脂肪干细胞细胞外囊泡抑制纤维化的颊粘膜的纤维化成纤维细胞通过微- 375 / FOXF1轴

文摘

口腔黏膜下纤维化(OSF)是一种癌前病变。脂肪干细胞(ADSC)派生细胞外囊泡(EVs) (ADSC-EVs)调节多种口腔疾病。因此,本研究探讨了在OSF ADSC-EVs机制。ADSCs转导与微rna - miR - 375模拟。ADSC-EVs和mir - 375中ADSC-EVs (evs - mir - 375)提取和识别。mir - 375表达EVs和纤维化的颊粘膜成纤维细胞(fBMFs)检测。电动汽车由观察fBMFs吸收。目标之间的关系mir - 375和forkhead盒蛋白质F1 (FOXF1)预测和验证。evs - mir - 375治疗后或FOXF1过度,fBMF细胞增殖,迁移,入侵,和细胞凋亡进行了评估,apoptosis-related蛋白质水平(cleaved-caspase-3、伯灵顿和bcl - 2)和肝纤维化标志物(αsma,胶原蛋白,胶原蛋白III)被发现。功能救援实验进一步验证执行的角色mir - 375 / FOXF1 OSF的轴。mir - 375在电动汽车特别是调节- mir - 375和电动汽车- mir - 375治疗fBMFs(所有 )。ADSC-EVs携带fBMFs mir - 375。fBMFs可以内化ADSC-EVs。evs - mir - 375治疗显著抑制fBMF细胞增殖、迁移、入侵、纤维化和促进细胞凋亡(所有 )。此外,mir - 375目标FOXF1 fBMFs。FOXF1过度推广fBMF细胞生物学行为和纤维化的逆转evs - mir - 375治疗后( 或 )。我们强调,ADSC-EVs抑制fBMF纤维化然后抑制OSF进展通过mir - 375 / FOXF1轴。

1。介绍

口腔黏膜下纤维化(OSF)是一种慢性进行性疾病,影响整个口腔,咽,甚至食管粘膜(1]。癌前病变,7% - -30%的OSF发展成恶性肿瘤,严重威胁全球公共卫生(2]。OSF流行在印度和东南亚,咀嚼的共同习惯辛辣食物和刺激物(如槟榔和烟草)被认为是作为OSF发病机理的因素(3,4]。从病理学,它也承认,过多的胶原蛋白沉积或结缔组织中胶原蛋白降解导致刚度不足的病变区域,造成限制张口[5]。此外,成纤维细胞是不可或缺的参与者在OSF开发中,由于它们的功能障碍和纤维化可导致hypovascularity和随后的口腔黏膜变苍白,牙齿和牙龈染色,牙关紧闭症(6]。先前的研究提出,纤维化的颊粘膜成纤维细胞(fBMFs)紧密涉及OSF [7]。然而,OSF的基本分子机制仍然是难以捉摸的,发生和发展是一个伟大的价值确定新型生物标志物和目标OSF的有效疗法。

越来越多的研究证明,脂肪干细胞(ADSCs)密切参与纤维化在许多疾病8,9]。此外,ADSCs对口腔mucosa-related疾病起到治疗作用[10,11]。然而,ADSCs在OSF的具体作用尚不清楚。良好,ADSCs能够分泌细胞外囊泡(EVs)和ADSC-derived EVs (ADSC-EVs)调节细胞功能和参与多种疾病的病理12]。

电动汽车,验证lipid-enclosed膜结构、疾病诊断和治疗都是有前途的工具(13]。据报道,电动汽车在不同器官的纤维化发挥监管作用,如肾脏和肝脏(14,15]。机械,电动汽车可以调节受体细胞的行为通过货物的转移包括小分子核糖核酸(大鹏)[16]。一项研究指出,大鹏在OSF显示非凡的微分表达式(17]。之前的工作已经提出,mir - 375超表达间充质干细胞有助于限制的纤维化瘢痕(18]。因此,它是合理的推测ADSC-EVs可能发挥作用在纤维化的fBMFs mir - 375参与OSF fBMF纤维化可能抑制通过电动汽车运输mir - 375。因此,我们进行了一系列组织学和分子实验来确定ADSC-EVs在OSF的潜在机制,目的在于对OSF提供一些新的治疗方法。

2。材料和方法

2.1。道德声明

所有程序在本研究进行的公司合规指南从日照人民医院的机构审查委员会(批准号RY201810259)。所有患者签署知情同意。

2.2。隔离和fBMFs文化

共10例(8 2男性和女性;30-48岁,平均36.8岁)在一个中间阶段OSF的专家门诊口腔科粘膜疾病的病理诊断。fBMFs隔绝颊粘膜病变,主要是培养和通过使用先前描述的组织培养方法研究[19]。简而言之,从粘膜标本被削减,剁碎,洗两次磷酸盐(PBS)含有抗生素(100 U /毫升青霉素,链霉素100毫克/毫升、和0.25毫克/毫升两性霉素)。然后,fBMFs被放置在一个60毫米培养皿,在杜尔贝科的修改鹰培养基培养(DMEM Gibco,大岛,纽约,美国有10%的胎牛血清(的边后卫,Gibco)和抗生素。的fBMFs 3^{理查德·道金斯}6^th通道被用于后续的实验。

