人脱落乳牙干细胞减轻大鼠三叉神经痛

抽象的

三叉神经痛是一种可治区的渐进神经系统疾病，可持续数月或数年。来自人剥落的落叶牙齿（SHED）的干细胞是用于细胞疗法的候选来源。由于它们的神经保护和免疫调节作用，这些神经嵴细胞在介导慢性疼痛方面具有潜在的作用。在这项研究中，我们建立了对眶下神经（CCI-离子）的慢性收缩损伤的大鼠模型，评价血管性疼痛中血液的镇痛作用。研究了局部血液移植对三叉神经中炎症细胞浸润的影响是基于苏木精和曙红染色。定量了在三叉神经和神经节中受伤神经和短暂受体潜在的香草型1（TRPV1）表达的促炎因子的水平。该数据显示，系统性或局部注射SHED在神经损伤后测量大鼠对机械刺激的敏感性，并且这种效果持续到8周的观察期。PKH26标记的血液分布到局部注射后的同侧三叉神经神经枝24和72小时。病变部位的血液移植导致受伤神经中的炎症细胞浸润和促炎细胞因子水平降低，抑制早期三阶段的三叉神经和神经节中的CCI离子诱导的TRPV1表达的上调。因此，这些结果提供了突出的证据，这些证据支持使用Shed治疗三叉神经痛和可能其他慢性疼痛病症。

1.介绍

三叉神经痛是由三叉神经损伤或损伤引起的，可持续数月或数年。典型的三叉神经痛的特征是单侧、刺痛、自发或触发，通常是休克样面部疼痛，无疼痛间隔。三叉神经痛是一种进行性神经系统疾病[1］．三叉神经痛的治疗是一项临床挑战，因为其发病机制非常复杂，涉及神经系统的结构和神经生理变化。

通过非侵入性手术从人出剥落的落叶齿（SHED）的干细胞从天然剥离落叶齿收集[2］．Shed具有区分各种类型的细胞，包括神经，成骨和脂肪细胞的能力[3.］．例如，血液已经显示出在植入受伤牙齿后用血管和动物中的血管和神经进行再生牙髓[4.］．作为神经嵴来源的干细胞，SHED表达各种神经细胞标记物，如谷氨酸脱羧酶，NeuN的，巢蛋白，胶质纤维酸性蛋白，βIII-管蛋白和神经丝M [2那5.］．SHED可以分化成多巴胺能神经元样细胞体外和SHED移植部分在帕金森氏病的大鼠模型中提高阿朴吗啡诱发的旋转行为[6.］．在脊髓损伤的大鼠模型中，SHED显示出解除键的神经营养因子，抑制星形胶质细胞和神经元的细胞凋亡，促进运动功能恢复[7.］．这些证据表明，SHED可能是一种有吸引力的神经再生治疗的细胞来源。此外，SHED具有优越的免疫调节特性，可降低免疫疾病(如系统性红斑狼疮(SLE))中促炎细胞因子的水平[8.］．免疫系统与神经系统相互作用以调节疼痛敏感性。作为神经顶部细胞，除神经保护和免疫调节性质之外，棚潜力在介导慢性疼痛方面发挥作用。但是，关于棚屋的潜在镇痛作用，很少有信息。

瞬态受体电位香草醛1型(TRPV1)是一种瞬态受体电位家族的阳离子通道成员，可被热、酸和配体(如辣椒素)激活。在动物和人类中，TRPV1定位于外周和中枢神经系统，并已被证明在介导神经病理性疼痛、内脏疼痛、炎症性疼痛和其他形式的异位性疼痛中发挥关键作用[9.-11.］．例如，三叉神经节中TRPV1的表达在牙齿移动疼痛后升高，据报道TRPV1拮抗剂缓解了大鼠的正畸疼痛[12.］．

在本研究中，我们通过诱导缩弓神经（CCI离子）的慢性收缩损伤来评估脱落对神经性疼痛的影响，建立了三叉神经病疼痛的大鼠模型。我们旨在提供证据，即Shed在三叉神经痛大鼠中增加了机械阈值。此外，我们研究了Shed的镇痛作用是否参与炎症细胞浸润和调节促炎细胞因子的水平，例如肿瘤坏死因子 - （TNF-）α和白细胞介素 - （IL-）1β。此外，我们证实SHED的长期抗痛觉过敏作用与三叉神经TRPV1表达和三叉神经节（TG）相关联。

