文摘
肝细胞癌(HCC)仍然是一个巨大的健康负担。其早期诊断和治疗是复杂的,缺乏早期诊断标记和多药耐药性。微rna调节肝细胞癌基因是正在探索新的诊断和治疗策略,尽管交付的方式治疗剂量的microRNA的仍然是一个挑战。在这项研究中,我们探索了利用液从脐间充质干细胞转染miR-27a-3p与肝癌的癌基因GOLM1和抑制肝癌进展在体外和体内。我们首先确定和比较miR-27a-3p表达水平的血液,不同细胞系和组织的肝癌及其相应的正常控制。然后我们采用生物信息学分析来确定目标基因在HCC miR-27a-3p,后来在间充质干细胞转染调节miR-27a-3p,和治疗肝癌细胞转染干细胞的提取液。然后我们使用balbc /裸小鼠肝细胞癌的小鼠模型创建,同样处理液从miR-27a-3p转染干细胞。结果表明,miR-27a-3p血液中表达下调,细胞株和组织肝细胞癌患者与正常对照组相比。液从miR-27a-3p转染间充质干细胞预防肝癌细胞增殖,入侵和转移在体外和体内。Upregulation miR-27a-3p预防HCC通过相互作用和表达下调GOLM1致癌基因作为其目标。 In conclusion, miR-27a-3p is a potential therapeutic target for HCC acting through GOLM1.
1。介绍
迄今为止,肝细胞癌(HCC)仍然是一个重大的医疗负担负责一个巨大的生命损失和生计在发达国家和发展中国家1,2]。全球估计表明,大约841000新的肝癌病例和782000肝癌由于每年死亡记录(3]。病毒性肝炎B和C,过度饮酒,和aflatoxin-contaminated食品发展的主要风险因素是肝细胞癌(4]。成功治疗肝癌病例是由缺乏早期诊断标记和复杂的多药耐药性的发展,因此迫切需要更多的小说和创造性的方法来诊断和治疗癌症。
为了寻找新的生物标志物对于肝细胞癌诊断和治疗,高尔基体膜蛋白1 (73 / GOLM1 / GOLPH2 GP) - II型Golgi-membrane蛋白质被发现和证实强烈促进肝癌发展和传播5]。在分子水平上,GOLM1诱发肝癌转移的相互作用和调节表皮生长因子受体(EGFR)回收在细胞表面,因此促进肝癌细胞的epithelial-mesenchymal过渡(6]。它进一步促进矩阵的运输和分泌metallopeptidase 2和7在肝细胞癌,另一个互动,促进肝癌转移(7,8]。这一发现使得GOLM1肝癌的治疗目标至关重要。
GOLM1信使核糖核酸的翻译的表达是一个因素,他们的活动在一定程度上由微RNA (microRNA)控制。microrna - 559, microrna - 141 - 3 - p, miRNA-27b-3p的microrna已知控制GOLM1表达式(9]。与肝脏生理、miR-27a家族,这在其他方面功能维持肝祖细胞的未分化状态已被证明与GOLM1 [10]。19 p13.12 miR-27a-5p位于染色体。它属于miR-27a基因家族的基因间;位于染色体19日miR24-2和miR24a之间,从非编码基因转录11]。它被发现有一个潜在的结合位点3 - - - - - -UTR区域GOLM1 [10]。这些发现miR-27a家族的演员,包括miR-27a-3p是本研究的主题,作为GOLM1的潜在的监管机构,因此,使其肝细胞癌治疗的重要目标。
虽然有足够的实验证据表明,使用正确microrna的模仿或antagomirs具体改变microrna的表达规范化异常基因调控途径和逆转癌症,主要的挑战一直是如何有效地交付microrna的目标肿瘤细胞而不退化或导致过度毒性(12]。在这项研究中,我们探索液是一种更有效的方式提供miR-27a-3p肝癌细胞。内生的起源、液有独特的能力提供其microrna包含货物到目标细胞迅速和与很少或没有毒性13]。我们证明液源自miRNA-27a-3p overexpressing脐间充质干细胞有能力与GOLM1和抑制肝癌的进展。
2。材料和方法
2.1。血液样本集合
我们收集血液样本90名肝癌患者和75名健康对照组参加武汉大学中南医院2021年3月至2021年7月。只有确诊患者的肝细胞癌和没有开始任何形式的治疗包括为例。对照组是健康的病人来例行体检在医院。知情同意是获得所有科目。患者分为两组;肝癌患者(90总共67男性和23岁女性)的平均年龄 ,和健康对照组(75总共48个雄性和雌性27日)的平均年龄 。
2.2。肝癌细胞株
肝癌细胞系HepG2、MHCC971 Hep3B, Huh7 +正常肝细胞株L02都来自武汉Procell有限公司,中国,在高葡萄糖DMEM培养媒体富含10%胎牛血清(的边后卫)和1% penicillin-streptomycin抗生素。
2.3。肝细胞癌组织样本收集
