山奈酚通过雄激素依赖途径促进细胞凋亡，抑制细胞增殖，抑制前列腺癌血管生成模拟和侵袭

摘要

山奈酚是一种众所周知的天然黄酮醇，据报道是一种潜在的治疗多种癌症的药物。在本研究中，我们证明了雄激素敏感的LNCaP细胞的生长可以被5μM山奈酚，大约60% × 10μM山奈酚，几乎100%μ山柰酚。山奈酚对PC-3细胞和非恶性RWPE-1细胞的作用相对有限。在DHT存在时，IC₅₀对于Kaempferol是 在LNCaP细胞中, 在PC-3细胞中，和 在RWPE-1细胞中。山奈酚在二氢睾酮(DHT)存在下以剂量依赖的方式促进LNCaP细胞凋亡。荧光素酶检测结果显示山奈酚能明显抑制DHT诱导的雄激素受体的激活。qPCR数据显示，在山奈酚存在的情况下，雄激素受体下游靶点如PSA、TMPRSS2和TMEPA1降低。随后证实PSA蛋白水平下降。山奈酚抑制AR蛋白表达和核积累。山奈酚抑制PC-3细胞血管生成模拟的体外研究。综上所述，山奈酚是一种很有前景的治疗前列腺癌的候选药物，其中雄激素信号通路和血管生成拟态都有涉及。

1.介绍

前列腺癌是全球第二大常见癌症，也是导致男性癌症相关死亡的第五大原因。它在发达国家更常见，是全世界男性中最常见的癌症[1］．手术、激素治疗、放疗或化疗的结合可能是目前前列腺癌更常见的治疗方法。前列腺癌的治疗结果取决于患者的年龄以及癌症的侵袭性和广泛性。在参与前列腺研究的60岁以上的男性中，30%到70%死于无关原因的人被发现患有前列腺癌。找到有效治疗前列腺癌的新方法仍然是必要的。

“山柰”最初是以德国博物学家恩格尔伯特·坎普弗尔的名字命名的。它是一种天然的黄酮醇，存在于许多水果和蔬菜中。山奈酚是一种黄色结晶固体，熔点为276-278°C(529-532°F)。微溶于水，高度溶于热乙醇、醚和二甲基二乙基醚。许多报告表明，服用山奈酚可以降低各种癌症的风险，如结肠癌[2),肝癌3.和膀胱癌[4］．Kaempferol已在几种恶性肿瘤中研究，包括泌尿外科系统的恶性肿瘤。如报道称，它可以抑制肾癌细胞的细胞生长[5，6，膀胱癌细胞[7，8]和前列腺癌细胞[9］．目前正考虑将其作为一种可能的癌症治疗方法。山奈酚在前列腺癌中的系统性作用尚不清楚。本研究探讨了山奈酚对不同类型前列腺癌细胞生长、凋亡、血管生成拟态及侵袭的影响，并探讨了参与山奈酚与前列腺癌相关通路的DHT或AR。

2。材料和方法

2.1。细胞系和文化

我们使用的细胞系为HEK293、LNCaP、PC-3和RWPE-1。HEK293、LNCaP、PC-3由中国科学院Cellbank(中国上海)提供，RWPE-1购自美国型培养库(ATCC, USA)。PC-3和LNCaP在含有10%胎牛血清和1%青霉素/链霉素的RPMI-1640培养基中保存。RWPE-1，人类非恶性前列腺细胞系，维持在无血清角质形成细胞培养基(Invitrogen，目录编号no.;10724)和补品(Invitrogen，目录编号:10724)37000 - 015)。HEK293细胞系由人胚胎肾细胞转化产生，并在添加10%胎牛血清和抗生素的Dulbecco 's modified Eagle 's培养基(Life Technologies)中维持。所有细胞在37°C和5% CO中培养₂．

