暴露的间充质干细胞阿尔茨海默病的环境可以提高治疗效果

文摘

间充质干细胞(msc)已成为一个有前途的工具用于治疗阿尔茨海默病(AD)。先前的研究表明,人类的coculture msc和广告在体外模型减少42(淀粉样β蛋白的表达β42)在中以及淀粉样β蛋白的过度表达(Aβ-)降解酶如neprilysin (NEP)。我们关注的角色影射msc(人类沃顿jelly-derived间充质干细胞(WJ-MSCs)暴露于广告细胞系通过coculture系统)减少的水平β和抑制细胞死亡。我们表明,老鼠组接受天真msc和影射msc显示显著减少细胞死亡,泛素共轭的水平,和一个β水平,但影响是更大的在msc。此外,信使核糖核酸测序数据分析表明,高水平的TGF -β诱导primed-MSCs。此外,治疗TGF -β减少一个β表达一个广告转基因小鼠模型。这些结果强调广告环境预处理是一种很有前途的战略来减少细胞死亡和泛素共轭水平和维护msc的具备干细胞。此外,这些数据表明,人类WJ-MSCs暴露于广告环境可能代表一个有前途的治疗广告和小说。

1。介绍

阿尔茨海默病(AD)是一种广泛引起痴呆,是一种与年龄相关的1,2)、进步和不可逆的神经退行性疾病(3,4),不存在疾病修饰治疗(5,6]。大部分的药物正在开发目标β独自一人(7,8]。多目标药物的发展,然而,可能是更有效的广告所涉及的多种致病机制(9,10]。

之前的研究包括那些由我们小组报告表明,间充质干细胞(msc)可能是一个潜在的治疗广告(11- - - - - -16]。msc分泌蛋白质,抑制细胞凋亡和炎症、调节免疫应答受损组织,促进内源性神经发生和神经保护。基于特定的诱导机制和改善治疗结果,msc显示相当大的承诺(17]。当用于治疗广告,msc表达基因增强相关运输和分泌细胞外(11- - - - - -13,15,16),这表明旁分泌活动的增加。这些基因已知具有神经保护和神经营养功能如抑制细胞凋亡、细胞增殖的调控,调控的神经发生。进一步,我们以前的研究表明,msc接触脑脊液(CSF)的广告调节与广告相关的基因治疗的患者,同时保持具备干细胞(18]。因此,AD-exposed msc增强msc在广告的整体功效治疗。

在这项研究中,我们调查是否治疗效力的msc可以增强暴露他们的广告环境。因此,我们生成AD-exposed msc使用coculture msc和APP695-Swedish突变(K595N / M596L)表达H4细胞(H4SW细胞),提供一个广告环境的特点是高水平的分泌有毒的形式β,如β1-40和β1-42 [19,20.]。然后分析了msc接触后的治疗效果的广告环境。此外,识别条件msc、表达的基因治疗有效的广告,我们执行信使rna序列分析的天真和条件msc。

2。材料和方法

2.1。沃顿商学院的Jelly-Derived间充质干细胞的文化

沃顿商学院的jelly-derived间充质干细胞(WJ-MSCs)孤立根据Kwon等描述的过程。21]。WJ-MSCs是根据标准操作程序(sop)培养良好生产规范的设施在三星医疗中心。之前coculturing H4SW细胞,WJ-MSCs分离使用trypsin-EDTA 0.25%解决方案(Gibco-Invitrogen)。

2.2。H4和H4SW细胞系文化

人类胶质母细胞瘤H4细胞和APP695-Swedish突变(K595N / M596L)表达H4细胞(H4SW)请提供Jung-Hyuck安的实验室(梨花女子大学医学院,韩国)和培养过程之前报道(19,20.]。H4 H4SW细胞培养在杜尔贝科的修改鹰的媒体(DMEM;Gibco / BRL)含10%胎牛血清(的边后卫;Gibco / BRL), 100 U /毫升青霉素(Gibco / BRL), 100年μg / mL链霉素(Gibco / BRL),和2毫米谷酰胺(Gibco / BRL)如前所述。H4SW细胞培养是由增加500μg / mL geneticin (Gibco / BRL)增长的媒体。

