评估ELISA免疫测定ENA-6概要文件的系统性红斑狼疮患者Erythematodes

文摘

自身免疫性疾病发生在3−5%的人口。研究包括30例临床诊断为系统性红斑狼疮患者和30名健康对照组(美国风湿病学院,1997)。系统性红斑狼疮诊断标准根据发表在1997年美国风湿病学院(ACR)。本研究的目的是评估值每个ENA-6抗原的浓度剖面在系统性红斑狼疮,调查可能的Sm抗体的浓度之间的相关性和中投公司和测试使用免疫生物标记在系统性红斑狼疮。此外,我们的研究的目的是确定是否有相关性Sm抗体和中投和系统性红斑狼疮活动。结果显示,所有这些ENA-6和Sm抗体生物标记补充活跃的系统性红斑狼疮的诊断但他们作为独奏标记不允许分类系统性红斑狼疮患者。我们的研究表明,基于从ROC曲线计算,Sm / RNP显然是一个非常重要的系统性红斑狼疮的诊断的标志(0942年欧盟切断≥9.56,AUC)。sci - 70(10%)的高发病率的反应表明,ELISA检测抗体产生更多比其他多路试验假阳性结果。一个重要的结论,可以从我们的研究是实验室测试的结果并不比临床检查更有效检测疾病的复发,但在系统性红斑狼疮活动的确认是有帮助的。

1。介绍

自身免疫性疾病发生在3 - 5%的人口(1),因此从无数的遗传和环境因素,导致免疫反应性改变(2,3]。改变免疫系统发起的丧失免疫耐受自体抗原导致autoreactive现象的发展,可以发现在外周血。定义特定致病介质可能会引发自体免疫性疾病的发展或进展仍然是一个研究的焦点。

系统性红斑狼疮(SLE)是一种自身免疫性疾病,其特征是B细胞过度活跃导致细胞质的自身抗体的生产过剩,核,和表面抗原和免疫复合物的形成4,5]。

大多数的自身抗体在系统性红斑狼疮发现针对细胞内蛋白质颗粒。98%的患者有抗核抗体和antidouble-stranded DNA抗体被发现在50 - 80%的患者6]。这些自身抗体经常针对细胞核的细胞内抗原(双-和单个链DNA (dsDNA和ssDNA, resp)组蛋白,并可榨出的核抗原(ENAs)。大多数这些自身抗体并不特定于系统性红斑狼疮和可能产生的结果是非多克隆激活B细胞(7,8]。ENA-6-Profile有助于系统性自身免疫性风湿病的诊断疾病,如系统性红斑狼疮系统性红斑狼疮、干燥综合征、尖综合症、多发性肌炎/皮肌炎、或进行性系统性硬皮病(PSS) [9]。因为抗体ENA有部分个体疾病的标记功能,这些抗体的分离检测ENA-6-profile允许这些疾病的血清学分化。

自身免疫性疾病检测协议开始测定安娜(反核抗原)。积极安娜测试会导致进一步的调查可提取的核抗原(ENA) [10]。

的患病率(70%)anti-dsDNA自身抗体在系统性红斑狼疮更高,给诊断敏感性高于同样针对疾病的anti-Sm自身抗体(30%)。在某些病理条件下,如系统性红斑狼疮、循环免疫复合物(CIC)的浓度水平的增加组织和导致激活体液免疫效应器的机制,如古典补体激活(11]。

六个最诊断有用的自身抗体包括Ro (SSA),发现在40 - 60%的干燥综合征患者和25 ANA-positive系统性红斑狼疮患者的35%。洛杉矶(单边带)自身抗体被发现在50 - 60%的干燥综合征患者和5到15%的系统性红斑狼疮患者(12]。

史密斯(Sm)抗体具有高度特异性系统性红斑狼疮但只有发生在30至35%的情况下(13]。ELISA监测可提取的反核antibodies-Smith抗原通常是使用浓度ds-DNA控制疾病活动的价值(14]。

