抗凝剂的选择影响骨髓抽出物的特点集中和间充质干细胞在体外生物活性

文摘

骨髓抽出物集中(BMC)通常被用作治疗代理解决骨科损伤,利用其独特的多孔性减少炎症和修复的主要地区。骨髓的愿望执行使用柠檬酸钠(SC)或肝素钠(HS)作为抗凝剂通过离心集中细胞成分和加工。到目前为止,考虑两个常用的抗凝剂的影响在间充质干细胞/基质细胞(MSC)人口一直被忽视。当前的研究评估的差异产生的bmc使用15% SC和HS 1000 U /毫升或100 U /毫升决赛 作为抗凝剂使用体外指标包括总有核细胞计数(TNC)和生存能力,能力为间充质基质/干细胞(MSC)与纤维母细胞建立菌落形态(CFU-f)和细胞因子的表达谱MSC文化。我们的研究结果表明,HS-derived BMC文化导致更高的CFU-f形成和CFU-f频率在浓度评估相比SC-derived BMC的文化。此外,有显著差异在27% 26(7)的细胞因子量化HS-derived BMC文化相比SC-derived BMC文化对MSC可塑性和自我更新。

1。介绍

使用骨髓抽出物(BMA)和BMA集中(BMC)已成为越来越受欢迎的在治疗或处理与整形和肌肉骨骼疼痛相关条件(1- - - - - -3在外科手术中作为一个兼职4,5)调节慢性炎症/病变组织的微环境1]。BMC的好处是认为与间充质干细胞/基质细胞(MSC)人群,是独一无二的在造血调控作用(s) (6- - - - - -8]。临床上,BMC的总体质量通常是与三个指标:(1)总有核细胞计数(TNC),(2)可行性,和(3)菌落纤维母细胞形态(CFU-f);CFU-f计数作为代理MSC。过渡委员会定量的理由是,msc在低频率下发生在有核细胞(0.0004% ~ 0.01%,新生儿~ 30岁,≤0.00025%,50岁及以上(9)因此,更高的过渡委员会数量据称将导致更多CFU-fs。然而,这种逻辑最近争议(10,11]。而其他的角色包括CD34细胞的骨髓⁺造血祖/前体[12)细胞和血小板(13)已被建议作为贡献者BMC的治疗价值,msc在BMC的价值仍然是一个顶峰。

技术在收获、加工、体积和剂量/ BMC是公认的不一致,有问题在确定orthobiologic的价值。骨髓抽出物的收获可以通常通过使用柠檬酸钠(SC)配方包含配方(包括酸柠檬酸和葡萄糖)或肝素钠(HS)。然而,抗凝剂选择的影响却没有得到足够关注和制造商BMA处理设备创建BMC建议使用抗凝剂是可以接受的。从力学上看,作为抗凝血剂SC和HS功能不同。柠檬酸、活跃的抗凝剂SC是一个二价阳离子螯合化合物,作为抗凝剂主要是通过减少细胞外环境中的二价离子的可用性(即。、钙^{2 +}和毫克^{2 +}血小板激活),而这些医院是主要参与者,凝血酶活动,和血栓/纤维蛋白凝块的形成14]。相比之下,肝素是一种自然合成高硫酸粘多糖(GAG)与抗凝血酶III作为抗凝剂主要是通过络合作用,导致抑制凝血酶酶活性(15]。然而,海关是一个多样化的插科打诨和几个生物角色之外的功能作为抗凝剂(16),包括抗炎作用[17),这可能会影响细胞功能的下游BMA集合。

目前的体外研究的目的是确定是否SC和HS不同影响BMC质量,使用过渡委员会,生存能力,和CFU-f作为指标,以及在BMC体外培养细胞因子量化评估潜在细胞表达谱的差异造成了BMC处理每个抗凝。Donor-matched bma收集使用临床相关的剂量的SC(15%决赛 )[18)和HS (1000 U /毫升和100 U /毫升决赛 )[19- - - - - -21]。在这里,我们发现bma的短暂接触到各个抗凝处理BMC的结果在不同的BMC的产品质量的差异。

2。材料和方法

2.1。捐赠样本采集、同意和人口统计数据

捐赠者都是病人安排在BMC干预对肌肉骨骼条件,要求至少有两个BMA吸引(50 mL /画)。那些参加了本研究同意捐赠 毫升的最后BMC产品来源于各自的抗凝血剂(8.0 -10毫升每BMC总,下面描述)进行体外分析。病人治疗是没有办法改变的结果同意捐赠BMC标本。系列1包含8女性和6男性与从27岁到76岁平均年龄为54。系列2包含8女性和男性5从34 - 77岁,平均61岁。