2.3。使用免疫组织化学鉴定fBMFs

分离后的附着fBMFs 2^nd通过用0.25%胰蛋白酶,fBMFs resuspended在DMEM含有10%的边后卫和细胞密度是适应的 细胞/毫升。细胞悬液是滴入6-well板块与无菌幻灯片。当细胞达到80%以上融合,细胞培养基被丢弃。幻灯片被移除,用PBS,固定在4%多聚甲醛10 - 15分钟,然后洗3次,PBS。10分钟后孵化Triton x - 100, 0.5% PBS的细胞被洗了3次,之后5分钟孵化与3%过氧化氢和3 PBS洗涤。接下来,细胞与山羊血清封闭了10分钟在室温下,一夜之间孵化与主抗体(pan-cytokeratin (pan-CK)(1: 400)、波形蛋白(1:200),博士德生物科技有限公司,有限公司,武汉、湖北,中国)在4°C,并为30分钟再在孵化器37°C。3 PBS洗后,细胞被孵化与二次抗体(ZSGB-BIO 1: 200年,中国北京)在37°C,持续15分钟,使用2,开发4-diaminobutyric酸(ZSGB-BIO) 2分钟,并与苏木精染色(# 14166、细胞信号技术、贝弗利,妈,美国)。最后,幻灯片使用中性密封胶和光学显微镜下观察(奥林巴斯光学有限公司,东京,日本)。

2.4。识别ADSCs

主要ADSCs获得ScienCell研究实验室(美国加利福尼亚州卡尔斯巴德)培养在孵化器37°C公司为5%₂和饱和湿度。当细胞达到3^{理查德·道金斯}通道,流式细胞仪是用来检测干细胞表面标记的表达式(集群的区别(CD) 45 (ab8216)、CD31 (ab9498)、CD105 (ab2529)和CD90 (ab23894)) (Abcam Inc .,剑桥,妈,美国)。ADSCs在3^{理查德·道金斯}通过在成骨的培养(Sigma-Aldrich,默克公司,达姆施塔特,德国),脂肪形成的(美国Cyagen生物科学,圣克拉拉,CA),和chondrogenic介质(Sigma-Aldrich)。ADSC的分化潜能分析用茜素红染色(Cyagen生物科学),油红O染色(Sigma-Aldrich)、阿尔新蓝染色冰醋酸(上海君威生物技术有限公司,上海,中国。

2.5。细胞转染

mir - 375模拟,pcDNA3.1-forkhead盒蛋白质F1 (FOXF1),及其对应的负控制(数控)从广州购买RiboBio有限公司有限公司(广州)。ADSCs ( 在对数生长期细胞/)被播种到6-well盘子。融合在70%,ADSCs或fBMFs转染使用Lipofectamine 2000(美国表达载体Inc .,卡尔斯巴德,CA)根据制造商的指示。

2.6。隔离和电动汽车的识别

80%融合,ADSCs在DMEM培养含有10% EV-free的边后卫最小化无关的电动汽车,和上层清液收集后48 h。EVs提取ADSC浮层使用不同的离心和过滤过程(20.,21]。简单地说,细胞上清液离心两次(2000 g, 20分钟;10000 g, 40分钟)0.22先后然后过滤μ无菌过滤器(美国默克密理博公司,Billerica的)。接下来,上层清液离心机(100000克,70分钟)和PBS resuspended(100000克,70分钟)。去除任何残留的RNA,沉淀EVs筛选了使用混合物PBS和核糖核酸酶(表达载体)。电动汽车形态使用透射电子显微镜(TEM)观察。ADSC-EVs在2%多聚甲醛固定30分钟然后滴到碳涂层铜网。风干后,混合物被负染色以1%醋酸双氧铀的两倍。使用HT7700 TEM图像捕获120 kV(日立高新技术公司,东京,日本)。电动汽车的大小和浓度测定用NanoSight NS300纳米粒子跟踪分析(NTA)(莫尔文莫尔文仪器有限公司,英国。电动汽车表面标记CD9 (ab92726)、CD63 (ab134045)和calnexin (ab22595) (Abcam)被发现使用免疫印迹分析描述ADSC-EVs (WB)。

EVs细胞溶解在里帕裂解缓冲,和蛋白质浓度的电动汽车被发现使用皮尔斯bicinchoninic酸(BCA)蛋白质检测设备(美国热费希尔科学,罗克福德,IL)根据制造商的指示。电动汽车被添加到完整的细胞培养基。fBMFs服用包含100的培养基μg ADSC-EVs EV抑制剂的条件培养基补充GW4869 (MedChemExpress有限公司蒙茅斯结,新泽西,美国)控制。

