文摘

高尿酸血是一种代谢紊乱,炎症痛风的发展至关重要,近年来越来越流行。新兴的临床结果证明显著的肌腱损伤患者长期无症状高尿酸血,然而,高尿酸血对肌腱体内平衡的影响和相关的影响在很大程度上是未知的。在这里,我们调查是否无症状高尿酸血与自发破裂跟腱和高尿酸血的病理影响肌腱干细胞/祖细胞(TSPCs)。水平明显高于血清尿酸(SUA)被发现在648年关闭了跟腱断裂(ATR)患者与12559名健康志愿者进行比较。在体外研究表明,尿酸(UA)剂量依赖性降低大鼠跟腱TSPC生存能力,减少肌腱胶原蛋白的表达,和变形结构组织而显著增加基质降解酶的转录水平和促炎的因素。一致,中断在跟腱组织结构和功能完整性的鼠模型中发现了高尿酸血,一起增强免疫细胞的渗透。基因转录组分析显示显著提升参与代谢压力和组织变性TSPCs高尿酸血的挑战。具体来说,减少活动AKT-mTOR通路的增强的自噬信号确认。我们的发现表明无症状高尿酸血可能是倾向的ATR阻碍TSPCs的正常功能。这些信息可能提供理论和实验依据探索ATR的早期预防和护理。

1。介绍

痛风是一种单钠尿酸盐导致的炎症性关节炎(MSU)结晶沉积在关节组织过饱和的安和苏阿(1- - - - - -3]。 (7.0 mg / dL)男人和> 360μ摩尔/升(6.0 mg / dL)在女性诊断为高尿酸血4,5]。在较少的程度上,结晶的密歇根州立大学在肌腱组织报道,由高尿酸血之前在间质液体(6- - - - - -9]。已经证明,密歇根州立大学的直接互动与tenocytes晶体可以减少细胞生存和功能,这与肌腱损伤在晚期痛风患者6]。长期高尿酸血挑战肌腱的组织学和功能属性,因为他们可能诱发地区炎症和代谢压力(10- - - - - -12]。值得注意的是,亚临床肌腱损伤提出了在无症状的高尿酸血9,13]。因此,试探性的高尿酸血和肌腱组织的脆弱性之间的关系长期以来一直受到质疑,然而很少有集体报告可用(9,12- - - - - -14]。

跟腱断裂(ATR)是最常见的肌腱损伤,下肢与上升的事件在个人从事有规律的体育运动或休闲运动(15,16]。ATR的直接原因通常是一个突然的跟腱(在),而变性在破裂前已被证明在ATR病例的80% (15- - - - - -18]。在正常条件下,生物力学适应性的外在和内在的影响依赖于适当的功能,肌腱干细胞/祖细胞(TSPCs) [17,19]。这个小的子集在肌腱细胞组织具有单独使用能力和维护腱内稳态中起着至关重要的作用[17- - - - - -19]。多个因素,包括过度使用、衰老、代谢失调,和氟喹诺酮类原料药和糖皮质激素的使用,已经被证明能够诱导细胞在TSPCs赤字,与ATR的病理过程密切相关15,20.- - - - - -22]。零星证据与ATR联系高尿酸血,按照假设的功能完整性肌腱组织可能被高浓度的安和苏阿(6,14]。然而,高尿酸血对TSPCs的影响和相关的分子机制尚不清楚。

本研究的目的是调查高尿酸血和ATR之间的关系。我们评估的相关性SUA水平ATR在大量人群发病率的参与者有或没有自发破裂,探讨了细胞和分子改变TSPCs和肌腱UA带来的体内平衡在体外和在活的有机体内。

2。材料和方法

2.1。研究对象和数据收集

共有648名患者关闭ATR是从2010年1月至2021年8月注册的。与此同时,12559名志愿者参与中南医院体检中心体检被招募为健康对照组。研究根据《赫尔辛基宣言》。伦理批准这项研究从中南医院的伦理委员会,获得武汉大学(武汉,中国),并从所有参与者获得知情同意。排除标准是 年,现任或前任使用urate-lowering代理和非甾体类抗炎药物或糖皮质激素,和恶性肿瘤或其他伴随的风湿性炎症条件。

2.2。制备可溶性UA

氢氧化钠溶液(氢氧化钠)是用作溶剂由溶解400毫克(mg)在10毫升氢氧化钠(ml)的双重蒸馏水(ddH)₂O);然后,336毫克UA(美国密苏里州Sigma-Aldrich)添加到溶剂和溶解在65°C。不同浓度的可溶性UA稀释高葡萄糖DMEM(美国马Gibco)与10%胎牛血清(的边后卫)(ExCell生物学、江苏、中国),和媒体是放置在细胞孵化器1小时(h)治疗前允许pH值调整。

