Temporin A和Bombinin H2抗菌肽对肺癌细胞具有选择性的细胞毒性

抽象的

背景．近年来，人们对抗菌肽在肿瘤治疗中的应用进行了研究。据报道，它们可以选择性地靶向并杀死癌细胞，同时不影响正常的健康细胞。某些Anura amp对肿瘤细胞表现出选择性的细胞毒性。目的．试验Anura AMPs bombinin H2, bombinin H4, temporin A，和temporin L作为非小细胞肺癌(NSCLC)治疗药物的潜力。方法．采用CellTox Green细胞毒性试验检测非小细胞肺癌A549、Calu-3和正常上皮细胞Beas-2B的细胞毒性作用。它们对人红细胞的溶血作用也进行了临床相关性测试。使用MALDI-TOF进行细胞膜分析，以确定NSCLC和Beas-2B细胞株的细胞膜特性是否有助于amp的作用模式。结果．Bombinin H4 (100 - 1.5μ.米, ）和颞a（100-50 μ.米, ）向NSCLC细胞系显示选择性细胞毒性。此外，它们表现出低水平的溶血活性（轰炸蛋白H4,0.061％; Temporin A，0.874％）与未处理的细胞相当。细胞膜分析显示普通上皮细胞系BEA-2B的磷脂组合物，从癌细胞系发散。然而，在支撑AMPS可以通过癌细胞系的膜组成具有选择性亲和力的假设的NSCLC细胞系的磷脂曲线中存在重叠。结论．这些结果表明，bombinin H4和temporin A在肺癌治疗中具有应用潜力。进一步在体外和在活的有机体内研究以开发他们作为抗癌药的使用更深入的了解。

1.介绍

2018年，据报道，估计有1700万新的癌症病例和全世界960万癌症相关死亡，肺癌是最常见的死因[1］.肺癌通常通过化疗进行治疗[2］.然而，由于膜转运蛋白(如多药耐药(MDR)蛋白和p -糖蛋白)发生改变，癌细胞的化疗耐药增加，这种治疗的成功受到限制。此外，化疗药物的非特异性靶向性导致其对健康分裂细胞的毒性，导致恶心、腹泻、脱发、贫血和感染等有害副作用，所有这些都降低了患者的总体生活质量。不幸的是，近年来，肺癌患者的预后并没有显示出与其他癌症(如乳腺癌和前列腺癌)相同水平的改善[3.］.在开始治疗后平均4-6个月后，患者的疾病进展，突出当前治疗的长期无效和疾病的侵袭性[4.］.非小细胞肺癌（NSCLC）的5年生存率目前仅为10-20％[5.］.因此，必须开发既不具有传统化疗相关的毒性也不具有耐药性机制的新药物治疗方法。

抗微生物肽（AMPS）是一组化合物，其是先天免疫反应的保守元素[6.]，在所有物种中发现的研究，如细菌，真菌，植物，昆虫，鸟类，鱼类，两栖类和哺乳动物[6.那7.];这些小肽在12至50个氨基酸之间[8.］.它们已被证明能有效地杀死广泛的微生物，如病毒、真菌和革兰氏阳性和阴性细菌[9.］.amp被分为两组:一组对细菌和癌细胞有毒，但对非癌症哺乳动物细胞无毒，另一组对所有三种细胞类型都有毒[10］.AMPs对癌细胞的特异性选择性高于正常上皮细胞，通常归因于癌细胞细胞膜和AMPs之间的几个互补特性。这些特性包括它们之间的静电相互作用能力，AMP的疏水性作为治疗指标，以及AMP的序列。AMP与靶细胞膜之间的静电相互作用是相互作用的关键驱动因素之一。由于过量的碱性氨基酸，如精氨酸、赖氨酸和组氨酸，amp通常是阳离子，净正电荷在+2和+7之间[11］.并非所有安培都具有抗癌性质，但那些抗癌肽（ACPS）的人被认为是更具体的影响，而不是化疗和传统治疗的副作用较少的副作用[10那12那13］.