核糖核蛋白抗体(RNP)发现到95年的100%的患者混合性结缔组织病(MCTD)但也发现在45%的系统性红斑狼疮患者(15]。anti-RNP抗体的存在仅强烈建议MCTD的诊断(16]。硬皮病(scl - 70)自身抗体的特定标记是硬皮病和中发现60%的患者被诊断出患有这种疾病(17]。Jo-1自体抗体是一个家庭的特征自身抗体肌炎患者(18,19]。

本研究的目的是评估值ENA-6每个抗体的浓度剖面在系统性红斑狼疮,调查可能的Sm抗体的浓度之间的相关性和中投和测试他们使用免疫生物标记在系统性红斑狼疮。此外,我们的研究的目的是确定是否有相关性Sm抗体和中投和系统性红斑狼疮活动。

2。材料和方法

2.1。病人

研究包括30血清样品提交给我们的参考实验室从诊断SLE患者疾病和自身免疫测试30从健康人血清样本。通过输入患者临床诊断根据系统性红斑狼疮诊断标准于1997年发布的美国风湿病学院(20.]。

2.2。ENA-Assay

反核抗体的检测(ANA)一直是一个重要的工具系统的诊断风湿性疾病。检测中使用的抗原是由人类或动物的生理盐水提取纯化核,这使得他们被称为提取核抗原(ENA)。最常见的测量ENA规范anti-SS-A / Ro anti-SS-B /洛杉矶,anti-Sm, anti-Sm / RNP anti-Jo-1,反- sci - 70 (21]。

确定Sm-antibody和其他ENA 6抗体的浓度以及中投,我们使用ELISA方法(22]。

2.3。过程原则

Autostat II试验是一种固相免疫吸附试验(ELISA)分析物的显示颜色反应的一种酶和底物。Autostat II井涂以纯化抗原。Hytec 288使用的设备。

添加稀释血清抗体与抗原结合的井。孵化后在室温和洗掉的材料,增加了辣根过氧化物酶共轭anti-IgG单克隆抗体,结合固定化抗体。

进一步培养和洗涤后,tetra-methyl联苯胺衬底(三甲)被添加到每个。At-Ag的存在复杂的基质变成深蓝色的颜色。控制解决方案添加颜色变成黄色。

颜色的强度成正比的自身抗原呈现在原始的血清样本(23- - - - - -25]。

2.4。解释的结果

抗原的ENA 6结果低于10被认为是负面的,而十五岁以上的结果被认为是积极的。结果在10到15是模棱两可(26,27]。参照区间如表所示1(28]。

对于dsDNA技术都申请的决心,ELISA和免疫荧光试验(IFA)。程序的基本原理是基于使用幻灯片与上皮细胞(Hep-2细胞)中孵化基质与稀释血清几步。未装订的材料由吸气和洗涤去除。荧光共轭的下降(反免疫球蛋白分子荧光素标记包含蓝色染料和0.099 azid钠)添加(29日]。根据大量自身抗体在标本,使用显微镜,可以发现不同程度的苹果绿荧光强度光。5 +荧光级确定;4 +;3 +;2 +,积极的和消极的为零(30.]。

2.5。统计分析

Kolmogorov-Smirnov测试正常使用测试变量的分布。以来所有的变量是倾斜的中位数和四分位范围。Mann-WhiteyU以及被用来比较两组之间的差异。因为所有的变量都是高度倾斜,相关性被斯皮尔曼的测试评估。一个值< 0.05被认为是统计学意义(31日]。

敏感性、特异性、正面和负面预测值计算根据以下公式(32]: 在哪里=真阳性的情况下,=假阳性的情况下,=假阴性病例=真阴性病例[32]。

接受者操作特征(ROC)曲线由计算的敏感性和特异性ENA 6 SS-A ENA6 SS-B, ENA6 Sm, Sm / RNP Jo-1或sci 70化验几个截止点(33- - - - - -35]。

