文摘
根吸收是一种常见的牙科挑战可以导致牙齿松动,甚至牙齿脱落。细胞中参与根吸收,成牙骨质细胞负责铺设水门汀,而巨噬细胞与不同的表型也被证明有双向对根吸收的影响。然而,巨噬细胞和成牙骨质细胞之间的关系在很大程度上仍是个未知数。在这项研究中,我们审查的影响巨噬细胞不同分化表型在成牙骨质细胞的矿化。使用transwell coculture系统和条件基于媒介coculture系统,我们发现与M0(未极化的巨噬细胞)相比,M1-polarized巨噬细胞减毒成牙骨质细胞矿化,而M2-polarized巨噬细胞增强成牙骨质细胞矿化。此外,通过提取M0、M1 / M2巨噬细胞液和检查他们的成牙骨质细胞对矿化的影响,我们发现,巨噬细胞在成牙骨质细胞矿化的影响,至少部分,由液施加。此外,在活的有机体内研究还表明,M1 / M2比增加会抑制成牙骨质细胞矿化和带来根吸收。在机械及矫正牙齿运动(移动),根吸收明显压缩一侧的牙周组织,和更高的M1 / M2比和较弱的成牙骨质细胞矿化压缩一边观察而不是紧张。我们也使用本地化的脂多糖(LPS)注入增加M1 / M2比上颌磨牙的根,根吸收和减少成牙骨质细胞矿化也被观察到。此外,当我们注入液从M0、M1和M2-polarized巨噬细胞在小鼠,观察到成牙骨质细胞矿化是组中的减毒注射M1-polarized巨噬细胞液,虽然它是组注射M2-polarized增强巨噬细胞液。
1。介绍
牙根吸收是一种常见的临床挑战在牙科和可以分为几种类型,包括内部、外部入侵,压力,和特发性吸收(1]。其中,外部的根吸收是最常见的。根吸收也可以分类基于刺激因素,包括矫正压力吸收,牙周感染吸收,吸收牙髓的感染,影响牙齿或肿瘤吸收压力,和ankylotic吸收2]。矫正压力吸收在矫正治疗是最常见的副作用。
牙骨质是根表面的薄层,开出抗再吸收障碍和锚地的作为一个功能牙周韧带(3,4]。成牙骨质细胞,负责制定水门汀,成骨细胞,表达的转录因子骨涎蛋白(BSP), osterix (OSX)、碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN),和runt-related基因2 (RUNX2) [3,5]。其中,OSX transactivating是重要的基因编码1型胶原蛋白和移植细胞分化和矿化3]。除了合成水门汀的组成部分的主要作用,成牙骨质细胞也有报告称,超氧化物歧化酶表达3,在防御中发挥着关键作用氧化应激在水门汀维护(4,6]。此外,成牙骨质细胞也osteoclastogenesis相关,黄齐等人提出,成牙骨质细胞有能力引起osteoclastogenesis, il - 1的有力推动下β(7]。Nemoto等人也表明,成牙骨质细胞表达功能toll样受体,参与相关基因表达改变的牙骨质形成和upregulation osteoclastogenesis-related分子(8]。
巨噬细胞是不可或缺的免疫细胞,导致促炎和抗炎过程和参与组织破坏和再生(9]。极化巨噬细胞可分为两大组。M1-polarized巨噬细胞也被称为经典激活巨噬细胞。干扰素- M1的典型激活刺激巨噬细胞γ(IFN -γ)和脂多糖(LPS)9。M2-polarized巨噬细胞也称为或者激活巨噬细胞。M2巨噬细胞可以进一步分为M2a巨噬细胞,刺激il - 4或IL-13;M2b巨噬细胞,刺激免疫复合物结合il - 1β或有限合伙人;il - 10和M2c巨噬细胞,刺激,TGF -β或糖皮质激素(9]。M1-polarized促炎过程中巨噬细胞的功能并能分泌大量的促炎细胞因子,如il - 1β白介素,IL-15、地震和TNF -α(9]。相反,M2-polarized巨噬细胞在抗炎和组织修复阶段至关重要9]。