文摘

有人建议,环境暴露汞导致自身免疫性疾病。BCR信号中断与中央宽容和自身免疫的失败,我们曾表明,低水平的汞^{2 +}干扰BCR信号。在这个报告中我们采用multiparametric phosphoflow血细胞计数,以及小说Overton算法的泛化从一至二维单峰分布同时监控低水平Hg的效果^{2 +}中毒的激活ERK和几个BCR信号通路的上游元素wehi - 231 B细胞。后,我们发现,暴露在低水平的汞柱^{2 +},只有大约三分之一的细胞敏感金属。对于那些敏感的细胞,我们确认我们的早期作品,激活ERK Hg减毒但现在报告^{2 +}对酪氨酸激酶杀人案上游影响不大。另一方面,我们发现通过麦克米兰酪氨酸激酶信号上游实际上是增强,是上游的激活B细胞蛋白质BLNK signalosome脚手架。

1。介绍

汞是一种强有力的immunotoxicant。早期的实验表明,暴露在高或中等程度的汞通过坏死或凋亡诱导免疫细胞死亡。幸运的是,暴露在高水平的汞不再是常见的,但大部分人口继续暴露在低水平。在更高级别的风险相比,低水平暴露于汞不是与免疫细胞的死亡,而是免疫疾病特点是immunoproliferation和自身免疫1,2]。

今天在美国大多数暴露于汞是消费的结果有机汞污染的海鲜。也被报道,高果糖玉米糖浆,大多数加工食品的主要成分,通常含有惊人的高水平的无机汞(Hg^{2 +}),所以低级Hg^{2 +}接触现在担忧的来源(3]。然而即使对膳食摄入有机汞,绝大多数是Hg很快代谢^{2 +}随着时间的推移,因此汞负担在大脑或脾脏等器官通常包括无机和有机物种,甚至暴露在有限条件下有机汞(4,5]。事实上研究在正常个体,以及已知的人不小心暴露于高水平的膳食有机汞,最终表明,大约70%的总汞负担在脾脏和大脑是无机汞的形式(6,7]。最重要的是,研究结果表明,小鼠暴露有机汞,汞柱^{2 +}生产的有机汞的新陈代谢,但不是残余有机汞,汞直接负责调解自身免疫性炎症反应的物种。换句话说,关于自身免疫性疾病和炎症过程Hg^{2 +}是活性代谢物8,9]。

原则上,自身免疫性疾病可能造成遗传缺陷,或环境干扰的控制中央宽容机制免疫系统中和反应不成熟的淋巴细胞克隆。在不成熟的B细胞B细胞受体(BCR)复杂的信号通路是至关重要的这一过程(10,11]。事实上它已经表明,有直接抑制BCR信号之间的联系和诱导B细胞室的中央宽容失败导致增加成熟的自身免疫性B细胞克隆(12]。协会的暴露水平低(非免疫抑制水平在活的有机体内或触发免疫细胞死亡在体外Hg的)^{2 +}与自身免疫表明汞^{2 +}可能会干扰信号转导途径在不成熟的B细胞的方式,以中央宽容妥协。

whei - 231是一种良好的鼠标B细胞系展品很多不成熟的B细胞的特点。特别是,与成熟B细胞的刺激BCR与有丝分裂发生和增殖有关,wehi - 231的过程类似于未成熟的B细胞经历增长逮捕和细胞凋亡在BCR刺激13,14]。我们曾表明,暴露wehi低水平的Hg - 231^{2 +}干扰逮捕引发增长的BCR信号通路和细胞凋亡15]。而且在不成熟的B细胞,增长逮捕和细胞凋亡顺向BCR信号依赖于激活ERK (16]。我们有wehi - 231所示,尽管ERK似乎并没有一个直接的目标,低水平暴露于汞柱^{2 +}变弱的激活期间ERK1/2 BCR信号(17),从而表明汞^{2 +}作用于BCR信号转导通路的上游元素最初逮捕抑制ERK激活和随后的生长和凋亡BCR订婚后的受体激动剂配体(17]。