2．2.荧光素酶检测

参考我们以前研究的方法[10，11］．简单地说，将野生型AR表达质粒和报告基因pSG5-AR、pSG5-PR、pSG5-GR、MMTV-Luc、pRL-TK-luc转染缺乏功能性AR的HEK293和LNCaP细胞进行AR处理24 h。然后，细胞与不同浓度的山奈酚在1 nM双氢睾酮(DHT) (Sigma，美国)和/或5存在或不存在的情况下共培养μM羟基氟胺（HF）（Sigma，USA）24小时。收获细胞并测定荧光素酶活性。数据表达为相对荧光素酶活性，其归一化为内部尼郎荧光素酶对照。

进行哺乳动物2-杂化测定以确定AR N-C相互作用和Ar-Ar Coreculator相互作用。用PGAL4-RE-LUC报道体质粒转染后，PGAL4-ARDBD-LBD（AR DNA结合结构域和配体结合结构域），PCMX-VP16-AR或PCMX-VP16-ARA70持续24小时，HEK293和LNCAP细胞是为双荧光素酶测定（Promega，Wi）收获。

2．3.MTT测定及IC₅₀体外值测定

对于MTT测定，将LNCAP，PC-3和RWPE-1细胞接种在2500-8000个细胞/孔的24孔板中。5 μ10米,μ米,15μ从第0天开始，山奈酚在添加/不添加1 nM DHT的井中添加M，每隔一天更换一次。每孔加入噻唑蓝溴化四唑溶液(5 mg/mL, Sigma)，在37°C和5% CO中孵育₂一小时。分别在第0、2、4和6天采集样本。然后,300年μL DMSO加入并o.d.通过微孔板读取器（Synergy MX，Biotek）在570nm下检测值。

细胞毒性试验是根据先前研究报告的方案进行的[12］．确定IC₅₀值, LNCaP细胞, RWPE-1细胞, PC-3细胞在24孔培养板中重复3次。用不同浓度的山奈酚孵育细胞2天，采用MTT法检测3个重复的细胞活力。对照组为山奈酚培养基(无细胞)。将山奈酚处理的细胞与未处理的细胞对照孔进行比较。的集成电路₅₀用程序CompuSyn (Developer)进行分析。

进行MTT测定以评估细胞生长，预期预期为6天的细胞，以及IC中的细胞₅₀值测定预计增长2天。因此，我们采用两种不同的培养条件进行MTT测定和IC₅₀价值的决心。

2．4．细胞凋亡检测

采用Annexin V-APC凋亡检测试剂盒(Sungene Biotech, Shanghai, China)流式细胞术检测细胞凋亡。DHT和/或山奈酚处理4天后，收集的细胞在PBS中洗涤，然后与Annexin V和PI(碘化丙啶)在结合缓冲液中孵育，室温黑暗中30分钟。采用FACSCalibur流式细胞仪(BD Biosciences, USA)分析染色细胞。

2．5．体外血管生成模拟试验

PC-3细胞植入基质涂层96孔板，密度为 细胞/孔。对于处理，将不同浓度的Kaempferol加入细胞中。在用Kaempferol治疗24小时后，取出细胞照片，计算血管内成像的数量。

2.6。通过Transwell入侵测定

侵入测定采用Transwell板(美国康宁)。简单地说, 细胞/处理不同浓度的山奈酚200μ将不含胎牛血清的lrpmi -1640接种于上层插入物中，并涂以基质凝胶。然后,500年μ在下部井中添加添加10%胎牛血清的L RPMI-1640。孵育24 h后，刮去上插片顶部的细胞，用4%多聚甲醛固定下插片浸润的细胞，并用结晶紫染色。利用酶标仪在570 nm处的OD值对细胞的入侵数量进行定量分析。

2.7。RNA提取及实时荧光定量PCR分析

根据我们之前的研究进行RNA提取和实时荧光定量PCR分析[10，11］．简单地说，从细胞中提取RNA并进行逆转录后，根据制造商的说明，使用SYBR Green PCR Master Mix Kit (Perkin Elmer, MA, USA)进行实时定量PCR分析。扩增系统和引物分别为AR、PSA、TMPRSS2、TMEPA1和β-肌动蛋白正常化控制与以前的研究相同[10，11］．