2.2。收获准备和过程

所有捐助者参加在这项研究中,两个50毫升BMA吸引进行每个画包含两个各自的抗凝血剂之一。注射器被贴上任意为盲人医生从抗凝的身份。对于每一个捐赠者,骨髓是吸气双边后部棘;抗凝剂用于第一个愿望是随机的。SC(柠檬酸钠40毫克/毫升原液,加剧Fagron消毒服务,美国)被使用在所有情况下最后的15% 股票的解决方案和HS(美国费森尤斯公司Kabi肝素钠)是在两个不同的浓度,使用1000单位/毫升(U /毫升)和100 U /毫升决赛 (系列1和2,分别);1 ~ 120 mg的HS - 140 U /毫升(22]。简要冲洗注射器和11-gauge套管针/涂上商品解决方案在抗凝血剂BMA愿望之前加载。

2.2.1。系列1

对于所有捐助者( ),总共7.5毫升SC的解决方案是添加到60毫升注射器。1000 U /毫升HS系列,5毫升10000 U /毫升是添加到60毫升注射器。额外的2.5毫升无菌生理盐水被加入到HS-containing注射器调整最终体积7.5毫升,匹配SC-containing注射器的体积。在愿望,注射器都与BMA 50毫升。

2.2.2。系列2

在所有捐助者( ),HS是用于100 U /毫升决赛 ;SC最终保持在15%的水平 在这里,1毫升5000 U /毫升商品添加到60毫升注射器。骨髓的愿望导致了42.5毫升BMA SC-containing注射器和49毫升HS-containing BMA的注射器。量不平衡的系列1中使用生理盐水作为执行之前为了评估抗凝剂使用典型的临床实践之间的差异。

在每个系列生产BMC, bma加载到无菌50毫升锥形管和离心2200相对离心力(RCF) 8分钟。淡黄色的外套被收集和recentrifuged 2200 RCF 5分钟。巴菲外套收集,避免破坏红细胞的接口。巴菲外套然后收集成卷的,总共有8 - 10毫升(最终体积)和残余包含各自的抗凝剂的等离子体。

2.3。总有核细胞量化

bma的bmc, 10μ从每个样本稀释1 L: 100年0.1% Triton x - 100 (permeabilize有核细胞)包含3.61μ米4 ,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)。立即,10μL染色的标本被加载到纽鲍尔血细胞计数器/计数室。的四个的图像 计数室网格被抓获在相衬和在104 x荧光下使用一个AMG EVO FL显微镜总放大和DAPI“光立方(357/44BP nm激发;447/60BP海里排放)。相衬和荧光图像被显示为每个四个网格,和有核(DAPI⁺)细胞得分。有核细胞计数测定根据平均计数在四个领域调整各自的稀释因子得分和报告每毫升BMA / BMC。

2.4。细胞生存能力

bma的bmc, 10μ从每个样本稀释1 L: 100年的磷酸盐(Gibco,猫。包含4.02 # 10010 - 023)μ钙黄绿素,acetoxymethyl酯(calcein-AM)和3.61μ如前所述(M DAPI impermeant在细胞水平23]。细胞悬液孵化在37°C 30分钟然后简要漩涡。10μL染色的标本被加载到纽鲍尔血细胞计数器/计数室。产生如上所述图像捕获和覆盖的第三个通道检测钙黄绿素通过GFP荧光光立方(470/22 nm激发;510/22 nm发射)。数量从4 网格平均,可行性报告的比例 和 或钙黄绿素^{- - - - - -}/ DAPI⁺。

2.5。克隆形成单位与纤维母细胞形态学分析

每个介绍了BMC文化后立即处理。总共有100μL的BMC加入5毫升细胞培养基(杜尔贝科的修改鹰介质(Gibco,猫。# 10567 - 014))补充10%胎牛血清(峰值血清,猫。# PS-FB2)和0.6 U /毫升HS(防止介质凝固)25厘米²细胞培养瓶,建立粘附细胞的文化。文化是维持在37°C, 5%的公司₂。在第五天,媒介是吸气和文化与磷酸盐(PBS)(洗Gibco,猫。# 10010 - 023)删除不依从细胞和添加了新媒体文化。文化保持12 - 14天,CFU-fs量化。随着MSC人口是异质的,可能以不同的速率扩散(24),与纤维母细胞紧密聚集细胞包含≥25组细胞形态得分为殖民地。CFU-f频率取决于CFU-f计数/毫升除以全国过渡委员会数/毫升,导致CFU-f形成细胞的百分比在最初的细胞群。

