域。在该结构域内，Tan IIA是一种有效的PXR激动剂，因此我们认为Tan IIA与PXR的对接位点可以定义为内源性配体结合位点的结构域。在激酶结构域，ADM与PXR内源性配体的对接高于Tan IIA，说明ADM与PXR可能具有更稳定的对接。此外，分子对接的相互作用/结合位点存在互补，这已被近期的研究证实[13］．我们的研究结果表明，这些对接网站的结构可能对协同抗肿瘤效应产生影响，并且需要进一步研究。

我们的调查表明，Tan Iia与ADM联合的是有希望的有效癌症治疗。这种新的潜在联合疗法需要进一步发展，因为它可以最大限度地减少不利副作用，以显着提高癌症患者的生活质量。

5.结论

本研究发现，Tan IIa与ADM组合可以提高携带肿瘤小鼠的寿命质量，并增强抗肿瘤效果。Tan IIa增加了细胞色素P450酶和活性的浓度。Tan Iia和ADM的组合可以上调CYP3A4蛋白表达。Tan Iia和Adm都有一个稳定的虚拟对接，其具有PXR蛋白的相同结合位点。我们的研究建立了一个可行的平台，可评估草药和化疗药物的组合抗肿瘤效应在活的有机体内研究。

数据可用性

用于支持本研究发现的数据可根据要求从通讯作者(Xin-Lin Wu和Sui-Lin Mo)获得。

披露

资助机构在研究的设计、数据的收集、分析和解释以及手稿的撰写中没有发挥作用。研究的设计，数据的收集，分析，解释和报告，以及手稿的写作是作者的唯一责任。

的利益冲突

作者声明他们没有利益冲突。

作者的贡献

刘涛利和张丽娜对这一工作做出了同样的贡献。

致谢

本研究得到了中国国家自然科学基金的支持（授予第81274135）。

参考文献

1. L. A. Torre，F.Bray，R.L.Siegel，J.Ferlay，J.Lottet-Timult，以及A. Jemal，“全球癌症统计，2012”，“CA:临床医生的癌症杂志，卷。65，不。2，pp。87-108,2015。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
2. J.Ferlay，I. Soerjomataram，R. Dikshit等，“全世界的癌症发病率和死亡率：2012年Globocan的来源，方法和主要模式，”国际癌症杂志，卷。136，没有。5，PP。E359-E386,2015。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
3. S. Yamamoto和S. Kondo，“口服化疗治疗肝癌”，关于药物治疗的专家意见第19卷第2期9，pp。993-1001,2018。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
4. Y.歌曲，J.J.Jang，T.H.Shin等，“苏氟碱衰减蒸发CD133阳性肝细胞癌细胞的抗癌反应”实验与临床癌症研究杂志第36卷第2期1，第38页，2017。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
5. 刘明利，钱丽英，戴志杰等，“中药对肿瘤患者肝保护及化疗完成的影响”，中华肿瘤杂志，基于证据的互补和替代医学， 2011年第2期，文章编号291843,8页，2011年。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
6. L.江，L. Huang，Q.Kuang等，“通过优化候选基因的选择，”改善乳腺癌中肿瘤化学治疗性敏感性的预测“计算生物学与化学，卷。49，第71-78,2014。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
7. 李飞，张伟，《中药及其化学成分在抗肿瘤转移中的作用》，癌症研究与治疗杂志，第10卷，第5期。增刊1,20-26页，2014。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
8. B. Ling, D. Michel, M. Sakharkar和J. Yang，“评估四种抗癌药草水提取物对人类恶性黑色素瘤细胞的细胞毒性作用，”药物设计、开发和治疗， 2016, vol. 10, pp. 3563-3572。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
9. W. Hsiao和L.刘，“中草药在癌症治疗中的作用 - 从中​​医理论到机械洞察力”足底》，卷。76，没有。11，pp。1118-1131，2010。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
10. J.Xie，J. Liu，H.Liu等，“丹参酮IIA对人非小细胞肺癌A549细胞系V VEGF / VEGFR2表达的”丹参酮IIA对VEGF / VEGFR2表达的抗肿瘤作用“药物学报B，第5卷，第5期。6, pp. 554-563, 2015。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
11. 中州。刘,S.-L。密苏里州,H.-C。“中药复方对人妊娠X受体及其靶基因细胞色素P450 3A4的调控及其分子对接研究”，Xenobiotica号，第41卷。4, pp. 259 - 280,2011。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
12. C. F. Thorn, C. Oshiro, S. Marsh等，“阿霉素途径”，药物发生和基因组学，卷。21，不。7，pp。440-446，2011。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
13. Xie J.， J. H. Liu et al.，“丹参酮IIA联合阿霉素协同抑制NSCLC A549细胞恶性生物学行为，”BMC癌症，第16卷，第5期。1, p. 899, 2016。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
14. R. Munagala, F. Aqil, J. Jeyabalan，和R. C. Gupta，“丹参酮IIA抑制病毒致癌基因表达，导致细胞凋亡和抑制宫颈癌，”癌症的信第356期2, pp. 536-546, 2015。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