2.3。动物和细胞

TSPCs Sprague-Dawley老鼠被隔绝在组织( , ;8周)如前所述23]。协议使用老鼠机构批准的动物保健和使用委员会(IACUC)重庆医科大学。对于高尿酸血鼠模型,8-week-old Sprague-Dawley老鼠分配给高尿酸血组( )和对照组( )。大鼠高尿酸血组与腺嘌呤intragastrically管理(0.1克/千克,Macklin、上海、中国)和钾oxonate(1.5克/公斤,Macklin)溶解在0.5%羧甲基纤维素钠(Macklin)每天一次连续6周。在相同的日子,在对照组大鼠intragastrically管理相同体积的0.5%羧甲基纤维素钠。

2.4。增殖、细胞周期和细胞凋亡检测

细胞培养在96 -孔板(1500个细胞/)治疗UA的不同浓度对不同时期之前进行细胞计数Kit-8(美国马CCK-8, bios)试验来确定细胞的可行性。细胞周期分析,细胞被固定在75%乙醇。与PBS洗涤后,细胞被propidium碘染色(美国新泽西州π,MedChemExpress)染色方案补充0.2% Triton x - 100 (Solarbio,北京)和核糖核酸酶(Solarbio)。细胞周期是由流式细胞分析仪(美国BD FACSCelesta, OA)。检测细胞死亡,细胞样本孵化与0.5μL APC-Annexin V和7-AAD (BioLegend、钙、美国)。凋亡细胞的数量 细胞是由一个流式细胞分析仪计算(BD FACSCelesta)。

2.5。组织学

在标本收集的动物牺牲后立即( 从对照组; 从高尿酸血组)。标本固定在4%多聚甲醛(不合格品生物技术、苏州、中国)72 h,然后嵌入石蜡。4微米厚的部分都与苏木精和伊红染色(圆),Solarbio)和滑动扫描成像的数字病理(徕卡DM300、AG)、德国)。

2.6。免疫组织化学和免疫荧光分析

的multidifferentiation势TSPCs治疗UA的不同浓度测试通过为脂肪生成油红O染色,通过对软骨形成红色染料O染色,染色茜素红S骨生成,如前所述[23]。马森的三色的(MT)染色(Solarbio)和小天狼星红染色(Solarbio)是用于检测胶原纤维沉积。免疫荧光,肌腱部分与5% BSA含有0.1% Triton-X密封,然后用初级抗体(孵化Proteintech CD3, 1: 200年,,美国;CD68 1: 200年,亲和力,哦,美国),水洗,并与二次孵化抗体(Antirabbit免疫球蛋白(H + L), F (ab )₂片段Alexa萤石®488共轭,1:500年,细胞信号技术,妈,美国)。染色细胞观察和成像(徕卡DMi8、AG)、德国)。

2.7。RNA提取和量化

总RNA提取RNA提取设备(Beyotime、上海、中国),和浓度测量NanoDrop 2000(美国马热费希尔科学)。使用RevertAid大师的互补脱氧核糖核酸合成混合(热费希尔科学)。实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR;铂®qPCR SuperMix-UDG热费希尔科学)是由CFX96触摸qPCR系统(美国CA Bio-Rad)如前所述[23),使用特定的感兴趣的基因引物/探针(补充表1)。基因表达进行评估的水平β肌动蛋白。

2.8。免疫印迹分析

细胞培养在10厘米菜( 与不同浓度的细胞/板)治疗UA 48 h;然后,细胞溶解产物免疫印迹分析处理。主要的抗体被用于1:1000稀释anti-phospho-AKT (AF0016亲和力),anti-AKT (AF6261亲和力),anti-phospho-mTOR(5536年代,细胞信号技术),anti-mTOR(2983年代,细胞信号技术),anti-phospho-p70S6K (AF3228亲和力),anti-p70S6K (AF6226亲和力),和anti-phospho-4E-BP1(2855年代,细胞信号技术)。额外的初级抗体使用anti-4E-BP1 (1: 500、60246 - 1 - ig Proteintech), anti-p62(1: 750年,AP6006 Bioworld,锰、美国),anti-LC3A / B(1: 600年,14600 - 1 - ap, Proteintech),和反β肌动蛋白(AF7018 1: 20000年,亲和力)。