2.7。电动汽车的内化

根据提供的指令,电动车都标有红色荧光PKH26。简而言之,mir - 375中ADSC (evs - mir - 375)中(100μg)在1毫升稀释剂稀释C和PKH26染色(4μL)在1毫升稀释剂稀释后c .轻轻搅拌4分钟,2毫升0.5%牛血清白蛋白添加绑定到过度的染料,然后,飘散的染料被丢弃。接下来,贴上EVs和fBMFs孵化4或24 h。之后,这些细胞被冲洗两次与PBS和在4%多聚甲醛固定了10分钟。细胞核染色了4 ,6-diamidino-2-phenylindole解决方案(1μg / mL)。LSM 5励磁机共焦激光扫描显微镜(Thornwood卡尔蔡司缩微成像,Inc .,纽约,美国)被用来捕捉EV图像。

2.8。定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)

从细胞总RNA提取使用试剂盒试剂(表达载体),然后反向转录成cDNA使用PrimeScript RT试剂盒(豆类生物技术有限公司,大连,中国)。qPCR进行了使用SYBR®预混料交货Taq™II(豆类)7900年ABI ht快速PCR实时系统(美国应用生物系统公司,培育城市,CA)。反应条件是predenaturation (95°C, 10分钟)和40个周期的变性(95°C, s),退火(60°C, 20年代)和扩展(72°C, 34 s)。Glyceraldehyde-3-phosphate脱氢酶(GAPDH)或U6担任内部控制。使用2基因表达进行了分析^{- - - - - -ΔΔCt}方法。基因及其引物的扩增引物序列如表所示1。

2.9。世行(免疫印迹试验)

蛋白质样本获得使用里帕裂解缓冲(强)(Beyotime生物技术有限公司,上海,中国。蛋白质浓度测定用BCA蛋白质分析工具包(Beyotime)。电泳是在4°C冷室1 - 2 h的初始电压60 V的电压120 V后进入分离胶。然后,蛋白质被转移到聚偏二氟乙烯膜通过湿electro-transfer方法在4°C的冷室2 h。接下来,膜被移除,阻止了5%脱脂milk-tris-buffered saline-Tween 20 (TBST),并在室温下培养1 - 2 h。随后,膜被放置在一个孵化器,加上主要抗体一夜孵化在4°C。后3 TBST洗(10分钟),膜被孵化1 h和辣根peroxidase-labeled山羊anti-rabbit免疫球蛋白G(免疫球蛋白)(CoWin生物科学,1:5000年,中国北京)在室温下。接下来,膜与TBST冲洗3次(10分钟)。乐队是采用化学发光法,灰色的价值进行了分析。GAPDH担任内部控制。 The primary antibodies were anti-GAPDH (1 : 10000, ab181602, Abcam), anti-FOXF1 (1 : 1000, ab168383, Abcam), anti-B-cell lymphoma-2 (Bcl-2) (1 : 1000, ab32124, Abcam), anti-collagen I (1 : 1000, ab260043, Abcam), anti-collagen III (1 : 1000, ab184993, Abcam), anti-cleaved-caspase-3 (1 : 500, ab32042, Abcam), anti-Bcl-2-associated X (Bax) (1 : 1000, ab32503, Abcam), and anti-alpha-smooth muscle actin (αsma)(1: 10000年,ab124964 Abcam)。

2.10。Transwell化验

迁移和入侵进行评估使用24-well Transwell®系统(美国康宁玻璃作品,康宁,纽约)8μ米孔隙过滤器聚碳酸酯膜。薄膜与基底膜基质涂层检查入侵的能力。细胞( 细胞)铺在顶端商会在250年μ无血清培养基。基底外侧室充满介质化学引诱剂补充10%的边后卫。48小时孵化后,过滤膜结晶紫沾0.1%,然后,在倒置显微镜下观察细胞(×100)和5种不同计算字段。

2.11。流式细胞术

细胞( 每组细胞/毫升)被播种到12-well盘子。后操作指令的基础上进行了膜联蛋白V死细胞工具包(Beyotime),细胞凋亡测定使用流式细胞分析仪(美国贝克曼库尔特,沥青,CA)。

2.12。细胞计数Kit-8 (CCK-8)测定

细胞( 每组细胞/毫升)被播种到96孔板24 h。使用CCK-8测定细胞活力检测。CCK-8试剂添加到每个相应的体积。混合后,细胞进一步培养孵化器(37°C, 5%有限公司₂)为1.5 h。光密度(OD)值在450 nm决定使用一个微型板块读者。