我们进一步收集32对肝癌HCC病人手术和paracancerous组织样本。收集的样本只从病人治疗手术前尚未启动。新鲜样本存储在-80°C到实验时间。患者的有关临床资料也收集。所有患者知情同意提供样品前集合。
2.4。RNA提取和反转录
总RNA提取等离子体、细胞和组织样本使用RNzol-total RNA提取工具包(猫:RP1001 Bioteke,北京,中国),根据制造商的指示。反转录进行使用ReverTra Ace-qPCR从TOYOBO RT工具有限公司(日本大阪)。逆转录条件如下:65°C 5分钟,5分钟37°C,然后98°C,持续15分钟。互补脱氧核糖核酸是暂时保持在-20°C之前使用。
2.5。实时聚合酶链反应分析
定量实时PCR当时使用SYBR执行®预混料交货Taq™II实时PCR试剂盒(豆类、日本)根据制造商的指示,在Bio-Rad排名PCR机器。一个20 -μL使用反应总额。循环条件如下:最初的脂肪变性为5分钟95°C, 40变性的周期为30秒95°C, 30秒退火61.4°C,伸长为30秒72°C。Glyceraldehyde-3-phosphate脱氢酶(GAPDH)作为内生控制数据规范化。所有的反应都在重复进行。引物的序列miR-27a-5p和GAPDH是表中提供1。双三角洲Ct方法被用来计算基因表达。
2.6。荧光原位杂交
以证实qPCR结果,进行荧光原位杂交(FISH)测定在肝细胞癌和正常肝细胞株。一个5biotin-labeled探针(CTTCCAGTCGAGGATGTTTACA)旨在检测hsa-miR-27a-3p从能生物技术有限公司获得成像是根据Arrigucci鱼协议所述进行et al。14]。
2.7。脐带间充质干细胞的分离和鉴定
我们孤立的从新鲜脐带间充质干细胞,从母亲收集来自武汉大学中南医院。所有的母亲同意允许使用他们的脐带。声带被迅速清洗和冲洗两次磷酸盐(PBS)含有氯化钠和甲硝唑治疗。清洗声带被切成碎片,转移到T75文化血压得到较好的控制瓶含有干细胞培养基(Cyagen,广州,中国),37°C 5%孵化有限公司2。每三天之日起最初的文化,新媒体改变了。最初的文化日期大约10天后,观察纤维母细胞殖民地。然后他们通过在媒体间充质干细胞培养21天(Gibco、GMP质量)与10%胎牛血清抗生素(青霉素、链霉素的边后卫)和1% (Sigma-Aldrich)。
2.8。外来体提取
当文化通道2中的msc (P2),质粒进行转染使用Lipofectamine 2000(美国表达载体,卡尔斯巴德,CA)。这些细胞被播种在6-well板 融合细胞浓度和培养至80%。一组然后用hsa-miR-27a-3p转染质粒编码,另一组与正常控制质粒转染。转染后48小时,文化媒体被和收获液使用Bestbio从上层的外来体工具包(Bestbio,北京)根据制造商的指示。短暂,20毫升的细胞培养基收集和储存在2 - 8°C。媒介是离心机在3000克15分钟在4°C和上层的收集。然后小心翼翼地将上层清液转移到另一个干净的离心管,再一次在1000 g离心20分钟在4°C。沉积物被丢弃,上层清液收集并仔细地搬到另一个干净的离心管。3毫升的试剂B (Bestbio外来体工具包)添加到12毫升的培养基,限制严格,混合好,可以解决在晚上2 - 8°C。第二天,混合物在10000 g离心机在4°C 60分钟。上层清液是小心地删除和沉淀物收集。 The sediment containing the exosomes was then resuspended in 10 μL的外来体保护解决方案,为下游应用程序存储在-80°C。液的蛋白质浓度测定用BCA™蛋白质分析工具包(Beyotime、上海、中国),分析了外来体蛋白质CD9和CD63免疫印迹。
2.9。透射电子显微镜法
2.9.1。纳米粒子跟踪分析
示例离心机在10000 g稀释1:1000与PBS和300μL加载到sample-holding商会LM10单位(Nanosight、处、英国)。Three-30第二视频记录了每个样本,使用NTA 1.1和2.1的数据分析软件(Nanosight)。基本控制设置机器的维护进行样本分析。控制珠子100、200和400 nm从杜克大学获得科学(Palo Alto, CA)。快门速度为30的珠子6和1毫秒为100年,200年和400海里珠子,分别与零相机获得。的样本,与相机的快门速度是30年或15毫秒收益从280年到560年不等。分析软件设置如下:检测阈值:5 - 10;模糊:汽车;最小粒度:50 nm。所有数据被当作两个视频记录的平均值。 Relative exosome concentration was calculated based on the dilution factor.
