文摘
目标。调查是否hUC-MSCs衰减严重burn-induced阿里和影响是基于从hUC-MSCs TSG-6分泌。方法。大鼠模型建立和评估如下:细胞因子表达被ELISA测定,炎性细胞浸润和肺损伤被免疫组织化学分析评估。结果。体外,TSG-6水平燃烧组的血清与虚假的组相比显著增加。体内,TSG-6水平的肺组织和血清中燃烧+ hUC-MSC组与燃烧组相比显著增加。在肺组织和血清,增加水平的促炎细胞因子(TNF -α,il - 1β和il - 6)显著降低,但抗炎细胞因子il - 10后增加hUC-MSC管理局( )。这些重要积极作用hUC-MSC移植后并没有发生在燃烧+ siTSG-6组。结论。气管内的注入hUC-MSCs一直是一个有效的治疗严重burn-induced阿里通过促进TSG-6分泌和抑制肺组织炎症反应。
1。介绍
急性肺损伤(ALI)及其严重的急性呼吸窘迫综合征(ARDS)是常见的表现形式的低氧呼吸衰竭患者的死亡率[25 - 40%1]。ALI / ARDS也是一个主要的并发症和死亡率严重烧伤患者的常见原因(2]。越来越多的实验和临床研究的证据表明,系统性炎症反应中扮演重要角色的发展和死亡率ALI / ARDS [3- - - - - -5]。多项研究表明,移植msc可以减少系统性炎症,减弱肺损伤,改善生存在阿里的模型6- - - - - -8]。不幸的是,没有严重burn-induced阿里这些研究的动物模型。人脐带msc (hUC-MSCs)出现在一个有吸引力的来源,为临床应用msc。hUC-MSCs不仅共享相同的特性,比如multilineage分化、旁分泌功能,和免疫调节特性的msc但也有一些独特的优点,如不需要骨髓匹配,低免疫原性,较高的自我更新能力,加速损伤组织修复过程(9,10]。我们先前的实验已经证明了严重烧伤可能带来系统性炎症反应。同时,hUC-MSCs可以缓解严重烧伤的系统性炎症反应通过分泌多种生物活性因子(11]。然而,很少有人知道hUC-MSCs预防严重burn-induced阿里。multipotential抗炎蛋白的肿瘤坏死因子(TNF -α-)刺激基因/蛋白6 (TSG-6)被发现在各种各样的疾病有效的模型,包括呼吸道疾病模型。我们之前的研究进一步证实的潜在作用和机制hUC-MSCs分泌TSG-6衰减严重burn-induced通过抑制过度炎症激活P38和物信号的方式11,12]。上面的发现促使我们进一步调查是否hUC-MSCs burn-induced阿里通过旁分泌分泌TSG-6衰减严重,抑制肺组织的炎症反应。在这项研究中,我们调查的治疗潜力和机制hUC-MSCs严重burn-induced ALI大鼠模型。
2。材料和方法
2.1。hUC-MSC准备
实验过程都是按照国际标准实验动物的生物医学研究委员会颁发的国际医学科学组织(帮助)。我们批准的认证机构动物保健和使用委员会第四届解放军总医院医学中心和获得受试者的知情同意。主要的人类脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)购买ScienCell研究实验室(ScienCell,圣地亚哥,CA)。hUC-MSCs被检查使用流式细胞仪和CD105是积极的,CD90、CD29、CD44,和HLA-I和消极CD34、CD45、HLA-DR, CD31、vWF如我们之前所述出版(12]。他们有潜力发展为成熟细胞产生脂肪,软骨,骨骼,肌腱和肌肉。这些属性,结合他们的发育可塑性,产生极大的兴趣,因为潜在的再生医学中使用MSC替换受损组织。
2.2。体外评价TSG-6释放hUC-MSCs燃烧动物的血清中