Windows软件使用SPSS(17.0版本;美国SPSS、芝加哥、IL)。

3所示。结果

图1显示ENA6 Sm的中位数和四分位范围血清浓度在健康受试者(65;0 60-2 62)和系统性红斑狼疮患者(19日07;1、97 - 130年44)。在系统性红斑狼疮患者血清ENA6 Sm抗体浓度明显高于健康对照组相比()。

图2中位数和四分位范围显示循环免疫复合物(CIC)在健康受试者血清浓度(19日00;12日00 00 32)和系统性红斑狼疮患者(71年,14;52岁,99 - 102年,04)。在系统性红斑狼疮患者血清中投浓度明显高于健康对照组相比()。

结果并没有显示出显著相关性ENA6 Sm和中投公司(;)(图3)。

ROC曲线ENA6 Sm和中投的系统性红斑狼疮患者和健康对照组数据所示4和5。

我们的研究样本中97%的患者是安娜积极和3%是安娜-呈现在图6。

图7礼物,30%的患者dsDNA dsDNA积极消极和70%。

基于提出的截止值,灵敏度和特异性ENA6 Sm和中投公司计算。

表2显示每一个标记的预测能力在系统性红斑狼疮患者和健康对照组的区别。

系统性红斑狼疮患者血清浓度ENA6 SS-A (11.70;2.85 - -183.51)明显高于(),与健康对照组相比(3.55;1.20 - -5.75)。系统性红斑狼疮患者血清浓度ENA6 SS-B (6.64;1.71 - -46.32)明显高于()如果比健康对照组(3.10;1.45 - -5.90)。系统性红斑狼疮患者血清浓度ENA6 Sm (19.93;2.27 - -135.95)明显高于(),与健康对照组相比(1.65;0.60 - -2.62)。在系统性红斑狼疮患者血清浓度的Sm / RNP (56.61;17.70 - -166.96)明显高于(健康对照组相比)1.20 (0.50 - -2.80)。系统性红斑狼疮患者血清浓度Jo-1 (2.22;1.40 - -4.79)明显高于(),与健康对照组相比(0.205;0.00 - -0.80)。系统性红斑狼疮患者血清浓度的sci 70 (1.10;0.71 - -3.33)明显高于(),与健康对照组相比(0.155;(表0.00 - -0.28)3)。

结果显示显著相关性ENA6 SS-A和ENA6 SS-B (;)(图8);ENA6 Sm和Sm / RNP (;)(图9);Jo-1和sci 70 (;)(图10)。结果没有显示其他标记之间的显著相关性ENA6概要文件。

中华民国曲线为ENA6 SS-A, ENA6 SS-B, ENA6 Sm, Sm / RNP Jo-1, sci 70在系统性红斑狼疮患者和健康对照组图所示11。

在我们的研究中根据ROC曲线,计算Sm / RNP显然是非常重要的系统性红斑狼疮的诊断标记(56切断≥9日欧盟;AUC 0942)。出乎意料,第一个,是Jo-1 (AUC 0915);然后sci - 70 (AUC 0899);Sm (AUC 0844);SS-A (AUC 0740);0661年和SS-B (AUC)。

基于提出的截止值,灵敏度和特异性的ENA6标记计算。表4显示每个标记的预测能力在系统性红斑狼疮患者和健康对照组的区别。

患者的百分比浓度升高ENA抗原水平如下:Sm, / RNP, Sm, SS-A, SS-B, sci - 70和Jo-1;73年,3%;66年,6%;50%;40%;10%;分别为6 6%。

4所示。讨论和结论

本研究的目的是评估值ENA-6每个抗体的浓度在系统性红斑狼疮和浓度来确定值的中投和Sm-antibody作为潜在的免疫生物标记在系统性红斑狼疮。此外,我们旨在建立史密斯在血清抗体之间是否有相关性和中投和疾病活动水平36]。