Phosphoflow血细胞计数是一种相对较新的技术,已被证明是远远优于传统的免疫印迹技术研究磷酸化依赖免疫细胞信号通路,特别是B细胞(18- - - - - -21]。在实验中下面我们利用多参数phosphoflow血细胞计数同时量化的几种不同的活性元素BCR信号转导通路在单一细胞的基础。通过捕获多个相互关联的磷酸化Hg中的模式^{2 +}陶醉(暴露)和BCR刺激wehi - 231细胞我们洞察机制Hg^{2 +}在低暴露水平与上游的元素BCR信号转导通路在B细胞。

2。材料和方法

2.1。试剂

HgCl₂从奥尔德里奇(纯≥99.5%)得到的化学物质(圣路易斯,密苏里州)。

2.2。细胞

wehi - 231细胞获得美国类型文化集合(弗吉尼亚州马纳萨斯)。他们保持RPMI 1640包含谷酰胺(HyClone,洛根,UT)和补充10%胎牛血清(的边后卫,HyClone), 50μM 2-mercaptoethanol, 1 x抗生素抗真菌的解决方案(Mediatech,位于弗吉尼亚州赫恩登)湿润有限公司5%₂的气氛。细胞通过每周两次的浓度细胞/毫升。细胞生存能力被台盼蓝排斥视觉监控。

2.3。抗体

多克隆山羊affinity-purified抗体鼠免疫球蛋白μ链从MP-Biomedicals-Cappel购买,梭伦,哦。荧光标记抗体用于仪分析磷酸化ERK1/2,麦克米兰,BLNK,对BD买来杀人案生物科学(CA)圣何塞。

2.4。Phosphospecific流式细胞术

wehi - 231细胞计数,血清RPMI介质洗,resuspended细胞/毫升在不同浓度的HgCl的存在与否₂在聚丙烯管。随后,细胞被添加到试管山羊anti-mouse免疫球蛋白的μ链。细胞被孵化为指定的一段时间在37°C。最后的刺激(0.5,1、5或10分钟),这些细胞被通过添加同等体积的4%多聚甲醛固定,pH值7.4,孵化10分钟37°C。这些细胞被稀释在杜尔贝科的磷酸盐,pH值7.4,颗粒状,离心resuspended 90%甲醇,然后孵化冰至少30分钟permeabilize质膜。透化作用后细胞颗粒状去除甲醇,然后洗了两次样品缓冲(杜尔贝科的磷酸盐,1%的边后卫,0.1%叠氮化钠)。细胞在抗体resuspended鸡尾酒含荧光标记抗体特定ERK1/2的磷酸化残留物,麦克米兰,BLNK,或对根据制造商的指示杀人案。这些细胞被孵化在冰1到2个小时,然后洗了3次样品缓冲。这些细胞被蒙在鼓里被分析在4°C到beckman coulter青色ADP流式细胞分析仪。

2.5。数据分析

对所有实验,10000事件最初分析每个样本的获得和数据使用苏米特(贝克曼库尔特;迈阿密,FL)和/或FlowJo(树明星;亚什兰或)软件。额外的数据分析和图形是使用Excel(微软;雷蒙德,佤邦)和σ情节(Systat软件;圣何塞,CA)软件。对于任何荧光标记的细胞群的平均荧光指数(MFI)被定义为人口的平均荧光强度。

