的患病率金黄色葡萄球菌天疱疮患者的皮肤和软组织感染

摘要

寻常天疱疮是一种自身免疫性疾病，可导致严重的发病率和死亡率。寻常性天疱疮的免疫抑制治疗易使患者发生感染。这项研究的目的是评估金黄色葡萄球菌感染和PVL天疱疮患者的基因在皮肤科门诊。材料和方法．本描述性研究对2014 - 2015年在皮肤科门诊就诊的寻常天疱疮患者196例(男性119例，女性77例)进行描述性研究。在本研究中，寻常型天疱疮的诊断是通过组织学、病灶周围皮肤的免疫荧光模式和血清的间接免疫荧光检测。通过问卷调查收集数据。结果．59.1%的寻常性天疱疮患者有金黄色葡萄球菌感染。116人中有49人对甲氧西林有耐药性。PVL116例中有25例检测到基因金黄色葡萄球菌积极的病人。结论．这是……的第一份报告金黄色葡萄球菌伊朗天疱疮患者的感染。超过40%的菌株对甲氧西林具有耐药性金黄色葡萄球菌．PVL耐甲氧西林基因携带金黄色葡萄球菌在这项研究中是很高的

1.介绍

天疱疮被定义为一组危及生命的水泡性疾病，可导致粘膜和皮肤上皮内形成水泡[1- - - - - -3.］.天疱疮的四种主要类型是寻常天疱疮、叶状天疱疮、IgA天疱疮和副肿瘤性天疱疮。发病率在每年每10万人0.1至0.5之间;然而，在某些人群中，发病率较高[4］.印度、东南欧和中东的居民患寻常天疱疮的风险最大。天疱疮发生在男性和女性的频率相同。在大多数地理位置，寻常天疱疮比叶状天疱疮更常见。然而，在某些地区，如北非、土耳其和南美洲，叶状天疱疮的流行程度超过寻常天疱疮[5］.寻常天疱疮和叶面天疱疮是潜在威胁生命的疾病。这些疾病的一线治疗包括全身糖皮质激素伴或不伴辅助免疫抑制剂。局部皮肤护理措施可降低感染风险。当病灶对治疗无效时，应考虑继发感染的可能性，如果发现感染，应适当治疗[6- - - - - -8］.细菌性感染未被报道为天疱疮的诱发因素，而败血症为金黄色葡萄球菌剂量，作为免疫抑制治疗的并发症。对于天疱疮与细菌感染之间的关系有许多可能的澄清[9，10］.这种细菌可能只是一种机会性感染，因为天疱疮患者长期接受免疫抑制治疗。早期发现并发天疱疮和细菌性感染尤其明显金黄色葡萄球菌这是非常重要的，因为这种疾病可能导致致命的后果。这项研究的目的是评估金黄色葡萄球菌感染和PVL天疱疮患者的基因。

2.材料和方法

2．1．研究种群和菌株收集

这项横断面研究对德黑兰医学科学大学附属拉齐医院德黑兰皮肤病学服务中心的338名皮肤和软组织感染患者进行了研究。临床诊断为天疱疮的患者，其组织病理学和直接免疫荧光(DIF)检查结果一致，证实了天疱疮的临床诊断。寻常型天疱疮的诊断是通过组织学、病灶周围皮肤的免疫荧光模式和血清的间接免疫荧光检测。完成了一份问卷以收集病人的资料。临床金黄色葡萄球菌从德黑兰医科大学附属拉兹医院德黑兰皮肤病学服务中心收集的皮肤和软组织感染天疱疮患者的样本被送往Kashan医学院的微生物实验室，以批准诊断金黄色葡萄球菌．所有患者采集皮肤和软组织感染标本，在羊血琼脂和甘露醇盐琼脂37℃孵育24-48 h。革兰氏染色、过氧化氢酶活性、脱氧核糖核酸酶、玻片凝血酶和试管中柠檬酸盐兔血浆的游离凝血结果均证实为菌种水平。

２.２.金黄色葡萄球菌识别

所有拭子接种于甘露醇盐琼脂上，37℃孵育。将疑似菌落在胰蛋白酶大豆琼脂上继代培养，确定分离株为金黄色葡萄球菌通过菌落形态、革兰氏染色、过氧化氢酶活性、dna酶试验、玻片凝固酶试验和试管中柠檬酸兔血浆的游离凝固[11，12］.