2.8。免疫印迹分析

用RIPA缓冲液(50 mM Tris-HCl/pH 7.4, 1% NP-40, 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM PMSF, 1 mM Na)裂解细胞_3.签证官₄如1mm NaF、1mm冈田酸、1mg /mL抑肽酶、leptin和pepstatin)。个别样品(30 - 60μ在5-8% SDS/PAGE凝胶上进行电泳，然后转移到PVDF膜(Minipore)上。挡住了膜后5%的无脂牛奶TBST(50毫米三羟甲基氨基甲烷/液pH值7.5,包含0.15 Tween-20氯化钠和0.05%)1 h在室温条件下,探讨了这些墨迹原发性anti-AR(在20)(圣克鲁斯生物技术)和anti-PSA (C-19)(圣克鲁斯生物技术)抗体稀释1:500:1000一夜之间在4°C。洗涤后，二抗(兔抗山羊IgG 1: 5000稀释;Santa Cruz Biotechnology)或兔抗小鼠IgG(1:5 000稀释;Pierce Chemical, Rockford, IL))在室温下加热1 h。用辣根过氧化物酶标记的抗兔或抗小鼠IgG抗体进行免疫印迹分析，使用增强化学发光试剂进行western印迹检测(Amersham Biosciences)。

2.9。免疫荧光

LNCaP细胞AR的免疫荧光染色，将细胞镀在玻璃盖上。经二氢睾酮和/或山奈酚处理后，细胞固定并在−20℃用冷甲醇渗透15分钟，然后洗涤，然后在室温下用5%正常山羊血清和0.3% Triton X-100封闭1小时。盖玻片上的细胞用抗ar抗体，1:500稀释(Cell Signaling Technology)， 4°C孵育过夜，然后用Alexa Fluor 647山羊抗兔抗体二抗孵育。DAPI对细胞核进行反染，荧光显微镜(TCS SP8徕卡，德国)观察染色细胞。

2.10。统计分析

数据显示为 (SD)。各组之间的差异使用Student’s进行评估 -测试。 被认为具有统计学意义。

3.结果

3．1.山奈酚对ar阳性前列腺癌细胞的抑制作用明显强于ar阴性或非恶性前列腺癌细胞

我们研究了山奈酚对LNCaP、PC-3和RWPE-1细胞生长的影响。LNCaP细胞为ar阳性细胞，PC-3细胞为ar阴性细胞。RWPE-1细胞为非恶性前列腺上皮细胞。加入1 nM DHT模拟去势后雄激素水平。MTT法检测结果显示，LNCaP细胞活力降低33%μM Kaempferol，约60％到10点 μM山奈酚，几乎100%μM山柰酚(图1 (c)（相反，无论DHT的存在如何，PC-3和RWPE-1的细胞生长都不会显着抑制Kaempferol的同一剂量（图1(一)和1 (b)）.

半最大抑制浓度(IC₅₀）用于测量化合物在抑制生物或生物化学功能中的有效性。使用剂量响应曲线来确定IC₅₀值并检查不同浓度的拮抗剂对逆转激动剂活性的影响。在本研究中，集成电路₅₀以山奈酚1 nM DHT处理48 h时对细胞生长的半抑制作用来评价山奈酚浓度对细胞的影响。在DHT存在时，IC₅₀LNCaP、PC-3和RWPE-1中山奈酚的浓度为 ， ，和 ，分别(图2（a）和2（b））.

3．2．山奈酚促进ar阳性前列腺癌细胞dht依赖性凋亡

鉴于山奈酚对ar阳性前列腺癌细胞生长的影响显著高于ar阴性或非恶性前列腺癌细胞，我们进一步评估山奈酚对前列腺癌细胞凋亡的影响。如图所示3.，山奈酚可促进ar阳性前列腺癌细胞LNCaP细胞的凋亡，且呈明显的剂量依赖性。值得注意的是山奈酚对前列腺癌细胞凋亡的影响是二氢睾酮依赖性的。

3．3.山奈酚特异性抑制dht介导的AR激活

我们探讨山奈酚是否可以调节AR功能。首先，在HEK293细胞中评估山奈酚对AR反式激活活性的调节作用。在HEK293细胞上瞬时转染AR和含有AR反应元件(ARE)的报告基因(小鼠乳腺肿瘤病毒(MMTV)-Luc)。测定荧光素酶的相对活性。正如预期的那样，我们发现DHT激活AR反式激活，而羟氟他胺(HF)阻断了这种激活。有趣的是，山奈酚能抑制1nm DHT诱导的AR反式激活。山奈酚的这种抑制作用呈剂量依赖性，如图所示4(一)．

然后用LNCaP细胞进一步证实山奈酚对AR反式激活的抑制作用。1 nM DHT诱导LNCaP细胞AR转激活，HF阻断，5μ10米,μ米,或15μkaempferol。结果表明，Kaempferol可以有效抑制DHT诱导的AR活性（图4 (b)）.

