临床孤立综合征或复发缓解型多发性硬化症初治患者血清瘦素水平

摘要

一些研究调查了多发性硬化症(MS)患者的瘦素水平，结果有些矛盾。他们都关注已确定复发-缓解(RR) MS患者，但没有特别关注在疾病早期提示MS的临床孤立综合征(CIS)患者。在这项研究中，测定了89例treatment-naïve患者(53例患者)和73例对照组(36例患者)的血清瘦素水平，以寻找组间的差异以及与几种疾病参数的相关性。在MS患者和对照组中均观察到瘦素水平(女性较高)预期显著的性别二型性。与女性对照组相比，RRMS女性患者瘦素水平升高()及女性CIS患者()．女性CIS患者的水平与对照组相当。在RRMS女性患者中，瘦素水平与病程呈正相关，但与EDSS无关。本研究结果未表明瘦素参与ms早期发病。CIS患者正常瘦素水平提示瘦素不具有致病作用。女性MS患者在病程中瘦素/BMI的比值以时间依赖和残疾独立的方式增加。

1.介绍

瘦素是一种主要由脂肪细胞释放的细胞因子样激素，表现出影响能量平衡的神经内分泌特性。血清瘦素水平通过抑制食物摄入和刺激能量消耗来调节体重，在BMI和体脂较高的受试者中，血清瘦素水平较高[1，2］.此外，瘦素具有影响中性粒细胞趋化和巨噬细胞促炎细胞因子表达的免疫调节特性。它还作为促炎细胞因子诱导Th-1免疫应答，因此在Th-1介导的自身免疫发病机制中发挥重要作用，如实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)，多发性硬化症(MS)的实验模型[3.］.事实上，瘦素缺乏的小鼠对EAE的诱导具有抗性。另一方面，活化的T淋巴细胞在活性EAE脑损伤中分泌瘦素[4提示瘦素在诱发EAE中的作用。

瘦素在多发性硬化症发病机制中的作用还没有完全阐明，报道的结果在一定程度上相互矛盾。早期研究报告了复发缓解(RR) MS患者与健康受试者之间的相似血清瘦素水平[5，6］.随后，Matarese等人[7]发现treatment-naïve RRMS患者血清瘦素升高。Frisullo等人也报道了treatment-naïve RRMS患者较高的血清瘦素水平[8］.最近，两项进一步的研究报告了相互矛盾的结果。Emamgholipour等人[9]发现MS患者瘦素水平升高，而Rotondi等人[10发现了与对照组相当的水平。研究结果之间的冲突可能部分是由于不同的样本量和不同的纳入和排除标准。尽管存在差异，但迄今为止所有的研究都检测了已确诊疾病患者的瘦素水平。除了一项包括原发性或继发性进行性MS患者的研究外，这些研究几乎都是临床明确的RRMS患者[9］.这些研究均未评估临床分离综合征(CIS)患者在确诊MS前的疾病早期瘦素水平。

本研究的目的是测量未接受治疗的CIS或RRMS患者的血清瘦素水平，并评估其与几种疾病参数的潜在相关性。

2.对象和方法

89例treatment-naïve(男35例，女54例;年龄范围从20岁到45岁)从2005年平均招募，在整个年份，作为更大的研究CSF和血清神经内分泌变量的一部分，并满足2005 McDonald标准的MS或可能的MS被纳入研究[11］.53例患者(男性21例，女性32例)有CIS提示MS, 36例(男性14例，女性22例)有RRMS。由于在早期MS中没有血清瘦素水平的报告，首次发作的患者(CIS)在男性和女性亚组中分别进行了评估。所有患者临床状态良好，EDSS低(范围0.0 - 4.0)，评估时无药物，既往复发期间从未接受过任何免疫调节治疗或皮质类固醇治疗，因为复发是轻微的或患者低估了。所有患者均无内分泌或代谢疾病。评估时，54例患者(22例男性)出现复发[12缓解期35例(男性13例)。CIS患者的病程为0.1 ~ 72个月，RRMS患者的病程为2 ~ 192个月。所有患者均接受脑MRI及脑脊液分析。以扩大伤残状况量表评估伤残程度[13] (eds)。记录吸烟史和每天吸烟数量。

对照组由73名年龄范围相同的患者组成，其中男性30名(年龄21 - 48岁)，女性43名(年龄18 - 48岁)。受试者是一项更大的脑脊液和血清神经内分泌变量研究的对照组的一部分，他们入院进行诊断调查，发现没有神经疾病。更具体地说,我们不仅包括无症状患者积极的血清螺旋体测试,而且与CSF阴性结果和一个正常的神经和迷你精神状态检查,以及一些非特异性脑MRI T2病灶患者和非典型历史女士,以及正常的神经系统检查,颈椎MRI及脑脊液表现。