在无尾蛙皮肤分泌物中发现的amp已被药用多年。无尾蛙背部皮肤分泌物是自然形成的amp的最丰富的来源之一，作为防御机制的一部分，以保护青蛙的皮肤免受病原体入侵和捕食者的摄入[14］.无尾目动物在受到威胁或伤害时，会大量排出amp和其他分子，如生物碱、神经肽和生物胺[15］.每个Anura物种都分泌一组独特的安培，导致抗微生物，抗癌和血液解效果如性质的变化[16］.某些无尾抗菌肽已经观察到表达对肿瘤细胞，例如来自从负子蟾科家族的非洲爪蛙已显示出对小细胞肺癌细胞系杀肿瘤性质[抗菌肽选择性细胞毒性17]和膀胱癌细胞系[18]以及一系列造血细胞系[19］.

本研究的目的是研究无尾动物的抗菌肽林蛙(temporin A和temporin L) [20.),Bombina Variegata.(蚕素H2和蚕素H4) [21]以确定它们是否对肺癌细胞显示选择性细胞毒性，从而提供潜在作为新的化疗剂来治疗肺癌。细胞活力与抗菌肽不同浓度和时间点的百分比是使用肺癌细胞系中测试（A549和的Calu-3）以及非癌性细胞系（BEAS-2B）。此外，细胞膜表征分析，以确定膜的组成可以影响作用的AMPS模式。

2.材料和方法

2.1。肽

Templin A [Flpligrvlsgil]，Temporin L [FVQWFskflgril]，Bombinin H2 [IIGPVLGLVGGSALGLKI]和Bombinin H4 [I-（D-Allo-1）GPVLGLVGGSALGLKKI]由Selleck Chemicals（休斯顿，TX，USA）合成。

２.２.肽的验证

在添加100后，在样品上进行基质辅助激光解吸/电离（MALDI）质谱分析 μ.的0.1％甲酸升以溶解所述肽。基质溶液制成的向上α.-氰-4-羟基肉桂酸(10 mg/ml)与50:50的乙腈和0.1%的三氟乙酸溶液结合。当所有样品都干燥后，MALDI板被装入Voyager-DE STR生物光谱工作站(应用生物系统，Framingham, MA)。设置数据采集参数:离子模式，阳性;仪器模式,反射器;仪器范围1000 ~ 4000 Da;低质量门，1000达;总扫描，每个光谱100次;加速电压，20,000 V。使用电压数据浏览器对结果进行分析^TM版本4.0(应用生物系统，弗雷明汉，马萨诸塞州)。光谱与参考蛋白(血管紧张素、缓激肽和神经紧张素)进行校准。

电喷雾离子(ESI)质谱联用MALDI质谱进一步验证肽的特性。每个肽与100肽混合μ.l的甲醇，然后移入LTQ Orbitrap XL (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA)。多肽以高能碰撞离解(HCD)方式破碎，其同位素宽度为1.5 m/z。

２.３.抗菌性

葡萄球菌表皮1457年和美国epidermidis5179-R1在马血琼脂平板上37℃培养24小时，随后接种3 ml预温胰蛋白酶大豆肉汤(TSB;Becton Dickinson, Cockeysville, USA)。前培养物在37℃摇瓶培养2-3小时，接种200μ.l新鲜TSB在96孔组织培养板(NUNC, Thermo Fisher Scientific, Roskilde, Denmark)中开始OD₆₀₀0.05。每个测试井，100μ.加入肽。选择该浓度，因为它是对抗癌潜力进行研究的浓度的上限。未经处理的细菌用作对照。

将96孔板插入BMG FLUOstar Omega微孔板阅读器(BMG LABTECH，德国)，其波长为600 nm。24小时内每小时读取每口井的OD值，以确定AMPs对细菌生长速率/种群密度的影响。所有实验均为3个重复，每个菌株和条件均为3个重复。

