抗硝基9抗体的研制与鉴定

⁹⁰ μ 用Western分析检测Nitr9蛋白。(a) Western blot分析瞬时转染表达Nitr9亚型和EGFP质粒的HEK293T细胞的总蛋白裂解物。质粒可以编码内源性的Nitr9亚型，也可以编码flag标记的Nitr9，如图所示。所使用的一抗显示在左边，所识别条带的分子量显示在右边。anti-FLAG抗体作为检测Nitr9的阳性对照，anti-GFP抗体显示每个质粒的转染效率。注意，Nitr9L亚型的总蛋白载量(下图)是Nitr9S和Nitr9SS质粒的10倍。化学发光检测的暴露时间在每个面板上都有标注。(b) Nitr9L和Nitr9S糖基化。Western blot分析内源性糖苷酶处理的HEK293T细胞总蛋白裂解物，这些细胞转染了编码内源性Nitr9亚型的质粒。的anti-Nitr9抗体可以识别所有三种预测大小的Nitr9亚型(右图)。(c)检测斑马鱼组织中的Nitr9蛋白。Western blot分析25g内糖苷酶处理的斑马鱼组织和HEK293T细胞总蛋白。值得注意的是，在HEK293T细胞以及斑马鱼肾脏和脾脏中检测到一个非特异性条带(~ 28kd)，蛋白含量较高。下图为使用抗gapdh多克隆抗体进行负载对照。