巨噬细胞也发挥重要的作用在调节牙齿和牙周组织的代谢活动。巨噬细胞已报告调解LPS-induced成骨细胞和牙周韧带细胞的凋亡诱导肿瘤坏死因子-α(10]。此外,一些证据表明,液从M0(未极化的巨噬细胞)和M2-polarized巨噬细胞促进骨修复和再生,而液M1-polarized巨噬细胞抑制骨修复(11]。矫正牙齿的运动(移动),由当地矫正压缩引起的血管系统负载和牙周组织缺血导致的坏死和透明样变化牙周韧带和牙槽骨3]。随后,macrophage-like细胞,多核细胞,破骨细胞,cementoclasts, odontoclasts移除坏死和变透明的组织,这一过程造成的副作用外部根吸收(4]。外部根吸收的细胞过程大体相似的骨吸收(4]。他等人表明,M1 / M2-polarized巨噬细胞比例增加,根吸收是加剧迫使应用程序期间移动(12]。切除后的力量,M1 / M2-polarized巨噬细胞比率下降,根吸收部分获救(12]。在此基础上,李等人进行的在体外实验证明M2-polarized巨噬细胞可以增强牙周韧带的cementoblastic分化干细胞(13]。进一步探究的实验发现M1极化标记il - 1β、il - 6和TNF -α可以减弱成牙骨质细胞的矿化,而M2极化PPAR标志吗γ提拔成牙骨质细胞矿化(14- - - - - -17]。这些结果都表明巨噬细胞之间的潜在联系,成牙骨质细胞和根吸收。
外来体是一种膜囊泡,大多数类型的细胞可以分泌到细胞外的环境中18]。运输microrna,信使rna、蛋白质和其他物质,许多生物的角色,特别是在细胞间通信(19]。先前的研究描述了不同液从巨噬细胞不同分化表型的影响骨代谢(11),它是假设液可能对牙骨质的新陈代谢起到类似的作用。
然而,巨噬细胞及其相关分子影响根吸收,包括引起根吸收,促进其修复,尚不清楚。因为没有直接证据被发现在巨噬细胞和成牙骨质细胞矿化之间的关系,是否巨噬细胞不同分化表型显示相似或不同的成牙骨质细胞对矿化的影响仍然未知。在这项研究中,我们旨在澄清M0、M1的影响——M2-polarized巨噬细胞和成牙骨质细胞矿化,初步探索其内在机制,为了提供更好的理解细胞的根吸收和修复机制。
2。材料和方法
2.1。细胞培养和巨噬细胞的极化
264.7生小鼠monocyte-like细胞从ScienCell购买(美国圣地亚哥,CA)。永生化的小鼠cementoblastic细胞系OCCM-30慷慨地提供了玛莎j . Somerman博士(美国国立卫生研究院,马里兰州贝塞斯达)(20.]。细胞培养在杜尔贝科修改鹰的介质(DMEM;Gibco,马里兰州,与10%胎牛血清(美国)的边后卫;美国Gibco,马里兰州)补充1% penicillin-streptomycin解决方案(美国马里兰州盖瑟斯堡Gibco,,)。在37°C细胞孵化有限公司5%2在湿润的空气。化验时,进行文化融合达到75 - 80%。
M1两极分化,细胞治疗2.5 ng / ml IFN -γ(Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州,美国)和200 ng / ml有限合伙人(Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州,美国)化验前12 h。M2两极分化,细胞治疗50 ng / ml il - 4 12 h。
2.2。Transwell Coculture系统
在transwell coculture系统成牙骨质细胞和巨噬细胞极化表型不同,成牙骨质细胞被播种上插入(0.4μ米孔;康宁,洛厄尔,MA)和M0、M1 / M2巨噬细胞被播种和诱导12-well盘子。然后,上部插入被放置到12-well盘子,其中M0、M1 / M2孵化。12-well板块改变每天提供新鲜诱导M0、M1 / M2。在为期3天的coculture之后,成牙骨质细胞RNA和蛋白分离收集。