２.４.细胞培养

NSCLC细胞系A549 (ATCC - ccl185)和正常上皮细胞系Beas-2B (ATCC CRL-9609)在添加10%胎牛血清(FBS) (South American Origin, Biosera, Uckfield, UK)的DMEM (Corning, Thermo Fisher Scientific, Basingstoke, UK)、2 mM l -谷氨酰胺(Gibco, Thermo Fisher Scientific, Basingstoke, UK)、1%青霉素/链霉素(Gibco, Thermo Fisher scientific，贝辛斯托克，英国)。NSCLC细胞系Calu-3 (ATCC HTB55)在添加10%胎牛血清、2 mM l -谷氨酰胺和1%青霉素/链霉素的rpi -1640 (Corning, Thermo Fisher Scientific, Basingstoke, UK)中常规生长。37℃培养所有细胞^O.C和5% CO_2.

2.5。细胞毒性检测

2.5.1。CellTox Green细胞毒性试验

CellTox Green细胞毒性试验用于测定由于AMP处理导致的膜完整性的降低。CellTox绿色染料与无酚无血清培养基制成的细胞株按1的比例混合μ.l染料:1000μ.l细胞股票。无酚介质降低了荧光读数的背景噪声，从而可以获得更准确的读数。然后用这种溶液将肽稀释到特定的浓度(100μ.M，50 μ.25米,μ.男，12.5 μ.6.25米,μ.男，3 μ.1.5米,μ.一旦细胞被给药，培养皿被保持在37℃和5% CO的温度下₂．由培养基和CellTox Green Dye组成的未经处理的细胞作为对照;细胞裂解缓冲液(在CellTox细胞毒性测定试剂盒中提供)作为阳性对照，表明细胞死亡。

根据已发表的文献，使用北极星Omega平板阅读器(BMG LABTECH，德国)在24小时内采集荧光读数[22那23］.从底光学升起读取板，读取板，520-530纳米发射，增益调整为1500个OD。优化增益，以便在24小时处理中任何细胞系中的任何肽都没有达到最大值。读数违反了空白平均值。仅测试对NSCLC细胞系，A549和CALU-3的细胞毒性的肽，用于对正常肺上皮细胞系，BEA-2B的选择性。所有实验都有三个重复。

2.5.2。溶血性试验

HaemoScan生物材料溶血试验(HaemoScan，荷兰)用于研究amp对人红细胞的细胞毒性。只有对A549和Calu-3细胞株表现出选择性细胞毒性的amp进行了溶血性能的测试。

按照制造商的说明，分析议定书遵循。总之，通过向红细胞悬浮液中加入5ml供应的洗涤缓冲液并以400×g离心10分钟来制备红细胞悬浮液。然后除去上清液。用洗涤缓冲液重复该步骤两次，然后将步骤重复用稀释缓冲液重复替换洗涤缓冲液两次。然后将最终沉淀悬浮在5ml稀释缓冲液中以形成无色上清液。

将对A549和/或Calu-3有显著影响但对非癌细胞没有显著影响的每种肽(Beas-2B)的最低浓度添加到0.5 ml的红细胞悬液(bombinin H4, 6.25)中μ.M;temporin, 50μ.m）。甲血红蛋白校准曲线也产生暴露于在AMP后建立存在于红细胞悬浮液的处理组的血红蛋白浓度。

校正组和治疗组在37°C孵育24小时。培养24小时后，4000 × g离心1分钟，20分钟μ.取上清液的L和180μ.L测定缓冲液。在BMG flustar Omega微版阅读器(BMG LABTECH，德国)读取之前，先在摇版器上搅拌。读取380、415、450 nm三个波长的吸光度(Harboe法)，计算(2 × 415) -(450 + 380)得到最终OD值。

然后通过将治疗读数与血红蛋白校准曲线进行比较，确定测试样品的血红蛋白浓度。治疗组的血红蛋白浓度以样品中存在的总血红蛋白的百分比表示，表示为溶血百分比。所有实验都有三个重复。