2.3。广告环境下预处理msc

H4SW细胞培养和维护6-well板兼容插入井。confluency到达70%,H4SW细胞cocultured WJ-MSCs在6-well transwell插入(美国BD猎鹰)24小时的无血清培养基在37°C公司为5%₂。

2.4。为验证二手WJ-MSCs流式细胞术分析

coculture之后,预处理WJ-MSCs通道5 trypsin-EDTA分离使用0.25%的解决方案和收获15毫升锥形管。离心后,WJ-MSCs洗和resuspended磷酸盐(PBS)和2%的边后卫阻止非特异性结合位点。Immunophenotypic先决条件的分析,根据执行WJ-MSCs MSC标准国际社会的细胞疗法(ISCT) [22)通过流式细胞仪测定的表达以下标记:CD44, CD73, CD90、CD105, CD14, CD11b, HLA-DR (mhc ii)、CD34、CD45、CD19(美国BD生物科学)。至少10000事件是收购了BD FACSVerse(美国新泽西州BD生物科学)、结果分析与BD FACSuite软件版本10(美国BD生物科学)。分析了预处理算子的微分WJ-MSCs根据以前的报告中概述的过程(21]。

2.5。与预先处理这些WJ-MSCs H4SW细胞Coculture

confluency 70%, H4SW细胞(众议院的Transwell单元)是cocultured 预处理WJ-MSCs播种在6-well transwell插入(BD猎鹰)24小时无血清条件下在37°C公司为5%₂。天真WJ-MSCs与H4SW cocultured细胞作为对照组。coculture 24 h后,H4SW细胞收获和快速冷冻进行进一步分析。

2.6。脑室注射WJ-MSCs和TGF -β到5 xfad老鼠

12个月大的转基因小鼠模型的广告,5 xfad(湄公河# 04848),被用于这项研究。杰克逊实验室的老鼠购买(美国我巴尔港)。实验动物分为五组:野生型(WT), 5 xfad(假的),+幼稚MSC(天真的MSC注入5 xfad老鼠),+影射MSC(影射MSC注入5 xfad老鼠),和+ TGF -β(重组TGF -β蛋白质被注入5 xfad老鼠)。在注入WJ-MSCs之前,所有的老鼠都在5%和2%异氟烷吸入异氟烷麻醉和维护在外科手术。与聚乙烯吡咯酮碘剃须和手术部位消毒后,皮肤切口长度约1厘米。使用一个微型钻机,一个小毛刺洞是在以下坐标(右侧脑室):a / p - 0.4毫米,M / L + 1.0毫米,前囱D / v - 2.3毫米。WJ-MSCs ( 细胞)悬浮在3μL(酚红MEM-alpha或3μL TGF -β(10 ng / mL)注入右侧侧脑室的速度1μL / min用15分钟延迟使用汉密尔顿注射器(美国汉密尔顿公司NV)。注射后的针小心地删除完成后,和皮肤缝合,其次是杀菌的。所有小鼠安乐死一周后管理。

2.7。大脑组织准备

一周后注入WJ-MSCs,所有老鼠与异氟烷麻醉,紧随其后的是心脏灌注。老鼠的脑组织被收获,分成一半沿纵向裂缝。收获的大脑组织在液态氮冷冻和储存在-80°C对西方印迹和酶联免疫吸附试验(ELISA)分析或固定在4%多聚甲醛进行组织学分析。

2.8。西方的屁股和ELISA

组织和细胞提取准备根据以前公布的方法(23]。短暂,声波降解法(布兰森超声学、绝望、英国)中执行一个缓冲区包含9.8尿素,4% 3 - ((3-cholamidopropyl) dimethylammonio) 1-propanesulfonate(家伙),130毫米二硫苏糖醇,40毫米tris-Cl, 0.1%十二烷基硫酸钠(SDS)。蛋白质浓度测定用布拉德福德试验(Bio-Rad实验室,Inc .)、钙、美国)。蛋白质提取(20μg / lane)被加载到SDS-polyacrylamide凝胶电泳,然后转移到硝化纤维膜。美国NuPAGE 12%(表达载体,CA)凝胶用于免疫印迹分析。细胞膜是孵化anti-ubiquitin抗体(乌兰巴托,1:1000;美国圣克鲁斯)、anti-MOAB (1: 200;罗福斯生物制品有限公司,美国),anti-GFAP (1: 1000;Abcam,剑桥,英国),anti-TNF -α(1:5000;Enogene,南京,中国),反β肌动蛋白(1:5000;Sigma-Aldrich有限公司,密苏里州,美国)在4°C。随后,膜被孵化与二次抗体(山羊anti-mouse IgG-HRP;美国Ab前沿)在室温下1 h (RT)。这些墨迹开发使用ECL解决方案(美国Advansta)和蛋白质乐队通过接触x射线胶片被检测到。光密度分析使用ImageJ软件(美国国家卫生研究院)。