2.3。条件培养基的准备和Coculture
24小时后孵化M0、M1、M2与DMEM(没有的边后卫)中单独收集。然后,上层清液,由离心提取中 和 10分钟,分别是混合着DMEM(的边后卫)的比率1:1。混合物M0、M1、M2上层清液和DMEM(的边后卫)被用作成牙骨质细胞条件培养基。在为期3天的孵化成牙骨质细胞的条件培养基与新生产的上层清液每天刷新。
2.4。外来体净化
24小时后孵化M0、M1、M2与DMEM(没有的边后卫)中单独收集。首先,细胞通过离心去除 10分钟。然后,死细胞被离心分离去除 10分钟,其次是细胞碎片的离心去除 30分钟。收集的液最初超速离心法 70分钟,洗磷酸盐(PBS),最后由超速离心法收集相同的条件下。的最终产出液储存在−40°C和验证了免疫印迹分析和电子显微镜。M0、M1、M2液被添加到培养基的成牙骨质细胞150剂量μ每天g / ml。为期3天的潜伏期后,成牙骨质细胞受到核糖核酸或蛋白质提取或免疫荧光染色。
2.5。RT-qPCR
如前所述(执行RT-qPCR21]。从巨噬细胞和成牙骨质细胞总RNA提取使用试剂盒试剂和cDNA被PrimeScript RT反转录试剂盒。RT-qPCR进行使用由于“快速上手”项目普遍SYBR绿色主混合实时PCR检测系统。3 -磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH) mRNA担任内部标准化控制。GAPDH的引物序列,BSP、OSX RUNX2,胶原蛋白、I型,α1 (COL-1),酪氨酸蛋白phosphatase-like成员(PTPLA),诱导一氧化氮合酶(间接宾语)和精氨酸酶1 (Arg-1)表中列出1。
2.6。免疫印迹分析
免疫印迹分析如前所述[21]。巨噬细胞和成牙骨质细胞洗和可溶性里帕裂解缓冲。蛋白质浓度测定和调整是一样的,其次是在预制凝胶电泳,然后转移到一个聚乙二烯二氟化物膜。与5% BSA被屏蔽后,一夜之间转移膜是在4°C的环境与anti-iNOS抗体,anti-ALIX抗体,anti-GM130抗体(美国Proteintech,芝加哥,IL) anti-CD63抗体,anti-Arg-1抗体,anti-BSP抗体,anti-COL-1抗体(细胞信号技术,丹弗斯,妈,美国),anti-RUNX2抗体,anti-OSX抗体,或反β肌动蛋白抗体(Abcam、剑桥、马、美国)稀释1:1000。随后,膜与anti-rabbit孵化或anti-mouse二级抗体(zb - 2301和zb - 2305、中山金桥生物技术,北京,中国),在室温下被稀释在1:5000 1 h。相关蛋白的表达与化学发光试剂可视化和分析使用ImageJ软件。
2.7。免疫荧光染色和荧光成像
如前所述(执行免疫荧光染色21]。在为期3天的孵化液从M0、M1 / M2巨噬细胞、成牙骨质细胞和4%多聚甲醛固定在PBS, permeabilized 0.1% Triton x - 100,阻塞山羊血清为5%。然后,成牙骨质细胞孵化了anti-OCN抗体(美国Proteintech,芝加哥,IL)稀释1:200一夜之间在4°C。孵化后与二次抗体细胞,细胞核与DAPI染色,使用共焦成像系统和图像采集。
2.8。高山染色
5-bromo-4-chloro-3-indolyl-phosphate /硝基蓝四唑染色工具包(电视台/ BCIP CoWin生物技术,北京,中国)使用(如前所述)(22]。经过5天的应用液从M0、M1 M2-polarized巨噬细胞,成牙骨质细胞洗PBS和固定在4%多聚甲醛30分钟。与PBS三洗后,成牙骨质细胞孵化在碱性溶液在室温下60分钟,其次是三洗PBS终止反应。