2.6。细胞膜表征

2.6.1。磷脂提取和MALDI-TOF质谱分析

在磷脂分析之前，收获培养的细胞系如下：从烧瓶中丢弃培养基;用10mL PBS洗涤细胞，随后用3mL 0.025％胰蛋白酶/ EDTA温育3-5分钟。通过加入10mL细胞培养基终止反应，并将样品以10,000×g离心5分钟。

细胞球然后水溶性200 ul的氯仿:甲醇(2:1),然后稀释(1:5)在dihydroxybenzoic酸(DHB)的浓度为10毫克/毫升甲醇含0.1%三氟乙酸或para-nitroaniline(机构)的浓度为10毫克/毫升氯仿:甲醇(2:1)。然后将每一种混合物的一微升涂在干净的MALDI平板上(应用生物系统)。样本使用Voyager-DE STR, MALDI-TOF质谱仪(应用生物系统，弗雷明汉，马萨诸塞州)进行分析。使用特定的337 nm激光波长，以确保只检测外膜。设置数据采集参数:时延200纳秒，每次扫描100次，加速电压20000 V。两种基质(DHB和PNA)分别在阳性和阴性模式下运行。使用Excel将m/z信号在每个样本之间的0.5以内对齐。使用Voltage Data Explorer对结果进行分析和归一化^TM版本4.0(应用生物系统，弗雷明汉，马萨诸塞州)。去除任何背景噪声，收集1到1600之间的m/z值，并建立新的光谱。

2.6.2。磷脂的鉴定和电荷

根据Estrada和Yappert的工作，确定了在特定m/z值下每个膜组分的可能身份[24]，如PC(40: 6)，表示头基(脂肪酸链中碳的个数:双键的个数)。

2.7。统计分析

使用Grubbs测试检查组内数据读数的异常值，用a来识别异常值值大于0.05时，与预期分布结果比较。任何异常值都被排除在进一步的统计分析之外。对每组数据进行单样本Kolmogorov-Smirnov (K-S)检验，检验数据的正态性，确定合适的进一步数据分析检验。所有数据被证明是非正态分布，因此进行了Kruskal-Wallis非参数分析。为了确定两组之间是否存在显著差异，研究人员使用了一项Mann-Whitney测试来测试单独的治疗组和未治疗的对照组。一个的<0.05值被认为是显著。

3.结果

谱和ESI质谱确认每个肽的综合使身份准确地代表了肽从天然来源发现,无尾目动物bombinin H2和非对映异构体bombinin H4,包含在第二个氨基端D-alloisoleucine残留的转译后的修改,temporin,和temporin L [25］.

3．1.抗菌性

未经处理美国epidermidis1457年和5179 - r1underwent rapid proliferation throughout the initial 8 hours, reaching a maximum OD₆₀₀在进入固定阶段之前分别在10小时后分别为0.95和0.7。为了美国epidermidisbombinin H2, bombinin H4和temporin L (100μ.M)在24小时内显著抑制增殖( ;数字1)，而只有蚕豆蛋白H2和蚕豆蛋白H4 (100μ.M)明显抑制生长美国epidermidis5179 - r1 ( ;数字1（b）)．

3.2。细胞细胞毒性

当轰炸素H2对A549细胞系施加时，统计学分析显示未处理细胞和在12.5的浓度范围内的未处理细胞和处理细胞之间的显着细胞死亡 μ.m到50 μ.米( )．对于Calu-3细胞，当浓度为50时，与对照相比，蚕binin H2导致显著的细胞死亡μ.米和100μ.米( ）（数字2（a）)．然而，当用浓度为12.5的bombinin H2处理非癌细胞系Beas-2B时，也会发生显著的细胞死亡μ.M - 100μ.M.这些数据表明，bombinin H2对癌细胞没有选择性的细胞毒性。