2.9.2。免疫印迹分析
Exosomal蛋白质提取使用的鸡尾酒radio-immunoprecipitation化验(里帕)缓冲区(Sangon生物技术有限公司,中国)和蛋白质抑制剂,phenylmethylsulfonyl氟化物(PMSF)解决方案(热费希尔科学、沃尔瑟姆,妈,美国)。Bicinchoninic酸(BCA)试验(Beyotime、上海、中国)进行测量的蛋白质浓度和10μg蛋白的10% sds - page凝胶电泳分离。分离蛋白被臃肿到聚偏二氟乙烯(PVDF)膜(默克公司)和屏蔽5%脱脂牛奶在室温下2 h。膜被孵化一夜之间用以下主要抗体:CD63(猫:67605 - 1 - ig稀释:1:7000年,Proteintech,中国),CD9(猫:60232 - 1 - ig,稀释1:10000年,Proteintech,中国),GOLM1(猫:HPA010638稀释:1:5000年,Sigma-Aldrich,北京,中国),和β肌动蛋白(猫:A5441稀释:1:5000年,Sigma-Aldrich,北京,中国),稀释按照制造商的指示。他们培养相应的合二次抗体(山羊anti-mouse:猫:12 - 489,稀释:1:6000年,山羊anti-rabbit:猫:12 - 348,稀释:1:6000年,所有从Sigma-Aldrich,北京,中国)和乐队的PVDF膜检测使用化学发光底物系统(美国热费希尔科学)。
2.9.3。细胞增殖实验
转染24小时后,细胞被播种到96孔板(2000个细胞/)和培养为0 h, 24小时、48小时、96 h。然后,10μL CCK8的解决方案是添加到每个好,和盘子孵化2 h在37°C。最后,甲瓒染料由细胞产生的脱氢酶活性被分光光度计测量吸光度在450海里(美国PerkinElmer EnSpire)。光密度值的每个记录的测量肝细胞增殖。
2.9.4。Transwell化验
验证细胞迁移,Transwell化验。转染24 h孵化后,细胞缺乏的边后卫的6小时,然后放入参议院(20000细胞/室)Transwell试验板(美国康宁公司),和200年μL含有10%的边后卫的DMEM补充道。24小时后,介质被和细胞迁移到众议院的板在4%甲醛溶液固定,与结晶紫染色20分钟,光显微镜下计算。
2.9.5。流式细胞术
肝癌细胞亚文化和处理之前脐MSC液提取48小时。然后他们被移除,使用70%乙醇固定24小时在4°C,和resuspended在溶液中含有磷酸缓冲盐(PBS)和propidium碘染色(猫:P4170 Sigma-Aldrich,北京,中国)。混合物被蒙在鼓里30分钟,然后使用流式细胞仪分析细胞周期(美国贝克曼库尔特史诗XL)。
2.9.6。生物信息学分析
进行了生物信息学分析寻找基因与miR-27a-3p显著相关。生物信息学工具Targetscan:https://www.targetscan.org/vert_80/,戴安娜工具:http://diana.imis.athena-innovation.gr/DianaTools/index.php,miRBase:https://www.mirbase.org/被用来分析公开数据。缩小的数量达到正确的概率,提高点击率,搜索结果缩小到只有基因有95%以上可能正确的点击。所有的预测基因的三个工具然后把生物信息学和进化基因组学(求)软件:http://bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/Venn/生成和维恩图来确定哪些基因在所有三个工具的十字路口。四个高度潜在miR-27a-3p绑定基因(FBW7, PLK2、GRB2 GOLM1)生成的。
2.9.7。动物实验
十一balbc /裸小鼠获得6周大,不停地在实验室2周的时间来适应新环境。老鼠在8周大创建肝癌模型用于外来体的挑战。所有实验都严格遵循批准的协议进行动物保健和使用委员会华中科技大学。起始重量的老鼠是研讨会。他们一直在下列条件下:14小时光和10个小时的黑暗周期和温度18 - 23°C,湿度40 - 60%。他们在实验室丸和喂养提供足够的干净的水。HepG2细胞传播,并用于注入小鼠,建立肝癌模型。肿瘤模型的建立后,老鼠分成两组;一组5老鼠注入液提取miR-27a-3p转染msc、而另一组6小鼠注射液从msc转染与正常控制。21天的小鼠观察和结果都被记录下来。 To demonstrate the effect of miR-27a-3p on HCC metastasis, 6 balbc/nude mice were acquired and kept as before. They were divided into two groups of 3 mice each. The mice were operated under anesthesia and cultured HepG2 cells delivered directly into the liver. In the first group, exosomes extracted from the MSCs transfected with miR-27a-3p mimics were administered directly to the liver; while in the second group, MSCs transfected with normal control was administered. The mice were followed for three weeks, sacrificed, and liver tissues collected for HE staining, Masson’s staining, and immunohistochemistry.