2.材料和方法

2.1。脱落和文化

根据机构审查委员会的指导方针，在中国医科大学口腔医院从6- 8岁儿童身上获得了脱落的人类乳牙作为丢弃的生物样本。获得了孩子父母的知情同意。将牙髓从脱落的牙齿中分离出来，用4mg /mL (Boehringer Ingelheim, Mannheim, Germany)和3mg /mL胶原酶类型的溶液消化Ι(Worthington生化公司，Lakewood, Co, USA)， 37°C, 30分钟。单细胞悬浮液是通过消化通过70μ米过滤器（默克公司，黄柏，爱尔兰）。The cells were cultured in alpha modification of Eagle’s medium (HyClone, Logan, UT, USA), 15% fetal bovine serum (ExCell Bio, Shanghai, China), 100 mmol/L L-ascorbic acid (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), and 100 U/mL penicillin-streptomycin (HyClone) at 37°C in the presence of 5% CO₂。在实验中使用了3-5的段落3-5。使用无血清培养基作为移植的细胞悬浮培养基。

2.2。表面标志的表达分析

采用流式细胞仪(BD FACSAria II, Becton-Dickinson, Islandia, NY, USA)检测细胞表面标记物。使用的一抗(抗cd73、抗cd105、抗cd34和抗cd45)购自BD生物科学公司(Franklin Lakes, NJ, USA)。干细胞被调整到 并与冰上的相应的一抗孵育30分钟。

2.3。在体外神经源性和成骨分化试验

根据以前的一份报告，可诱导神经源性和成骨性分化[2］．For neurogenic differentiation, cells were cultured in medium containing B27 supplement, 20 ng/mL basic fibroblast growth factor, 20 ng/mL epidermal growth factor, and 1% penicillin. After 4 weeks of culture, the SHED were fixed in 4% formaldehyde and analyzed for expression of the neural cell markerβiii -微管蛋白免疫细胞荧光染色(Sigma-Aldrich)。细胞核染色为4 那6-二脒基-2-苯基（DAPI，大连美仑生物技术，大连，中国）。For osteogenic differentiation, SHED were cultured to 80% confluence and then incubated in medium supplemented with 10 nM dexamethasone and 1.8 mM monopotassium phosphate. After 4 weeks of induction, mineralized nodule formation was evaluated by 1% Alizarin Red S staining under a stereoscopic microscope.

2.4。动物，痛模型的建立，以及SHED移植

Male Sprague-Dawley rats (8 weeks old, 200–250 g) were housed in a temperature-controlled room with free access to food and water. The trigeminal neuropathic pain model was established through CCI-ION using an intraoral approach [13.］．在手术期间，将这些动物用戊巴比妥钠（50mg / kg，腹膜内）麻醉。头部固定在仰卧位的桌子上。粘膜切口沿着左上颌牙龈沟缘。用两个铬肠（4.0）连续树脂松散地连接离子。在恶意大鼠中，单侧眶下神经暴露而不结扎。所有实验均经中国医科大学动物研究伦理委员会（G2019008）批准。

神经结扎后三天，大鼠低剂量注射一次（ 细胞,0.2毫升, 大鼠，CCI-离子+低剂量injshed组）或高剂量（ 细胞,0.2毫升, 大鼠，CCI-ION+高剂量注射组)病灶部位的SHED。CCI-ION+infSHED组大鼠单次注射 流(0.2毫升, ）通过尾静脉3天后连接后。对照大鼠局部（CCI-离子+ RECMENDIUM）或静脉内（CCI-ION + INFMEDIUM）注射无血清培养基。所有动物均用过量的戊巴比妥钠（70mg / kg，腹膜内）杀死。通过盐水上升主动脉灌注动物，然后将4％甲醛灌注。

2.5。行为测试

在神经连接或脱落给药后的3,7,14,28和56天之前测定机械阈值，并在盲静脉条件下通过同一调查仪进行评估。一系列校准的von毛细毛发，屈曲重量在2g和15g之间，用足够的压力施加到离子上方的皮肤上以弯曲细丝。从von毛细毛发的主动撤回被定义为积极的反应。每个von frey灯丝用几秒钟的间隔施加五次。当大鼠向相同长丝显示5个正反应时，完成该过程。计算响应频率（[总刺激的正响应数量/数量×100％），并进行了一系列von Frey灯丝力，刺激响应频率曲线（ - 曲线）被绘制。我们使用了EF50值，定义为von Frey灯丝力（ ）从刺激-响应频率曲线中产生50%的响应频率，作为机械阈值的测量。EF50的下降表明存在机械性异位痛[14.］．