所有受试者均获得书面知情同意，本研究获得雅典大学医学院伊根尼医院伦理委员会批准。

身体质量指数(BMI，体重(公斤)除以身高(米)的平方)是根据自我报告的身高和体重计算的。所有患者和对照组在上午8点至10点之间采集血液样本，随后进行一夜斋戒。血清离心分离，−30°C保存至估算。瘦素在冷冻血清样本中异常稳定，在−20°C和超过5个冻融周期的2年以上[14］.使用比利时DIAsource ImmunoAssays SA的包被管放射免疫测定试剂盒测定血清中的瘦素。制造商给出的分析灵敏度为0.1 ng/mL，分析内和分析间的灵敏度接近5%。我们计算了实验内的变异系数%(平均值±SD，范围0.06 - 11.5%)。对照和患者的血清都包括在每一批中，以补偿分析间的差异。

采用方差分析(ANOVA)评估组间瘦素水平的差异，协变量为年龄和BMI。与BMI标准化的瘦素水平(瘦素/BMI比值)的差异也按照之前的建议进行了评估[7，使用方差分析与年龄作为协变量。瘦素/BMI比值可以作为衡量脂肪细胞瘦素分泌活动的指标，因为BMI与体脂显著相关[15］.男性和女性的分析是分开进行的，因为女性的瘦素水平更高[1，16］.以血清瘦素水平或瘦素/BMI比值为因变量，以临床资料和自变量进行多元回归分析。使用线性回归来寻找瘦素和瘦素/BMI比值与年龄、BMI和病程的相关性。在这个分析中，疾病持续时间的数据，以月为单位，通过对数转换得到正态分布(夏皮罗-威尔克正态检验)。

3.结果

表格1总结CIS和RRMS患者的临床数据，包括男性和女性。表格2显示患者和对照组的年龄、BMI、瘦素水平和瘦素/BMI比值。无论是男性还是女性，总组患者(CIS + RRMS)的瘦素或瘦素/BMI比值与对照组相比均无显著差异(表)2)．在比较对照组、CIS和RRMS三组女性时发现显著差异。与对照组和女性CIS相比，RRMS患者的瘦素和瘦素/BMI比值均较高。这些差异在男性患者中没有显著性。

所有女性组的血清瘦素水平和瘦素/BMI比均高于所有男性组。已知瘦素与BMI之间的显著相关存在于所有组中，包括男性和女性，相关系数从0.525 (CIS男性)到0.835 (RRMS女性)。

年龄或吸烟状况对瘦素或瘦素/BMI比值没有影响。当患者被分为活动性(MRI中出现复发或凝胶的患者)和非活动性(MRI中没有凝胶的患者)时，两组之间也没有显著差异。在以后的多元回归分析中，为了保持自变量的数量较少，没有将这些变量作为自变量引入。

将男性和女性患者分别以血清瘦素水平或瘦素/BMI比值为变量，以病程、复发、脑脊液寡克隆带、MRI钆增强病灶、EDSS评分为自变量进行多元回归分析。对于男性患者，无论是瘦素水平还是瘦素/BMI比值(瘦素)，都没有发现与任何独立变量相关，,；瘦素/BMI比值数据见表3.)．对于女性，没有发现与复发、脑脊液中寡克隆带的存在、脑脊液中钆增强病变或EDSS评分相关，但瘦素水平和瘦素/BMI比值与疾病持续时间呈正相关(瘦素)，，，疾病持续时间= .395，和；瘦素/BMI比值见表3.)．通过对CIS和RR患者分别进行多元回归分析发现，这种关联仅在RR女性患者中存在(分析数据见表)3.)．

女性RR患者病程与瘦素/BMI比值的相关性如图所示1（，,)．疾病持续时间的数据经过日志转换以达到正态分布。这种相关性在男性RR患者中不显著，)．

4.讨论

本研究不仅评估treatment-naïve RRMS患者的血清瘦素水平，还评估了CIS患者在疾病早期的血清瘦素水平，并检测了与各种疾病参数的潜在关联。瘦素水平在RRMS女性患者中升高，并与疾病持续时间呈正相关。另一方面，女性CIS患者瘦素水平正常。男性RRMS和CIS患者瘦素无明显变化。

在MS患者和对照组中，瘦素水平与性别和BMI密切相关。瘦素水平的性别二型性(女性较高)在正常受试者中已经很好地确立，而且以前也在多发性硬化症患者中观察到[10，16］.关于MS患者瘦素与BMI的相关性，以前的报道有些矛盾。Matarese等人[7]报道了在多发性硬化症患者低残疾复发时这种相关性的丢失。Rotondi等人[10]报道了这种相关性在低残疾缓解期的MS患者中保持，而在高残疾缓解期的MS患者中消失。我们的队列包括复发和缓解期的低残疾患者。我们的发现与第二项研究更加一致，但这可能是因为纳入了我们的缓解期患者。

rms患者瘦素水平升高的研究已经在之前的几项研究中报道过[7- - - - - -9］.只有一项研究报告了性别特异性分析，该研究发现女性和男性患者的血糖水平都有所上升[8］.这与我们的数据相反，我们的数据显示的差异仅限于女性患者。考虑到两项研究中的男性样本量和男性复发的百分比非常相似，要调和这些相互矛盾的结果并不容易。对这种差异的一种可能的解释可能是Frisullo等人。8]包括既往接受过皮质类固醇治疗的患者。皮质类固醇已被证明提高血清瘦素水平，尽管只是暂时的[10，17］.

