ETV6-RUNX1重排在突尼斯儿科B-Lineage急性淋巴细胞白血病

文摘

在这项研究中,41的57突尼斯B-lineage儿童急性淋巴细胞白血病(b)和细胞遗传学的检测复发性异常的诊断、评估了荧光原位杂交(鱼)的t (12; 21)。这一易位导致ETV6-RUNX1(以前TEL-AML1)融合基因。16例(28%)ETV6-RUNX1重排。此外重排,2例显示正常的丧失ETV6等位基因,其他三个显示额外的信号RUNX1基因。七个病人没有ETV6-RUNX1重排显示额外的信号RUNX1基因。7的一个病人也与t(3; 12)被鱼。这是第一个突尼斯的研究中,我们报告的发病率t(12; 21)在童年B-lineage所有和我们发现的多个副本RUNX1。最后,我们的研究结果证实了额外的或二级基因变化在儿科常见B-lineage所有ETV6-RUNX1基因融合的设想在疾病进展中发挥关键性的作用。

1。介绍

t (12; 21) (p13;如)易位是最常见的基因改变在童年b细胞急性淋巴细胞白血病发生在大约25%的情况下,与一个有利的结果(1,2]。

分子这种易位的结果是两种已知基因的融合:ETV6映射到12 p13和RUNX1位于21的时候(1,3]。它导致混合蛋白质的形成涉及的helix-loop-helix领域ETV6和整个RUNX1基因干扰transactivation正常RUNX1transdominant的方式(3,4]。

因为它是一个神秘的易位通常逃在常规细胞遗传学诊断(CC)研究由于改变乐队的相似性,分子细胞遗传学工具,如荧光原位杂交(FISH)需要确定的发病率ETV6-RUNX1融合在突尼斯B-lineage所有儿科病例,分析正常或随机的染色体畸变在诊断和比较我们的发现与以前文献中描述。

2。方法

2.1。病人

在57童年B-lineage所有情况下由常规核型分析,选择41鱼分析根据以下标准:年龄(约);缺乏细胞遗传学的检测复发性异常,也就是说,高超二倍体的分析(51 - 65染色体),t (4; 11)、t(1; 19)和t (9; 22)。这些病人被称为我们的实验室在突尼斯不同血液的细胞遗传学分析服务。

2.2。传统的细胞遗传学

染色体与RHG-banding准备进行根据先前描述的协议(5]。

染色体被确定和安排根据国际系统对人类细胞遗传学命名(ISCN 2005) (6),核型概要文件是由至少20中期分析。

2.3。荧光原位杂交(FISH)

的存在ETV6-RUNX1融合基因是评估使用两个YAC克隆(YAC936E2和YAC821S11)选择12 p13(从他们的位置ETV6)和21的时候(RUNX1)地区,分别在杜辐射”中心Polymorphisme Humain数据库”(http://www.cephb.fr/)。

的ETV6和RUNX1探针与tetramethylrhodamine-6-dUTP和荧光素标记12-dUTP (Abbott-Vysis,,,美国),分别用尼克翻译工具包(Abbott-Vysis,,,美国)。

鱼技术,幻灯片在70%甲酰胺变性1分钟和30秒然后脱水与冷(),70%,85%,100%乙醇1分钟和30秒。

干燥后,ETV6-RUNX1既鱼调查,初步在变性5 - 10分钟,应用到一个幻灯片,覆盖着一个毫米盖玻片和密封橡胶胶水。幻灯片被放置在一个潮湿的耐光的容器一夜之间杂交。

杂交后,盖玻片摘除和幻灯片在柠檬酸0.4标准盐水洗(SSC) 5分钟,紧随其后的是第二个洗2 NP40 xssc - 0.1%为2分钟。

干燥后,幻灯片和4 '复染色,6-diamidino-2-phenylindole与荧光显微镜检查配备适当的过滤器和CytoVision鱼系统图像捕获软件(蔡司Axioskop 2 +)和至少50中期细胞,和100间期核进行了分析ETV6-RUNX1易位。

在正常情况下,杂交的ETV6(红色)和RUNX1(绿色)调查显示,两个红色和两个绿色信号模式(图1(一))。然而,在案件的t(12; 21),这些探针的杂交信号显示一个或两个融合(红/绿或黄色),一个红色,一个绿色信号模式对应的正常拷贝ETV6和RUNX1基因,分别(图1)。