3．4．山奈酚抑制LNCaP细胞AR靶基因表达

为了进一步研究山奈酚对AR下游基因的调控能力，我们检测AR阳性LNCaP细胞中AR靶基因的表达。我们的数据显示，AR靶基因(PSA、TMPRSS2和TMEPA1) mRNA水平通过1nm DHT诱导上调。然后,5μ10米,μ米,15μM山奈酚能有效抑制dht诱导的LNCaP细胞AR靶基因表达(图)5）.

3．5.山奈酚抑制DHT存在下LNCaP细胞AR和PSA蛋白表达

我们的研究发现山奈酚抑制ar介导的活性和靶基因的表达。然后我们尝试在蛋白水平上通过western blot验证山奈酚对AR和PSA的抑制作用。我们的数据显示，5μ10米,μ米,15μM山奈酚与1 nM DHT的存在(图6）.随着山奈酚浓度的增加，PSA蛋白逐渐降低。符合图4，我们发现山奈酚可以抑制DHT诱导的AR和PSA的蛋白水平(图)6）.

3.6。山奈酚抑制DHT存在下LNCaP细胞AR表达和核积累

为了研究山奈酚在DHT存在时对AR表达和定位的影响，我们采用免疫荧光法进行了研究。如图所示7， 1 nM DHT上调AR表达并诱导AR核积累，在浓度为10-15的浓度下，山奈酚可减轻和/或逆转AR核积累μ米的范围内。

3.7。山奈酚抑制PC-3血管源性拟态形成和侵袭

考虑到山奈酚对PC-3细胞增殖仍有影响，我们进一步探讨山奈酚在PC-3血管生成模拟形成和侵袭能力中的作用。如图所示8(一个)和8 (b)，山奈酚以剂量依赖的方式抑制血管生成拟态的形成(5-15μ山奈酚对PC-3侵袭能力的抑制作用(图8 (c)和8 (d)）符合血管原性模拟物。

4.讨论

前列腺癌已被报道为男性最常见的癌症之一，无论是发病率还是发病率。众所周知，雄激素/AR信号通路对前列腺癌的发展至关重要。因此，雄激素剥夺疗法(ADT)已被广泛接受为无根治性前列腺切除术指征的患者的一线治疗。除了已被证实的氟他胺外，新的化学物质似乎对前列腺癌细胞有治疗作用。在我们之前的研究中[10，11]，隐丹参酮和黄芩苷的结构与二氢睾酮相似，被发现可抑制雄激素受体介导的雄激素依赖性前列腺癌细胞生长。山奈酚的结构与隐丹参酮或黄芩苷相似，也非常接近二氢睾酮(图)1）.此外，kaempferol比Cryptotalshinone或Baicalein更广泛地发现水果和蔬菜。几项研究表明kaempferol对不同类型癌症的治疗作用，包括肺癌[13]、胃癌[14]，胰腺癌[15，乳癌[16，卵巢上皮癌[17]，肾小血罐[5，膀胱癌[7，18]和前列腺癌[9］．我们的数据证实了山奈酚抑制ar阳性前列腺癌细胞株LNCaP的表型。但山奈酚对非恶性RWPE-1和ar阴性PC-3的作用有限，这与报道的数据相似[9］．山奈酚对前列腺癌细胞有明显的抑制作用，而对非恶性前列腺细胞的抑制作用非常有限。但由于山奈酚对PC-3细胞的作用也非常有限，这可能意味着它对去势抵抗前列腺癌的适应症有限。