3所示。结果与讨论

3.1。Phosphospecific流仪分析ERK活化在wehi BCR信号- 231 B细胞

在我们先前的调查汞对BCR信号转导的影响,我们采用免疫印迹技术显示ERK激活受损(17]。但是我们觉得新phosphospecific流仪技术的应用可以提供更好的描述汞的影响^{2 +}BCR信号。因此,我们首先采用phosphospecific流式细胞术研究BCR激活ERK 1/2的动力学控制wehi - 231细胞。ERK1/2丝氨酸/苏氨酸激酶在B细胞核心BCR信号转导通路和BCR信号被双重激活规范的苏氨酸/酪氨酸的磷酸化主题(22]。在图1,在材料和方法部分,所述wehi - 231细胞或没有接受anti-mu (25μ刺激BCR g / mL)。在时间间隔的细胞被探测荧光标记抗体针对双重磷酸化ERK 1/2 (anti-pERK),否则同形像控制抗体。ERK活化半当时的水平取决于phosphospecific流式细胞术。在图1(一)每个块代表一个不同的时间后BCR刺激。在每个情节的红线代表控制直方图没有anti-mu补充道,而绿线代表了直方图在那个时间点由BCR激活细胞。最初的两条曲线重叠,然后开始单独刺激细胞ERK 1/2就被激活了。最大分离出现在5分钟,之后他们一起移动ERK活化半减毒。

ERK活化产生的动力学BCR刺激可能是更容易欣赏图1 (b)。在图1 (b),为每个细胞的分布与anti-pERK探测(刺激或如果)如图1(一),意思是荧光指数(MFI),定义为平均荧光强度分布,计算。然后对于每一个时间点,未经处理的细胞的MFI的区别和MFI BCR刺激细胞被绘制。相同的过程则探讨了应用于细胞与同形像控制抗体,MFI anti-mu治疗细胞之间的差异和未经处理的细胞了。

一般来说,因为大量的细胞检查、人口差异MFI由流式细胞术往往是非常重要的。例如中值的标准误差正态分布变量是由1.25,在那里σ分布的标准差,独立测量的数量。分布如图1(一)(以及其他数字摘要),σ的小额信贷机构的顺序,但由于每个销售代表约10000个细胞,标准错误订单的1%的小额信贷机构。

另一种欣赏MFI测量图的意义1 (b)注意,在图1,荧光强度测量实际的荧光信号的对数成正比。结果相对较小的MFI变化往往是重要的。通过对比直方图如图1(一)与MFI绘制在图的差异1 (b)很明显,所有时间点2.5至15分钟,直方图的细胞明显不同于控制细胞治疗。换句话说,在这个实验中,不同的小额信贷机构的控制和BCR刺激细胞间至少2可以被认为是有意义的。

图1表明wehi - 231年的最大活跃anti-mu刺激BCR发生在大约5分钟,之后它趋势基线。然而在图1我们雇佣anti-mu 25μ刺激BCR g / mL。这个最初的25μg / mL图是基于我们的经验与这个系统(17]。然而我们利用anti-mu试剂是多克隆抗体,每一批存在和潜在的受体激动剂的反应的变化。向自己保证,我们利用一个适当的刺激抗体的浓度,在图2我们调查了最大活跃反应5分钟作为刺激抗体浓度的函数。因此,细胞治疗与不同浓度的anti-mu 5分钟,然后活跃水平由流式细胞仪利用anti-pERK试剂用于图1,或同形像控制抗体。活跃和同形像控制染色概要文件为每个浓度相比anti-mu被染色的细胞没有接受anti-mu和MFI的区别是,商议决定。