2.9.8。组织学检查和免疫组织化学
后收集的小鼠肝组织肝细胞癌模型创建和处理外显与苏木精和伊红染色())和马森的三色的污渍如前所述15,16)来演示肝癌转移。组织学检查后,GOLM1的表达和肿瘤增殖标记(ki - 67)进行免疫组织化学。简而言之,肝脏组织嵌入石蜡,石蜡移除,组织水化。他们在室温下培养30分钟5%正常阻止血清和沾anti-GOLM1抗体和增殖标记(ki - 67)抗体在一夜之间在4°C。幻灯片被潜伏在一个适当的二次抗体在室温下60分钟,和染色检查。染色强度和比例看,分数计算表达式。
2.10。统计分析
所有的实验数据都表示为 三个独立的实验。使用未配对学生的数据进行了分析 - - - - - -测试区别两个独立的团体和多个组之间的差异的单向方差分析Bonferroni Dunnett事后测试,除非另有说明。统计分析进行了使用GraphPad Prism 8.2版本(GraphPad软件有限公司、美国)。 被认为是具有统计学意义。
3所示。结果
3.1。表达miR-27a-3p在肝细胞癌等离子体表达下调,细胞和组织
作为第一步,miR-27a-3p的表达水平是评估90名肝癌患者的血浆/ 75健康对照组,HCC /正常肝细胞株,肝细胞癌肿瘤组织/ paracancerous组织控制。实时的存在和荧光原位杂交(FISH)化验。在重复实验。qPCR结果表明miR-27a-3p在肝癌细胞株的表达水平显著低于正常肝细胞,观察相同的结果在肝细胞癌肿瘤组织相对于paracancerous组织, (数据1(一)- - - - - -1 (c))。同样,miR-27a-3p在HCC患者的血浆水平与健康受试者相比,明显降低 ;(图1 (d))。细胞系的表达miR-27a-3p进一步证实了利用荧光原位杂交(FISH),和荧光强度非常弱的肝癌细胞株与正常肝细胞相比,L02。(图1 (e))。
(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
3.2。miR-27a-3p与肝细胞癌患者的一些临床变量
我们进一步评估miR-27a-3p和肝细胞癌患者的临床参数之间的关系,寻找一个临床意义上的关联。显示在表中2和3,miR-27a-3p表达水平与肿瘤分化显著相关( , ),肿瘤大小( , ),和TNM阶段( , )。然而,没有发现相关性对性别、年龄、吸烟、酗酒、肝硬化,甲胎蛋白(AFP),乙型肝炎病毒dna,和其他生化指标。
3.3。miR-27a-3p与肝癌细胞GOLM1显著相关
然后我们开始了寻找基因miR-27a-3p使用显著相关生物信息学分析。我们进行搜索使用Targetscan,戴安娜工具和miRBase。搜索结果使用生物信息学分析和进化基因组学(求)软件和维恩图(图生成2(一个))。四个高度潜在miR-27a-3p绑定基因(FBW7, PLK2、GRB2 GOLM1)生成的。四个基因的确定哪些是最与miR-27a-3p, Huh7,和HepG2细胞选择microrna的模仿(过度)和antagomirs(降价)实验,分别。如数据所示2 (b)和2 (c)与miR-27a-3p, GOLM1基因最相关。
(一)
(b)
(c)
3.4。高尔基体膜蛋白1显著调节肝细胞癌
结果不同的研究小组已经证明GOLM1调节肝细胞癌。在这里,我们进行了一次简短的生物信息学分析GEPIA2 (http://gepia2.cancer-pku.cn/指数TCGA)使用数据集显示GOLM1在肝细胞癌的表达。像预期的那样(图3相比,肝癌样本),GOLM1显著调节正常样本。
(一)
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3.5。间充质干细胞是人类脐带成功隔绝
间充质干细胞成功分离和传播人类脐带。细胞的表型被确定通过确定的存在间充质干细胞标记物表面的培养细胞用流式细胞仪(图4)。73年105年90年标记CD, CD, CD, CD 44、45 CD, CD 34成功演示了两个独立的实验。