2.13。Dual-Luciferase报告基因分析

通过数据库(http://www.targetscan.org/vert_71/)[22),它是预测有mir - 375和FOXF1之间的结合位点。互补绑定序列和突变序列mir - 375和FOXF1放大和克隆到pmiR-GLO荧光素酶向量(WI Promega,麦迪逊,美国)构建野生型质粒FOXF1-WT和相应的突变质粒FOXF1-MUT。FOXF1-WT或FOXF1-MUT cotransfected数控模拟和mir - 375模拟(上海GenePharma有限公司有限公司、上海、中国)到293 t细胞使用Lipofectamine™2000(英杰公司)根据提供的指令。荧光素酶活性检测48 h后。

2.14。统计分析

SPSS 21.0(美国纽约阿蒙克的IBM公司)是用于数据分析。Kolmogorov-Smirnov测试验证数据是正态分布。结果表示为 (SD)。比较两组使用独立的样本进行了分析 - - - - - -测试,比较分析了在多个组用单向方差分析(方差分析),其次是图基的多重比较测试。的从双尾检验获得价值, 意味着一个统计上的显著差异。

3所示。结果

3.1。fBMFs ADSCs获得成功

Myofibroblasts参与胶原蛋白分泌,导致OSF;因此,它是具有重要意义的OSF的干预和治疗方法,探讨目标或通路,抑制fBMF纤维化(19,23- - - - - -25]。ADSCs参与肝纤维化的发生和发展,心肌纤维化和其他疾病(8,9,26]。然而,在OSF ADSCs的作用和机制仍不清楚。在这项研究中,fBMFs最初提取和识别。简单地说,在5^th天发布通道和净化,覆盖整个细胞培养瓶的底部。通道后细胞增殖能力强和快速增长,基本上主轴和多边形细胞形态(图1(一))。免疫组织化学结果显示,波形蛋白是积极的表达和pan-CK消极的表达;与中核细胞梭形或多角形,胞浆褐黄色,核膜清晰(图1 (b))。从以上,它相信fBMFs成功孤立。

接下来,ADSCs被确定。在3^{理查德·道金斯}和8^th天的文化中,我们观察到的大部分细胞长轴形状(图1 (c))。14日^th脂肪形成的感应,油红O染色显示红色(图1 (d)),这证明ADSCs产生脂肪滴。在21日^圣成骨诱导,有明显的钙沉积在细胞,和红色沉淀成立于茜素红染色(图1 (e))。14日^thchondrogenic感应,典型的软骨细胞形态和蓝色沉淀染色后在显微镜下观察(图1 (f))。这些结果表明ADSCs成骨、脂肪形成的和chondrogenic能力。此外,流式细胞术结果显示干细胞标记CD105(93.48%)和CD90(88.45%)高表达,而造血干细胞标记CD31(1.95%)和CD45(3.92%)显示弱表达在ADSCs 3^{理查德·道金斯}通道(图1 (g))。上述结果表明,fBMFs ADSCs获得成功。

3.2。ADSC-EVs成功提取

EVs修改内容,ADSCs稳定overexpressing mir - 375是由使转染ADSCs mir - 375,和转染效率被确认使用RT-qPCR ( )(图2(一个))。根据TEM观察,电动轮是杯子形状的统一大小,和双分子层脂膜结构是清晰的,直径约40 - 100海里(图2 (b))。EV大小在布朗运动检测使用NanoSight NTA乐器,这表明,电动汽车分布式40到100 nm直径55纳米(图峰值2 (c))。蛋白质浓度为1.5 mg / mL。世行结果表明,电动汽车表面标记在ADSC-EVs CD9和CD63表达,而内质网标志calnexin并不表示(图2 (d))。此外,RT-qPCR透露,与EVs-NC相比,mir - 375表达明显增加mir - 375中ADSC-EVs (evs - mir - 375) ( )(图2 (e))。总之,ADSC-EVs被成功提取。

3.3。ADSC-EVs被fBMFs内化

100年fBMFs后治疗μg ADSC-EVs 24 h, mir - 375在fBMFs也升高明显调节电动汽车- mir - 375治疗fBMFs RT-qPCR结果(所有所示 )(图3(一个))。根据共焦激光扫描显微镜观察,PKH26-labeled EVs(红点)被fBMFs逐渐内化(图3 (b))。从上面,我们证实ADSC-EV-carried mir - 375介导ADSCs之间的通信和fBMFs可能参与调节fBMF功能。

3.4。mir - 375中ADSC-EVs抑制fBMFs的纤维化

进一步研究ADSC-EV-carried mir - 375是否参与fBMF纤维化的规定,电动汽车- mir - 375培养fBMFs探索fBMFs的功能变化和纤维化,apoptosis-related蛋白质和胶原蛋白的表达。CCK-8试验表明,EV-treated fBMFs显示明显减少扩散能力,和电动汽车- mir - 375治疗进一步减少fBMF细胞增殖( )(图4(一))。根据Transwell化验,EV治疗抑制fBMF细胞迁移和入侵,这是进一步抑制(evs - mir - 375后治疗 )(数据4 (b)和4 (c))。流式细胞术结果显示凋亡率EV-treated fBMFs升高,和电动汽车- mir - 375治疗引起了更多的细胞凋亡率明显增加( )(图4 (d))。此外,RT-qPCR和世行结果表明,EV治疗促进了proapoptotic蛋白质的水平(cleaved-caspase-3和伯灵顿)和抑制凋亡蛋白bcl - 2和纤维化标志物的水平(αsma,胶原蛋白,胶原蛋白III)。电动汽车- mir - 375治疗加强电动车(所有的角色 )(数据4 (e)和4 (f))。简而言之,mir - 375中ADSC-EVs抑制fBMFs的纤维化。