3.2。Anti-Mu相比,低浓度汞柱^{2 +}仅略微扰乱的活动ERK和麦克米兰BCR信号通路

酪氨酸激酶麦克米兰是一个重要的元素的BCR ERK信号通路的上游。在BCR信号,激活ERK是依赖于激活麦克米兰,,像兵,麦克米兰活动增加了酪氨酸磷酸化(22,23]。在以后的实验中,我们将看看汞的影响^{2 +}ERK和上游的元素BCR在信号通路,所以为了控制我们测量了水平的激活ERK和麦克米兰(活跃和pSyk)诱导的Hg^{2 +}独自一人,没有特定的BCR信号,这些诱导BCR anti-mu通过绑定。因此wehi - 231细胞处理(0μ2.5 g / mL,μg / mL, 5μg / mL) Hg^{2 +}后,在不同时间点的Hg^{2 +},与不同的荧光标记细胞染色anti-pERK anti-pSyk。我们先前已经表明,治疗wehi - 231细胞浓度的5μg / mL HgCl₂10分钟导致细胞Hg的负担^{2 +}1纳克/ 10的顺序⁷细胞,这种细胞负担最大限度地影响BCR信号(17]。我们有由propidium碘吸收这些决定在体外Hg^{2 +}负担不有毒wehi - 231细胞(NS),而相似在活的有机体内Hg^{2 +}负担不毒老鼠spenocytes [24]。同时活跃和pSyk被衡量phosphospecific流式细胞术。在10分钟的马克anti-mu加入一些细胞没有汞处理^{2 +}。五分钟后在15分钟的马克这些细胞被phosphospecific同样活跃的化验和pSyk流式细胞术。未经处理的细胞也贴上同形像控制活跃并通过流式细胞术pSyk抗体和化验。

为活跃和pSyk结果如图3(一个)和3 (b),分别表示为MFI变化量之间的细胞被贴上phosphospecific抗体的细胞被贴上适当的同形像具体的控制。细胞被刺激的结果anti-mu显示作为一个酒吧情节在15分钟的马克,为细胞区别于结果Hg处理^{2 +},这是显示为线情节。anti-mu诱导BCR信号相比,Hg^{2 +}仅对ERK或麦克米兰几乎没有影响。

3.3。低水平的汞^{2 +}减弱ERK的磷酸化,强调麦克米兰的磷酸化和BLNK,但几乎没有影响的磷酸化对BCR介导信号转导中杀人案wehi - 231细胞

我们接下来研究了汞的影响^{2 +}在BCR上游的ERK信号。BCR信号是一个复杂的过程,仍不完全清楚。后不久,不过人们普遍认为抗原接触BCR复杂,多分子的集群形成的开始和组装的B细胞受体signalosome随之而来(23,25]。在大多数情况下的结构完整性signalosome由支架蛋白锚定BLNK,绑定其他signalosome选民的能力是由特定BLNK残留的酪氨酸磷酸化。这些残留物对,杀人案基质的林恩,麦克米兰激酶,在一个自催化时尚这些激酶的活动水平,尤其是麦克米兰反过来监管在一定程度上,是否注定要BLNK [23]。

phosphospecific流式细胞仪的优点之一是,它能够同时监控多个元素的单个细胞磷酸化依赖的信号通路。相应的数据4(一)- - - - - -4 (d)wehi有或没有Hg - 231细胞被孵化^{2 +}5分钟,然后用anti-mu刺激与否。在时间间隔细胞被固定和水平的激活ERK (pT202 / pY204),麦克米兰(pY436)对(pY551)杀人案,BLNK (pY84)同时由多色phosphospecific流式细胞术。在每一个细胞与Hg preincubated^{2 +}比较细胞没有。结果表示为MFI的细胞之间的差异或没有处理anti-mu添加anti-mu后作为时间的函数。

图4(一)表明汞^{2 +}变弱的正常ERK信号实现BCR信号转导过程中,而图4 (b)表明汞^{2 +}实际上增强了麦克米兰的强度信号。另一方面对出现影响杀人案,Hg^{2 +}似乎并没有任何明显的影响大小或动力学对响应杀人案。最后的磷酸化BLNK麦克米兰的一样,由Hg增强^{2 +}。