2.6。SHED分布

根据制造商的说明，用PKH26红色荧光细胞连接剂迷你试剂盒(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)对SHED进行标记。简单地说，1毫升稀释剂C和4μ将L PKH26染料加入细胞粒料中并在室温下温育5分钟。用5ml血清终止反应。将染色的细胞以1200rpm离心5分钟并注射（ 细胞,0.2毫升, 大鼠)。在SHED移植后24和72 h，分别采集左侧TG、三叉神经脊髓尾侧亚核、C1-C2脊髓颈背角(VC/C2)、延髓口腹内侧(RVM)、心、肺、肝、肾、脾、肠。组织在4%甲醛中固定2天，然后用15%和30%葡萄糖水脱水，切成10块μ片。DAPI染色(1μL/mL)，室温保存15分钟。PKH26(红色)和DAPI(蓝色)荧光信号用LSM 510共聚焦激光扫描显微镜(卡尔蔡司，德国)分析。

2.7。苏木精和曙红（他）染色

HE染色来评估对炎性细胞浸润的SHED在受伤的神经的效果。动物SHED移植7天后死亡。Paraffin-embedded trigeminal nerves of sham rats and CCI-ION rats with or without SHED transplantation were cut to a thickness of 10 micrometers, dehydrated twice with 100% ethanol for 10 min, and rinsed with water. Then, the sections were stained with Harris’ hematoxylin solution (Baso, Zhuhai, China) for 3 min and rinsed with water. Ten percent acetic acid and 85% ethanol were used for tissue differentiation. Then, the sections were stained with eosin Y ethanol solution (Baso) for 2 min. The sections were dehydrated with two changes of 95% alcohol and two changes of 100% alcohol. After extracting the alcohol with two changes of xylene, the sections were covered with coverslips and observed and imaged under a light microscope (Olympus SZX12; Olympus, Tokyo, Japan).

2.8。定量逆转录（RT-Q）PCR

在血液移植后7天和56天杀死动物。mRNA水平TNF-α.和il - 1β在三叉神经中通过使用Stratagene / Sybr Green SuperMix系统通过RT-QPCR量化。我们使用具有GDNA橡皮擦的Primescript RT试剂盒，以防止基因组DNA的污染。使用Trizol试剂（Invitrogen，Carlsbad，Ca，USA）从受伤神经中提取总RNA，并使用RNEasy试剂盒（Qiagen，MD，USA）纯化。cDNA是从1中产生的 μG RNA使用上标II（Invitrogen，Carlsbad，Ca，USA）和每次反应2.5ng随机引物。PCR程序如下：在94℃下5分钟，在95℃下3分钟，然后在95℃，45℃下在58℃下为30℃，在68℃下为30℃。β-Actin被用作正常化的管家基因。使用以下引物：TNF-α.，前进5. -CCC CGA cta TGT GCT CCT ca -3和反向5 -GGG CTC TTG ATG GCG GA-3 ;il - 1β，前进5. -GGA AGG CAG TGT CAC TCA TTG TG-3和反向5 -GGT CCT CAT GGA CCT AGC TCC-3 ;和β肌动蛋白（对于看家标准化基因），正向5 -GGT CCA CAC CCG CCA CCA G-3和反向5 -Cag GTC Cag acg Cag gat gg-3 。所有PCR均以三份运行。使用比较CT方法计算相对mRNA水平（方法）。

2.9。免疫组织化学染色

动物SHED移植7天后死亡。灌注后，收集左Tg和三叉神经并在4％多聚甲醛中后固定过夜。组织在10℃下冠状冠状组织 μm.采用常规免疫组化方法，首先使用抗TRPV1的一抗(1:10 0,Neuromics, Edina, MN, USA)，然后使用cy -3标记的山羊抗兔抗血清(1:25 0,Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA, USA)。从6个TGs的每个神经节的6个代表性切片中计数trpv1阳性细胞。只评估细胞核清晰的标记神经元。使用ImageJ软件(美国国立卫生研究院，MA, USA)分析三叉神经TRPV1染色强度。

2.10。Western Blot.