3所示。结果

57 B-lineage所有的孩子中,16例没有为本研究筛选(4例和t (9; 22) (q34;如)从哪一个还超二倍体的染色体核型与53个,1例和t (1; 19) (q23处;p13), 1例和t(8; 14)(抓起;问),2例t(4, 11)(温度系数;q23处),2例与德尔(9)(p12p23), 1例与德尔(11)(q23处),与德尔(6问)3例,2例和高超二倍性(53和56染色体)。都关联到一个add(14)(问)。

选择41例包括25名男性和16名女性随着年龄从1.2至15年(平均7.4年)。

23的41例(56%)有异常鱼发现(表1)。

鱼分析披露16阳性病例ETV6-RUNX1融合基因在57儿科B-lineage所有病例(28%)。13提出正常核型(例1、2、4、9、10、11、12、13、14、15、19、21、22)和2有随机的染色体畸变(例3和18),在剩余的情况下,是不可能获得足够的染色体准备(20例)。两个16例(例1和3)有两个融合信号(图1 (b))。

附带额外染色体畸变t(12; 21)中发现了五个病人(31.2%)。删除nontranslocatedETV6等位基因被发现在两个病人(例1和2)(图1 (c)),3例患者21显示额外的信号RUNX1(例4、14和21)(图1 (d))。其中包括一个案例的克隆与额外的信号RUNX1是不同于一个窝藏ETV6-RUNX1融合基因(21,表1)。

额外的副本RUNX1基因也被发现在7例t (12; 21);三个(17例8日、23)没有21在核型。在剩下的四个病例(例5、6、7和16)的数量RUNX1信号检测到鱼与21号染色体的数量是在协议或标记染色体的存在(图1 (e))。的情况下,1(5例)与t(3; 12)检测到中期鱼(图1 (f))。

4所示。讨论

在目前的研究中,我们使用的检测ETV6-RUNX1融合基因在41 B-lineage所有患儿正常核型形成或随机的染色体畸变的诊断。据我们所知,这是第一次报告的频率t(12; 21)后从突尼斯和第二个阿拉伯国家埃及米哈伊尔·等人在2002年发表的研究(7]。

ETV6-RUNX1重排57所选子群的出现在16个突尼斯B-lineage所有患者(28%)。,13(13/16,81%)正常核型在诊断,比例高于先前报道Veiga等人在巴西(6/12,50%)8和Douet-Guilbert et al。9在法国)(2/10,20%)。

我们证实鱼的效率等的检测技术的染色体重排,通常由CC(错过10,11]。

在埃及,英国,印度,韩国,马来西亚,ETV6-RUNX1重排被发现比我们发现频率较低,范围从0到22%7,12- - - - - -14]。

然而,在德国B-lineage所有病人(11)、意大利(11),法国(15),据报道这种易位的频率约为25%。31%的频率是发现在美国病人(16,我们在以色列最近的报告17在巴西]和[8)的发生率为40%。

这种差异可以解释说,由于预计在3 - 5年发病高峰大多数发表的系列报道中,我们的箱子可能是偏见的老年人(平均年龄7.4岁),然后对应于t(12; 21)发生率低。

的ETV6-RUNX1融合基因在der(21)中检测出所有患者t(12; 21),而互惠ETV6-RUNX1融合基因在der(12)中观察到的只有两种情况。

虽然这t(12; 21)可能引发白血病过程,发现与关键辅助遗传事件ETV6-RUNX1融合基因目前被认为是关键的白血病生成和之前报道的文献[4,18- - - - - -20.]。

在我们的研究中,额外染色体畸变在五个病人被发现ETV6-RUNX1融合阳性病例(31.2%)。

两个病人(12.5%)显示nontranslocated的删除ETV6等位基因。这个删除已经报道但它的发病率是高度可变的几项研究中,从8.6%到87.5%不等(2,7,9,21- - - - - -23]。

这种低检测德尔(12)在我们的研究中可以用这一事实来解释ETV6调查覆盖了几乎整个的鱼ETV6基因,因此亚微观的删除可能错过。

根据努森的假说(9),ETV6可以作为一个肿瘤抑制基因,t(12; 21)扰乱一份吗ETV6和删除第二钝化事件(17,21]。

在其他三个病人,我们发现额外的副本RUNX1基因的克隆与额外的信号从一个窝藏RUNX1是截然不同的ETV6-RUNX1融合基因。

有趣的是,额外的副本RUNX17病人基因也被观察到ETV6-RUNX1融合。其中,三个没有21他们核型可能符合额外的21也许在一个小克隆没有观察到的细胞遗传学的或来自非分裂克隆超二倍体的细胞,而正常细胞分裂中期来源于正常。