ELISA测试进行的β和光,42酶联免疫试剂盒(kouichi剑桥,英国)和一个SRGN酶联免疫试剂盒(寿命生物科学、华盛顿、美国)根据制造商的指示。

2.9。Thioflavin-S染色

固定的脑组织被嵌入在石蜡,4μ米厚的日冕部分做好准备的话。检测一个β,执行thioflavin-S染色根据制造商的指示。所有幻灯片被串行deparaffinized水化使用乙醇分级系列,紧随其后的是治疗的幻灯片1%过滤thioflavin-S (Sigma-Aldrich)和洗涤。挂载的幻灯片被储存在4°C荧光显微镜成像(尼康,品川,东京,日本)。

2.10。RNA隔离

总RNA分离使用试剂盒试剂(表达载体)。RNA质量评估的安捷伦2100生物分析仪使用RNA 6000纳米芯片(安捷伦科技,Amstelveen、荷兰),和RNA量化进行了使用一个nd - 2000分光光度计(美国德热Inc .)。

2.11。图书馆准备和QuantSeq 3信使rna序列

图书馆是由控制和测试使用QuantSeq 3 rnamRNA-Seq图书馆准备工具包(Lexogen, Inc .,奥地利)根据制造商的指示。总之,500 ng的总RNA样品准备和一个包含一个Illumina-compatible oligo-dT引物序列的5结束是杂化RNA,反转录。降解RNA模板后,两样东西合成含Illumina-compatible链接器是由一个随机引物序列的5结束。双链库是由磁珠纯化去除所有反应组件。图书馆是放大添加集群所需的完整的适配器序列生成。完成图书馆的纯化PCR组件。通过单头75高通量测序进行测序使用NextSeq 500 (Illumina公司,Inc .)、美国)。

2.12。QuantSeq 3信使核糖核酸测序数据分析

QuantSeq 3mRNA-Seq读取使用Bowtie2对齐(24]。Bowtie2指数从基因组装配序列生成或代表记录序列的基因组和转录组看齐。对齐文件被用来组装成绩单,估计他们的丰富,检测基因的微分表达式。差异表达基因决定基于独特的计数和多个比对使用Bedtools [25]。RT(读计数)数据处理基于quantile-quantile归一化法在R软件使用磨边机(26使用Bioconductor []27]。进行基因分类是基于搜索大卫(http://david.abcc.ncifcrf.gov/)和Medline数据库(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)。

2.13。实时聚合酶链反应

实时聚合酶链反应(PCR)进行使用StepONEPlus系统(应用生物系统公司、钙、美国)2 x电力SYBR绿色主人混合(美国AB)以下三级项目参数:95°C 10分钟,15秒95°C, 59°C 30秒(40周期)。引物对运算器(人类)和TGF-β(人类)从Bioneer购买公司(大田、韩国)。所有PCR反应进行了一式三份。每个目标基因的比较量化进行了基于周期阈值( ),这是标准化的人类吗GAPDH使用ΔΔCT Livak和Schmittgen提出的方法。