2.6。蛋白质的定量测定

镀处理后,SC和HS-BMC符合系列2中的方法和培养CFU-f分析中描述。镀后立即和简短的混合,100μL(媒体再次取样(0)和第5天(中采样前PBS洗和介质替换)和12。媒介样本离心机在10000 RPM的微型离心机> 30秒去除细胞/碎片,和上层的收集和储存在-20°C到化验细胞因子。细胞因子是化验使用microbead数组。每个prevalidated数组从BioLegend购买(猫。# 740180,猫。# 740502)。样品按照制造商的说明进行了处理和分析。珠子是化验用贝克曼库尔特CytoFLEX年代;分析所有fcs文件来确定蛋白质浓度是通过BioLegend Qognit基于云计算的软件。

2.7。统计分析

系列1和2中,所有的SC和HS准备供者匹配和比较了TNC计数/毫升,生存能力,CFU-f计数/毫升,CFU-f频率通过成对双尾 - - - - - -测试。对比HS-BMC制剂包含100 U /毫升和1000 U /毫升不是供者匹配,并通过一个未配对的双尾执行统计分析 - - - - - -检测上述指标。细胞因子浓度不同生长因子和免疫调制剂之间的比较。对生长因子donor-matched SC和HS-BMC文化之间的比较,这是假设HS-growth因子复合物将延长半衰期的蛋白质体外(讨论中描述)。因此,称为单侧配对 - - - - - -在每个时间点测试使用。海关可能会反的影响或促炎,对比SC和HS文化浓度immunomodulating因素是使用配对双尾 - - - - - -在每个时间点测试。置信区间将对所有分析> 95%。所有测试执行通过统计分析软件v9.3.1 GraphPad棱镜。

3所示。结果

3.1。系列1:15%相比SC 1000 U HS /毫升

3.1.1。SC和HS导致不同的过渡委员会数量在最后BMC BMA的平等开始卷

在对比SC和HS 1000 U /毫升、TNC计数SC-BMCs(每毫升显著高于 ,图1(一))。在这里,平均过渡委员会 /毫升(+ / - -7.72) SC /毫升(+ / - -5.75)——和HS-BMC跨国公司,分别。

3.1.2。细胞生存能力不显著影响SC或海关后处理

后立即处理,生存能力没有明显影响选择的抗凝剂( ,图1 (b))。生存能力平均95.53%(+ / - -0.51)和95.93% (+ / - -0.87)SC HS-BMCs,分别。

3.1.3。CFU-f SC和HS-BMC产品数和频率是不同的

CFU-fs打进了成对的SC -和HS-BMC产品匹配的时间点。每毫升,HS-BMCs显示显著增加CFU-fs SC-BMCs相比,平均540 CFU-f /毫升(+ / -90)和170 CFU-f /毫升(+ / - -27.91),分别为( ,图1 (c))。占镀跨国公司的差异,CFU-f频率相对于各自的过渡委员会评估。镜像CFU-f计数的结果,在HS-BMCs CFU-f频率显著升高(0.0013% (+ / - -0.0003))SC-BMCs相比(0.00027% (+ / - -0.00005)( ,图1 (d))。

3.2。系列2:15% SC 100 U /毫升海关

3.2.1之上。SC和HS BMA集合没有稀释导致类似的过渡委员会统计最后的BMC

模拟临床实践,生理盐水稀释并不是一个因素,调查的可行性较低浓度的HS(最终U /毫升),42.5毫升BMA收集7.5毫升SC(50毫升)和49.0毫升BMA成1毫升HS的解决方案(材料与方法中描述)。凝血在这两种情况下没有被观察到。在本系列,过渡委员会记录BMA和BMC SC和HS条件允许褶皱变化最终BMC计算。与全国过渡委员会系列1中收集的数据,SC-BMC和100 U /毫升HS-BMC导致类似的过渡委员会数/毫升导致 (+ / - -9.86) (分别为+ / - -8.22)( ,图2(一个))。此外,计算折叠变化在BMC过渡委员会开始BMA显示没有区别的SC和HS组(3.51(+ / - -0.31)和3.76(+ / - -0.42)成倍增加,分别)(图2 (b))。