(一)
(b)
3.6。液从miR-27a-3p转染间充质干细胞
合成寡核苷酸的分离msc被转染mir - 271 - 3 - p和正常对照组。细胞被培养和液分离培养基的超速离心法在100000 g。透射电子显微镜是用来证明液的结构(图5(一个))。免疫印迹分析证实了液通过检测外来体标记的存在,CD63 CD9和两个独立的实验(图5 (b))。液进一步证实了大小计算及其纯度决定(图5 (c))。转染效果是由荧光显微镜。功效由强度表示绿色荧光的荧光标记miR-27a-3p(图5 (d))。
(一)
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3.7。液从miR-27a-3p转染间充质干细胞抑制肝细胞癌增殖
在这个实验中,Huh7 HepG2细胞培养和处理液提取miR-27a-3p转染msc。细胞增殖、迁移和细胞周期分析测定使用CCK-8 Transwell,分别和流式细胞术分析。结果表明,治疗的细胞包含miR-27a-3p模拟液抑制Huh7和HepG2细胞的增殖(数字6(一)和6 (b))。同时,液包含miR-27a-3p来源于细胞抑制剂并没有阻止细胞增殖。流式细胞仪分析显示液包含miR-27a-3p抑制剂显著缩短了G0 / G1期细胞HepG2和Huh7(数字6 (b)和6 (c));而循环进展显著抑制在G0 / G1期栽培后miR-27a-3p中液。Transwell和伤口愈合试验,包含miR-27a-3p模拟液抑制Huh7和HepG2细胞的迁移和入侵而包含miR-27a-3p抑制剂并没有阻止细胞迁移和入侵数据7(一)- - - - - -7 (f))。
(一)
(b)
(c)
(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
3.8。液从miR-27a-3p转染间充质干细胞抑制肿瘤生长,监管的高尔基体膜蛋白1表达,抑制体内转移
体内实验证实细胞培养的结果。11 balbc /裸体小鼠获得和使用8周大。HepG2细胞被增加在文化和注入小鼠建立肝癌模型。建立肿瘤模型后,老鼠分成两组;一组5老鼠注入液提取miR-27a-3p转染msc、而另一组6小鼠注射液从msc转染与正常控制通过尾静脉。经过21天的观察,肿瘤组的小鼠注射过表达miR-27a-3p包含液明显较小,较低的体积和重量比控制老鼠(数字8(一个)- - - - - -8 (d)),表明液从miR-27a-3p转染msc抑制小鼠的肝细胞癌肿瘤的进展。演示miR-27a-3p在肝癌转移的影响,6 balbc /裸小鼠获得并保持。他们被分为两组,每组3老鼠。小鼠麻醉操作和培养HepG2细胞直接交付到肝脏。在第一组中,提取液从msc转染miR-27a-3p模拟肝脏直接管理;在第二组,msc转染与正常的控制管理。老鼠跟着三个星期,牺牲和肝组织为他收集的染色,马森的染色和免疫组织化学。结果从鼠标集团注入液miR-27a-3p转染msc显示显著降低癌症扩散到肝脏与对照组相比,表明液从miR-27a-3p转染msc体内抑制肿瘤转移(数字8 (e)- - - - - -8 (h))。
(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
(g)
(h)
4所示。讨论
在这项研究中,我们能够证明液源自脐带间充质干细胞和携带miR-27a-3p有能力防止肝癌细胞增殖,迁移和转移在体外和体内。在本研究的第一部分,我们证明了miR-27a-3p的表达显著下调在血液样本的肝细胞癌患者与健康对照组相比。我们进一步表明其表达下调在肝癌细胞株和肝细胞癌组织和正常肝细胞和肝细胞癌paracancerous组织相比,在差别分别,虽然对这些HepG2 Hep3B和LO2 HuH7相比略小,MHCC97H细胞线。此外,过度miR-27a-3p导致抑制肝癌进展,而击倒促进肝癌进展。这些发现符合类似研究的结果由Li et al。17),杨et al。18),和赵et al。19),所有显示miR-27a-3p肝癌表达下调,起着关键作用的差别,这对这些促进肝癌进展,尽管确切的机制还不知道。