15. “丹参酮IIA通过诱导内质网应激抑制人前列腺癌细胞生长在体外和在活的有机体内”,前列腺癌和前列腺疾病，第16卷，第5期。4，pp。315-322，2013。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
16. L. Yang，H. Guo，L. Dong，L. Wang，C.刘和X. Wang，“丹参IIa抑制生长，衰减茎，诱导人胶质瘤干细胞的凋亡，诱导人胶质瘤干细胞凋亡”肿瘤学报告，卷。32，不。3，第1303-1311,2014。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
17. W.-Q.王，L. Liu，H.-C。Sun等人，“丹参酮IIa抑制肝细胞癌姑息治疗后的转移，并通过血管标准化延长存活，”血液学与肿瘤学杂志，第5卷，第5期。1, p. 69, 2012。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
18. H.-J.洪，J.-C。刘，p.-y.陈，J.-J.陈，P. Chan和T.-程“丹参酮IIA通过依赖于Akt依赖性途径来防止多柔比蛋白诱导的心肌细胞凋亡，”国际心脏病学杂志，卷。157，不。2，pp。174-179,2012。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
19. “丹参酮IIA对阿霉素诱导的新生大鼠心肌细胞凋亡的保护作用，”翻译研究，卷。151，没有。2，第79-87,2008。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
20. Y.Y.GU，L.-P.刘，J.Qin等人，“Baicalein通过抑制多发性骨髓瘤细胞系RPMI 8226抑制ABCG2的副人群比例在体外”,Fitoterapia.， vol. 94, pp. 21-28, 2014。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
21. Zhu H. Y. Zhu, G. Y. Cao, S. P. Wang等，“POU2F1通过FAT1信号通路促进肝癌的生长和转移，”美国癌症研究杂志，第7卷，第5期7, pp. 1665-1679, 2017。视图:谷歌学术搜索
22. Y.邓，H.-C。Bi，L.-Z.Zhao等，“通过萜烯三晶圆和萜烯三叶片的细胞色素P450s诱导GATOPGO BILOBAEXTRACT EGB 761的黄酮类化合物，”Xenobiotica第38卷第2期5，第465-481页，2008。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
23. O. H. Lowry，N. J. Rosebrough，A.L.Farr和R. J. Randall，“蛋白质测量与FolinPhenol试剂”，“生物化学杂志第193卷第1期193，页265-275,1951。视图:谷歌学术搜索
24. Y.Y.Tu和C.S. yang，“大鼠肝微粒体的”高亲和力亚硝胺脱果脂肪酸盐酶系统及其禁食“癌症研究号，第43卷。43，第623-629页，1983。视图:谷歌学术搜索
25. G.Fu，C. Zhou，Y. Wang等，“细胞色素P450s诱导剂的影响Crucian鲤鱼中苯甲酸苯甲酸苯甲酸克拉甲酰化的影响”Carassius auratus.吉布里奥，“环境毒理学和药理学，卷。46，pp.188-193,2016。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
26. 张军，王军，王建勇。江,告诫。刘凯，傅克荣和洪英。Liu，“丹参酮IIA通过JNK途径诱导细胞色素c介导的人肺癌A549细胞caspase级联凋亡”国际肿瘤学杂志第45卷第5期2, pp. 683-690, 2014。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
27. “丹参酮IIA增强阿霉素对人肝癌HepG2细胞的杀伤作用，”足底》，第80卷，第2期。1, pp. 70-76, 2014。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
28. “丹参酮IIA和丹参酮IIA磺酸钠对表柔比星抗癌作用的影响:an在体外研究中,“基于证据的互补和替代医学，卷。2011年，第21页，9页，2011年9页。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
29. Liu X.， Wang Y.， Ma C. et al.，“丹参酮ⅱA磺酸钠对阿霉素肾病的蛋白质组学研究”，美国中医杂志第39卷第3期2，pp。395-409，2011。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
30. X. Wang，Y.Wei，S. Yuan等，“丹参IIa对抗人乳腺癌的潜在抗癌活动”国际癌症杂志，卷。116，没有。5，PP。799-807，2005。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
31. A. Emadi，R. J. Jones和R. A. Brodsky，“环磷酰胺和癌症：金色周年纪念”自然评论临床肿瘤学，第6卷，第2期11，第638-647页，2009。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
32. J. Tai, S.张，M. Wu, D. Hasman，“迷迭香的抗增殖作用(Rosmarinus officinalis.）人类卵巢癌细胞在体外”,植物医学第19卷第2期5, pp. 436-443, 2012。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