2.9。生物力学测试

老鼠从动物(在样本收获 从对照组; 从高尿酸血组)后立即牺牲和冻结在-80°C到测试。标本是在室温下解冻过夜。生物力学测试了使用材料试验机(英斯特朗有限公司,805年,妈,美国)。u形夹之间的肌腱组织固定,确保拉力是平行的轴线组织,与位移的10毫米/分钟。最终的破坏载荷和刚度确定的荷载位移曲线。

2.10。统计分析

数据表示为,除非另有注明 。统计学意义是取决于学生的 - - - - - -测试或Mann-Whitney测试比较两组之间的连续变量或单向或双向重复测量方差分析(方差分析)数量超过2组。值小于0.05被认为是重要的。参数之间的相关性与皮尔森相关系数的计算。

3所示。结果

3.1。SUA水平ATR的关系

样品被收集从648年ATR患者超过12年,其中,91.5%是男性(表1)。横断面分析显示,在ATR病人SUA水平明显高于对照组的准确性的12559名志愿者(图1(一)、表1)。在ATR患者高尿酸血的患病率是35.96%,对照组(表的18.03%1),的优势比2.612高尿酸血的ATR的发生在总人口(95%置信区间:2.215 - -3.080, )。一致,ATR患者肌酐和血尿素氮水平大于对照组(数字1 (b)和1 (c)、表1)。ATR患者血糖明显降低(图1 (d)、表1)。有一个5年的不同参与者之间的平均年龄这两个组。ATR病人的年龄,年龄在18岁到60岁之间匹配的对照组,表现出正相关,ATR的发生率在我们的队列(补充图1)。之间的收缩压和舒张压水平可比ATR患者和对照组(表1)。除此之外,没有发现显著差异在不同组的甘油三酯和总胆固醇水平(表1)。

3.2。UA抑制细胞生存能力和促进鼠TSPCs Nontenocytic分化

描述孤立tendon-derived细胞单细胞悬浮体生成从8-week-old SD大鼠。大殖民地容易观察(图8天之后2(一个))。受到媒体分化时,这些细胞表现出深刻的能力形成不同的细胞谱系。明显的脂质滴后,油红O染色观察脂肪形成的归纳(图2 (b))。同时,丛形成被红色染料容易观察到O化验postchondrogenic感应,和红色的钙沉积可以可视化茜素红染色细胞暴露于成骨诱导媒体(图14天2 (b))。流式细胞术分析来检验这些细胞表面抗原。我们发现超过95%的细胞群从主代表达间充质干细胞标记CD44和CD90.1,和超过99%的细胞为阴性白细胞CD45标记和内皮细胞标记CD106(图2 (c))。这些结果表明,这些细胞分离大鼠肌腱具有干细胞特性和实用TSPCs研究资源。

为了了解相关SUA水平升高的ATR,我们首先研究TSPCs UA的效果。可溶性UA抑制扩散TSPCs隔绝老鼠在剂量依赖性的方式,测试的CCK8化验(图2 (d))。并行、细胞周期分析确定数量的剂量依赖性降低TSPCs G2 / S期治疗UA的不同层次(图时2 (e))。流式细胞仪分析显示的可行性TSPCs伴随着显著增加细胞死亡的UA治疗,即使在低浓度(数字2 (f)和2 (g);补充图2)。这些事件的发生没有深刻的细胞凋亡的证据(数据2 (f)和2 (g))。

进一步测试是否UA TSPCs的常规功能的影响,我们研究了脂肪形成的,成骨,chondrogenic TSPCs在治疗UA的能力。分化文化后21天,脂肪空泡被油红O染色,随时观察和治疗UA TSPCs表现出更高程度的脂肪形成的潜力比对照组治疗PBS(图3(一)、补充图3)。同样,osteoblast-like与不规则的立方形的形态学变化中发现TSPCs治疗UA(图3(b))。茜素红S染色显示,钙结节的形成的浓度呈正相关,UA治疗(图3(b),补充图3 b)。相反,红色染料O染色证明一个显然更高层次的粘多糖(呕吐)产生的沉积控制TSPCs比治疗UA组,表明UA抑制的过程TSPC chondrogenic分化(图3(c),补充图3 c)。同时,证实PPAR基因表达分析γ骨桥蛋白,脂肪形成的标记和成骨分化,分别都是调节治疗UA比控制,特别是最高剂量的0.8毫米(数字3(d)和3(e))。同时,chondrogenic标记2型明显胶原蛋白表达下调TSPCs暴露在UA治疗相对于PBS控制(图3(f))。这些结果表明,高浓度的UA可以阻碍TSPCs的正常功能,通过减少细胞的生存能力,促进他们的脂肪形成的和成骨分化而抑制chondrogenic血统的形成。