为了描述miR-27a-3p在肝细胞癌的作用机制,我们利用生物信息学分析和寻找肝癌相关基因可能与miR-27a-3p联系在一起。四个基因检索,其中GOLM1很可能与miR-27a-3p后湿实验室验证。鉴于之前的实验表明,miR-27a-3p最Huh7细胞系中表达下调HepG2细胞相比,过度的miR-27a-3p Huh7细胞使用miR-27a-3p-mimics GOLM1的差别导致了对这些而击倒HepG2细胞导致upregulation GOLM1表达式。这确实证实,最有可能差别miR-27a-3p对这些促进肝癌进展通过调节GOLM1表达式。miR-27a-3p属于miR-27家族还包括miR-27b [20.]。先前的研究已经证明了miR-27b和GOLM1在肝细胞癌之间的联系21),然而,这是第一次研究证明miR-27a-3p与GOLM1肝癌。
小分子核糖核酸是一种治疗肝癌的新目标和其他形式的癌症。在这种背景下,王先生和吴12)正确地认为,修正特定的异常的microrna的表达使用microrna的模仿或antagomirs有能力受影响的基因和正常化逆转癌症恶化。挑战,然而,如何安全地交付microrna的寡核苷酸,其目标基因没有众多的内切酶在体内降解。傅et al。22)广泛回顾了主要的microrna的输送系统,包括,等修改后的交付与病毒载体和纳米颗粒。这些修改,虽然稳定microrna,触发免疫原性的缺点,只能加载一个寡核苷酸。液和其他内生膜囊泡下的新方法探索microrna的交付(23- - - - - -25]。他们已经产生了大量的热情,因为他们能够改变生物活性分子,就像是microrna在一个安全的封装保护他们从核糖核酸酶(rna)的体液,而不太可能引发免疫反应和毒性(可以忽略不计22,26]。在这项研究中,我们miR-27a-3p转染在间充质干细胞能够与目标交互GOLM1当MSC液用于治疗肝癌细胞。这表明,MSC液中,mir - 271 - 3 - p。
我们这个肝癌治疗方法的成功归因于miR-27a-3p之间的交互和GOLM1,我们也认识到这一事实miR-27a-3p一起交付的其他内容而闻名的间充质干细胞细胞再生能力(27]。各种团体研究使用间充质干细胞治疗肝脏疾病如肝纤维化,以及最近HCC与不同程度的成功28- - - - - -30.]。因此,可能的影响可能是由于细胞间充质干细胞的再生能力。这需要在未来的实验验证。其次,NTA分析显示小型和中型囊泡从40到400纳米大小。液通常从50到150纳米大小。因此,很可能其他中小泡也可以扮演了一个角色在这个结果。
5。结论
简而言之,因此,我们已经表明,miR-27a-3p促进肝癌差别是肝癌表达下调,这对这些进展。我们也表明miR-27a-3p与GOLM1密切相关,这超表达miR-27a-3p的差别导致了对这些GOLM1,反之亦然。我们认为促进肝癌进展的差别miR-27a-3p对这些基因的上调表达的GOLM1所以过度miR-27a-3p防止肝癌进展和转移通过下调GOLM1。此外,我们能够证明miR-27a-3p可以转染成液的脐带间充质干细胞和转染细胞包含处理时可以与GOLM1 miR-27a-3p肝癌细胞。
数据可用性
从这项研究的所有数据是可用的。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
作者的贡献
建行的构思和设计研究,进行实验和数据分析,起草了手稿。连续波的构思和设计研究,样本收集。等进行了实验和手稿的技术评审工作。MBMY和QY回顾了手稿。曹国伟,基督教塞德里克Bongolo,埃里克Thokerunga是平等的贡献者。
确认
这项研究受到了武汉示精密医疗技术有限公司