2.9。动物实验
动物实验是北京大学生物医学伦理委员会批准。在活的有机体内实验使用6雄性C57BL / 6小鼠。机械及移动模型进行使用先前描述的协议(23]。全身麻醉后,镍钛螺旋弹簧被正确的上颌第一磨牙和上颌切牙之间提供一个几乎恒力约 。侧一侧被用作控制。1 d或7 d后,弹簧被移除,老鼠被过量戊巴比妥钠注射安乐死。上颌骨仔细和固定在4%多聚甲醛溶液为24小时hematoxylin-eosin(他)染色和免疫染色。
如前所述(执行局部注射模型24- - - - - -27]。实验组接受注射的小鼠10毫克/毫升有限合伙人(从大肠杆菌),5μl周围的牙龈沟两侧上颌第一至第三臼齿每隔2天总共七次。对照组注射生理盐水,相同的音量和频率相同的解剖区域。
的在活的有机体内实验使用外来体函数的联合应用局部注射周围的牙龈沟两侧上颌第一至第三磨牙,尾静脉注入液每隔2天总共十次。老鼠被随机分为三组,随后注入液从M0、M1, M2,分别在100年的剂量μg /鼠标,享年100岁μl在体积28,29日]。
2.10。他染色和免疫组织化学染色
标本被切成5μm组织学和免疫染色分析部分。他染色根据他的指示进行染色工具包(G1120, Solarbio,北京)。免疫组织化学染色,部分患者有一系列梯度乙醇和孵化抗原检索解决方案10分钟在95°C。阻断内源性过氧化物酶的活性,部分被孵化与3%过氧化氢在室温下20分钟。被屏蔽后5% BSA在PBS 30分钟在室温下,部分是孵化主要抗体。初级抗体的稀释取决于指令。适当的二次抗体(ZSGB-Bio,北京)随后应用。生产棕色沉淀后轻拍检测设备(Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州,美国),部分与苏木精复染色,显微镜和图像采集(尼康、日本)。
2.11。数据分析
每个实验重复独立至少三次。定量数据被表示为手段和标准偏差,分析了使用单向方差分析与IBM SPSS统计数据。小动物——一张长有 被认为是具有统计学意义。
3所示。结果
3.1。巨噬细胞的极化M1 / M2表型
巨噬细胞是有限合伙人和干扰素治疗γ或il - 4 12 h M1和M2分化为巨噬细胞,分别。M0、M1、M2蛋白质提取后立即感应。M1极化标记的蛋白表达伊诺M1组高于M0和M2组。M2极化标记Arg-1 M2组高于M0、M1组(数字1(一)和1 (b))。mrna M0、M1、M2提取后立即感应或诱导后1天、3天。伊诺的mRNA表达更高的M1组立即M0和M2组相比,诱导后1天,但没有显示显著差异归纳(图。3天后1 (c))。这表明,M1表型极化效应持续了1天,但直到第三天。也是M2表型分化的事实,随着Arg-1 mRNA表达的是更高的M2组立即M0、M1组相比,诱导后1天,但没有显示显著差异归纳(图。3天后1 (c))。因此,在其他的实验中,我们改变了极化M1 / M2每天确保M1和M2的极化效应。
(一)
(b)
(c)
3.2。巨噬细胞与不同极化表型Coculture系统的成牙骨质细胞矿化的影响
在transwell coculture系统(图2(一个)),收集成牙骨质细胞信使rna和蛋白质提取后为期3天的coculture。mineralization-related基因的mRNA表达,包括BSP COL-1, RUNX2, OSX, PTPLA,减少在M1-polarized巨噬细胞cocultured集团和增加M2-polarized巨噬细胞cocultured组相比M0组(图2 (b))。蛋白表达了类似的趋势(数据2 (c)和2 (d))。这些结果表明巨噬细胞不同分化表型,通常称为M1 M2-polarized巨噬细胞,影响了成牙骨质细胞不同的矿化与M0、M1巨噬细胞衰减矿化和M2巨噬细胞增强矿化。