动物SHED移植7天后死亡。总蛋白从左边TG和假手术组，CCI-ION大鼠三叉神经无SHED移植和CCI-ION大鼠移植SHED提取。蛋白质用的组织蛋白提取试剂（微凹生物技术，上海，中国）萃取，和50 μ在室温下封闭(Tris Buffered Saline with Tween with 5%脱脂奶粉)2小时，并在4℃下与抗TRPV1的抗体(1:40 0;Santa Cruz)。清洗膜，用辣根过氧化物酶结合的二抗(Santa Cruz Biotechnology)在37°C孵育2小时。用ECL (Western Lightning, USA)检测免疫反应性。TRPV1蛋白水平归一化为β肌动蛋白相同的样本。

2.11。统计分析

所有数据都表示为 （SEM）。使用双向重复措施Anova进行分析机械阈值数据，然后是Bonferroni的后HOC测试。单向ANOVA用于比较三个组中的数据。意义程度确定在 。

3.结果

3．1.用于移植研究的分离SHED的特性

流式细胞分析显示，培养的SHED中有99.27%和80.23%的CD73阳性(图)1（a）和CD105(图1（c）),分别。只有2.35%和0.56%的细胞CD34阳性(图1 (d)）和CD45（图1 (e)),分别。这些结果表明SHED表示一组间充质干细胞标志物，但不是造血干细胞标记物。培养的棚子大多是主轴形的（图1 (f)）.

4周神经诱导培养后，SHED表达神经标记βIII-小管蛋白，表明它们的神经分化潜力（图1 (g)）.在诱导成骨分化4周后，在SHED培养中形成茜素红s阳性结节(图)1（h）)，表明SHED有向矿化组织分化的潜力体外。

３．２．局部注射或输注SHED可逆转CCI-ION术后疼痛过敏反应

三叉神经是支配面部皮肤的主要感觉神经。TG的三个大分支是眼神经(V1)、上颌神经(V2)和下颌神经(V3)。我们通过V2的主要分支眶下神经的CCI诱发神经性疼痛。双向重复测量方差分析显示，治疗的主效应显著( ）和时间（ ）和显著的交互作用( ）.在CCI-ION组中，EF50显著降低( ）第3天第一次试验。在该模型中，机械性异常痛持续超过8周，这表明在神经结扎后3,7,14,28和56天，机械性阈值显著且持续下降( 那 那 那 那和 那分别地）（图2(一个)）.

在试点实验中，我们发现在段落中脱落3-5有效地产生了长期疼痛缓解，而在高通道（> 20）处脱落无效（数据未显示）。

首先，我们测试了损伤三叉神经直接注射SHED对CCI-ION大鼠行为体征的影响。如图所示2 (b)，两个低剂量（ )及高剂量SHED ( 在与CCI-ION + Injmedium相比，逆转局部注射后的机械超敏反应和Allodynia 3,7,14,28和56天的机械超敏反应和56天。培养基对损伤的机械阈值没有显着影响。

接下来，我们测试SHED的单次输注是否有效。在已接受SHED的输注大鼠，输注后第3天的EF50时相比被增加显著与在介质控制（ ）及基线水平( ）.在8周的观察期内持续存在的镇痛作用，如与CCI-ION + INFMEDIUM相比，在血液+注入后的机械阈值3,7,14,28和56天的显着增加所示 在所有时间点）（图2 (c)）.

3.3。在早期阶段局部移植的局部化

用PKH26和DAPI染色的SHED分布到24小时的IPSILATERAL TGS（图3(一个)-3（c）） 和7.2 h (Figures3（d）-3（f））局部注射后。在三叉脊髓亚核亚核和C1-C2脊髓颈背角（VC / C2），肾小度腹部髓质（RVM），心脏，肺，肝，肾，脾脏或肠中没有发现pKH26阳性细胞。

3.4。局部血液移植抑制受伤神经中的炎症细胞浸润

损伤部位注射SHED后7天，用HE染色对损伤的三叉神经进行组织学检查。如图所示4.， CCI-ION组三叉神经招募的白细胞数量显著增加(图)4（c）)，与假手术组( ）（数字4（b））.然而，在三叉神经炎症细胞浸润在CCI-ION +低剂量降低injSHED组当与CCI-ION + injMedium组相比（ ）（数字图4（d））.