在剩下的四种情况下的数量RUNX1CC信号是一致的结果包括一个案例(案例5)我们已经确认了t(3; 12)鱼。这种易位B-lineage此前报道的情况除了与t (12; 21) Yehuda-Gafni et al。17)和小林et al。19]。

Extracopies的RUNX1基因被发现6例(有或没有ETV6-RUNX1融合基因,没有患者中有21例核型)57 B-lineage (10.5%)。这个发病率高于之前报道了木豆Cin et al。24),Niini et al。25)和最近Busson Le-Coniat et al。26]报告只有2或3例。

尽管这些发现的真正意义尚未澄清,基因剂量效应涉及的假设RUNX1似乎是非常可能的27,28]。

总之,我们的研究结果表明ETV6-RUNX1融合基因是一种常见的基因异常检测到鱼在突尼斯B-lineage所有儿童的28%,我们确认在这些患者中经常遇到二次基因事件。有趣的是,额外的副本RUNX1比以前经常发现在我们的系列报道其他人群,因此值得进一步研究阐明机制的作用RUNX1在白血病生成。此外,由于这个异常的未知的预后意义,进一步的研究应进行连续的孩子所有的关联RUNX1超表达与患者的跟踪。

确认

我们非常感谢这三个机构的医生谁与我们在这工作。作者感谢Mouna Zarrad, Zeineb Mrad,迭代反演Meksi, Rym Khattat优秀的技术援助的细胞遗传学实验。