(一)
(b)
(c)
(d)
我们进一步探讨如何用不同的巨噬细胞极化机制成牙骨质细胞的表型影响矿化执行条件基于媒介coculture实验(图3(一个))。信使rna表达表现出类似的趋势在transwell coculture实验(图3 (b)),这表明巨噬细胞的影响在成牙骨质细胞的矿化是由巨噬细胞分泌物质,通过向成牙骨质细胞培养液。
(一)
(b)
3.3。巨噬细胞与不同极化表型的影响成牙骨质细胞矿化液
考虑到液是重要的监管机构在蜂窝通信的细胞上清液,我们提取液从M0、M1和M2-polarized巨噬细胞检查他们在成牙骨质细胞矿化功能。液都验证了免疫印迹分析和电子显微镜(数字4(一)和4 (b))。液被透射电子显微镜,可视化和水泡形态近似直径60和100 nm之间被观察到。免疫印迹结果显示细胞外囊泡的存在标志阿历克斯和CD63的缺席高尔基GM130标志,表明细胞外囊泡的存在和高尔基的缺失或细胞污染。添加M0、M1 / M2的影响液成牙骨质细胞的培养基被评估。RT-qPCR和免疫印迹结果表明有一个减少的表达mineralization-related标记成牙骨质细胞组的处理液从M1-polarized巨噬细胞和成牙骨质细胞组的增加,处理液从M2-polarized巨噬细胞、成牙骨质细胞组相比,处理液从M0(数字4 (c)- - - - - -4 (e))。免疫荧光染色还显示减少的表达OCN成牙骨质细胞组的处理液从M1-polarized巨噬细胞和略有增加OCN表达成牙骨质细胞组的处理液从M2-polarized巨噬细胞、成牙骨质细胞组相比,处理液从M0(图4 (f))。高山染色成牙骨质细胞还表示受损的矿化液处理后的成牙骨质细胞从M1-polarized巨噬细胞和增强矿化液处理后的成牙骨质细胞从M2-polarized巨噬细胞、成牙骨质细胞组相比,处理液从M0(图4 (g))。这些结果表明,液的影响从M0、M1 / M2在成牙骨质细胞矿化是按照效果M0、M1、M2在成牙骨质细胞矿化,表明巨噬细胞与不同极化表型成牙骨质细胞矿化的影响,至少部分,通过液。
(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
(g)
3.4。根吸收、积累M1 / M2和成牙骨质细胞矿化的机械及移动模型
观察根吸收,M1 / M2-polarized巨噬细胞积累的变化,和成牙骨质细胞的矿化在移动过程中,我们进行了一次在活的有机体内研究机械及移动模型(图5)。根吸收后短期机械及移动,无法看到。经过长期机械及移动、根吸收可以看到在力量方面,没有明显的根吸收在侧端(图6(一))。这些结果证实,机械力可以诱导根吸收长期在相对,但不可能在短期内产生明显的根吸收。
(一)
(b)
(一)
(b)
(c)
(d)
免疫组织化学结果显示组中的短期机械及移动,M1极化标记的表达伊诺略高的压缩比张力侧牙周组织,和M2极化PPAR标志的表达γ略低的压缩比张力侧牙周组织(图6 (b))。组中与长期机械及移动,M1极化标记的表达伊诺说更高的压缩比张力侧牙周组织。相反,M2极化PPAR标志的表达γ是说低压缩比张力侧牙周组织的(图6 (c))。这些数据表明,机械及过程中移动,M1-polarized巨噬细胞倾向于聚集在压缩方面,虽然M2-polarized巨噬细胞喜欢紧张的一面。扩展力的时间,趋势更加明显,M1 / M2的差异之间的比例压缩,张力侧牙周组织逐渐扩大。
成牙骨质细胞的矿化也显示差异压缩和紧张的一面成牙骨质细胞层的过程中机械及移动。集团短期机械及移动,的表达OSX略成牙骨质细胞层的压缩方面低于张力。组中与长期机械及移动,OSX的表达非常低的压缩一边比在张力侧(图成牙骨质细胞层6 (d))。这些结果表明,成牙骨质细胞的矿化是在张力方面比在压缩方面。