然后,集成电路₅₀Kaempferol在我们的实验室设置中评估。我们的数据显示，在存在1nm DHT的情况下，48小时治疗kaempferol抑制了用IC的LNCAP细胞的增殖₅₀价值28.8. μ58.3 M,曲泽μm，rwpe-1 69.1 μm分别。由于使用不同的kaempferol衍生物，细胞培养条件随着DHT的增加来模拟体内实际环境，以及时间点差异，我们的结果与发布的数据不同[9］．山奈酚在浓度为5-15时呈剂量依赖性促进LNCaP细胞凋亡μM在1 nM DHT的存在下。

以HEK293细胞为工具细胞系，我们的数据显示1 nM DHT可激活AR下游信号。如预期，HF可显著抑制dht诱导的AR激活。山奈酚的加入也能抑制AR的活化。LNCaP细胞株也表现出同样的表型，说明山奈酚能特异性抑制雄激素诱导的AR激活。这些数据显示山奈酚在前列腺癌治疗中的潜力。众所周知，前列腺癌是一种雄激素依赖性的癌症，该结果表明山奈酚是一种很有前景的治疗激素敏感性前列腺癌的候选药物。

然后，我们观察了山奈酚治疗后雄激素下游信号的变化。在LNCaP细胞中，加入山奈酚后，雄激素下游信号PSA、TMPRSS2、TMEPA1的表达明显降低。此外，PSA western blot结果在蛋白水平上证实了这一结果。山奈酚也以剂量依赖的方式抑制dht诱导的AR表达和核积累。这些数据表明山奈酚对激素敏感的前列腺癌细胞的抑制作用可能是对雄激素受体及其下游信号的抑制激活的直接作用。

血管生成拟态在恶性肿瘤中被称为非内皮化血管样通道，它可能依赖于肿瘤生长的供血[19］．如前所述的报道所述，血管原性模仿与Melanoma等许多肿瘤中的转移和预后差密相关[20.，21),神经胶质瘤(22，23，乳癌[24]，以及肝癌[25］．血管源性拟态被认为与上皮-间充质转化相关[26]作为前列腺癌预后不良的标志[27］．本研究探讨山奈酚对前列腺癌细胞血管生成拟态的影响。考虑到细胞形成管的能力，根据之前的研究选择PC-3进行血管生成模拟和侵袭试验[28］．我们的结果表明，Kaempferol以剂量依赖性方式抑制了血管原性模拟和侵入能力，浓度为5至15 μM。

有报道山奈酚通过caspase级联途径抑制LNCaP细胞生长[9］．山奈酚通过抑制某些P450同工酶也可以抑制癌细胞的生长[29]、MAPK通路的调控[7，30.]，抑制PLK1 [31]，降低IL-6和TNF(肿瘤坏死因子)水平[32，33]，以及通过ERK-NFkB-cMyc-p21途径抑制VEGF(血管内皮生长因子)[34］．根据我们的数据，我们推断AR信号通路可能是山奈酚对前列腺癌细胞治疗作用的机制之一，山奈酚可能通过血管生成模拟形成介导转移;尽管如此，进一步的研究仍然是必要的。

5.结论

与RWPE-1等非癌细胞系相比，山奈酚显著抑制前列腺癌细胞系的细胞增殖，促进细胞凋亡，尤其是ar阳性前列腺癌细胞系LNCaP细胞。山奈酚以剂量依赖性的方式抑制血管生成拟态的形成和侵袭能力。山奈酚可能是一种很有前途的前列腺癌化学治疗的候选者。

数据可用性

所有用于支持这项研究结果的数据都包含在文章中。

的利益冲突

所有的作者都宣称他们没有相互竞争的利益。

致谢

我们感谢常州大学制药工程与生命科学学院徐德丰博士的大力支持，他为化合物的合成提供了专家协助。上海市卫生和计划生育委员会项目(no . 20184Y0151);上海市第九人民医院创科项目(no . CK2018009);上海市帆船计划项目(no . 19YF1427200)。