2．3.甲氧西林耐药性的测定

采用两种方法评价甲氧西林耐药情况。第一种方法是根据CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute, CLSI) 30推荐的Mueller Hinton琼脂纸片扩散法μg头孢西丁片(≤21 mm提示MRSA)μg苯唑西林片(≤10mm提示MRSA)。第二种方法为聚合酶链反应(PCR)检测台面式晶体管基因(阳性表示MRSA) [13，14］.

２.４.耐多药药物敏感性试验和测定

根据临床和实验室标准协会(CLSI)的建议，采用Mueller Hinton琼脂纸片扩散法测定抗菌药物的敏感性和耐药性[13］.使用的药物有:苯唑西林(1μ(1 g)、青霉素μteicoplanin(30克)μ四环素(30克)μ阿奇霉素(15克)μg)、克林霉素(2μg)、头孢西丁(30μg)、环丙沙星(30μg)、庆大霉素(10μlinezolid(30克)μdaptomycin(30克)μg)、阿米卡星(30μG)、头孢唑啉(30μg).参考菌株金黄色葡萄球菌以ATCC 3359作为对照。根据CLSI和制造商协议(Mast Group Ltd.， Merseyside, UK)推荐的标准，结果被解释为易感、中间或耐药。中耐多药的定义金黄色葡萄球菌分离是根据新的标准化国际文件。如果这些分离菌对三种以上的抗菌药物有耐药性，就被归类为耐多药(MDR) [15］.

2．5．基因组DNA的制备

DNA是通过煮沸制备的。保存在−20℃。整除2μ用模板DNA的L进行PCR。

2.6。检测PVL基因

的存在lukS-PV和lukF-PV基因编码PVL采用基于聚合酶链反应(PCR)的方法，引物对如Lina等所述。本研究使用的引物如下:5“ATCATTAGGTAAAATGTCTGGACATGATCCA3.'作为forward和5“GCATCAASTGTATTGGATAGCAAAAGC3.'作为反义词[16］.在这项研究中金黄色葡萄球菌以ATCC 49775为阳性对照，以蒸馏水为阴性对照。在最后的20卷中，对Eppendorf cycler进行DNA扩增μL反应中含有1.5 mM的氯化镁₂, 250年μM dNTPmix, 1μ每个引物的分子量(20 NM)， Taq DNA聚合酶的1u, Tris-HCL (PH 9.0) 10 mM, KCL 30 mM, 4μ模板DNA的M。放大进行了第一次变性94°C 5分钟(第一变性)后面36个周期根据以下程序:变性在94°C 45秒,退火61.3°C 45秒,在72°C和扩展了45秒,加上最后一个扩展在72°C 5分钟完成部分聚合。PCR产物通过含有溴化乙锭的1.5%琼脂糖凝胶(Bio-Rad, UK)进行电泳。PCR纯化试剂盒(Bioneer公司，韩国)纯化PCR产物，前链测序由Bioneer公司(韩国)进行。核苷酸序列用Chromas 1.45软件、MEGA-4软件和NCBI软件BLAST进行分析。

2.7。统计分析

采用SPSS (version 19, Chicago, IL, USA)进行统计分析。比较比例采用卡方检验或Fisher精确检验。一个值< 0.05被认为是显著的。

3.结果

天疱疮患者占57.9%(196/338)，其他皮肤感染占42.1%(142/338)。52.9% (179/338)金黄色葡萄球菌隔离。196例天疱疮患者中有116例(59.1%)患有天疱疮金黄色葡萄球菌196人中有55人(28%)患有皮肤和软组织感染美国epidermidis,有3.5%大肠杆菌,有2.5%铜绿假单胞菌,有2%克雷伯氏菌spp, 1%的人普罗透斯1%为非溶血性链球菌， 0.5%有白喉，0.5%有白喉枸橼酸杆菌属spp, 0.5%的人Providenciaspp, 0.5%的人肠杆菌属Spp .， 0.5%沙雷氏菌属spp。(图1）.

116例患者平均年龄为年龄(范围:6-88岁)男性54.4%，女性45.6%。116例天疱疮患者中有87例(75%)患有金黄色葡萄球菌皮肤和软组织均住院治疗。116例中22例(18.9%)发生医院感染。平均住院天数为天(表1）.