3.3。高尿酸血引起病理变化和机械老鼠

探讨高尿酸血对跟腱的属性的影响,组织病理学分析与组织收集从一个已知的高尿酸血鼠模型(24]。)染色显示,在对照组细胞梭形,排列在一个平行的和统一的方式,和胶原纤维光滑和有序的安排(图4(一))。在高尿酸血组出现椭圆形,细胞和细胞数量明显减少(图4(一))。此外,矩阵在高尿酸血动物细胞嗜碱性的明显的胶原蛋白分解和定向障碍(图4(一))。同时,如图所示,马森的三色的(MT)染色和天狼星红染色,间质结构无序高尿酸血组,和纤维组织提出了广泛的增生与对照组相比(图4(一))。这些高水平的提高胶原蛋白沉积和混乱表明高尿酸血可以在组织诱导结构改变。

考虑到与系统和地区建立了协会的痛风炎症,我们评估了浸润的炎症细胞在大鼠组织存在高尿酸血。免疫荧光染色法对CD3和CD68进行评估T细胞和巨噬细胞的浸润,分别为(数字4 (b)和4 (c)补充数据4和4 b)。在组织内大鼠高尿酸血,显然增加T细胞(图的数字4 (b))和巨噬细胞(图4 (c))都发现,与对照组相比。这些结果证实,高尿酸血能诱导免疫细胞在组织的积极渗透,这是与先前的研究一致6,7]。我们还证实UA是否直接影响到mRNA的表达炎性细胞因子和TSPCs ECM-related因素。实时PCR结果表明,促炎细胞因子的基因,如白介素(IL) 1β、白介素和肿瘤坏死因子(TNF)α和降解酶,如矩阵metalloprotease (MMP) 2, MMP3, MMP13(补充数据4摄氏度和4 d),48小时后都显著调节文化与UA比PBS的控制。这些结果表明,高尿酸血可能带来组织学骚乱在组织,增强免疫细胞浸润,在一致性TSPCs促炎反应和分解代谢的基因表达升高。

为了调查是否带来的观察病理改变在高尿酸血与整体有关影响机械性能,我们进行了一系列机械测试样品的生物力学加载系统。破坏载荷和平均终极力量从大鼠高尿酸血都明显低于本地(数字4 (d)和4 (e))。根据,显著差异所示的硬度和杨氏模量在两组之间(数字4 (f)和4 (g))。,这些结果表明,高尿酸血的力学性能可以减少,这意味着一个潜在的贡献作用的高尿酸血经常观察病理的痛风患者的下肢(7,25]。

3.4。在鼠TSPCs UA影响代谢过程表达下调mTOR信号

评估详细信息的基因档案TSPCs受到UA和识别潜在的信号通路参与,转录组研究使用批量执行与RNA信使RNA序列的样本TSPCs PBS和两个剂量的治疗UA 48小时。分析差异表达基因(度)显示一个类似的转录组概要文件从接受pbs控制TSPCs和生理治疗组UA水平(0.2毫米;补充图5)。0.2毫米UA-treated组相比,40个基因调节和2基因表达下调与TSPCs治疗UA水平代表高尿酸血(0.8毫米),热的可视化地图(图5(一个))。基因本体论(去)富集分析显示,高尿酸血影响TSPCs通过影响基因的表达主要参与代谢过程的调节,压力反应、变性(图5 (b))。在后续评估的关键分子通路与细胞的反应TSPCs UA,我们确定了一种蛋白激酶/ mTOR /自噬信号活动深刻影响了UA治疗,剂量依赖性的方式(图5 (c),补充图6)。具体来说,不同浓度的治疗UA 48小时显著减少AKT的水平和mTOR磷酸化,通过免疫印迹分析(图所示5 (c),补充图6)。这些都是与减少磷蛋白质的表达P70 S6激酶(P70 S6K) p-4E-BP1表达的增加,和减少LC3 A / B比率和p62表达式(图5 (c),补充图6)。值得注意的是,增加0.8毫米UA TSPC文化phospho-c-Jun的表达明显增加,在功能一致性有两个上述调节基因的mRNA分析prr7, jund(图5 (c))。总的来说,这些发现揭示高尿酸血和ATR之间的正相关关系。高水平的UA不仅破坏了结构和功能的完整性,而且还直接影响肌腱体内平衡通过解除对TSPCs的正常功能。