3.5。mir - 375目标FOXF1 fBMFs

通过数据库(http://www.targetscan.org/vert_71/)[22),它是预测有mir - 375之间的结合位点和FOXF1(图5(一个)),他们的目标是使用dual-luciferase记者的绑定关系验证了基因试验( )(图5 (b))。进一步探索FOXF1 mir - 375的监管效果,mir - 375模拟转染进fBMFs ( )(图5 (c))。RT-qPCR和世行的结果如图所示,mir - 375超表达显著抑制FOXF1表达fBMFs(所有 )(数据5 (c)和5 (d))。FOXF1表达也明显抑制电动汽车和电动汽车,mir - 375治疗后(所有 )。这些结果暗示FOXF1 mir - 375的目标基因,和EV-carried mir - 375负监管FOXF1表达式。

3.6。EV-Carried mir - 375抑制通过针对FOXF1 fBMFs的纤维化

确定是否EV-carried mir - 375通过FOXF1调节fBMFs的纤维化,质粒overexpressing FOXF1 (pc-FOXF1)或pc-NC转染到fBMFs接受电动汽车- mir - 375。的转染FOXF1验证了使用RT-qPCR和WB ( )(数据6(一)和6 (b))。CCK-8试验表明FOXF1超表达明显促进细胞增殖,evs - mir - 375后明显抑制治疗(所有 )(图6 (c))。Transwell化验,FOXF1超表达明显增加fBMF细胞迁移和入侵,而电动汽车- mir - 375 +(所有pc-FOXF1治疗造成相反的结果 )(数据6 (d)和6 (e))。流式细胞仪显示fBMFs的细胞凋亡率显著降低pc-FOXF1-treated fBMFs,当时evs - mir - 375治疗后明显升高(所有 )(图6 (f))。根据RT-qPCR和白平衡的结果,FOXF1超表达明显减少proapoptotic蛋白质(cleaved-caspase-3和伯灵顿)的水平和高水平的凋亡蛋白bcl - 2和纤维化标记(αsma,胶原蛋白,胶原蛋白III),而电动汽车- mir - 375 + pc-FOXF1治疗逆转上述趋势(所有 )(数据6 (g)和6 (h))。集体,EV-carried mir - 375抑制通过针对FOXF1 fBMFs的纤维化。

4所示。讨论

OSF可能进化恶性肿瘤和极大地影响病人的生活质量27]。它表明ADSC-EVs帮助减少纤维化小鼠(28]。本研究阐明ADSC-EVs抑制fBMF纤维化,从而抑制OSF进展通过mir - 375 / FOXF1轴。

研究提供了大量证据,ADSCs纤维化中是至关重要的各种疾病(8,26]。ADSC可以分泌EVs和ADSC-EVs有很强的潜在疾病的治疗方法12]。ADSC-EVs显示保护作用对心肌和肾纤维化(9,29日]。此外,一项研究证明,在fBMFs myofibroblast活动同OSF进展[紧密相关30.]。当地干细胞生物学上可以作为免疫调节和proregenerative活动在当地环境31日]。当地的干细胞可能产生同样的效果,但是缺乏msc在其他方面的优势。例如,dental-derived干细胞的应用是有限的获取困难等原因,这就是为什么没有其他干细胞作为种子细胞在这项研究。因此,识别后ADSCs、fBMFs ADSC-EVs,我们调查的角色ADSC-EVs在OSF fBMF纤维化。EVs封装多种功能分子包括大鹏扮演pathobiological角色在不同疾病(32]。研究已经证明,mir - 375紧密涉及多个器官的纤维化,肝和肠等(33,34]。然而,很少有人知道EV-carried mir - 375的作用在OSF fBMF纤维化。此后,我们最初建造mir - 375中ADSCs,发现mir - 375表达mir - 375中ADSC-EVs (evs - mir - 375)和电动汽车- mir - 375治疗fBMFs明显增加。同样,正如前面已经指出,mir - 375表达减少口腔癌变前的病变高恶性转化的风险[密切相关35]。ADSC-derived液提供mir - 375为受体细胞促进骨再生(36]。短暂,ADSC-EVs fBMFs mir - 375。