hUC-MSCs被镀成6-well板块的细胞密度5000细胞/厘米2和孵化3毫升间充质干细胞培养基无血清(MSCM-sf) (ScienCell研究实验室,圣地亚哥,CA) 1天,随后被培养,不断用3毫升MSCM-sf包含10%的血清或烧伤血清24小时postsevere燃烧。目前,炎症介质水平的氧化应激因素,其他因素都非常高。TSG-6分泌物hUC-MSCs 10%烧伤后血清连续文化的上层清液细胞化验使用酶联免疫试剂盒。
2.3。hUC-MSCs TSG-6与核转染
我们选择了慢病毒表达载体包含TSG-6 siRNA序列(GeneChem、上海、中国)具体目标TSG-6,包括Lenti-TSG-6-siRNA及其负控制向量,Lenti-GFP-siRNA。TSG-6 siRNA慢病毒载体被切断向量PGC-LV生成。TSG-6 siRNA寡核苷酸序列是5 - - - - - -CCGGTTCTCCGAACGTGTCACGTTTCAAGAGAACGTGACACGTTCGGAGAATTTTTG-3和反向5 - - - - - -AATTCAAAAATTCTCCGAACGTGTCACGTTCTCTTGAAACGTGACACGTTCGGAGAA-3 。
控制核前5的序列 - - - - - -CCGGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTCGAGATGAACTTCAGGGTCACGTTGCTTTTTG-3和反向5 - - - - - -AATTCAAAAAGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTCGAGATGAACTTCAGGGTCACGTTGC-3 。
的重组慢病毒是由cotransfecting HEK293T细胞pGC-LV-GFP-siRNA或pGC-LV-TSG-6-siRNA,菲尔普1.0和2.0菲尔普质粒用Lipofectamine 2000 (GeneChem、上海、中国)。hUC-MSCs是与准备慢病毒转染(Lenti-TSG-6-siRNA或Lenti-GFP-siRNA)。hUC-MSCs被镀成6-well盘子或t - 75培养瓶细胞密度5000细胞/厘米2和孵化3毫升或10毫升MSCM-sf没有抗生素1天。然后,这些细胞转染了1毫升Lenti-TSG-6-siRNA媒介或Lenti-GFP-siRNA根据制造商提供的协议。12小时后,媒介被改变,这些细胞被孵化MSCM-sf顺序没有抗生素治疗3 - 4天。TSG-6基因在hUC-MSCs击倒的效率评估使用GFP-fluorescence观察和免疫印迹。然后,hUC-MSCs t - 75文化瓶用0.25%胰蛋白酶和resuspended收获 对后续的植入细胞1毫升无菌PBS的作用。
2.4。动物
所有研究坚持程序符合国际生物医学研究指导原则涉及动物发出的国际医学科学组织理事会(帮助),和所有实验协议机构批准的动物保健和使用委员会第四解放军总医院医学中心,按照美国兽医协会的指导方针进行安乐死的动物:2013版。六个雄性Wistar鼠(180 - 220 g)得到当地动物设施和居住的动物实验研究所的第四医学中心的解放军总医院在马厩22°C的温度,相对湿度55%,12/12小时的日夜循环,伴随食物和水随意实验。
2.5。实验小组
Wistar鼠随机分为5组:(1)虚假的,(2),(3)+ hUC-MSCs燃烧(燃烧和植入hUC-MSCs),(4) +车辆燃烧(燃烧和植入hUC-MSCs转染Lenti-GFP-siRNA),和(5)+ siTSG-6燃烧(燃烧和植入hUC-MSCs转染Lenti-TSG-6-siRNA)。每组大鼠同样分为三个子组6老鼠表示时间点的d1, d3, d7的样本收集。
2.6。动物治疗