4所示。讨论

饮食逐渐变化,从传统的碳水化合物和蔬菜类模式当前由肉类、乳制品,和其他富含嘌呤的食物,高尿酸血和痛风的报告病例数上升(1]。在我们健康的对照组,高尿酸血的患病率为18.03%,按照刘的荟萃分析报告在中国大陆(26]。ATR组高尿酸血的患病率为35.96%。这加强了临床研究报告的显著差异多兹和多节的14]。高尿酸血和炎症性疾病之间的关系引起了广泛的关注在过去几十年。然而,高水平的精确作用SUA在肌腱仍然不理解。有一种普遍的共识,即高尿酸血,即使无症状,可能会促进促炎反应在肌腱组织,导致肌腱异常的发病和进展7,27]。因此,它是重要的来确定高水平SUA贡献的退行性的发展,创造了ATR的倾向,这是本研究的目的。

临床发现648年至12559年关闭ATR病人和准确性志愿者展示了SUA水平显著升高与腱断裂有关,与增强的肌酐和尿素氮水平。有鉴于此,我们解决UA TSPCs孤立从大鼠的影响,这是至关重要的细胞群肌腱体内平衡的维护(19,28]。同时,我们评估的影响高尿酸血在组织结构和功能的完整性。此外,我们为特征的分子机制的干扰TSPCs暴露在UA的浓度升高。研究发现与高尿酸血和临床证据表明,高水平ATR UA呈现的完整性,通过直接减少TSPCs的可行性和损害他们的tenocytic分化,可能通过介绍代谢压力。

水晶生物学的进步直接证明MSU的参与在导致病变的病理生理过程1,29日]。严酷的扰动在肌腱组织内的微环境诱导的水晶口供UA经常涉及炎性环境和造成不可逆的细胞外基质成分的变化9,30.]。这个概念也被报道证实了密歇根州立大学和tenocyte损害之间的因果关系(6]。重要的是,我们的研究表明,尿酸盐结晶沉积的形成之前,海拔在UA水平可能容易减少TSPC人口内的可用性和阻碍其正常功能。这表明高水平的UA可以开始加强腱病理生理过程,期间阿基里斯tendinosis相似,早期无症状的高尿酸血阶段。根据,CD3的观察增加⁺和CD68⁺细胞内高尿酸血老鼠认为活跃的无菌炎症可能引发集体,可能导致UA的退行性改变引起的高水平,这是常见的在断裂肌腱(16,17]。出现了故障TSPCs之间是否存在因果关系,在组织内的炎性浸润无法回答。然而,海拔在UA水平可能影响肌腱脆弱性和ATR的可以被认为是一个诱发因素。

报道,恶化的完整的组织架构呈现肌腱更容易撕裂和断裂9,12]。在我们的研究中,显示分解的mRNA表达基质金属蛋白酶是剂量依赖性在TSPCs UA的曝光,表明积极响应导致肌腱矩阵的退化。虽然一个相反的反应在tenocytes刺激与MSU水晶(20.),我们的组织学分析的样本有高尿酸血的老鼠显示明显减少稳态胶原蛋白张力相对于正常的控制,这是伴随着明显受损的机械性能。这些结果与观察痛风患者的肌腱(6,8,29日]。确凿的这些数据,高尿酸血可能引发对TSPCs独特的影响,可能不同于那些tenocytes,通过限制正常的合成代谢功能补充挑战肌腱组织以及促进细胞外基质的分解反应。这些事件都可能导致紊乱肌腱架构。此外,最近的研究已经证明了的功能潜力TSPCs分化成fibrocartilage-like细胞(31日)构成的纤维软骨过渡区,扮演了一个至关重要的角色,在bone-tendon结32,33]。根据我们的研究结果,这些研究结果,高尿酸血的作用TSPCs ATR患者尤为重要,特别是在postrupture恢复过程(17,18]。有理由推测,UA水平高,与已经低的多孔性和多血管受伤,可能提高肌腱补给和重建的挑战与具备干细胞细胞,这将在未来进行分析研究。