补充材料

(A)二氢睾酮(DHT)是一种雄激素。山奈酚，一种广泛存在于水果和蔬菜中的天然黄酮醇。(C)隐丹参酮，从丹参中分离得到的主要丹参酮，具有多种活性。(D)黄芩素，一种黄酮类化合物，原分离自黄芩根。山奈酚、隐丹参酮或黄芩苷的结构与二氢睾酮相似。（补充材料）

参考

1. M. Daniyal，Z.A.Siddiqui，M.Akram，H.M. Asif，S. Sultana和A. Khan，“流行病学，病因学，前列腺癌的流行病学，病因，诊断和治疗”亚太癌症预防杂志，卷。15，不。22，pp。9575-9578,2014。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. I. Riahi-Chebbi, S. Souid, H. Othman等，“酚类化合物山奈酚在人类耐药LS174结肠癌细胞中克服5-氟尿嘧啶耐药，”科学报告，第9卷，第5期。1，第195页，2019。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. P. Kaur, Robin, R. G. Mehta, B. Singh, S. Arora，“利用主成分分析开发基于水的多草药组合及其在HepG2细胞中的功能意义”，补充和替代医学第19卷第2期1，第18页，2019。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. P. Wu，X. Meng，H. Zheng等，“Kaempferol衰减了ROS诱导的溶血和其诱导细胞凋亡的分子机制对膀胱癌，”分子，第23卷，第2期。2018年，第2592页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. “山奈酚通过EGFR/p38信号通路诱导肾细胞癌细胞周期阻滞和凋亡，”肿瘤的报道，卷。31，不。3，pp。1350-1356,2014。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. M.R.Ahn，K.Kunimasa，S.Kumazawa等，“来自蜂胶的各种组分的抗血管生成活性和抗氧化活性之间的相关性”分子营养与食品研究，第53卷，第53期5，第643-651页，2009。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. Xie F.， M. Su, W. Qiu等，“山奈酚通过诱导肿瘤抑制因子PTEN促进膀胱癌细胞凋亡，”国际分子科学杂志，卷。14，不。11，pp。21215-21226,2013。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. X. Wu, T. Obata, Q. Khan, R. A. Highshaw, R. de Vere White, C. Sweeney，“磷脂酰肌醇3激酶途径调节膀胱癌细胞侵袭”，BJU International.第93卷第5期1，页143-150,2004。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. E. Halimah, A. Diantini, D. P. Destiani等，“山奈酚-3- o -鼠李糖苷在LNCaP前列腺癌细胞系中诱导caspase级联通路”，生物医学报告，第3卷，第2期。1，pp。115-117，2015。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. “隐丹参酮抑制雄激素受体介导的雄激素依赖性和去势抵抗前列腺癌细胞的生长，”癌症的信第316卷1，第11-22页，2012。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. “黄芩素抑制雄激素受体(AR)介导的前列腺癌进展通过抑制AR N-C二聚和AR共激活剂的相互作用，”Oncotarget，第8卷，第2期62, pp. 105561-105573, 2017。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. 倪捷，彭士堂，叶士生，“不同的记忆保留α‐维生素E在前列腺癌细胞中与其转运蛋白基因表达和生长抑制效果相关。”前列腺，第67卷，第5期5，页463-471,2007。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. “山奈酚对非小细胞肺癌放射增敏作用的研究”，肿瘤的报道第34卷第3期5, pp. 2351-2356, 2015。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. H.宋，J.Bao，Y.Wei等人，“Kaempferol抑制胃癌肿瘤生长：体外和体内研究，”肿瘤的报道，卷。33，不。2，pp。868-874,2015。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. J. Lee和J. H. Kim，“山奈酚通过体外阻断egfr相关通路抑制胰腺癌细胞的生长和迁移，”《公共科学图书馆•综合》，第11卷，第5期。5、article e0155264, 2016。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. S. H. Kim，K.A.Hwang和K.C.Choi，“用Kaempferol治疗抑制了细胞和异种移植乳腺癌模型中雌激素和三氯烷引起的乳腺癌细胞生长，”营养生物化学杂志，第28卷，第70-82页，2016。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. “山奈酚通过激活p53通路诱导卵巢癌细胞凋亡，”食品化学，第128卷，第128号2, pp. 513-519, 2011。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. “山奈酚通过抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡来抑制膀胱癌肿瘤的生长，”分子致癌作用第54卷第5期9, pp. 831-840, 2015。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. S. A. Ahmadi，M. Moinfar，K.Gohari Moghaddam，以及M.Bahadori，“血管生成和血管生成的实际应用前列腺腺癌中的血管生成和血管生成模仿”伊朗医学档案，第13卷，第2期6，页498-503,2010。视图:谷歌学术搜索