虽然数据4(一)和4 (b)表明汞^{2 +}抑制和增强激活ERK和麦克米兰,分别很难辨别是否有动力学的差异。评估是否Hg^{2 +}改变了动力学ERK激活或麦克米兰在BCR信号我们改建的数据数据4(一)和4 (b)在数据4 (e)和4 (f)。在图4 (e)我们绘制了改变(与anti-mu细胞之间或不治疗)的MFI ERK和麦克米兰(控制)细胞尚未使用汞^{2 +}。这个数字表明,在控制条件下动力学ERK活化阶段与麦克米兰激活。在图4 (f)我们已经绘制相同的变量;不过这一次我们使用的结果细胞暴露于汞^{2 +}。这里很明显,尽管Hg^{2 +}可能会降低(ERK的磷酸化)级响应,同时增加的大小(磷酸化)麦克米兰响应,暴露之间的相位关系几乎没有影响两激酶激活在BCR信号转导。

3.4。Hg的影响分析^{2 +}ERK的活化和麦克米兰BCR信号在单个细胞水平

虽然我们早前指出,phosphospecific流式细胞仪的优点之一是,它有可能允许信号分析单一事件,我们没有利用这一分析在图完成4。在图4我们减少了复杂的原始数据集从流cytometery以便获得描述不同的细胞数量只与四个数字,与绑定相关联的四个小额信贷机构phosphospecific ERK抗体,麦克米兰,对和BLNK杀人案。Hg的影响^{2 +}BCR信号转导当时基本上决定通过比较这些数字在不同的细胞群。然而小额信贷机构的初始数据减少意味着图4实质上是人口水平分析,获得类似的结果在原则上可以利用免疫印迹技术,虽然更大的困难和可能不是那么精确。

在图5我们分析Hg的效果^{2 +}ERK和麦克米兰活动期间BCR信号减少但放弃最初的小额信贷机构以保护单个细胞的信息。相应的图5(一个)直方图是一种出现关于pSyk (y设在)和活跃(x设在)控制人口wehi - 231细胞尚未处理汞柱^{2 +}或anti-mu。细胞的数量表达任何特定pSyk,活跃值对情节的密度成正比。因为图4表明,最大响应(活跃或pSyk)刺激anti-mu发生在5分钟后,在图5 (b)我们显示出现(pSyk,活跃)直方图wehi - 231细胞治疗与anti-mu 5分钟。最后图5 (c)是细胞已被接受的直方图anti-mu 5分钟,但也使用Hg吗^{2 +}。每个直方图分为象限,细胞的人口比例下降到每个象限表示。

在图5(一个)我们已经调整了象限设置以描述控制人口的97.03%,,只有0.18%,。利用同一象限的设置,在anti-mu刺激这改变5分钟后到73.06%,和5.18%,。我们已经确定,如图4,当细胞与汞中毒^{2 +}后,pSyk和活跃的形象改变anti-mu BCR从发现的刺激细胞不醉。这反映在图5 (c)。对Hg BCR刺激后,^{2 +}醉细胞的比例在每个象限不大大不同于那些细胞不醉,但是大部分的分布似乎pSyk更高和更低的活跃值。

经常在流式细胞术,细胞群的特点是一个单一的荧光强度是可视化为一维直方图。为了分析人口转移频率在不同实验条件下产生Overton算法通常是用来减去这些一维直方图从一个另一个26]。在我们的例子中我们想分析Hg的效果^{2 +}暴露发生在人口转变,同时对细胞的活跃水平和pSyk BCR刺激后,和可视化的二维直方图。虽然我们正在与二维直方图,就像对一维直方图,汞的影响^{2 +}可以被减去的直方图分析nonintoxicated细胞(图5 (b)从对Hg)^{2 +}喝醉了的细胞(图5 (c))。

完成这个减法广义Overton算法从一个到两个维度。结果如图5 (d)情节的离散区域一直在编码根据传说在右边。正数表明地区汞有过度的细胞数量^{2 +}暴露人口对于nonexposed人口BCR刺激后,而负数代表相反的。数字的绝对值是成正比的绝对差异,无论是积极的还是消极的。在一维Overton算法,阳性细胞的总数是总结,这个数字除以总人口数量是根据定义的阳性细胞百分比。使用一个类似的过程,我们发现,在图5 (d)汞中毒,37.6%的细胞人口是指定的“积极的”。