Bombinin H4被证实对A549细胞系24小时后具有高度毒性，在1.5小时后观察到显著的细胞死亡μ.M - 100μ.米( )．但是，在的Calu-3细胞系，显著细胞死亡仅在较高浓度观察到，50 μ.米和100μ.米( )，与未处理的细胞相比(图2 (b))．在Beas-2B细胞系中，12.5时观察到显著的细胞死亡μ.m - 100μ.米( )．由于Bombinin H4在测试的最低浓度下对A549细胞显示出选择性细胞毒性但不在BEAS-2B细胞中，建议轰炸蛋白H4表现出一定程度的选择性细胞毒性。

有趣的是，temporin A对A549细胞具有双重作用。浓度为50时μ.米和100μ.米( )，观察到明显的细胞死亡。然而，当浓度为3μ.M-25μ.M，观察到细胞活力的显着增加（ )．对于Calu-3细胞，50μ.米和100μ.m internin a诱导显着的细胞死亡（ ）与未处理的细胞相比，但与A549不同，在较低浓度下，细胞活力没有增加(图2 (c))．当将temporin A应用于Beas-2B细胞系时，仅在100时观察到显著的细胞死亡μ.米( )．这些结果表明，颞叶蛋白A在50时具有选择性的细胞毒性μ.M。

用浓度为1.5μ.M-25μ.米( ）与未处理的细胞相比导致显着的细胞死亡。在Calu-3细胞系中，颞下来诱导整个浓度范围的显着细胞死亡，1.5μm - 100μ.米( )，与未处理的细胞相比(图2 (d))．与CALU-3细胞系一样，BEA-2B细胞系在整个颞延长L浓度范围内显示出显着的细胞死亡，1.5 μ.m - 100μ.米( )，与未处理的细胞相比。因此，颞叶蛋白L被证明不是选择性的细胞毒性。

３．３．溶血的特性

在之前的细胞毒性研究中，只有bombinin H4和temporin A被鉴定对肺癌细胞A549和/或Calu-3细胞类型有选择性的细胞毒性潜力，而非癌细胞系Beas-2B。因此，由于它们的选择性细胞毒性特性，在6.25处理24 h后，只有bombinin H4和temporin A被研究了溶血活性μ.米和50μ.M,分别。有趣的是，虽然bombinin H4对红细胞没有产生细胞毒性作用，但溶血水平明显低于未处理的细胞( )，提示蚕豆素H4可能对红细胞活力有保护作用。颞叶蛋白A虽然对红细胞无毒，但其溶血值与未经处理的细胞相当( )，没有显示与Bombinin H4相同的保护属性（表1)．

3.4。细胞膜表征

研究了每个细胞系细胞膜的磷脂谱，以便了解AMP可能存在的差异，从而了解膜结构对AMP细胞毒活性的潜在影响。主成分分析(PCA)使用正电离MALDI-TOF(图3(一个)）显示BEA-2B，A549和CALU-3细胞系彼此不同，同时停留在其细胞类型内，表明膜磷脂表达在所有三种细胞系中不同。阴性模式MALDI-TOF原理分子分析显示普通上皮细胞系BEA-2B的磷脂组合物与癌细胞系不同。然而，我们发现A549和Calu-3癌细胞系的磷脂曲线重叠（图3 (b)）这可能有助于解释为什么AMPS对癌细胞系具有类似的影响，但与非癌变的BEA-2B不同。

膜磷脂表达谱也进行了比较，试图确定细胞膜组成的差异，这可能解释了AMPs对细胞毒性的不同影响。当比较正常上皮细胞Beas-2B和非小细胞肺癌细胞系A549时，获得24个显著峰，其中Beas-2B或A549中的磷脂更丰富( ）;二十四岁的十三个有一个值<0.005(图3 (b))．将Beas-2B细胞与非小细胞肺癌细胞系Calu-3比较，发现32种膜组分有显著差异( ）有二十多个有的人值0.005。