接下来,特定角色fBMFs ADSC-EV-carried mir - 375的调查。令人信服的证据表明,扩散、迁移和myofibroblast fBMFs活动在本质上与OSF发病机理(19,23- - - - - -25]。主要是,αsma,胶原蛋白,胶原蛋白III是强有力的纤维化标记(37]。根据我们的结果,mir - 375超表达在ADSCs特别是加强电动汽车的作用,就是明证减少增殖,迁移和入侵,fBMFs升高的细胞凋亡,抑制纤维化水平标记(αsma,胶原蛋白,胶原蛋白III)。在支持这些,mir - 375超表达间充质干细胞抑制成纤维细胞的过渡到myofibroblasts,因此抑制纤维化小鼠疤痕区域(18]。mir - 375抑制细胞增殖的关节炎滑膜成纤维细胞(38]。此外,一项研究提出,mir - 375可能显示一个口头mucosa-related疾病关系密切39]。综上所述,mir - 375中ADSC-EVs抑制fBMFs的纤维化。

随后,我们旨在调查mir - 375的下游机制在OSF fBMF纤维化。通过预测和dual-luciferase试验,我们发现FOXF1 mir - 375的目标基因;FOXF1表达fBMFs转染后显著抑制mir - 375模拟或治疗的电动汽车/电动汽车- mir - 375。同样,一项研究支持目标mir - 375和FOXM1之间的关系,成员forkhead盒家庭像FOXF140]。简而言之,ADSC-EV-carried mir - 375目标FOXF1 fBMFs表达式。接下来,验证mir - 375 / FOXF1轴的作用在调节fBMF纤维化在OSF,我们在fBMFs过表达FOXF1。我们发现了FOXF1超表达明显促进细胞增殖,迁移,入侵和fBMFs纤维化标志物水平,减少细胞凋亡,而电动汽车——mir - 375治疗逆转上述趋势。,先前的研究已经证明FOXF1表达myofibroblasts与纤维化病变(紧密相关41]。然而,mir - 375之间的相互作用和FOXF1 fBMFs纤维化的OSF仍然是难以捉摸的,这意味着这项研究的新颖性。总之,EV-carried mir - 375抑制通过针对FOXF1 fBMFs的纤维化。

总之,本研究发现ADSC-EV-shuttled mir - 375抑制fBMF纤维化和针对FOXF1 OSF的减轻。ADSC-EV-based医疗干预可能OSF治疗的有效方法。mir - 375和FOXF1承诺OSF治疗的目标。在未来,我们将探讨的作用和调控机制ADSC-EV-carried mir - 375在OSF动物的水平。此外,高度多孔的结合,生物活性(biointeractive)支架与自体人类根尖周的囊肿间充质干细胞再生治疗可能是一种很有前途的工具,在牙科42]。机械刺激调节牙髓干细胞的行为和功能表示前景在骨骼和牙齿的再生组织(43]。因此,全面具体的新颖和有趣的生物材料对细胞生长的影响和行为需要进一步探索。组织和临床炎症和损伤也至关重要44,45]。然而,到目前为止,关于动物实验的研究和组织炎症不能进行大流行。在这里,mir - 374的作用在ADSCs-EVs fBMF纤维化的主要意图。在未来我们将研究组织炎症。尽管目前的研究提供了OSF治疗治疗价值,实验结果和临床应用需要进一步验证。

数据可用性

期间产生的所有数据或分析本研究包括在发表的这篇文章。

伦理批准

所有程序在本研究进行的公司合规指南从日照人民医院的机构审查委员会(批准号RY201810259)。

同意

所有患者签署知情同意。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

所有的作者是整个研究的完整性的担保人;黑洞导致研究概念、研究设计和定义的知识内容;黑洞和YHZ促成了文学研究;YXX促成了手稿的准备,而黑洞导致了手稿编辑和审查;HW导致了临床研究;YHZ导致了实验研究和数据采集;DSL的数据分析和统计分析。所有作者阅读和批准最终的手稿。