3.5。根吸收、积累M1 / M2和成牙骨质细胞矿化在当地注入模型
为了进一步阐明在成牙骨质细胞巨噬细胞矿化的影响在活的有机体内和排除其他影响因素可能被移动了,我们周围的牙龈沟有限合伙人注入老鼠的上颌第一第三磨牙倾斜巨噬细胞极化对M1和使用生理盐水的对照组。
免疫组织化学结果表明伊诺和CD86的表达牙周韧带注射LPS组增加,与对照组相比,表明一个增强的积累M1-polarized巨噬细胞的根(图7(一))。组注射LPS,形状不规则的渗透吸收坑可以看到根源,而对照组没有明显的根吸收(图的迹象7 (b))。这些结果表明LPS引起的累积M1牙周韧带和M1 / M2当地比率的增加,以及牙根吸收的发生,这意味着M1 / M2比率与根吸收的发生。
(一)
(b)
(c)
免疫组织化学结果还显示,OSX的表达,OCN, BSP,和COL-1减少牙周韧带和层的成牙骨质细胞注射LPS组,而对照组(图7 (c))。这些结果表明LPS引起的衰减成牙骨质细胞矿化,建议一个可能的M1 / M2的增加比率之间的关系,减少成牙骨质细胞矿化,根吸收的发生。
3.6。液从巨噬细胞不同分化表型体内成牙骨质细胞矿化的影响
后当地的联合应用液注入和尾静脉注射,免疫组织化学染色结果表明,BSP的表达,OCN,和OSX较低组注入液从M1-polarized巨噬细胞,虽然是高注入液从M2-polarized巨噬细胞相比,该集团从M0注入液。这些结果表明,与液从M0相比,液从M1-polarized巨噬细胞会影响成牙骨质细胞的矿化在活的有机体内,而液从M2-polarized巨噬细胞可以提高成牙骨质细胞的矿化在活的有机体内(图8)。
4所示。讨论
成牙骨质细胞是至关重要的细胞类型负责水门汀的保养和维修,这是密切相关的根吸收的过程和修复(3]。除了在合成水门汀的部件,其主要作用Nemoto等人报道,成牙骨质细胞表达功能toll样受体,参与改变的基因表达与牙骨质形成和osteoclastogenesis-associated upregulation的分子,表明额外的成牙骨质细胞的作用在调节牙骨质和骨的新陈代谢8]。符合这一点,黄齐等人还显示,成牙骨质细胞有能力引起osteoclastogenesis, il - 1的有力推动下β7。
巨噬细胞还参与外部根吸收的过程中,由巨噬细胞清除坏死和变透明组织是一个重要的外部原因根吸收(3]。当这样做时,巨噬细胞刺激监测牙骨质破坏,产生外部根吸收(30.]。不过,巨噬细胞不能单方面促进外部根吸收的发生。已报告M2-polarized巨噬细胞增强牙周韧带的cementoblastic分化干细胞通过一种蛋白激酶和物通路(13]。巨噬细胞的标记也被证明多样化影响成牙骨质细胞矿化。M1极化标记il - 1β、il - 6和TNF -α观察减弱成牙骨质细胞的矿化,而M2极化PPAR标志吗γ被认为是一个启动子的成牙骨质细胞矿化(14- - - - - -17]。在目前的研究中,我们审查的影响巨噬细胞不同分化表型在成牙骨质细胞的矿化。我们的研究结果表明,M1-polarized巨噬细胞减成牙骨质细胞矿化,而M2-polarized巨噬细胞促进成牙骨质细胞矿化。至少在一定程度上,这些影响是通过液施加。