我们曾表明,中毒wehi - 231 B细胞水平低,无毒的Hg^{2 +}(1 ng / 10⁷对ERK细胞)没有直接影响。然而,在这些层面Hg^{2 +}干扰BCR信号传导,激活ERK减(17]。这些早期的实验依赖免疫印迹分析。图1、3的phosphoflow仪研究(一),和图4 (a)完全支持这些先前的结果。因为有直接抑制BCR信号之间的联系不成熟B细胞成熟和增加自身免疫性B细胞克隆(12),在某种程度上,wehi - 231 B细胞可以作为一个不成熟的B细胞模型,Hg^{2 +}衰减的ERK激活意味着Hg^{2 +}中毒可能会允许一些反应B细胞克隆逃离中央宽容和成熟导致自身免疫或自身免疫性疾病。

在这两个实验和低水平的Hg早些时候在我们的工作^{2 +}似乎没有什么直接影响ERK意味着Hg的目标^{2 +}ERK的上游,信号通过至少一些元素的BCR信号转导通路的上游的兵也应减毒。麦克米兰就是这样的一个可能的元素。是中央酪氨酸磷酸激酶ERK的操作上游BCR信号转导通路,因此有必要对BCR信号的完整性和最终消除反应不成熟B细胞克隆的22,23]。我们之前分析Hg的麦克米兰激活^{2 +}陶醉wehi - 231 B细胞利用免疫印迹技术是不确定是否Hg^{2 +}中毒减毒麦克米兰激活(17]。然而利用phosphoflow血细胞计数(图4 (b))现在很清楚地表明,Hg^{2 +}提高麦克米兰的激活。

除了麦克米兰,我们也看着BLNK的磷酸化,对,杀人案两个其他元素上游的BCR ERK信号转导通路。BLNK支架蛋白是重要的结构完整性的B细胞signalosome,形成的抗原接触的BCR [23,25]。BCR信号期间,各种BLNK酪氨酸残基磷酸化的酪氨酸激酶麦克米兰,对,杀人案和林恩是必要的适当的signalosome的形成和成熟,各种signalosome选民明确识别和结合这些磷酸化图案(主要通过SH2域)25]。作为对激活本身就是杀人案与酪氨酸的磷酸化55127),BLNK和对活动杀人案被phosphoflow化验血细胞计数来确定汞的影响^{2 +}陶醉在他们的活动BCR信号(数字4 (c)和4 (d))。我们发现,尽管Hg^{2 +}没有影响对激活杀人案BCR信号期间,类似于麦克米兰,磷酸化BLNK显著增强。考虑到BLNK麦克米兰的基质,这是预期。

另一方面,发现麦克米兰激活增强,而下游激活ERK由Hg减毒^{2 +}有点奇怪,特别是考虑到我们与T细胞的早期作品。BCR信号与T细胞受体有许多共同之处(TCR)信号。特别是,在T细胞识别交联导致瞬态ERK的活化,就像BCR交联导致ERK的活化B细胞。我们已经发现,在T细胞低水平的汞中毒^{2 +}ERK激活期间减毒细胞信号(28]。在T细胞,细胞依赖ERK激活取决于上游激活phosphotyrosine激酶zap - 70,麦克米兰的同系物。然而在T细胞ERK的我们发现衰减Hg^{2 +}zap - 70与衰减,以及纬度的支架蛋白同系物BLNK [29日]。

虽然数据4 (c)和4 (d)表明在BCR信号、Hg^{2 +}依赖ERK活化的衰减与麦克米兰激活的增强,这些实验只讲的是发生在一个人口水平。问题依然存在这种相关性是否严格保存在细胞水平上。使用相同的数据集用于生成图4,数据5(一个)- - - - - -5 (d)专门利用的能力phosphoflow血细胞计数同时探测单个细胞麦克米兰和ERK活动来回答这个问题。图5(一个)是二维直方图绘制pSyk与活跃活动水平控制细胞,而图5 (b)情节pSyk和活跃的活动与anti-IgM细胞已被最大限度地刺激。的比较数据5(一个)和5 (b)表明,大多数细胞(大约90%)应对BCR刺激通过增加麦克米兰和ERK活性。