2.14。统计分析

所有值的 的意思(S.E.M)。单向方差分析是用来评估的意义,≤0.05被认为是具有统计学意义的价值。IBM SPSS软件21.0版本是用于分析。

3所示。结果

3.1。影射msc显示在瑞典H4细胞系凋亡影响血清饥饿

评价治疗效果的影射msc、瑞典H4细胞(H4SWs) cocultured与msc 24 h(图1(a))。观察细胞凋亡H4SW细胞serum-starvation状态时24 h(仅H4SW)。然而,当幼稚的msc或影射msc与H4SW cocultured细胞,细胞死亡是抑制(图2(一个))。coculture后,可行的细胞的数量计算。相比H4SW电池只集团,更可行的细胞中观察到+幼稚MSC和+ MSC组(图2 (b))。H4SW细胞的凋亡效应模型+影射MSC组最高。接下来,免疫印迹分析确认天真的凋亡效应和msc。表达的细胞死亡标记,裂解PARP,裂解caspase-3时减少H4SW细胞cocultured天真msc和msc(数据2 (c)和2 (d))。基于光密度分析、裂解PARP的水平和caspase-3降低+幼稚MSC(分别为2.2 - 1.4倍变化)和+影射MSC组(分别为2.7和1.8倍更改)。从这些结果,我们证实,影射msc对H4SW广告表现出更强的抗凋亡影响细胞比天真的msc在体外模型。

3.2。影射msc显示在体外治疗效果与阿尔茨海默氏症

接下来,我们进行了免疫印迹分析确认影射msc在AD病理的治疗效果,尤其是一个β和泛素共轭。一个β是最著名的广告的病理特点。泛素配合26 s蛋白酶体活性,呈低度负相关,这意味着受损26 s蛋白酶体活动积累的结果β、过度磷酸化τ和泛素在大脑的广告配合。因此,以及β泛素的水平,配合以本研究为广告的另一个标志。

msc与H4SWs cocultured在体外24小时来评估治疗效果与广告症状(图3)。coculture后的水平β的媒体被ELISA(图测量3(一个))。分泌一种β是显著降低+影射MSC条件下相比,控制细胞H4SW变化(1.6倍)。然而,天真的msc没有显示显著从β的效果。接下来,泛素的累积含量的变化分析了配合西方的屁股(图3 (b))和乐队的强度(图量化3 (c))。在广告中在体外模型(H4SW细胞),更多的泛素配合细胞溶质的积累比正常细胞系(H4)。然而,泛素的水平配合明显减两+幼稚msc(1.2倍变化)和+ msc(1.4倍更改)。特别是,影射msc显示增强治疗效果的衰减泛素共轭积累。这表明,影射msc成功降低的水平β在广告和泛素配合在体外模型,这效果比天真的msc。

此外,基因表达的差异(APPSW,BACE1,IGFBP3)H4 H4SW细胞cocultured天真msc或影射msc进行了分析。分析表明,在公元H4SW特异表达基因在体外模型改变后对正常情况下(H4细胞)coculture天真msc和msc。两个msc、影射msc显示更好的变更(补充图1)。

3.3。评价治疗效果5 xfad影射msc的老鼠

在广告评估影射msc的功效,我们执行一个在活的有机体内实验使用5 xfad AD转基因小鼠。实验动物(12个月)被分为四组:野生型控制(WT),转基因控制(假的),naive-MSC, MSC。我们注入了 WJ-MSCs到正确的侧脑室。小鼠安乐死注射后一周,收获和大脑组织。首先,影射msc的凋亡效应评估了裂解caspase-3免疫印迹分析(图4(一))。WT老鼠相比,5 xfad老鼠增加caspase-3裂解,表明大脑中的神经元死亡,而天真的msc和影射msc显著降低裂解caspase-3水平在大脑中。接下来,一个β积累在大脑中被西方印迹和测量thioflavin-S染色(图4 (b))。WT控制相比,沉积β在大脑中观察到5 xfad老鼠。组注射天真msc和msc显示下降β积累。尤其是影射msc,减毒β积累更有效地比天真的msc,证实了thioflavin-S染色。Thioflavin-S染色(图4 (c))显示广泛的β(绿色)存款的皮层和海马区域5 xfad转基因小鼠对照组(假的)。引人注目的是,一个的数量β在皮层和海马减少组注射天真和影射MSC、和影射MSC组显示更好的治疗效果。