我们的发现同意前面的他等人的研究表明,根吸收是加剧了M1 / M2比增加,但部分获救的M1 / M2比降低(12]。我们观察到,在移动过程中,M1极化标记的表达伊诺较高的压缩比张力侧牙周组织,而M2极化PPAR标志的表达γ在张力侧牙周组织高于在压缩方面,提出一个相对更高的M1 / M2比在压缩方面和相对较低的M1 / M2比紧张的一面。根吸收外部坑一起观察压缩侧的根,我们的数据支持这一发现他et al。巨噬细胞不同分化表型的原因显示不同的效果在根吸收,一些研究人员提出,M1-polarized激活巨噬细胞可以诱导的招聘和激活破骨细胞与高架caspase-1和il - 1的生产β,最终导致根吸收的发展(31日]。在这项研究中,我们观察到成牙骨质细胞的矿化倾向于M1 / M2时衰减率增加,导致增强根系吸收,而成牙骨质细胞的矿化倾向于增强当M1 / M2比率下降,导致受损的根吸收。这些调查结果可能会提供另一种可能的解释。
进一步澄清M1 / M2之间的关系比和成牙骨质细胞矿化在活的有机体内,我们积极增强M1巨噬细胞的极化有限合伙人局部注射。有限合伙人局部注射是一种常见的模型创建一个牙周组织的炎性环境被先前的许多文献证实,这也表明,M1极化标记il - 1的表达β肿瘤坏死因子-α在注射LPS, il - 6的分泌增加,而M2极化标记il - 10显示无显著变化(24- - - - - -27]。此外,Umezu等人发现,在当地注入模型,有限合伙人增加存在剂量依赖的相关性所显示的破骨细胞数量与注射5,50或500年μ0.05 g / ml有限合伙人和有限合伙人的增加注射时间,破骨细胞数逐渐增加,加上大小的破骨细胞和细胞核的数量(25]。因此,在这项研究中,我们利用他们的协议参数包括注射量、浓度、频率和配置的方法。免疫组织化学结果显示,伊诺和CD86的表达在牙周韧带增加注射LPS组与对照组相比,建议加强积累M1-polarized巨噬细胞的根源。
熊等人报道,M2-polarized-macrophage-derived液诱导成骨分化能力的骨骼间充质干细胞(32]。也观察到液从M0和M2-polarized巨噬细胞促进骨修复或再生,而从M1-polarized巨噬细胞抑制骨修复液,这表明巨噬细胞不同分化表型可能影响骨代谢通过液(11]。因此,我们也调查了巨噬细胞的影响是否成牙骨质细胞是由液。我们收集液从M0、M1和M2-polarized巨噬细胞和成牙骨质细胞将它们添加到培养基中。原来从M1减毒成牙骨质细胞的矿化液和液从M0相比,虽然M2液显示相反的效果,这是符合coculture成牙骨质细胞矿化的影响巨噬细胞和巨噬细胞上清液在成牙骨质细胞矿化的影响。的在活的有机体内实验也类似的结果,BSP的表达,OCN,和OSX较低组注入液从M1-polarized巨噬细胞,而高组注入液从M2-polarized巨噬细胞,而该集团从M0注入液。这些结果表明,巨噬细胞在成牙骨质细胞矿化的影响,至少部分,由液。
临床意义时,我们的研究提出了一个细胞间相互作用的角度在外部根吸收,有利于更好的理解这些细胞间的相互作用在这个过程中扮演的角色。通过研究巨噬细胞和成牙骨质细胞矿化之间的关系,新方法可以开发不同偏振之间保持平衡的巨噬细胞表型或促进M2极化减小到最低程度的根吸收,促进吸收的过渡来修复。新的监管因素也可能在将来的研究中发现巨噬细胞和成牙骨质细胞之间,这可能成为勘探的突破控制根吸收。
数据可用性
使用的数据来支持本研究的结果包括在本文中。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
作者的贡献
易赵和黄益平同样这项工作。易建联赵执行在体外和在活的有机体内实验,收集和分析数据,写的手稿。黄益平设计实验和回顾了手稿。郝刘和Ruoxi王了在活的有机体内实验。旷Tan参加了在活的有机体内实验。Lingfei贾庆林执行统计分析。李Weiran构思项目和监督项目的想法。所有作者的最后一篇文章阅读和批准。
确认
本研究在经济上支持由中国国家自然科学基金(82071142和82071142号)和年轻人才项目的中国口腔Association-Chinese矫正社会。