早期的研究发现，MS患者和对照组之间瘦素水平没有差异，患者数量较低，其中一项研究还包括接受免疫调节治疗的受试者[5，6］.上述情况可能部分解释了与最近的报告，包括目前的调查结果的差异。最近唯一一项报告患者和对照组瘦素水平相当的研究只调查了处于缓解期的患者[10］.这可能是这种差异的一个可能解释，因为一些研究表明，复发的存在对瘦素水平有显著影响。Batocchi等人[5发现在第一次临床复发前的随访期间，瘦素水平明显高于基线值。Frisullo等人[8研究发现，RRMS缓解期女性患者的血清瘦素水平高于复发期和对照组女性患者。然而，我们没有观察到瘦素水平在复发和缓解患者之间的显著差异。然而，我们确实观察到瘦素/BMI比值在女性CIS患者中呈边缘性显著负相关。

一些研究表明，瘦素导致促炎细胞因子的产生增加，共刺激分子上调，Th1型免疫反应增加，Treg功能抑制[18］.一些证据也表明，它在EAE的诱导和进展中具有重要的作用，ms的动物模型瘦素缺陷小鼠对EAE诱导具有抗性，这可以通过给药瘦素逆转[19］.因此，有人认为，活跃的RRMS患者瘦素水平的增加可能反映了一种致病作用[20.］.如果是这样的话，可以预期在CIS患者的MS早期瘦素水平会增加。然而，我们的研究发现，CIS患者和对照组之间瘦素水平没有显著差异，这表明该激素可能没有致病作用，在RRMS患者中观察到的较高水平可能是疾病过程中诱发的继发性现象。除此之外，男性患者和对照组之间瘦素水平缺乏显著差异也强烈反对其致病作用。

在我们小组最近的一项研究中，发现女性RRMS患者的BMI低于对照组[21］.由于瘦素水平的分泌与身体脂肪中储存的能量成比例，剧烈的BMI变化已被证明会影响循环中的瘦素浓度[20.］.因此，人们可能会认为女性rms患者的瘦素水平会降低。相反，我们发现瘦素水平不成比例地增加，提示在多发性硬化症患者中，调节瘦素分泌到体脂的机制可能失调。

一些研究调查了瘦素水平与疾病参数(如疾病持续时间和EDSS)之间可能的相关性，结果为阴性[5，6，10］.另一方面，本研究发现瘦素水平与RRMS女性患者的病程呈正相关。瘦素/BMI比值也存在这种相关性，进一步提示随着疾病进展，女性患者脂肪细胞瘦素分泌活性增加。然而，与EDSS缺乏相关性表明，瘦素分泌的变化与中枢神经系统损伤的积累没有直接关系。由于样本量较小，可能在以前的研究中没有发现瘦素与疾病持续时间的关联[5]或较不严格的排除标准[6，10］.更具体地说，Chatzantoni等人[6也包括接受免疫调节治疗的患者，而Rotondi等[10也包括过去接受过皮质类固醇治疗的患者。我们设计我们的研究仅包括treatment-naïve患者，包括既往皮质类固醇和免疫调节治疗的患者。这极大地限制了可纳入的RRMS患者的数量，并影响了我们的样本量，但它可能允许与表面相关，否则会被混杂因素掩盖。

除了相对有限的样本量外，还需要提到一些可能影响本研究结果的限制因素。首先，对照组不是健康的志愿者，而是作为可能患有神经系统疾病的住院患者进行调查，结果为阴性，尽管这可能影响了对照组的血清瘦素水平，但可能性不大。其次，仅纳入treatment-naïve RRMS患者意味着该样本不能代表整个RRMS人群。然而，这避免了其他潜在的重要混淆因素。最后，使用自我报告的BMI是一个进一步的限制，尽管这适用于患者和对照组，并考虑到自我报告值和测量值之间的高度相关性[22，预计不会对结果产生重大影响。

5.结论

目前对treatment-naïve CIS和RRMS患者的研究结果表明，在疾病的早期阶段，瘦素没有参与。仅在RRMS女性患者中发现瘦素分泌增加，但在首次脱髓鞘发作(CIS)患者中没有发现，这表明瘦素从疾病早期阶段就没有致病作用。女性MS患者在病程中瘦素/BMI的比值以时间依赖和残疾独立的方式增加。

利益冲突

作者声明本文的发表不存在利益冲突。

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