3.2.2。在SC-BMC不同于HS-BMC可行性

处理后,生存在SC-BMC HS相比显著降低(100 U /毫升)的bmc。SC-BMC,生存能力是95.18%(+ / - -1.02)而HS-BMC生存能力是98.50% (+ / - -0.48)( ,图2 (c))。

3.2.3。CFU-f SC和HS-BMC产品数和频率是不同的

评估CFU-f donor-matched SC /毫升和100 U /毫升HS-BMCs镜像系列1中观察到的结果。这里,SC-BMC CFU-f计数187个每毫升(+ / - -45.25)平均1037年相比显著降低(+ / -153)CFU-fs HS-BMCs每毫升( ,图2 (d))。同样,CFU-f形成细胞在全国过渡委员会的频率为0.0002854% (SC-BMC文化+ / - -0.000083)和0.0015% (+ / - -0.00028)HS-BMC文化( ,图2 (e))。总的来说,HS-BMC文化产生更健壮CFU-fs相比HS-BMC文化(图3)。

3.3。对比1000 U /毫升和100 U /毫升海关

3.3.1。bmc包含HS 100 U /毫升和1000 U /毫升不同过渡委员会

全国过渡委员会数量的bmc包含1000 U /毫升HS相比显著降低含100 U /毫升。平均而言,全国过渡委员会数量 (+ / - -5.75) (分别为+ / - -8.22)( ,图4(一))。

3.3.2。更高的细胞生存能力的bmc HS浓度的影响

1000 U /毫升HS-BMCs,平均生存能力是95.93%(+ / - -0.87)相比,98.50%(+ / - -0.48)包含100 U的bmc /毫升HS(图4 (b))。两组之间的差别十分明显( )。

3.3.3。增加CFU-f计数在bmc HS浓度较低

BMC CFU-f数量平均含100 U /毫升HS 1034 CFU-fs /毫升(BMC + / -153),这是相比更高的BMC含1000 U /毫升,平均540 (+ / -90)CFU-fs BMC /毫升( ,图4 (c))。然而,CFU-fs的频率的差异对两者之间的过渡委员会统计不显著HS组( ,图4 (d))。

3.4。细胞因子/趋化因子资料SC和HS-BMC文化之间的不同

HS和SC文化的差异,尤其是对CFU-f 12天的文化的形成时期,表明可能有可溶性因子的浓度的增加商品文化相比,SC的文化。SC和100 U /毫升HS组相似的初始过渡委员会统计,donor-matched吸引是化验系列2中所述。细胞因子/趋化因子在天化验0 5和12检测动态变化。

生长因子的化验,没有显著差异在任何时间点SC - 100 U /毫升HS组g - csf, EGF, EPO(促红细胞生成素)FGFb / FGF-2, gm - csf, csf, PDGF-BB,自洽场或TGF -α(数据没有显示)。炎性介质的化验,没有显著差异的团体之间的任何时间点IL-12p70, TNF -α、il - 4、il - 10、il - 1β、精氨酸酶CCL17 / TARC IRAP,干扰素-γ或CXCL10 / IP-10(数据没有显示)。细胞因子在SC和HS文化之间的差异是显著的时间内下面的课程。

3.5。生长因子

3.5.1。Angiopoietin-2

angiopoietin-2水平没有差异在每天0或5组。通过12天,SC组和HS组平均122.6 pg / mL(+ / - -15.1)和159.6 pg / mL(+ / - -26.75),分别,HS-BMC文化有显著提高SC-BMC文化( ,图5(一个))。

3.5.2。HGF

BMC处理和电镀(0)天之后,HGF浓度明显升高在8.06 pg / mL HS-BMC文化(+ / - -1.08)相比,SC文化6.76 pg / mL (+ / - -0.084) ( ,图5 (b))。后一个时间点显示HGF水平上升而第0天在这两种文化群体虽然没有差别。

3.5.3。PDGF-AA

在0和5天,没有差别水平之间的PDGF-AA SC -和HS-BMC文化。白天12日的PDGF-AA HS-BMC文化25.22 pg / mL(+ / - -6.24)相比显著升高SC-BMC文化场均8.34 pg / mL (+ / - -1.55) ( ,图5 (c))。

3.5.4。VEGF

VEGF浓度没有显著不同的SC -和HS-BMC文化在每天0和5。在12天,HS-BMC文化在SC-BMC文化的VEGF水平明显升高,含量970.60 pg / mL(+ / -278)和109.20 pg / mL(+ / - -23.97),分别为( ,图5 (d))。