我们的研究结果表明,最有价值的系统性红斑狼疮活动监视的标志是Sm / RNP,跟着Jo-1。结果不符合报告从其他作者37- - - - - -39]。可能的解释我们的结果可能是由于小样本研究。

anti-Sm抗体效价高的高度系统性红斑狼疮特定虽然low-titer anti-Sm ELISA据报道在其他疾病(40]。Anti-Sm事实上发现没有RNP抗体因为蛋白质与常见的核内小rna (40]。

六个抗原组成ENA-6概要文件用于我们的研究(RNP SS-A SS-B, Sm, sci - 70和Jo1)我们和谐的报道,敏感性和特异性的60 - 100%。最高的特异性报道Sm / RNP和Sm (100%);虽然最高灵敏度已经报道在sci - 70(96%)和乔1 (83%)。有证据表明对sci - 70和Jo1之间的相关性;以及在Sm和Sm / RNP;在SS-A SS-B;虽然没有相关其中三对夫妇的抗体(41]。我们的结果在sci - 70抗体的浓度水平和灵敏度不根据其他报告[42]。

高发病率的sci - 70(10%)的反应表明,ELISA检测抗体产生假阳性结果比其他多路检测42,43]。在我们的研究中根据ROC曲线,计算Sm / RNP显然是一个非常重要的标志对系统性红斑狼疮的诊断。Surprisingl Jo-1和有趣的是第一次。

ELISA监测可提取的反核antibodies-Sm和中投公司,它可以识别特征的变化与疾病血清标本中显著相关活动的系统性红斑狼疮患者(43]。尽管有一些前瞻性研究表明没有相关性的报道immunomarkers和狼疮耀斑和疾病活动在这项研究中,我们发现Sm抗体之间的相关性以及中投和疾病活动。的注意的是,这两个之间相关性不显著(44- - - - - -48]。97%的患者有积极的安娜抗体检测,通常在其他研究。Anti-dsDNA敏感度较低,但更具体的系统性红斑狼疮诊断(44,45]。他们可以发现55%到80%的系统性红斑狼疮患者血清的但不是在健康对照组的血清也证实了在我们的研究中。大多数的调查表明,anti-dsDNA有用的标记抗体的整体系统性红斑狼疮活动系统性红斑狼疮的44]。

抗体Sm,核糖核蛋白是在细胞核中发现的一个细胞,几乎全部出现在狼疮患者。目前在20%的患者中发现的但却很少人与其他风湿性疾病,其发病率在健康的人还不到1%。因此,它可以帮助确认系统性红斑狼疮的诊断(49- - - - - -56]。表2显示最佳的否决,置信区间,高的敏感性70%,特异性100%。

检测安娜,Op De Beeck等人相比,获得的结果使用间接免疫荧光(IIF)和BioPlex 2200,测试结果,发现BioPlex interval-specific可能性比率抗体浓度的增加而增加。同时BioPlex提供至少三个抗体的存在。他们得出的结论是,测试结果具体可能性比率和多种自身抗体的存在帮助解释由多元分析生成的数据(57]。

循环免疫复合物存在在许多患有系统性红斑狼疮和类风湿性关节炎(RA),尤其是在那些有血管炎的并发症。水平的CICs已报告显示与疾病活动之间的联系,尤其是在疾病的活跃阶段(45- - - - - -48,56]。ROC曲线在这项研究中,结果表明中投公司可能是更好的比史密斯抗原标记为系统性红斑狼疮活动。

我们的研究结果显示,所有的使用生物标志物陪活动系统性红斑狼疮的诊断,但他们作为独奏标志不允许分类的系统性红斑狼疮患者。此外,它可以得出的结论是,实验室检测并不比临床检查更有效检测疾病的复发,但有助于证实系统性红斑狼疮的活动。

利益冲突

作者声明与Autostat他们没有利益冲突。

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