老鼠麻醉与三溴乙醇(20毫克/毫升和300毫克/公斤)(美国σ2,2,2-tribromoethanol)通过腹腔内注射。背和腹部的头发完全剃。鼠模型回溯50%全层建立了烧伤病人通过将臀部和腹部到热水(94°C) 12和6年代,分别为(11,13,14]。腹腔内注入平衡盐溶液(40毫升/公斤)在所有组立即接种以防止休克。我们采取了20量度中央导管气管导管,而老鼠被限制在45°斜头朝操作员操作板。河鼠的上门齿与指甲的棉线固定一端的操作板,所以老鼠长大的,我们将喉镜插入嘴里。可以看到老鼠的声门的喉镜。气管导管很快插入气管时,声门开放(15,16]。老鼠燃烧+ hUC-MSC组立即收到了气管内的注入 (1毫升)hUC-MSCs后燃烧。老鼠燃烧+车辆和燃烧+ siTSG-6组收到的气管内的注入 (1毫升)hUC-MSCs转染Lenti-GFP siRNA或Lenti-TSG-6-siRNA在同一时间。老鼠在假针灸和烧伤组气管内的植入1毫升PBS。每组大鼠都是临床评估。烧伤伤口和老鼠骗局组治疗如前所述[11]。收集的血液和肺组织样本在每个时间点。与上面的麻醉剂麻醉后,老鼠的血液从下腔静脉中提取。然后,老鼠与过量戊巴比妥钠静脉注射安乐死。
在每个时间点指出的,下腔静脉的血液样本中提取,和肺组织样本收集。然后,老鼠与过量戊巴比妥钠静脉注射安乐死。
2.7。样本采集和检测
在所有组肺组织和血液样本被从主动脉ventralis d1, d3, d7受伤后。随后,一块肺标本被储存在液氮TSG-6使用酶联免疫试剂盒检测;同时,另一块是固定用4%多聚甲醛对免疫组织化学分析和圆)染色。设备的探测范围是从0.312 ng / ml到20 ng / ml。100毫克肺组织与PBS冲洗,均质1毫升的PBS,并存储在一夜之间−20°C。后两个冻融周期进行破坏细胞膜,匀浆是离心5分钟在5000 g 2 - 8°C。上层清液被除去,立即化验。标准是稀释根据制造商的指示。使用原液生产2倍稀释系列。混合一个管彻底后,下转移。 The undiluted standard serves as the high standard (20 ng/ml). The sample diluent serves as the standard zero.
2.8。组织学分析
与4%的多聚甲醛固定后1周在室温下,嵌入在石蜡标本的标本和分为five-micrometer-thick部分。然后,片与二甲基苯、deparaffinized水化,然后沾)按照标准程序。中性粒细胞和巨噬细胞的渗透检测通过孵化与特定的抗体(MPO、CD68;从研发系统、明尼阿波利斯、锰),相应的二次抗体,人民行动党(peroxidase-antiperoxidase)复杂反过来最后沾轻拍(3 3 - - - - - -diaminobenzidine)。髓过氧化酶(MPO)存在于细胞质中中性粒细胞和可以作为中性粒细胞在肺组织的一项指标。中性粒细胞的阳性反应是褐黄色彩色化。CD68 macrophage-specific抗原是巨噬细胞识别的直接证据。巨噬细胞是棕色的彩色化的积极反应。光学显微镜下随机,五个不同的视觉领域(400 x)的每个各自的部分是选择,和CD86 MPO-positive细胞数由一位有经验的科学家蒙蔽的方式。
2.9。西方墨点法
蛋白质从hUC-MSCs孤立使用缓冲区里帕(σ生命科学),包含及σ(生命科学)和完整的迷你蛋白酶抑制剂鸡尾酒(罗氏)。在3000 g细胞离心10分钟收集细胞核,然后,上层清液进一步在17000 g离心20分钟分离线粒体。细胞质在Laemmli稀释缓冲和变性在95°C 10分钟。蛋白质是量化使用商业bicinchoninic酸(BCA)工具包(BCA蛋白质检测设备;美国皮尔斯生物技术公司,罗克福德,IL)。受到等量的蛋白质sds - page凝胶(如前所述)(17),anti-TSG-6抗体(1:1000)和反β肌动蛋白抗体(1:20000)(研发系统、明尼阿波利斯、MN)用于蛋白表达分析。