然后,我们量化天真的msc的数量或影射msc 5 xfad通过实时定量PCR分析使用人类的大脑运算器底漆(图4 (e))。msc的绝对数量是决定基于标准曲线(线性回归 ,图4 (d))。大约2000剩余的细胞被发现在小鼠注射天真msc、数量而增加的msc发现变化(2.4倍)。基于这些结果,影射msc显示增强治疗效果和增加细胞的生存在活的有机体内。

3.4。msc与天真的msc mRNA表达不同

RNA微阵列进行识别的mRNA表达的变化msc(图5)和一个散点图是来自原始数据(图5(一个))。在图5(一个),调节基因在影射msc比较天真的msc和所示红色和蓝色所示的表达下调基因。重要基因的欧几里得距离聚类分析了兆电子伏软件提出了对数转换数据,如图5 (b)。38调节基因集群作为调节。在这些基因中,我们筛选TGF -β的表达增加3.0倍相比,影射msc在天真的msc的水平。此外,upregulation TGF -β表达预示MSC是通过定量实时PCR证实。结果表明,表达TGF - mscβ在3.2倍的水平高于天真msc(图5 (c))。

这些结果表明,TGF -β高度由影射MSC分泌,可能是一个治疗效果在广告的关键分子。

3.5。治疗效果的TGF -β在5 xfad老鼠

确定TGF -的作用β,尤其是在antiapoptosis和从β,重组蛋白注入侧脑室5 xfad小鼠安乐死一周后(图紧随其后6)。免疫印迹分析表明裂解caspase-3增加5 xfad老鼠WT控制相比,但明显降低TGF -β组(图6(一))。接下来,从βTGF - - -的影响β是衡量一个β免疫印迹分析和thioflavin-S染色(数字6 (b)和6 (c))。的沉积β在5 xfad TGF -治疗后小鼠减少β(图6 (b))。然而,这种观察没有复制,没有统计学意义在组织学观察thioflavin-S染色(图的分析6 (c))。

3.6。SRGN H4SW细胞分泌:一个潜在的预处理因素诱导的广告

接下来,该分子造成msc分泌TGF -β被调查。识别潜在的候选人负责启动msc、H4和H4SW细胞的基因表达谱进行了分析(图7)。图中的红点表示增加的mRNA表达H4SW细胞相比H4细胞,而绿色圆点表示降低了表达式(图7(一))。共有六个基因高度调节H4SW细胞被选中,和集群使用欧氏距离进行测量的重要基因(图7 (b))。接下来,分泌量serglycin (SGRN)蛋白质测定条件的媒体。H4SW细胞,SGRN蛋白质水平显著升高和H4细胞相比,这表明SGRN蛋白质可能代表广告微环境和潜在的作为的主要诱导msc。

3.7。的主要效应是SGRN msc

确认SGRN是否影射的主要诱导msc、不同浓度的SGRN蛋白质被用来治疗天真msc(图8)。与SGRN天真的msc的治疗后24 h, TGF -β信使rna表达天真msc通过定量实时PCR分析测量。TGF -明显增加β信使rna表达观察,除了在10 ng / mL(图8(一个))。高峰是观察到2毫克/毫升SGRN治疗。接下来,SGRN-treated msc的治疗潜力(SGRN msc)简要评估(图8 (b))。H4SW细胞与天真的msc cocultured或SRGN msc 24 h,然后,CCK试验进行确认的凋亡效应天真和SRGN msc H4SW细胞。细胞死亡时显著地抑制H4SW细胞cocultured天真msc和SGRN msc。这表明SGRN由H4SW分泌细胞或广告的微环境的诱导msc。

4所示。讨论

最新进展了msc在广告的有前途的治疗作用12,17]。因为广告仍然是发病率和死亡率的主要原因,重要的努力被指向β通过干细胞移植(删除13,28]。msc的治疗特性在很大程度上是相关的凋亡和抗炎能力,已被证实在活的有机体内和在体外(13,29日,30.]。然而,msc的低存活率在活的有机体内是一个挑战和msc的好处是由定义机制(31日- - - - - -33]。

各种修改的msc一直试图改善他们的存活率和治疗效果31日,32,34,35]。试图提高干细胞存活率、代谢或迁移能力主要集中在基因修改淘汰赛或者特定基因敲入36- - - - - -38]。然而,临床应用转基因msc与意想不到的基因突变导致肿瘤形成的风险(39]。在另一种方法,可以使支架的生物相容性代替封装msc开发改善生存和移植率(40]。这种方法促进了临床应用,但没有改善msc的功效。