细胞系之间磷脂丰度的变化(图4.）表示存在的存在如何影响整体细胞膜电荷。将所鉴定的脂质物种的平均相对强度（％）分配它们的相应电荷，其丰度用于在每个细胞系内产生百分比的阴性和正磷脂。与A549和CALU-3细胞系相比，BEA-2B细胞具有更大的阳性磷脂和较少的阴性磷脂（ )．当的Calu-3和A549细胞进行了比较，将Calu-3，III期癌症的细胞系，被认为是比A549细胞系更带负电荷的（1.7％）。

4。讨论

癌症的治疗方法多种多样:手术、化疗、放疗或这些治疗方法的组合。与特定的肺癌方面,90%的小细胞肺癌患者最初将对化疗治疗,但几乎所有将与耐药复发的疾病,而非小细胞肺癌患者对化疗反应率较低,由于固有耐药性(26］.近年来，ampps作为潜在的抗癌药物引起了人们的关注，因为有报道称，ampps可以选择性地靶向并杀死癌细胞，同时不影响正常健康的细胞，因此有吸引力的研究对象。在无尾草中发现的amp已用于医学目的多年，但只有少数研究报告了无尾草amp对不同类型癌症的细胞毒性作用[17那18];因此，我们试图确定AMPs bombinin H2, H4(来自无尾猿种Bombina variegate.)和temporin A和L(来自无尾猿种林蛙)表现出选择性的抗癌活性，因此有可能成为治疗肺癌的新化疗药物。

在这项研究中，我们已经能够证明，与正常肺细胞系相比，temporin A和bombinin H4对非小细胞肺癌细胞系的相互作用更有效。在两种NSCLC细胞系中，在相同浓度下，Temporin A能够启动显著的细胞死亡，而在Beas-2B细胞系中没有显著的细胞死亡，因此它作为一种抗癌剂的潜力最大。有趣的是，bombinin H4选择性地杀死了A549细胞，而不是Calu-3细胞。bombinin H4在癌细胞株中诱导细胞毒活性的能力的差异表明两种癌细胞的细胞膜蛋白组成的差异可能是这种观察效果的一个解释。膜磷脂谱显示，这些细胞系聚集成不同的组，表明细胞在外小叶上有明显的磷脂组成特征。然而，PCA在负模式MALDI-TOF的外膜研究中发现，尽管Beas-2B细胞具有与癌细胞不同的磷脂特征，但癌细胞之间存在重叠，这意味着癌细胞具有相似的磷脂特征。因此，单凭细胞膜磷脂组成并不能解释为什么bombinin H4对A549细胞具有细胞毒性，而对Calu-3没有。

细胞膜的电荷也会影响AMP选择性靶向癌细胞的亲和力。正如预期的那样，我们发现正常上皮细胞Beas-2B细胞与A549和Calu-3细胞相比，阳性磷脂的百分比更高，阴性磷脂更少。虽然PCA无法识别细胞系之间的具体差异，但正常哺乳动物细胞的外叶主要含有两性离子磷脂，如PC和SM，而负电荷磷脂，如PS和PG位于内叶。相比之下，在癌症中，带负电荷的磷脂会外化到外膜[27-30.]，增强安培和癌细胞之间的静电相互作用。

当比较A549和Calu-3磷脂充电器时，我们发现Calu-3, III期癌细胞，比A549细胞带更多的负电荷(1.7%)。考虑到AMPs通过静电相互作用发挥其细胞毒性作用，令人惊讶的是，带负电荷较多的Calu-3细胞对bombinin H4的敏感性不如A549细胞。