3.5。当地SHED移植对TNF-α的水平的影响α和IL-1β在三叉神经中

为了评估SHED移植对促炎细胞因子表达的影响，我们检测了TNF-α.和il - 1β局部移植后的RT-QPCR 7和56天受伤三叉神经的mRNA水平。CCI-离子组显示出明显较高的mRNA水平TNF-α.（ 那数字5（a）） 和il - 1β（ 那数字图5（c））在局部移植后7天的假期组。但是，局部血液移植降低了mRNA水平TNF-α.（ 那数字5（b）） 和il - 1β（ 那数字图5（d））在局部移植后7天的培养基对照相比，受伤神经。这些结果表明，SHED显着抑制早期神经病理大鼠受伤神经中的CCI离子诱导的促炎细胞因子的上调。

mRNA水平没有显着差异TNF-α.（数字6（a）） 和il - 1β（数字6（c））在神经结扎后56天的假手和CCI-离子组之间的受损三叉神经（ ）.当地SHED移植并没有改变TNF-α.（数字6（b）） 和il - 1β信使rna水平(图6（d）)损伤三叉神经56天后( ）.

3.6。局部血液移植抑制CCI离子大鼠TRPV1表达的上调

局部注射SHED后7天拔除三叉神经和TGs。免疫组化染色检测TRPV1表达(图7.）和Western Blot（图8.）.TRPV1阳性细胞在TG均显着增加（ ）和三叉神经（ ）与假大鼠相比，在CCI-离子组中（图7.）.在TG TRPV1表达的CCI-ION诱导的上调（ ）和主要传入神经（ ）被当地SHED管理机构显著抑制(图7.）.

TG中TRPV1蛋白水平( ）和三叉神经（ ）后神经结扎用假手术组相比上调（图8.）.局部血液移植抑制CCI离子诱导的TG中TRPV1表达的上调（ ）和主要传入神经（ ）（数字8.）.

4.讨论

本研究表明，SHED的全身或局部注射减毒的对机械刺激的敏感性在三叉神经损伤后的大鼠，而这种效果持续在整个8周的观察期。PKH26-labeled SHED were distributed to the ipsilateral TG 24 and 72 h after local injection. SHED transplantation at the lesion site reduced inflammatory cell infiltration and proinflammatory cytokine levels in the injured nerve in the early phase. Moreover, local SHED transplantation inhibited CCI-ION-induced upregulation of TRPV1 expression in the trigeminal nerve and ganglion.

在组织修复或重建中使用牙科衍生的间充质干细胞被认为是用于翻译再生医学的有趣里程碑。牙科衍生的间充质干细胞具有较强的能力，分化为神经，骨质骨质，脂肪酸谱系[15.-17.］．例如，SHED移植由糖尿病大鼠增加神经生长因子的蛋白水平和毛细血管密度[提供神经保护18.］．最近的研究表明，骨髓基质干细胞（骨髓基质干细胞）减少神经性疼痛的进展。骨髓基质干细胞的全身和局部用药减弱各种神经性疼痛模型机械和热痛觉过敏。骨髓基质干细胞静脉注射CCI-ION模式恢复痛觉过敏[19.那20.]和坐骨神经CCI模型[21.］．已显示BMSCs在鞘内产生疼痛缓解[22.]，IntraBrain [23.]，内侧[24.]注射。当BMSCs直接注射到病变部位时，CCI离子大鼠，坐骨神经的CCI模型和脊髓损伤模型中的机械和热阈值增加[20.那25.那26.］．

SHED据说显示出比成人骨髓干细胞和牙髓干细胞[更高的增殖率和碱性成纤维细胞生长因子基因的表达2那27.那28.］．可以容易地获得棚，而无需侵入手术，因此代表潜在的临床应用的大量干细胞来源，没有道德问题。更重要的是，作为神经嵴细胞相关的后期干细胞，血清表达各种神经细胞标记物[2]，释放关键神经营养因子，抑制星形胶质细胞和神经元的凋亡[7.］．重要的是，SHED移植可缓解糖尿病大鼠周围神经病变并增加毛细血管密度[18.］．因此，SHED在控制疼痛方面可能比骨髓间充质干细胞有优势，并有可能成为治疗神经性疼痛的一种替代和有效的治疗方法。