图5 (c)是pSyk与活跃直方图对细胞刺激anti-IgM如图5 (b),但这也与汞中毒^{2 +}。同样,大多数细胞似乎仍应对anti-IgM如图5 (b),但似乎微妙分布转向活跃和更高的pSyk水平较低。这当然与图一致4证明在Hg人口水平^{2 +}中毒导致平均明显降低活跃和pSyk水平较高。Hg的效果进行评估^{2 +}陶醉在BCR信号在细胞层面上,我们利用广义Overton算法减去图的直方图5 (b)的图5 (c),结果在图5 (d)。

当减去一维直方图是常见的做法的一维直方图只显示结果阳性的细胞。然而在图二维直方图中减去5 (d)我们显示正面以及负面的地区。我们理解积极的区域直方图在明亮的色调(代表)作为细胞位置在Hg变得更加密集^{2 +}中毒人群后BCR信号感应控制人口。同样的负面区域直方图(由浓或淡)代表细胞的位置变得不那么密集的Hg的结果^{2 +}中毒。他们本质上代表区域的直方图的细胞(控制)将从Hg的结果^{2 +}曝光。

在图5 (d),积极的和消极的区域很好地隔离,积极地区pSyk高,但较低的活跃,价值观。这个发现支持这样的看法,即在细胞以及人口水平,在Hg^{2 +}醉酒的细胞抑制ERK活性与增强的麦克米兰活动相关联。值得注意的是,在图5 (d)我们发现37.6%的细胞”是积极的。“在这种情况下我们解释积极意味着只有37.6%的汞^{2 +}醉细胞应对BCR交联与抑郁ERK和增强麦克米兰激活控制细胞相比。剩下的62.4%的汞^{2 +}陶醉wehi - 231细胞应对BCR交联提高活跃和pSyk一样他们会如果他们没有暴露于汞^{2 +}。

总体发现汞^{2 +}增加激活麦克米兰,同时减弱下游激活ERK乍一看有点困惑。然而最近的一份报告表明,在B细胞有两个功能和拓扑不同的ERK活化途径(16]。尽管取决于上游麦克米兰作为元素,不久之后分歧的。第一个是熟悉的途径前所述B细胞(22,23),但它是假定这个途径主要是可操作的成熟细胞。激活途径的推测启动细胞增殖。第二个ERK活化途径描述和假设是主要活跃在不成熟的B细胞。这个途径与细胞凋亡和克隆删除。两种途径的主要区别是,第二个途径取决于BCR介导Icrac钙电流。如果Hg^{2 +}被干扰抑制钙信号的上游调节器Icrac渠道,那么它可能通过这个途径ERK激活仍然可以减毒,即使通过麦克米兰上游信号增强。在任何情况下显然Hg^{2 +}最初与上游麦克米兰,B细胞的目标或目标可能包括Icrac频道。

4所示。结论

曝光后wehi低水平的Hg - 231 B细胞^{2 +},信号转导由BCR改变。单个细胞水平分析表明,当激活ERK镇压,上游激活BLNK麦克米兰是增强和磷酸化的增加。另一方面,对不影响杀人案的激活。wehi - 231是一个不成熟的B细胞模型,抑制ERK激活这些细胞表明低水平暴露Hg^{2 +}也可能干扰中央宽容在初级不成熟的B细胞。我们建议干扰中央宽容可能连接水平低汞中毒的机制之一,自身免疫性疾病。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

这项工作是由美国国立卫生研究院的资助:ES019228 (AR)。作者想表达谢意雷蒙德Mattingly博士为他仔细阅读论文的和深思熟虑的建议。