近年来,预处理方法,试图改善msc的功效也一直在聚光灯下(41- - - - - -43]。预处理的目的是促进细胞增殖(43),提高迁移能力43),提高蛋白质分泌(44]。不同基因的修改,可以通过公开msc预处理特定的微环境。与基因改造相比,预处理增强治疗效果,同时保持细胞的基因型(45]。0的方法提出了预处理msc。由缺氧预处理[46],炎症刺激[42,45),或其他因素(42)战略旨在提高生存和MSC posttransplantation的有效性。在这项研究中,我们事先已经使用一个mscβ阿尔茨海默病的最重要标志,并通过内生H4SW细胞用于预处理β。

H4SW细胞是一个稳定的细胞系,淀粉样前体蛋白(APP)的瑞典突变引入人类胶质母细胞瘤细胞系。神经细胞的应用程序是一个完整的膜蛋白参与突触的形成,突触可塑性,离子出口。应用,表达细胞膜,通常是由α分泌酶。然而,应用蛋白质的突变或PSEN1 / PSEN2裂解的增加应用程序的变化β- - -γ分泌酶,导致高水平的β生产在大脑中。的一个β生产被认为是阿尔茨海默病的致病物质,因为它形成低聚物和聚合物β斑块,导致神经毒性和最终,神经细胞的死亡。应用瑞典,毗邻β分泌酶的应用,是一个著名的家族性阿尔茨海默病的基因突变,导致增加总β生产(47- - - - - -49]。因此,广告的研究模型与应用瑞典突变是现在广泛使用的50- - - - - -53),H4SW细胞系称为广告在体外模型(20.]。此外,β积累在AD患者的大脑激活神经胶质细胞,是消除β和有神经保护作用[54- - - - - -57]。msc不删除β本身当暴露于广告而分泌的蛋白质可以刺激神经元或胶质细胞通过旁分泌作用[13]。因此,我们建议H4SW细胞系是适合本研究由于msc的治疗效果可以减少评估通过测量β存款刺激H4SW细胞。此外,泛素的沉积轭合物,间接的标志泛素蛋白酶体活性密切相关的淀粉样β蛋白清除机制,也是测量(15,58]。

当H4SW细胞与影射cocultured msc、减少的水平β和泛素配合观察H4SW细胞(数据2和3)。此外,当启动msc直接管理到5 xfad老鼠的大脑,一个广告在活的有机体内模型,影射msc显示治疗抑制神经元死亡和促进的效果β间隙(图4)。信使核糖核酸测序证实SGRN H4SW细胞所分泌的促进TGF -β由msc分泌(数字5和7)。TGF -β蛋白有相同的anticell死亡和从β影响影射msc, SRGN-treated msc(数据显示anticell死亡效果6和8)。此外,两个TGF -β蛋白质和影射msc显示抗炎效应导致诱导缓解肿瘤坏死因子的水平下降α在5和GFAP的通用标记神经炎症xfad(补充图4)。众所周知,SRGN的分泌增加炎症反应发生时(59]。硫酸肝素蛋白多糖,其中包含SRGN,负责促进fibrillizationβ和τ蛋白(60]。有趣的是,它也被报道说SRGN基因表达和蛋白表达显著增加在AD患者与正常对照组(61年]。因此,SRGN被认为是一个可能的生物标志物对于广告,表明SRGN预处理的MSC可能产生增强MSC治疗广告。此外,TGF -β高度表达影射msc或SRGN-treated msc、相关的信号通路TGF -β受损的广告(62年],TGF -β本身显示神经保护作用[63年,64年]。因此,之前发现SRGN和TGF -β有关AD患者的大脑和神经炎症已确认通过这项研究一旦老化。因此,我们得出结论,TGF -β,高度由影射msc分泌,可以在广告有治疗效果。

一个特别值得注意的发现是,当msc被暴露于一个广告微环境,SRGN分泌在阿尔茨海默氏症的大脑是公认的msc、被诱导增加TGF -的表达β,促进治疗效果。据我们所知,这是第一个研究的先决条件生成MSC使用可能的目标疾病的生物标志物。接种疫苗的概念,我们可以使msc在准备战斗状态,促进有效的蛋白质的分泌,让他们提前到目标疾病微环境。