2.10。酶联免疫吸附试验(ELISA)
100毫克肺组织冲洗和均质,然后存储在一夜之间在−20°C。样品进行破坏细胞膜;匀浆离心5分钟在5000μg (2 - 8°C。上层清液被移除。double-antibody三明治ELISA试剂盒(美国eBioscience)是用于检测肿瘤坏死因子-α(TNF -的水平α),interleukin-1β(il - 1β)、il - 6、il - 10、MPO和TSG-6肺组织和血清根据制造商的协议。
2.11。统计分析
所有的数据都表示为 并分析了使用SPSS 18.0(美国SPSS Inc .,芝加哥,IL)。方差分析的图基Cicchetti测试多个比较或非参数适当的克鲁斯卡尔-沃利斯检验被用于统计分析。是统计显著性水平 。
3所示。结果
3.1。TSG-6水平上层清液/ /血清和肺组织TSG-6击倒的效率
从hUC-MSCs调查TSG-6分泌是否影响他们的治疗效果,我们首先分析了从hUC-MSCs TSG-6分泌的水平治疗后血清的虚假或燃烧。与虚假的集团相比,烧伤血清的上层清液TSG-6水平显著增加体外postburn 24小时(图1(一))。体外培养的hUC-MSCs和小干扰rna或Lenti-TSG-6-siRNA Lenti-GFP转染。如图1 (b),代表照片展示了成功转染Lenti-GFP siRNA或Lenti-TSG-6-siRNA。免疫印迹的数据表明,TSG-6 Lenti-TSG-6-siRNA转染后表达明显减少车辆的价格相比(图组1 (c))。体内,TSG-6水平燃烧+ hUC-MSC组的肺组织与烧伤组相比均有显著增加在d1, d3, d7 postsevere燃烧(图1 (d))。同时,TSG-6燃烧+ hUC-MSC组的血清水平显著增加与体内燃烧组(图1 (e))。TSG-6肺组织和血清水平达到峰值在燃烧+ d3 hUC-MSC组。
(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
3.2。hUC-MSCs和TSG-6击倒结构性破坏的影响和总在肺组织炎性细胞浸润严重烧伤
我们评估治疗hUC-MSCs TSG-6击倒在结构变化的影响和渗透程度总在肺部炎症细胞的d1, d3, d7 postsevere燃烧使用)染色。如图2结构性破坏,而虚假的集团,包括肺泡融合、间质出血,肺泡渗出物,和渗透程度的总炎症细胞的肺组织燃烧,在d1显著增加。与此同时,这些变化不太严重的燃烧+ hUC-MSC小组d1。烧伤后破坏结构和炎性细胞浸润,如中性粒细胞浸润,间质水肿、肺出血,都逐步提高在d3和d7。然而,我们注意到燃烧+ hUC-MSCs恢复速度比其他组。此外,我们发现治疗效果的hUC-MSCs结构性破坏和总炎症TSG-6击倒(图后大幅下降2)。分别,我们计算的嗜中性粒细胞和巨噬细胞浸润引起的肺组织严重烧伤评估治疗的影响hUC-MSCs和TSG-6击倒在肺组织d1, d3, d7严重烧伤后用免疫组织化学染色。如图3与虚假的组相比,中性粒细胞浸润度烧伤组肺组织的显著增加,他们明显减少了hUC-MSC管理局( )。此外,数据显示,hUC-MSCs的治疗效果在中性粒细胞浸润肺TSG-6击倒(图后大幅下降3(一个))。在相应的直方图(定量分析报告 )(图3 (b))。如图4相比,与那些虚假的组中,巨噬细胞浸润程度的肺组织烧伤组明显增加,这是hUC-MSC植入术后显著下降( )。此外,数据显示,hUC-MSCs的治疗效果在肺巨噬细胞浸润TSG-6击倒(图后也大幅减少4(一))。在相应的直方图(定量分析报告 )(图4 (b))。它建议hUC-MSCs的治疗效果衰减burn-induced嗜中性粒细胞和巨噬细胞浸润依赖TSG-6表达的水平。Downregulation hUC-MSCs TSG-6表达式的显著降低他们的治疗功能改善结构破坏和总肺组织炎症细胞的渗透(数字2- - - - - -4)。