33. M. Okamoto，R.Kaji，H.Goda等，“Cis -diammoledicholloplatinum和5-氟尿嘧啶是体内细胞因子和自然杀手细胞活性的有效诱导剂，”癌症免疫学、免疫疗法，卷。47，没有。4，PP。1998年12月233-241。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
34. D. W. Nebert和D. W. Russell，“细胞色素P450的临床重要性”《柳叶刀》，第360卷9340页，1155-1162,2002。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
35. B.江，L.张，Y.Wang等人，“丹参酮Iia磺酸钠保护对多柔比星引起的心脏毒性在体外和在活的有机体内”,食品和化学毒理学，卷。47，没有。7，PP。1538-1544,2009。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
36. R. W. Wang, D. J. Newton, N. Liu, W. M. Atkins, and A. Y. Lu，“Human cytochrome p-450 3a4体外药物-药物相互作用模式是底物依赖的”，药物代谢与处置第28卷第2期3，页360-366,2000。视图:谷歌学术搜索
37. M. Ingelman-Sundberg，S.C.SIM，A.Gomez和C.Rodriguez-antona，“细胞色素P450多态性对药物治疗的影响”：药物发生，药物程度和临床方面，“药理学和治疗，卷。116，没有。3，pp。496-526，2007。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
38. S.-F。周,j。人细胞色素P450酶的多态性及其临床影响药物新陈代谢评论号，第41卷。2，第89-295页，2009。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
39. B. J. Roberts，S. S. ShoAF和B. J. Song，“细胞色素P4502E1（CYP2E1）的快速变化”在大鼠中乙醇戒断后的其他P450同工酶，“生化药理学，第49卷，第49期。11页，1665-1673,1995。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
40. N.Mimura，K.Kobayashi，Y.Nakamura，N. Shimada，M. Hosokawa和K.Chiba，通过CYP酶的MEDROXYXYENTONENE（MPA）的新陈代谢在体外MPA对CYP活动依赖雌性大鼠出血时间的影响在活的有机体内”,生命科学，卷。73，没有。25，pp。3201-3212,2003。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
41. K. Nagai，N. Yoshida，M. Kiyama，K. Kasahara，A. Yamamura和H. Konishi，通过减少大鼠肝CYP3A的代谢活性降低了多柔比星的消除清除。Xenobiotica第45卷第5期10，pp。874-880,2015。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
42. D. S. Ouyang, W. H. Huang, D. Chen等，“丹参酮IIA磺酸钠的细胞色素P450酶代谢动力学在体外”,中药，卷。11，p。2016年11日。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
43. 陈东，林晓霞，黄文华等，“丹参酮IIA磺酸钠及其与人cyp450的相互作用。Xenobiotica;生物系统中的外国化合物的命运”,3月，卷。2，pp。1-8,2016。视图:谷歌学术搜索
44. f .他H.-c。Bi, Z.-y。Xie等，“液相色谱/质谱法快速测定人肝微粒体中多种细胞色素P450探针底物的六种代谢物:在萜类高通量抑制筛选中的应用”，质谱快速通信，卷。21，不。5，pp。635-643，2007。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
45. Y.J.Jeon，J.S.Kim，G. H. Hwang等人，“丹参酮IIA的细胞色素P450 2J2的抑制诱导肝细胞癌HepG2细胞中的凋亡细胞死亡”欧洲药理学杂志，第764卷，第480-488页，2015。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
46. F.邱，R. Zhang，J. Sun等，“Danshen提取物的抑制作用对人肝微粒体中细胞色素P450酶催化活性”的“丹参催化活性”，药物代谢与处置第36卷第2期7，页1308-1314,2008。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
47. R. Wang，H.张，Y.王，X. Yu和Y.元，“丹参酮IIA通过调节CYP3A4和CYP2C9的活性和表达，”民族药物学杂志，第180卷，第87-96页，2016。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
48. Y.-F。Ueng,中州。郭,S.-Y。王,杨绍明。关铭林,张炳扬。Chen，“从丹参酮中分离的二萜醌丹参酮IIA在C57BL/6J小鼠中诱导CYP1A，而不是在DBA/2J小鼠中诱导”生命科学第74卷第1期7，页885 - 896,2004。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
49. 郭玉华，林玉玲，陈瑞敏，杨玉芳，“丹参提取物对细胞色素p450依赖性单加氧酶的诱导作用”，药房和药理学杂志，第58卷，第2期58，页521-527,2006。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
50. y . Chen黄永发。你,Y.-J。他等人，“丹参酮II A磺酸钠对健康志愿者CYP1A2活性的影响，”Xenobiotica第39卷第3期7, pp. 508-513, 2009。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