我们的研究有几个局限性。首先,确切的作用机制SGRN, MSC, TGF -β没有阐明。第二,广告的认知的恢复在活的有机体内模型没有研究。注射后启动msc、TGF -β,或者SRGN msc、长期后续必须遵守。最后,优化信号因素及其组合用于MSC预处理需要进一步调查。研究应该进行预先处理基于msc加强msc的治疗能力,扩大平台开发的这项研究。

5。结论

总之,我们报告,广告环境预处理是一种很有前途的战略来减少细胞死亡和泛素水平,同时保持msc的具备干细胞和特点。此外,这些数据表明,人类WJ-MSCs暴露于广告细胞模型在体外可能代表一个有前途的治疗广告和小说。

缩写

广告:	阿尔茨海默病
msc:	间充质干细胞
WJ-MSCs:	沃顿商学院的jelly-derived间充质干细胞
棉结:	Neprilysin
一个β:	淀粉样β蛋白
BACE1:	β分泌酶1
H4SW:	APP695-Swedish突变(K595N / M596L)表达H4
CSF:	脑脊髓液
乌兰巴托:	泛素
GFAP:	胶质原纤维酸性蛋白
肿瘤坏死因子-α:	肿瘤坏死因子-α
TGF -β:	转化生长因子
SRGN:	Serglycin
MEM:	最低必要的媒体
聚合酶链反应:	聚合酶链反应
ELISA:	酶联免疫吸附试验
GMP:	良好生产规范
的边后卫:	胎牛血清
PBS:	磷酸盐
ISCT:	国际社会的细胞和基因治疗
S.E.M。	平均数标准误差
运算器:	节细菌属危害元素
方差分析:	方差分析。

数据可用性

数据可以在请求。

伦理批准

本研究机构批准的动物保健和使用委员会(IACUC)三星生物医学研究所(SBRI)三星医疗中心(SMC)。SBRI是一个认证机构评估和认证协会实验室的动物保健国际(AAALAC国际)和遵守实验动物资源的研究所(ILAR)的指导方针。

同意

依照规定批准的机构审查委员会(IRB)三星医疗中心,收集脐带知情同意与孕妇(IRB # 2016-07-102)。

信息披露

这个手稿提交预印本的链接https://www.researchsquare.com/article/rs-89815/v1。

的利益冲突

作者声明没有潜在的利益冲突。

作者的贡献

JWC DLN, 9月,HSK的构思和监督项目。9月,HSK SJK进行了实验。SJC, SYO, GHR MJK提供资源。9月,HSK,新山的数据分析。JWC DLN, 9月,HSK写的手稿。所有作者讨论的结果和评论手稿。所有作者已阅读及同意发布版本的手稿。

确认

这项工作是由韩国国家研究基金会资助(2017 r1d1a1b03033239 P.S.E.和2018 r1d1a1b07046902 J.W.C.)由韩国政府(MSIP)。这项研究也支持通过授予韩国卫生技术研发项目通过韩国健康产业发展研究所(KHIDI)(格兰特数量:HI14C3484 J.W.C.)和由卫生部&福利,韩国。

补充材料

补充1。补充图1:mRNA的表达变化H4SW细胞cocultured天真msc和msc。H4SW细胞当cocultured mRNA表达的变化与天真的msc和msc。数据呈现的 。

补充2。补充图2:验证具备干细胞在msc。影射MSC的表面标记流式细胞术进行评估,根据ISCT MSC和板建造标准。

补充3。补充图3:验证后具备干细胞SGRN msc。MSC SGRN治疗后表面标记流式细胞术进行评估,根据ISCT和面板构建标准。

补充4。补充图4:抗炎功效的msc和TGF -β在5 xfad老鼠。(一)炎症标记物的免疫印迹分析,GFAP和TNF -α。(B)微结果表现为褶皱变化相比WT控制。对数据进行归一化β肌动蛋白的表达。数据呈现的 。三个样品每个实验小组在每个试验测试。 。

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