引用

1. s . p .和平先生Coniat, r·伯杰”T(12; 21):一个新的在急性淋巴细胞白血病复发易位,”癌症基因的染色体9卷,第191 - 186页,1994年。视图:谷歌学术搜索
2. s . a . Shurtleff a . Buijs f . g . Behm et al .,“电话/ AML1融合产生的一个神秘的t(12; 21)是最常见的遗传病变在儿科和定义了子群的一个优秀的患者预后,”白血病,9卷,不。12日,第1989 - 1985页,1995年。视图:谷歌学术搜索
3. t·r·Golub g·f·巴克,s . k . Bohlander et al .,“TEL基因的融合12 p13 AML1基因21日的时候在急性淋巴细胞白血病,”美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷92,不。11日,第4921 - 4917页,1995年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. 美国k, t . s . k .广域网,a . t . c . Cheuk et al .,”表征的额外基因事件在儿童急性淋巴细胞白血病TEL / AML1基因融合:分子细胞遗传学研究中,“白血病,15卷,不。9日,第1447 - 1442页,2001年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. a . Gmidene h . Sennana h . Elghezal et al .,“细胞遗传学分析298例新诊断的急性淋巴细胞白血病在突尼斯,”血液肿瘤,26卷,不。2、91 - 97年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. f . Mitelman Ed。2005年ISCN:人类细胞遗传学命名的国际体系瑞士巴塞尔,s . Karger, 2005年。
7. f . m .米哈伊尔·k·a·拥挤:喀et al .,“AML1基因表达在儿童急性淋巴细胞白血病”白血病,16卷,不。4、658 - 668年,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. l . b . a . Veiga v . m .因为l·r·卡瓦利et al .,“高频t (12; 21) (p13;如)在儿童急性淋巴细胞白血病和已知的临床结果在巴西南部,”白血病的研究28卷,第1038 - 1033页,2004年。视图:谷歌学术搜索
9. n . Douet-Guilbert f·莫雷尔,蔡明俊。布里斯勒et al .,“荧光原位杂交研究TEL-AML1融合基因在b细胞急性淋巴细胞白血病(1984 - 2001),“癌症遗传学和细胞遗传学,卷144,不。2、143 - 147年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. s . c . Raimondi”的现状在儿童急性淋巴细胞白血病细胞遗传学研究,“血,卷81,不。9日,第2251 - 2237页,1993年。视图:谷歌学术搜索
11. a . Borkhardt g . Cazzaniga s Viehmann et al .,”发病率和临床相关性TEL / AML1融合基因在急性淋巴细胞白血病患儿进入德国和意大利多中心治疗试验,”血,卷90,不。2、571 - 577年,1997页。视图:谷歌学术搜索
12. d·h·Spathas j·斯图尔特,i o .歌手,a . Theriault m .叫和j·m·康纳“t的检测在儿童急性淋巴细胞白血病(12;21)荧光原位杂交,”癌症遗传学和细胞遗传学,卷110,不。1、7 - 13,1999页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. r . Garcia-Sanz Alaejos, a Orfao et al .,“低频TEL / AML1融合基因在急性淋巴细胞白血病在西班牙,”英国血液学杂志》,卷107,不。3、667 - 669年,1999页。视图:谷歌学术搜索
14. h·k·吉尔,t . s . Keoh j·s·达利瓦et al .,“TEL-AML1频率在多种族的马来西亚小儿急性淋巴细胞白血病”癌症遗传学和细胞遗传学,卷156,不。2、129 - 133年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. 诉Cacheux h .洞穴,雷诺现象,g . Brunie m . Bakkus和p . Cochaux”ETV6 12 p染色体缺失的目标在t(12; 21)儿童急性淋巴细胞性白血病”白血病,11卷,不。9日,第1464 - 1459页,1997年。视图:谷歌学术搜索
16. l . Zhang j·b·潘克赫斯特w·f·克恩et al .,“染色体变化检测荧光原位杂交在急性淋巴细胞白血病患者,”中国医学杂志,卷116,不。9日,第1303 - 1298页,2003年。视图:谷歌学术搜索
17. o . Yehuda-Gafni g . Cividalli a Abrahmov et al .,“荧光原位杂交分析的t (12; 21) (p13;如)在儿童急性淋巴细胞白血病B-lineage”癌症遗传学和细胞遗传学,卷132,不。1,第64 - 61页,2002。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. 雷诺现象,h .洞穴,m . Baens et al .,“12; 21易位涉及电话和删除其他的电话等位基因:两个经常改变儿童急性淋巴细胞白血病中发现有关,”血,卷87,不。7,2891 - 2899年,1996页。视图:谷歌学术搜索
19. h .小林n . Satake n . Maseki长官a Sakashita当时表示,用军机和y Kaneko“der (21) t(12; 21)总是形成一个12号染色体;21易位与儿童急性淋巴细胞白血病”英国血液学杂志》,卷94,不。1,第111 - 105页,1996。视图:谷歌学术搜索
20. 美国k, t . s . k .广域网,l . c . Chan“儿童白血病的细胞遗传学和分子遗传学,”血液肿瘤,17卷,不。3、91 - 105年,1999页。视图:谷歌学术搜索
21. a . Martin-Ramirez m .会前t魂斗罗et al .,“荧光原位杂交研究TEL / AML1融合和其他涉及电话和AML1基因的异常。相关性和细胞遗传学研究在儿童急性淋巴细胞白血病预后价值,”Haematologica,卷86,不。12日,第1253 - 1245页,2001年。视图:谷歌学术搜索
22. h . m . Kempski和n . t .惊动,“TEL-AML1 untranslocated TEL等位基因的融合伴随着损失B-precursor急性淋巴细胞白血病的童年,“白血病和淋巴瘤,40卷,不。1 - 2,39-47,2000页。视图:谷歌学术搜索
23. 竹内,t .胶,c . r . et al .,巴特拉姆”电话是12日的目标之一删除p在许多情况下,儿童B-lineage急性淋巴细胞白血病,”白血病,11卷,不。8,1220 - 1223年,1997页。视图:谷歌学术搜索
24. p . Dal Cin l·阿特金斯c·福特et al。“放大AML1儿童淋巴细胞白血病,”癌症基因的染色体,30卷,第409 - 407页,2001年。视图:谷歌学术搜索
25. t . Niini j·卡内尔瓦,k Vettenranta, m . Saarinen-Pihkala和s . Knuutila”AML1基因扩增:一种新的发现在儿童急性淋巴细胞白血病”Haematologica,卷85,不。4、362 - 366年,2000页。视图:谷歌学术搜索
26. m . Busson Le-Coniat, f . Nguyen Khac M.-T。丹尼尔·o·a·伯纳德,r·伯杰“21号染色体异常与AML1放大在急性淋巴细胞白血病”基因染色体和癌症,32卷,不。3、244 - 249年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. d . Penther c . Preudhomme p Talmant et al .,”放大AML1基因存在于儿童急性淋巴细胞白血病而不是成人,而不是与AML1基因突变有关,”白血病,16卷,不。6,1131 - 1134年,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
28. p . Perez-Vera o . Montero-Ruiz s Frias et al .,“RUNX1的多个副本:描述的14个新病人,随访,和文献之回顾,“癌症遗传学和细胞遗传学,卷180,不。2、129 - 134年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

版权

版权©2009 Abir Gmidene等。这是一个开放的分布式下文章知识共享归属许可,它允许无限制的使用、分配和复制在任何媒介,提供最初的工作是正确引用。