20. S. Bhattacharyya, D. Mitra, S. Ray等，“逆转Lupeol对小鼠黑色素瘤进展中的血管源性拟态的作用，”微血管的研究，第121卷，第52-62页，2019。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. X. Lin, R. Sun, X. Zhao等，“C-myc过表达通过C-myc /snail/Bax信号促进血管源性拟态来驱动黑色素瘤转移，”分子医学杂志第95卷第1期第1452条，第53-67页，2017。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. O. Pastorino, M. T. Gentile, A. Mancini et al，“组蛋白去乙酰化酶抑制剂损害胶质母细胞瘤细胞的血管源性模拟”癌症，第11卷，第5期。6，p。747,2019。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. 谢慧娟，“小麦胚凝集素修饰的长春瑞滨阳离子脂质体在脑胶质瘤治疗中的应用，”人工细胞、纳米医学和生物技术，第46卷，增刊3，第S524-S537页，2018。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
24. R. Shen，T.Wu，P. Huang，Q.. Shao和M. Chen，泛素缀合酶E2C的临床病理学意义，富含含亮氨酸的重复的G蛋白偶联受体，WW结构域的氧化还原酶，和血管原性模拟侵袭性乳腺癌，“医学第98卷第1期第16条第15232条，2019年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. “卷曲2诱导的上皮间充质转化与肝细胞癌中血管源性模拟、干性和Hippo信号转导相关”，癌症科学号，第110卷。4，页1169-1182,2019。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. Wang H.， B. Huang, B. M. Li et al.，“ZEB1介导的血管生成模拟形成与前列腺癌的上皮-间充质转化和癌症干细胞表型相关”，细胞与分子医学杂志，卷。22，没有。8，pp。3768-3781,2018。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. R. Liu, K. Yang, C.孟，Z. Zhang, Y. Xu，“血管源性模拟是前列腺癌预后不良的标志”，癌症生物学与治疗，第13卷，第2期7, pp. 527-533, 2012。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
28. C. Yeo, H. J. Lee, E. O. Lee，“血清通过EphA2/VE-cadherin/AKT通路促进PC-3人前列腺癌细胞的血管生成模拟，”生命科学，第221卷，第267-273页，2019。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
29. L. Le Marchand，S.P.Murphy，J.H.Hankin，L.R.R.R.Wilkens，以及L. N.Kolonel，“摄入黄酮和肺癌”国家癌症研究所杂志，第92卷，第2期2，页154-160,2000。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
30. B. W. Kim, E. R. Lee, H. M. Min等，“持续ERK激活参与山奈酚诱导的乳腺癌细胞凋亡，在三维培养条件下更明显，”癌症生物学与治疗，第7卷，第5期7, pp. 1080-1089, 2008。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
31. G. Y. Kang, E. R. Lee, J. H. Kim等，“山奈酚诱导MCF-7细胞凋亡中PLK-1表达的下调”，欧洲药理学杂志，卷。611，没有。1-3，第17-21,2009。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. G. Bobe, P. S. Albert, L. B. Sansbury等，“在息肉预防试验中，白介素-6作为预防高风险腺瘤复发的潜在指标，通过饮食黄酮醇，”癌症预防研究，第3卷，第2期。6，页764-775,2010。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
33. B. S. Qazi, K. Tang, A. Qazi，“基础病理学的最新进展为白细胞介素-8表达介导的炎症和血管生成提供了见解，”国际炎症杂志文章编号908468,13页，2011。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
34. H. Luo, G. O. Rankin, N. Juliano, B. H. Jiang, Y. C. Chen，“山奈酚通过一种新的ERK-NF抑制VEGF表达和体外血管生成κB-cMyc-p21途径。”食品化学号，第130卷。2，页321 - 328,2012。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

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