积累证据从遗传和表观遗传与临床样本的研究指出,大多数痛风候选基因是密歇根州立大学晶体直接相关,包括那些影响晶体的形成,晶体的免疫识别存款,和相应的细胞反应的促炎的环境(34,35]。勘探的hyperuricemia-associated TSPCs转录组的概要文件,我们确定了通路富集在代谢过程中,应对压力,和退化,所有这些基本的快速响应TSPCs [19,28]。平行分析在分子水平上证实了AKT-mTOR信号由高水平活动确实是抑制TSPCs UA。它是很重要的,因为这种途径中扮演着重要的角色在传感细胞压力和代谢异常,和干扰信号的活动mTOR的下游TSPCs伴随的机械刺激和区域肥厚性反应(23,36]。因此,我们的研究结果提供了一个可能的分子高尿酸血如何影响的机械功能的解释。值得注意的是,prr7,证明加强c-Jun[的稳定性37),jund,另一个组件的c-Jun亚科内AP-1复杂(38),都是发现被高尿酸血转录调节。在一致性,磷酸化的增加存在剂量依赖的相关性c-Jun中检测出TSPCs UA对待。这些结果暗示UA暴露AP-1 TSPCs可能导致一个激活的转录因子复杂,已证明促进MMP的生产和调解组织变性(38,39]。在一起,我们的研究结果强调改变代谢编程TSPCs ECM重塑,证实TSPCs UA治疗和细胞反应的组织学观察在大鼠高尿酸血。详细的确认还需要确定这些分子的参与,其功能与整体高尿酸血对肌腱组织的影响。

还有其他与本研究的局限性。课题研究的数量是相对较小的,和临床数据的进一步分析从多个中心将带来一个更大的样本量的价值理解SUA异常之间的关系和ATR。另一个限制是缺乏全面调整hyperuricemia-associated并存病的影响对肌腱功能障碍及其对ATR。确定调节作用的高尿酸血TSPC代谢编程,我们不能排除这种可能性是否相关的因素,如饮食选择,肥胖,2型糖尿病,或者先前使用的药物可能是导致变性在肌腱组织独立于SUA水平升高。

总之,我们发现了一个正相关的高尿酸血ATR,我们表明,UA水平升高可能直接减少TSPCs和阻碍其正常功能的可行性在调节肌腱体内平衡。同时,我们证明,高尿酸血中断的结构和机械完整性。进一步,我们阐明小说基因和通路参与hyperuricemia-induced TSPCs放松管制。

5。结论

本研究的发现可能有助于推进监管机制的理解与潜在目标hyperuricemia-associated肌腱病理过程,强调无症状高尿酸血病人照顾ATR的有关因素。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

杰,公元前,我们进行了实验。CL和QY编辑了手稿。杰,YZ、提单和LS分析和解释数据。SL和SC导致统计分析。DN、LC和WW构思,设计实验,写的手稿。所有作者进行审核和批准的最终版本的手稿。晶晶梁、完陈和李Yanmei贡献同样这项工作。

确认

我们感谢健鹰Zhang博士协助准备的手稿。这项工作是支持部分由中国国家自然科学基金(81871779)。

补充材料

补充表1:实时PCR引物序列中使用。补充图1:皮尔森的年龄和ATR发病率相关性( )。ATR的发生率是ATR病人人数的百分比计算的参与者总数相同的年龄。年龄60岁,匹配的对照组。补充图2:流仪分析膜联蛋白V-PI TSPCs染色结果用不同剂量治疗UA。补充图3:量化油红O染色(a),茜素红染色(b)、番红精O染色(c)图像如图3TSPC分化潜力的治疗UA的不同剂量( )。数据规范化染色强度比PBS的每个治疗组在控制。值 染色强度代表三个独立实验的图像。 ; ; 与PBS控制。补充图4:量化的CD3 (a)和CD68 (b) immunofluorescent染色结果数据4 (b)和4 (c)分别为( )。值 染色强度代表三个独立实验的图像。实时qPCR促炎的结果标记(c)和降解酶(d) TSPCs用不同浓度的治疗UA或PBS ( 每个)。值显示 。 ; ; ; 与接受pbs控制在每组使用双向方差分析分析。结果来自两个独立的实验。补充图5:维恩图说明之间的共享度TSPCs治疗UA的控制(PBS)或不同浓度。Ctrl: TSPCs PBS对待;T02: TSPCs治疗UA的0.2毫米;T08: TSPCs治疗UA 0.8毫米。数字(27日13日,29日,和3)显示两组之间的度。补充图6:免疫印迹分析量化图像如图5 (c)UA TSPCs接受不同剂量( )。数据的归一化比率表明蛋白表达在相应的加载控制。值 从三个独立的实验。 ; ; ; 与PBS控制。(补充材料)