(一)
(b)
(一)
(b)
3.3。hUC-MSCs的影响以及TSG-6击倒在严重烧伤后肺组织炎性细胞因子
我们还测试了促炎细胞因子肿瘤坏死因子的水平α,il - 1β、il - 6和MPO和抗炎细胞因子il - 10在d1肺组织,d3, d7严重烧伤后使用ELISA。如图5虚假的集团,而促炎细胞因子的水平,如肿瘤坏死因子-α(图5(一个)),il - 1β(图5 (b)),il - 6(图5 (c)),和MPO(图5 (d)),肺组织的烧伤组明显增加,他们都明显下降后hUC-MSC管理局( )。值得注意的是,抗炎细胞因子il - 10的水平(图5 (e))在燃烧+ hUC-MSC组显著高于烧伤组和虚假的集团,在烧伤组也高于假组( )。
(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
尽管数据还表明,治疗效果hUC-MSC击倒TSG-6肯定增加了促炎细胞因子的水平,如肿瘤坏死因子-α,il - 1β、il - 6、MPO、减少肺组织中的抗炎细胞因子il - 10 ( )(图5)。
4所示。讨论
在过去的几年中,人类msc的细胞治疗ALI / ARDS引起了研究人员的兴趣,和治疗效果在不同的动物模型18- - - - - -20.]。研究表明,msc肺部疾病的治疗效果在各种临床前模型通过直接分化和旁分泌作用[21- - - - - -23]。的确,有一些msc,存活超过一周后系统性管理,表明msc的主要作用可能是通过旁分泌机制介导的(24]。
阿里只有严重烧伤或烫伤引起患者在临床并不罕见,尤其是在孩子。在目前的研究中,我们建立了一个严重burn-induced ALI大鼠模型研究hUC-MSCs的疗效及其可能的机制。我们发现气管内的植入hUC-MSCs增加存活率显著衰减严重burn-induced阿里通过抑制肺部炎症,治疗效果的hUC-MSCs强烈减少当TSG-6的表达通过RNA干扰抑制。它表明hUC-MSCs严重burn-induced ALI大鼠的治疗效应与可溶性因子有关TSG-6分泌hUC-MSCs本身。
我们创建了一个鼠模型通过严重烧伤与古典肺部炎症状态(13,14,25]。肺损伤的严重程度是由几个病理特征参数,就像图中描述(数据2- - - - - -4)。这些病理变化都是密切相关的人类阿里,这说明我们的模型成功地复制人类阿里。这些参数都是改善hUC-MSCs气管内的注入之后,这表明hUC-MSC植入术的疗效严重burn-induced阿里。这些发现证明了气管内的注入hUC-MSCs衰减严重burn-induced ALI大鼠肺损伤。我们与其他先前的研究结果是一致的,政府的hUC-MSCs或者BM-MSCs减少系统性炎症和减毒LPS-induced ALI大鼠(26]。
阿里是一种无法控制的肺部炎症性疾病,其特征是细胞因子的释放和中性粒细胞积聚。中性粒细胞是主要被召集的炎症和细胞释放炎性细胞因子。巨噬细胞是另一个主要的细胞中存在促炎(M1)或抗炎(M2)状态,作为引发的炎症反应,导致炎症的起始和分辨率。MSC与抗炎治疗可以调节巨噬细胞表型,同时增强巨噬细胞的吞噬活动(27]。在我们的研究中,中性粒细胞的浸润和巨噬细胞在肺组织烧伤组明显增加,肯定与hUC-MSCs接受治疗后减少。这缓和剂hUC-MSCs曾经证实的肺损伤犬辐射诱导ALI模型通过减少氧化应激,炎症反应,和TGF -β-Smad 2/3途径激活(28]。