3.6。免疫调制剂

3.6.1。il - 6

没有区别的SC -和HS-BMC文化il - 6浓度在前两个时间点。在12天,il - 6水平明显升高HS-BMC文化(22597 pg / mL + / - 5666)相比,SC-BMC文化(3522 pg / mL + / - 915.8) ( ,图6(一))。

操作。IL-12p40

在0和5天,没有差别的水平IL-12p40 SC -和HS-BMC文化。在12天,IL-12p40水平13.80 pg / mL(+ / - 3.61)在HS-BMC文化中,这是相比显著升高SC-BMC文化场均9.28 pg / mL (+ / - 2.41) ( ,图6 (b))。

3.6.3。IL-23

没有区别IL-23水平观察SC和HS-BMC文化之间每天0或5。HS-BMC文化在12天表现出更高水平的IL-23 (2.11 pg / mL + / - 0.40)相比SC-BMC文化(1.02 pg / mL + / - 0.23) ( ,图6 (c))。

4所示。讨论

本研究的目的是评估的BMC制剂包含SC或商品的差异,这两种用于骨髓愿望(21,25]。我们的研究评估两个不同浓度的HS, BMA收集到海关解决方案导致临床相关的最终浓度的HS 1000 U /毫升和100 U /毫升BMA [20.,21),分别代表系列1和2。

系列1,SC吸入导致更高的过渡委员会数量相比,海关没有细胞生存能力差。这些数据表明,使用SC一贯导致更高的过渡委员会数相比volume-matched HS最后BMC产品解决方案。然而,在这一阶段的研究中,最初BMA跨国公司没有量化;因此,它是未知的,如果这个结果是由于更高的初始过渡委员会BMA或者淡黄色的外套是更高质量的SC-BMC HS-BMC相比。既是BMC镀产品基于体积,没有过渡委员会,我们预期观察SC-BMC CFU-f计数升高,没有差异的频率之间CFU-fs SC - HS-BMC组。与预期的结果,HS-BMCs明显升高CFU-f计数每毫升和频率在跨国公司相比SC-BMC文化。这个显著的区别是一个强大的指示器,HS是提供一个天生的生化MSC人口受益。

模拟临床实践中,临床医生不会稀释HS匹配SC卷以15%的最终解决方案 和检查低剂量的HS系列2的研究设计。不管体积较大的起动BMA SC组相比,HS集团在本系列(49.0毫升 分别为42.5毫升BMA),没有差别在BMA全国过渡委员会统计,bmc来源于两种抗凝剂。此外,在BMC过渡委员会数成倍增加各自BMA基线SC和HS组之间没有差别。综上所述,这些数据表明,SC和HS系列中使用的卷2导致等效BMA和BMC产品在使用过渡委员会数作为指标。

尽管TNC等价计算每毫升SC和HS组串联2,CFU-f数量和频率的差异是显著的高于HS组。与系列1中的结果一致,这表明商品提供一个msc(未知)的优势。重要的是要考虑到体积镀后立即处理文化传媒(100稀释50倍μL BMC在媒体5.0毫升),这将表明抗凝是无效的文化的影响,因此,两个各自的抗凝血剂的影响在处理过程中可能发生的(下面讨论)。

比较100 U /毫升和1000 U /毫升HS条件BMC准备了几个有趣的差异。主要是,这是对CFU-f数量和频率在全国过渡委员会。实际是假定过渡委员会和CFU-f数量将两个HS组之间的波动,随着BMA画量不同,这个案子。然而,CFU-f频率没有差异100 U /毫升和1000 U / mL HS-BMCs,证明BMA的质量/ BMC的两个各自的团体是等价的。

检查,如果检查参与组成分泌腺的BMC的细胞之间的文化不同SC HS-BMC准备,26个细胞因子/趋化因子在细胞培养基化验。细胞因子的评估,那些增加HS-BMC文化在SC-BMC文化angiopoietin-2, HGF, PDGF-AA, VEGF、il - 6, IL-12p40, IL-23。这是SC - HS-BMC文化之间差异的证据secretomes尽管目前尚不清楚如何重要(或没有)这几个因素导致CFU-f大型微分计算和频率之间的抗凝剂的条件。每个已知细胞因子与肝素(26- - - - - -29日),有可能延长他们的半衰期的保护蛋白水解降解或加强他们的信号功能通过促进扩展相互作用与细胞表面受体(30.- - - - - -33]。有趣的是,一些细胞因子的化验与HS和促进MSC增殖(例如,bFGF / FGF-2 [34,35SC -])没有显示显著差异和HS-BMC文化在任何时间点。虽然没有观察不同浓度的几个因素化验在各自的文化中,我们也不能排除肝素的优势与这些生长因子,促进交流中的相互作用,延长细胞内的信号转导,并增加核扩散和CFU-f形成。