116年的金黄色葡萄球菌从本研究纳入的天疱疮患者皮肤感染中分离的48株(41.3%)为MRSA (OR = 2.3，)， 57.7%为MSSA(67/116)， 52.5%为MDR (OR = 1.8，）.患病率PVL的第金黄色葡萄球菌天疱疮患者感染发生率为21.5%(25/116)(图2）.这些PVL积极的金黄色葡萄球菌14例(56%)为MRSA, 11例(44%)为MSSA2）.

93.9%的菌株对青霉素耐药;所有菌株均对利奈唑胺敏感，99.1%的菌株对达托霉素敏感。所有菌株均对万古霉素敏感(图3.）.

4.讨论

天疱疮是一种众所周知的自身免疫性疾病[17］.目前，自身免疫、免疫缺陷和感染之间的关系已得到公认。人们认为，自身免疫和免疫缺陷不是独立的实体;它们之间存在着某种联系[18，19］.另一方面，在免疫抑制治疗的基础上住院治疗会使PV患者更易发生感染。一些研究报告了细菌感染[20.，21］.在我们的患者中发现的大多数细菌性皮肤感染是由于金黄色葡萄球菌．在其他关于PV患者的研究中，由于金黄色葡萄球菌也有报道[22］.Kanwar和Dhar报告说，败血症是PV患者最常见的死亡原因金黄色葡萄球菌是4宗死亡个案的致病因素[23］.在我们的研究中，53.7%的天疱疮患者金黄色葡萄球菌皮肤和软组织感染(ssti)， 53.6%为MRSA。迄今为止，没有研究描述伊朗天疱疮患者人群中MRSA和PVL阳性感染的临床谱和流行病学。我们的研究发现MRSA与金黄色葡萄球菌天疱疮患者的ssti。本研究显示21.5%金黄色葡萄球菌从天疱疮患者皮肤或软组织感染分离的PVL阳性金黄色葡萄球菌．2010年英国的数据显示，20%金黄色葡萄球菌从皮肤或软组织感染分离的PVL阳性金黄色葡萄球菌．Fogo等对PVL阳性的研究结果金黄色葡萄球菌据认为PVL的患病率高于2% [24］.Havaei等人对甲氧西林耐药临床分离株中编码双组分杀白细胞素基因流行率的研究金黄色葡萄球菌在伊朗，有24.2%的分离株呈PVL阳性，这一比例高于欧洲国家[25］.事实上，超过94%的患者与皮肤样本相关的PVL呈阳性[25］.PVL19.2%的耐甲氧西林菌株携带该基因金黄色葡萄球菌．Holems等人的研究金黄色葡萄球菌在英格兰和威尔士分离出了潘通-瓦伦丁亮色素基因PVL基因被<2%的分离株携带金黄色葡萄球菌,无论是methicillin-sensitive金黄色葡萄球菌(MSSA)和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(耐甲氧西林金黄色葡萄球菌)26］.总之，本研究中超过50%的天疱疮患者被MRSA定植。32例院内MRSA病例中有3例是PVL基因阳性。天疱疮与MRSA定植显著相关。两组间有显著差异金黄色葡萄球菌男性天疱疮患者的SSTI、耐多药、既往使用抗生素(特别是万古霉素和氨基糖苷类抗生素)、皮质类固醇的使用和医院感染。

5.结论

这是……的第一份报告金黄色葡萄球菌伊朗天疱疮患者的感染。天疱疮的自身免疫过程和免疫抑制治疗易使患者发生感染。金黄色葡萄球菌天疱疮患者的感染比其他细菌高。PVL耐甲氧西林基因携带金黄色葡萄球菌在这项研究中是很高的

相互竞争的利益

作者声明本论文的发表不存在利益冲突。

作者的贡献

Rezvan Moniri和Ahmad Khorshidi负责研究的构思和设计，Zeinab Fagheei Aghmiyuni和Tahereh Soori进行数据收集，Rezvan Moniri准备了论文的初稿。Seyed Gholam Abbas Mousavi和Rezvan Moniri进行了数据分析，对论文中重要的知识内容进行了批判性的修改，并监督了这项研究。

致谢

本论文在硕士学位论文的基础上，获得了卡山大学医学科学研究基金(批准号:950950956)的资助。93106)。作者感谢Azam Rezaee和Fatemeh Moradi的数据收集。

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