MPO酶存储在中性粒细胞和巨噬细胞释放到细胞外液在炎症过程的设置。自MPO是一个重要的酶在炎症过程中,有一个持续的兴趣MPO的使用作为一种生物标志物来评估本研究炎症反应的程度。严重烧伤后,显著增加MPO烧伤组肺组织中检测到,并在d1的峰值水平。正如我们所料,hUC-MSCs治疗明显降低MPO活性在d1, d3, d7。以前,李等人发现,静脉输液hUC-MSCs显著抑制大鼠肺组织中LPS-stimulated MPO活性(26]。降低MPO活性表明改善肺损伤的治疗效果和确认hUC-MSCs burn-induced肺损伤通过促进抗炎体内平衡。
促炎细胞因子TNF -α,il - 1β和il - 6的主要介质急性期反应。先前的研究表明,嗜中性粒细胞减少,肺组织的招聘和抑制TNF的表达α,il - 1β,il - 6可以提高阿里的结果(29日]。其他一些研究也表明,msc可以降低血浆TNF水平α和il - 1β通过旁分泌分泌30.]。与之前的研究一致,这些炎性细胞因子水平的增加严重burn-induced阿里的被发现在我们的模型中。严重烧伤后,TNF -的浓度α,il - 1β和il - 6的分泌明显增加。峰值水平的差异仅仅是发生在不同的时间。肿瘤坏死因子-α和il - 1β,出现在d1的峰值水平,而il - 6水平峰值出现在d3。hUC-MSCs气管内的植入后燃烧时,肺组织中促炎细胞因子的浓度显著下降,这是与以往的研究主要集中在协议证明BM-MSCs可以降低TNF -α和il - 6分泌肺巨噬细胞通过旁分泌途径或直接接触宿主细胞(30.]。我们的研究结果也证实hUC-MSCs能够防止肺损伤通过减少炎症反应。
白细胞介素- 10”(il - 10),其中最重要的抗炎细胞因子,减少促炎细胞因子的合成。il - 10的治疗应该是一个有前途的治疗策略,减少肺损伤(30.- - - - - -32]。一些人认为阿里的发展与减少表达和分泌il - 10的33]。然而,在我们的研究中,il - 10水平上升在烧伤后肺组织损伤,并进一步hUC-MSC政府后明显升高。因此,il - 10在肺部炎症反应的保护作用,曾被描述在先前的研究中,可能部分解释机制hUC-MSCs施加严重burn-induced阿里的治疗效果。
根据以上的发现,它可以推断出,hUC-MSC政府改善阿里的内稳态平衡细胞因子网络。此外,我们想知道更多关于hUC-MSCs是怎么工作的。在我们之前的研究中,我们发现TSG-6水平显著升高烧伤大鼠全身炎症反应。TSG-6表达式是诱导炎症反应的结果。我们的数据表明,严重burn-induced阿里可以上调TSG-6的表达,这是符合我们之前的研究(11]。更高水平的TSG-6燃烧+ hUC-MSC组可能与TSG-6 hUC-MSCs分泌的炎症反应的信号。测试我们的假设和调查TSG-6的角色,TSG-6击倒实现通过RNA干扰通过转染核中TSG-6 ALI大鼠模型。燃烧+ siTSG-6组TSG-6水平显著下降。同时,病理改变和炎性反应燃烧检测+ siTSG-6集团和燃烧+汽车集团。这些结果表明,hUC-MSC植入的功效,包括改善肺功能和肺的新陈代谢功能,保护肺组织结构,减少炎症细胞浸润,抑制促炎细胞因子,抗炎和促进表达,被TSG-6击倒了。我们的数据推断的消炎hUC-MSCs严重burn-induced阿里解释,至少部分由hUC-MSCs分泌TSG-6的激活。这些研究进一步证明TSG-6分泌蛋白是一种炎症反应,涉及有重要的和多样化的组织保护和抗炎作用34]。我们的研究结果显示,观察到的有利影响动物模型的hUC-MSCs阿里和建议的抗炎特性hUC-MSCs肺中解释说,至少在某种程度上,通过hUC-MSCs分泌TSG-6的激活。肿瘤坏死因子α刺激gene-6 (TSG-6), 30 kDa蛋白质生成的激活巨噬细胞,调节炎症;然而,它在激活的巨噬细胞的作用机制和作用并不完全理解。从我们以前的报告11]和文献[35),我们可以发现与MyD88 TSG-6抑制TLR4协会,从而抑制NF -κB激活。TSG6也阻止炎性蛋白的表达(伊诺、il - 6、TNF -α,il - 1β和处于受控),同时增加抗炎蛋白的表达(CD206, Chi3l3、il - 4和il - 10)在巨噬细胞。这种转变与抑制促炎的转录因子的激活STAT1和STAT3。因此,TSG-6函数转换巨噬细胞的促炎与抗炎表型次生抑制TLR4 / NF -κB STAT1和STAT3信号激活。