之间的不同的细胞因子浓度条件下,VEGF和il - 6水平继续增加在每个后续时间点HS-BMC文化,建议积极表达在体外。这是有趣的,因为通过哺乳动物MSC VEGF表达提出了直接与MSC效力和扩散36,37]。有人建议,msc不分泌足够的VEGF水平在体外表达VEGF, msc自分泌信号转导演示增加扩散,使得我们的研究结果提供更有趣的SC和HS文化差异的大小,有重要的临床意义。而il - 6通常被视为一种促炎的蛋白质,这一事实il - 6反和促炎的调节活动是经常被忽视38]。il - 6是一个关键的球员保留MSC作为祖细胞和辅助在MSC增殖。Pricola等人的体外研究表明,使用10 ng / mL的il - 6在离体培养的MSC增加细胞增殖和留存MSC /可塑性“具备干细胞”。此外,研究表明,siRNA-mediated击倒的il - 6表达通过msc在体外显著降低扩散(39]。这些结果强烈支持我们的观察对il - 6浓度和CFU-f形成HS-containing BMC的文化。我们推测,HS cytokine-receptor数组交互影响,改变细胞内的信号级联和细胞表达谱包括VEGF和il - 6的分泌。

当我们找到充足的证据表明,HS至少似乎稳定大量的细胞因子在这些实验条件和增加别人的表情,重要的是认识到何时何地,这正在发生。的BMC产品都严重稀释培养基(含有低水平的商品在所有情况下)镀时,实际的区别两个准备不太可能由于文化条件,而是在处理商品的影响。通常,处理需要30 - 40分钟,BMA收集和最终注入之间;时间可能是60 - 90分钟。在这段时间里,外生HS用作抗凝积极络合与细胞因子和细胞表面受体。一旦最终BMC产品生产,这些交互是可信的稳定和延续到文化。

我们假定HS的机制导致CFU-f数量的增加和CFU-f频率相比SC在体外通过以下:(1)HS-cell受体复合物加剧细胞因子与受体的相互作用,导致胞内信号转导和导致扩散和表达谱改变(VEGF / il - 6生产),和(2)细胞因子与HS导致半衰期延长。商品推广和扩展cytokine-receptor交互的能力可能是一个重要影响细胞因子浓度无显著差异在报道虽然可能是命令式的戏剧性的差异CFU-f SC之间数据和HS BMC文化。平移,这将表明HS-processed BMC是有利于人类msc的增殖能力和填充位置之外的骨髓和外国微环境改变,导致改进的可行性和临床结果一致。然而,我们不能排除这样一种可能性,即使用抗凝血剂影响MSC浓度和/或生存在最后BMC产品,导致CFU-f指标的差异报告。MSC-specific表面标记的评估可能的bmc通过流式细胞术在电镀之前至少会部分解决这个问题,不存在公认的面板来识别不同的亚种群的骨髓msc (21,40- - - - - -43]。

5。结论

我们的结果清楚地显示,HS和SC可以用作抗凝剂在BMA收集获取类似的过渡委员会计数在BMC /毫升和细胞生存能力的产品。然而,heparinized-BMC产品显示增加CFU-f计数/毫升和CFU-f频率相比SC-BMC准备。此外,HS似乎影响骨髓利基细胞因子稳定性和体外可能功能,提供了一个潜在的机械解释差异CFU-f SC -和HS-BMC文化特征。这些结果表明,BMC的临床使用应该把商品作为抗凝剂与SC。然而,未来的临床研究评估结果在SC -和HS-BMC准备将辅助来促进这个假定。

数据可用性

和/或使用的数据集分析在当前研究可从相应的作者以合理的要求。

附加分

临床意义。海关作为抗凝剂的使用是有利的在BMC收集检查参与组成分泌腺MSC增殖和相关的临床治疗价值。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

RCD负责构思、设计、数据分析,手稿起草、手稿修改,提交草案的最终批准。耶和华是负责数据采集,数据分析,手稿修改,提交草案的最终批准。LSK负责概念、实验设置、标本处理、手稿修改,提交草案的最终批准。EJD负责概念、样品采购、手稿修改,提交草案的最终批准。

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