引用

1. a·韩德h . m . s . Chaudhary葛文德m . n . et al .,“口腔黏膜下纤维化:一个神秘morpho-insight,”与治疗癌症研究杂志》上,15卷,不。3、463 - 469年,2019页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. 李问:彭,h . j . Chen y, z .唐,“口腔黏膜下纤维化在亚洲国家,”口腔病理学与医学杂志》上卷,49号4、294 - 304年,2020页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. g . Arakeri k . k . Rai s Hunasgi m·a·w·Merkx美国高,p·a·布伦南,“口腔黏膜下纤维化:更新当前的病机理论,“口腔病理学与医学杂志》上,46卷,不。6,406 - 412年,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. 巴里,r . Metgud、z Vyas以及和a .达克”的更新研究病因因素,疾病进展,在口腔黏膜下纤维化和恶性转化,“与治疗癌症研究杂志》上,13卷,不。3、399 - 405年,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. p . Kondaiah喘气,我汗,“分子途径由槟榔果在口腔黏膜下纤维化的发病机理,“牙周病学2000,卷80,不。1,第224 - 213页,2019。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. Wollina, s . b . Verma f·m·阿里·k·帕蒂尔,“口腔黏膜下纤维化:更新”,临床、化妆品和临床实验的皮肤病,8卷,第204 - 193页,2015年。视图:谷歌学术搜索
7. 廖y . w . c . m . Liu, p . l .谢长廷et al .,“mir - 1246作为口腔黏膜下层纤维化发病机制,治疗目标”台湾的医学协会杂志》上,卷118,不。7,1093 - 1098年,2019页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. t·m·李·h·j·低质粗支亚麻纱,t·w·邱et al .,“预先处理这些脂肪中提取干细胞改善心脏纤维化通过调节巨噬细胞极化在梗塞的老鼠心脏通过PI3K / STAT3通路,”实验室调查,卷99,不。5,634 - 647年,2019页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. 问:罗,d .郭陈g, g . Liu m .挂和m .金“液从mir - 126 - overexpressing Adscs治疗缓解急性心肌缺血性损伤,”细胞生理学和生物化学,44卷,不。6,2105 - 2116年,2018页。视图:谷歌学术搜索
10. b . Arzi k·c·克拉克,a .他et al。”疗效的新鲜,同种异体间充质干细胞对严重耐火猫慢性龈口炎,“干细胞转化医学》第六卷,没有。8,1710 - 1722年,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. d . y . Lee, h·b·金。k .垫片,n . Kanai t·冈和s . k . Kwon“化学诱导治疗口腔溃疡使用脂肪间充质干细胞,”口腔病理学与医学杂志》上,46卷,不。7,520 - 527年,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. d . e . Wong d·a·班亚德·j·f·桑托斯·l·r·Sayadi g·r·d·埃文斯和公元Widgerow脂肪干细胞细胞外囊泡:系统回顾^✰”,塑料、杂志和审美重建手术,卷72,不。7,1207 - 1218年,2019页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. h . Clemmens和d·w·兰伯特“细胞外囊泡:平移的挑战和机遇,”生化社会事务,46卷,不。5,1073 - 1082年,2018页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. l·陈,陈r, s Kemper, m .琮、h .你和d·r·Brigstock”治疗肝纤维化血清细胞外囊泡的影响,“《细胞外囊泡,7卷,不。1,p。1461505, 2018。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. 公元前t . t . Tang和刘”,细胞外囊泡:机遇和挑战对肾纤维化的治疗,”实验医学和生物学的发展卷,1165年,第709 - 693页,2019年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. d . Lucchetti a Fattorossi, a . Sgambato”在肿瘤细胞外囊泡:进展和陷阱在隔离和分析的方法,”生物技术杂志,14卷,不。1,文章e1700716, 2019。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. d . Chickooree k .朱诉Ram, h . j .吴z . j .他和张,“初步microrna的表达特征的微阵列分析颊粘膜口腔黏膜下纤维化患者,”口腔病理学与医学杂志》上,45卷,不。9日,第697 - 691页,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. w .盛,z,问:歌曲,h .妞妞和g .苗族“调制的间充质干细胞mir - 375改善治疗结果在疤痕形成,”美国转化研究杂志》上,8卷,不。5,2079 - 2087年,2016页。视图:谷歌学术搜索
19. h·w·杨,m . y, y . w .赵et al .,“Hinokitiol切除myofibroblast激活的癌前口腔黏膜下纤维化针对蜗牛,”环境毒理学,33卷,不。4、454 - 462年,2018页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. w·李,刘y, p . Zhang et al .,“与人类脂肪干细胞组织工程骨固定化细胞液促进骨再生,”ACS应用材料&接口,10卷,不。6,5240 - 5254年,2018页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. c .延伸美国Amigorena、g . Raposo和a·克莱顿”隔离和表征细胞培养上清液和生物液体的液,”当前的细胞生物学技术,3卷,不。3 p。22日,2006年。视图:谷歌学术搜索
22. 诉Agarwal, g·w·贝尔,j·w·南和d . p . Bartel”预测有效的microRNA目标网站在哺乳动物的mrna,”eLife,4卷,2015年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. c . y .林p l .谢长廷y . w .辽、c . y .彭c . c . Yu和m . y . Lu”Arctigenin减少myofibroblast活动由LINC00974抑制口腔粘膜下纤维化,”国际分子科学杂志》上,20卷,不。6、2019。视图:谷歌学术搜索