众所周知,提供本地的优势与相对较小的剂量直接到达靶器官,更快,更强的有效性,且系统性不良反应。在临床环境中,医生更喜欢使用药物通过气管内的管理或气溶胶吸入肺部疾病患者,特别是严重的病例。因此,我们选择了气管内的植入药物的路线。同时增加剂量的药物可能增加治疗的疗效,我们不能排除系统性不良反应和更多的浪费资源造成更大的剂量。考虑到这些因素,我们选择的最佳剂量hUC-MSCs ( )建议在我们之前的研究(36]。
在我们的鼠模型中,建立了全层燃烧伤害通过将臀部和腹部进热水,但不是胸部,所以阿里是由于严重burn-induced过度炎症和严重的代谢紊乱,而不是全层腐蚀剂燃烧在背部和腹部。
尽管50%回溯烧伤严重,我们设法避免的死亡大鼠模型。在早期的研究中,我们执行一致的治疗方法如下:受试者保暖然后腹腔内注入平衡盐溶液(40毫升/公斤)被立即实施防止冲击。然后和烧伤创面采用了1%的碘酊,保持干燥,防止感染。
我们所知,这是第一次报告的疗效评价hUC-MSCs严重burn-induced阿里。从hUC-MSCs TSG-6分泌发挥了关键作用严重burn-induced阿里通过抑制肺组织炎症反应。它表明气管内的植入hUC-MSCs是一种有效治疗严重burn-induced ALI大鼠模型。TSG-6 mRNA表达的同时,击倒hUC-MSCs没有完全废除抗炎作用表明一些其他未知的机制。这意味着需要额外的实验来确定这些因素的相对贡献的有利影响hUC-MSCs肺损伤。
缩写
| 肿瘤坏死因子-α: | 肿瘤坏死因子α |
| TSG-6: | 肿瘤坏死因子-α刺激基因/蛋白6 |
| hUC-MSC: | 人类脐cord-derived间充质干细胞 |
| 阿里: | 急性肺损伤 |
| ELISA: | 酶联免疫吸附试验 |
| ARDS: | 急性呼吸窘迫综合征 |
| MSCM-sf: | 间充质干细胞无血清培养系统中 |
| 绿色荧光蛋白: | 绿色荧光蛋白 |
| MPO: | 髓过氧物酶 |
| CD68: | 68年集群的区别 |
| 核: | 小干扰RNA |
| PMSF: | Phenylmethanesulfonyl氟化 |
| IL: | 白介素。 |
数据可用性
所有作者都确保所有数据和材料以及软件应用程序或自定义代码支持我们发表声明并遵守现场的标准。手稿中所有材料包括数据、表或文本段落是起源于作者。
伦理批准
本研究通过解放军总医院第四医学中心伦理委员会。实验过程都是按照国际准则帮助发行的生物医学研究的实验动物。样本收集后,老鼠安乐死安乐死的动物的兽医指南:2013版。
信息披露
我们承认,一个相同的手稿提出了预印本版本根据以下链接:https://www.researchsquare.com/article/rs-127492/v1由于没有同行评审和正式出版。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
作者的贡献
所有作者的研究理念和设计。材料制备、数据收集和分析由Lingying Liu于王,延安刘、李中原。第一稿的手稿是萧红胡锦涛和玉王写的。手稿被萧红胡锦涛和Yonghui Yu修订。所有作者阅读和批准最终的手稿。
确认
我们感谢杨京博士,小李,龙龙的杨,顺义聂动物实验的支持。我们感谢刘廖凯原语言修改。我们承认这笔赠款支持中国的国家自然科学基金(国家自然科学基金委81701900和81701900)。