它仍然不清楚干细胞如何抑制疼痛。已经提出，干细胞可以通过细胞对细胞接触活化机制或分泌各种分子如细胞因子的分泌，调节许多病理条件的各种分子[21.那29.那30.］．越来越多的证据表明，大多数全身骨髓间充质干细胞迅速滞留在肺部，其持久的抗痛觉过敏作用远远长于它们在宿主中的生存时间[31.那32.］．因此，BMSCs在慢性疼痛管理中的局部机制是各种分子的分泌抑制神经炎症和调节细胞因子水平。例如，在坐骨神经CCI模型小鼠中[22.那33.]，鞘内的BMSCs通过施加抗炎生长因子转化生长因子β的释放，这抑制CCI诱导的神经炎症脊髓一个持久的镇痛作用，下调TNF-α脊髓和背根神经节神经元中的表达，调节兴奋性突触传递[22.那33.］．核因子Kappa B（NF-κb）信号传导在BMSC诱导的持续疼痛和脊髓损伤的大鼠模型中发挥着关键作用[34.那35.］．在脊髓损伤大鼠中，BMSCs下调磷酸化NF-κ乙P65亚基，降低其它促炎因子，如TNF-αα和IL-1β[35.］．人骨髓间充质干细胞通过降低促炎细胞因子IL-1的水平来减轻机械异位痛和热痛觉过敏β和IL-17并释放抗炎细胞因子IL-10在鼠粪疼痛的小鼠粪便神经损伤模型中[21.那23.］．

为了支持BMSCs在止痛药中的机制，我们的研究提供了证据表明，通过在早期阶段减少受伤神经中的炎性细胞浸润和促炎细胞因子水平，局部血液移植衰减神经性疼痛。有足够的证据表明细胞因子在对神经病疼痛的炎症反应中起重要作用。神经损伤升高的促炎细胞因子水平的降低有助于疼痛缓解[36.那37.］．

与提及Shed具有免疫调节性能并调节其他条件的细胞因子水平。Shed抑制淋巴细胞刺激，伴有促炎因子的减少（TNF-α和IL-2），并增加了抗发炎因子（IL-6和IL-10）[38.］．此外，SHED调节免疫系统和解除免疫病症，如SLE [8.］．SHED移植降低了促炎细胞因子IL-17的水平，上调了调节性T细胞和辅助性T细胞的比例体外和逆转的SLE相关的疾病和在小鼠中改善的SLE表型[8.］．进一步研究棚上神经损伤免疫反应的影响将是对理解底层SHED的镇痛作用的机制有前途的方向。

本研究的另一个重要发现是，SHED移植抑制了cci - ion诱导的原发性传入神经TRPV1表达上调及TG的上调，这可能提示TRPV1参与了SHED的强镇痛作用。TRPV1是疼痛检测和调节的关键分子组成部分。在神经元中，TRPV1的激活增加了钙内流，并有助于对疼痛的更高感知[9.-11.］．在这项工作中，在大鼠神经损伤后，在损伤部位和IpsilaTalal Ganglia的三叉神经中的TRPV1表达增加，这表明外周Trpv1表达介导三叉神经痛。在此介绍，先前的研究报告说，在脊柱和颅神经损伤后神经纤维和神经节上调TRPV1表达。在坐骨神经连接大鼠中，背根神经节和脊髓背角的TRPV1 mRNA和蛋白质水平损伤后1-4周增加到1-4周[39.那40］．在成人雪貂的舌神经交易后3周，在受伤神经和TG神经元中上调TRPV1表达[41］．在小鼠三叉神经损伤后，损伤V2中大量大神经元的体细胞可被TRPV1配体辣椒素激活[9.］．在CCI离子后，在CCI离子后，在CCI离子后，在CCI离子后的所有背角椎板中的TG神经元的中央纤维和末端观察到TRPV1多动。我们的数据显示，通过对外周Trpv1表达和神经元塑性调节的下调，血液移植逆转神经性疼痛。然而，Shed调节TRPV1表达的分子机制未知，需要进一步调查。本研究的一个局限性是我们没有研究细胞因子与TRPV1表达的关系在血上介导的镇痛。未来，我们将重点关注揭开神经病疼痛的详细机制。

5。结论

本研究揭示了SHED在扭转大鼠三叉神经损伤后的超敏和异常痛觉方面的新作用。旁分泌功能和外周神经系统TRPV1表达下调可能是shedbased镇痛的机制。这些结果提供了临床前证据，支持使用牙科干细胞治疗三叉神经痛和潜在的其他慢性疼痛。

数据可用性

用于支持本研究结果的数据可根据要求可从相应的作者获得。

的利益冲突

作者声明有利益有关这篇文章的发表没有冲突。

致谢

本研究由国家自然科学基金资助项目(批准号:20081010901)。辽宁省自然科学基金资助项目(20180530097、201602811)。

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