24. c . y, y . w .廖,p . l .谢长廷et al .,“LncRNA GAS5-AS1抑制口腔黏膜下纤维化,myofibroblasts活动”台湾的医学协会杂志》上,卷117,不。8,727 - 733年,2018页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. t . y . k . Wang c . m . Liu, c . y .方c . c, c . h . Yu,“抑制HIF1A-AS1阻碍的arecoline-induced人类口腔黏膜成纤维细胞的迁移活动,“台湾的医学协会杂志》上,卷119,不。4、879 - 883年,2020页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. m .大和y酒井法子,h . Mochida et al .,“脂肪干细胞tissue-derived阻止纤维化小鼠脂肪肝炎通过抑制IL-17-mediated炎症,”胃肠病学和肝脏病学杂志》上,34卷,不。8,1432 - 1440年,2019页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. 黄懿慧Shih, t·h·王,t . m . Shieh黄懿慧曾,“口腔黏膜下纤维化:回顾发病机理,诊断和治疗,”国际分子科学杂志》上,20卷,不。12,2940页,2019年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
28. 谅解备忘录,m .周y李et al .,“细胞外囊泡从人类脂肪干细胞血管生成和fat-grafting应用程序的改进,”整形外科,卷144,不。4、869 - 880年,2019页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
29. y高,j .太阳盾,m .赵y,和f·金,“细胞外囊泡来自脂肪间充质干细胞缓解PM2.5-induced肺损伤和肺纤维化,”医学科学监控e922782条,卷。26日,2020年。视图:谷歌学术搜索
30. p·h·李,下午楚,p . l .谢长廷et al .,“Glabridin抑制人类纤维myofibroblasts颊粘膜的激活成纤维细胞通过TGF -β/ smad信号。”环境毒理学,33卷,不。2、248 - 255年,2018页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
31. a . Ballini薄伽丘,r·赛·范·范教授和m . Tatullo”检查参与组成分泌腺Dental-derived干细胞及其和交互bioscaffolds /再生医学生物材料:从体外研究转化应用,”干细胞国际卷,2017篇文章ID 6975251, 3页,2017。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. 山本,e . Azuma m . Muramatsu表示,t . Hamashima y Ishii,和m .会上,“细胞外囊泡的意义:pathobiological角色在疾病,”细胞结构和功能第41卷。。2、137 - 143年,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
33. 黄y s . Wang, c .周et al。”自噬的作用及相关小分子核糖核酸在炎症性肠病,”胃肠病学研究和实践卷,2018篇文章ID 7565076, 10页,2018。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
34. 杨y z、x j .赵h . j .徐et al .,“镁isoglycyrrhizinate改善高fructose-induced肝纤维化大鼠通过增加mir - 375 - 3 - p抑制JAK2 / STAT3通路和TGF -β1 / Smad信号。”Pharmacologica学报,40卷,不。7,879 - 894年,2019页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
35. a . m . Harrandah s g•菲茨帕特里克·m·h·史密斯,d, d·m·科恩和e . k . Chan“微- 375作为恶性转化的生物标志物在口腔病变,“口腔外科、口腔医学、口腔病理学、口腔放射学,卷122,不。6,743 - 752页。e1, 2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
36. 陈,y, y刘et al .,“液源自mir - 375 overexpressing人体脂肪间充质干细胞促进骨再生,”细胞增殖,52卷,不。5篇文章e12669 2019。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
37. 吴l . w .秋j .太阳,j .王”SENP1减弱肝脏纤维化通过显示SMAD2的表达,“生物化学和生物物理研究通信,卷495,不。1,第760 - 755页,2018。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
38. c . g .苗族w·j·史y y Xiong et al .,“mir - 375控制规范化Wnt通路通过FZD8沉默关节炎滑膜成纤维细胞,”免疫学的信,卷164,不。1、1 - 10,2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
39. b .助教和a . o . Gure马拉什的影响粉和吸烟对口腔黏膜的microRNA放松管制,”应用口腔科学杂志》上e20190382条,卷。28日,2020年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
40. l . h . Chen裴,p .谢,g .郭”Circ-PRKDC有助于结直肠癌细胞的5 -氟尿嘧啶阻力调节mir - 375 / FOXM1轴和Wnt /β连环蛋白通路。”Oncotargets和治疗,卷13卷,第5953 - 5939页,2020年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
41. n . Walker l .巴蒂尼美国Wettlaufer et al .,“居民组织间叶细胞祖细胞有助于纤维发生在人类肺移植,”美国病理学杂志》上,卷178,不。6,2461 - 2469年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
42. 科迪斯波蒂m . Tatullo g . Spagnuolo b . et al .,“PLA-based mineral-doped支架播种与人类根尖周的cyst-derived msc:再生在牙科治疗,一个有前途的工具”材料,12卷,不。4 p。597年,2019年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
43. m .马瑞利b·科迪斯波蒂r·m·谢尔顿et al .,“牙髓干细胞mechanoresponsiveness:机械刺激对牙髓干细胞的影响行为,”前沿生理学,9卷,p。1685年,2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
44. f . Inchingolo m . Tatullo f . m . Abenavoli et al .,“口语穿刺和口腔疾病:短时间内回顾性研究中,“国际医学科学杂志》上,8卷,不。8,649 - 652年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
45. m .马瑞利m . Tatullo g . Dipalma, f . Inchingolo“口腔感染金黄色葡萄球菌的病人受到白色海绵痣:描述两个病例发生在同一个家庭,”国际医学科学杂志》上,9卷,不。1,47-50,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

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