因此，另一个需要考虑的因素是amp本身的特性。在相同浓度下，Temporin A对两种癌细胞均具有细胞毒性，而在A549中，bombinin H4诱导细胞死亡的浓度远低于Calu-3。因此，可以认为AMP的肽序列本身在其细胞毒性潜能中起主要作用。事实上，AMP的序列可以影响其与细胞膜相互作用的能力。一些早期研究已经证明肽螺旋性对毒性很重要[31那32］.d -氨基酸与细胞裂解肽的结合降低了它们对哺乳动物细胞的细胞毒性[33那34］.Bombinin H4具有单一的l - d异构化，这可能足以降低肽的α -螺旋含量，从而降低其与细胞膜的结合能力。螺旋含量的破坏可导致AMP的疏水面与细胞膜上的正电荷残基的破坏[35］.这反过来可以防止放大器与弱化极性吸引力的膜结合。这种结构变化与Calu-3膜上的略微较低的正电荷组合，可以帮助解释为什么轰炸蛋白H4不是这种细胞系的细胞毒性。

许多研究使用来自不同癌症类型的细胞系来研究amp的抗癌特性[12那36那37];我们的研究强调调查数种癌细胞系，特别是从同癌症类型的重要性，以确定是否有任何观察到的AMP抗癌作用在多个细胞系中持续观察到或细胞系特异性。

为了使amp成为可行的抗癌药物，它们必须不能在患者中引起溶血反应。在人红细胞上测试了Temporin A和bombinin H4，以研究它们在引起非小细胞肺癌细胞系A549和Calu-3显著细胞死亡所需的最低浓度下的溶血特性。令人鼓舞的是，对于temporin A，我们观察到的溶血值与未经处理的细胞相当。用bombinin H时，溶血率明显低于未处理的对照组细胞，这表明它实际上对红细胞活力有保护作用。红细胞外膜不对称分布有糖脂、磷脂酰胆碱和鞘磷脂，形成亲水性环境。红细胞表面电荷具有10mv的zeta电位，被认为是中性电荷[38］.因此，中性电荷红细胞可能不吸引主要带正电安培。此外，相比于红细胞中的细胞系的相对大小也应予以考虑。评估的细胞系具有的直径为90-240 μ.M，而红细胞直径为6-8μ.米(39那40］.因此，可以认为，红细胞太小，无法吸引AMP，防止溶血发生。

通常接受，AMPS朝向细菌和癌细胞的选择性细胞毒性是由于其细胞类型在其细胞膜上具有负电荷。因此，我们试图调查抗微生物活性是否可以用作安培抗癌潜力的指标。Bombinins H2和H4显示出显着的抗微生物活性美国epidermidis1457和5179-R1在100 μ.M，而temporins A和L表现出一定的抗菌作用，但程度不如蚕素。考虑到bombinin H2和temporin L不具有选择性的细胞毒性，而temporin A表现出最有效的抗癌活性，AMP的抗菌作用不能作为其抗癌潜力的指标。

5.结论

研究抗菌肽的抗癌性能在近几年有所增加。许多研究使用不同的肿瘤细胞系，但通常只有一个从一个特定的癌症类型。在这里，我们表明，抗菌肽作为抗癌药物的有效性变化不只是安培之间，而且癌症类型之间，甚至在特定的癌症类型。因此，当务之急是研究是使用一个以上的细胞系由相同的癌症类型，以确定是否一个AMP的细胞毒性是细胞系特异性进行。此外，我们一家四阿努拉抗菌肽初步调查表明，temporin A和bombinin H4可容纳潜在的抗癌药物，并进一步在体外和在活的有机体内现在需要做的工作是充分确定它们的抗癌潜力和作用方式。

数据可用性

所有在当前研究中产生或分析的数据都包含在这篇发表的文章中。

利益冲突

作者宣布关于本条的出版物没有利益冲突。

作者的贡献

LS进行了大多数实验室工作并写了稿件。CM是稿件写作的主要贡献者以及项目的主要主管。PC进行了膜组成实验室工作。LGH为工作的细菌元素提供了技术支持。ED和KS为质谱工作提供了技术支持和数据解释。PL是MRES项目的次要主管，并帮助统计分析。FC提供了使用的放大器，并为稿件准备审查。所有作者阅读并认可的终稿。

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