51. S.-L。密苏里州,W.-F。Liu, Y. Chen et al.，“基于配体和蛋白质的人类细胞色素P450 2D6抑制剂的建模研究和中草药潜在抑制剂的虚拟筛选，Scutellaria baicalensis.（黄琴，贝加尔卡尔卡盖），“组合化学和高通量筛选，卷。15，不。1，pp。36-40,2012。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
52. S.-L。密苏里州,W.-F。刘,C.-G。Li et al.，“利用分子对接和虚拟突变的人细胞色素P450 2D6 (CYP2D6)底物的药效基因，QSAR和结合模式研究以及在中草药筛选中的应用”，当前医药生物技术，第13卷，第2期9, pp. 1640-1704, 2012。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
53. S.-L。密苏里州,中州。刘伟，段伟，魏敏。人细胞色素P450 2B6的底物特异性、调控和多态性目前的药物代谢，第10卷，第5期。7，pp。730-753，2009。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
54. S.-L。密苏里州,z。周,L.-P。杨敏伟，杨淑芬。人类细胞色素P450 2C9的结构特征和功能相关性的新见解。第一部分,“目前的药物代谢，第10卷，第5期。10，pp。1075-1126，2009。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
55. h, c。Chen, D. J. Waxman，“P450 3A4基因转移增强甲氧基吗啡酰阿霉素抗肿瘤活性”，癌症基因治疗，第16卷，第5期。5，pp。393-404，2009。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
56. J. S. Choi, Y. J. piy .， K. W. Kang，“槲皮素对阿霉素生物利用度的影响:槲皮素对CYP3A4和P-gp的抑制作用，”药物研究档案，卷。34，没有。4，pp。607-613,2011。视图:谷歌学术搜索
57. V. J. Wacher，C.-Y.Wu和L. Z. Benet，“细胞色素P450 3a和p-糖蛋白的重叠底物特异性和组织分布：对癌症化疗中的药物递送和活性的影响”分子致癌作用，第13卷，第2期3，pp。129-134,1995。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
58. S. Betts，L.Björkhem-Bergman，A.Rane和L.Ekström，“Cyp3a4和Cyp3a7在人胎组织中的表达及其与核受体的相关性”，“基本的,临床药理学,毒理学，卷。117，没有。117，pp。261-266,2015。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
59. P. Wei，J. Zhang，D.H. Dowhan，Y. Han和D. D. D. Moore，“核激素受体Car和PXR的特定和重叠函数在异鹅反应”，药物替代科学学报，卷。2，不。2，pp。117-126，2002。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
60. C. Yu，S. Ye，H. Sun等，“PXR介导的Cyp3a4通过Cryptotanshinone和丹参酮Iia的转录激活”，Chemico-Biological互动第177期1，页58-64,2009。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
61. N. Holmstock, F. J. Gonzalez, M. Baes, P. Annaert，和P. Augustijns，“PXR/ cyp3a4人类化小鼠研究涉及肠道p -糖蛋白的药物-药物相互作用”，分子制药学，第10卷，第5期。3，pp。1056-1062，2013。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
62. X. Zhang，Y.Gao，Y. Wang等人，“丹参酮Iia通过妊娠X受体改善硫酸葡聚糖钠诱导的炎性肠病疾病”药物设计、开发和治疗，卷。9，pp。6343-6362,2015。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
63. 《中药五味子与甘草》，《中药五味子与甘草》乌拉尔甘草FISCH）激活妊娠X受体并增加大鼠的华法林清关，“药理学与实验治疗学杂志，卷。316，没有。3，pp。1369-1377,2006。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
64. C. Awortwe, V. K. Manda, C. Avonto等，“紫锥菊通过激活妊娠X受体途径调控CYP1A2, CYP3A4和MDR1基因表达”，Xenobiotica第45卷第5期3, pp. 218-229, 2015。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
65. J. Yang，X. Luan，H.Gui等，“Byakangelicin通过人肝细胞中的妊娠X受体的反式激活诱导细胞色素P450 3A4表达”英国药理学杂志，第162卷，第162号2, pp. 441-451, 2011。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
66. Zhang X, Z. Ma, Q. Liang等，“丹参酮IIA在lca诱导的与妊娠X受体参与相关的胆汁郁积肝模型中发挥保护作用，”民族药物学杂志，卷。164，pp。357-367,2015。视图:出版商网站|谷歌学术搜索

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