长期影响的辅助Intravitreal治疗自体骨骨髓来源Lineage-Negative色素性视网膜炎细胞

文摘

背景。自体骨骨髓来源lineage-negative(林−)细胞凋亡和神经活动。这项研究的目的是评估的安全性和有效性小说林自体−在12个月的随访期间细胞疗法。方法。林Intravitreal注入−细胞在30眼睛视网膜色素变性(RP)执行。那家伙的眼睛(FEs)被认为是控制的眼睛。功能和形态的眼睛检查之前和1、3、6、9和12个月后注射。结果。不到10年前开始出现症状的患者 信,病程较长的患者 信件相比基线在12个月的随访( )。有更高密度的差异反应 - - - - - -波振幅在第一环多病灶的基本特性在治疗眼睛比菲录音在所有后续点被检测到。因此,平均偏差在静态视野测量10明显改善治疗眼睛与眼睛术后12个月。生命质量得分显著提高,一直持续到九个月的访问。结论。林−细胞治疗是安全有效的,尤其是对一组精选的RP患者仍保持着良好的视网膜中央凹视锥细胞的功能。

1。介绍

视网膜色素变性(RP)是最常见的形式的视网膜变性的患病率1:4000。基本问题导致RP都明显的视觉缺陷,进步的周边视野和夜间视力受损的损失造成的外围锥,恶化和杆功能。随着病情的发展,黄斑也受到影响,导致恶化的远近视力,畏光,彩色视觉丧失,并完成失明的高级阶段。黄斑参与的特征症状包括黄斑萎缩,水肿,外层膜的形成1]。

超过3000人在200多个基因突变负责这RP-like临床征象迄今尚未发现2]。发病的年龄和发展速度是严格与继承相关类型和患者的基因型(1,2]。突变基因蛋白质负责的产品结构、功能、代谢和其他生化过程在视网膜细胞(3]。然而,环境因素的影响可能也对RP的进程产生影响。丰富的血液供应和代谢率高的需求降低了摧毁棒在视网膜上可能是由于氧化应激锥功能障碍的潜在原因。另一方面,眼色素层的体积减少是由于血液循环恶化在RP在这个领域。其他因素可能夸大视网膜功能RP是小胶质细胞和促炎细胞因子表达增加二级extrabulbar炎症过程(1,4- - - - - -6]。

客观评价视网膜功能的细致electroretinography (ERG)对诊断至关重要。在RP,暗电活动异常主要表现为振幅下降,长时间的高峰时间,适应光的ERG检测。随着病情的发展,进一步恶化的反应,直到完全没有信号。剩余函数的推荐考试检测和监测在先进多病灶的RP electroretinography病例(mfERG)。视网膜中央凹的部分视网膜在RP的特点是保存完好的反应,而平均周边反应显著降低,峰值时间长(1]。在前两个几十年的生活中,RP的进展是缓慢而轻微症状,但患者年龄超过20年的常染色体隐性形式和32岁以上那些常染色体显性形式,每年损失10 - 20%的视野观察。因此,几乎丧失功能加速指数(1,3]。

几种方法检测治疗效果在RP试图限制RP的病因学的病理生理过程。一些维生素代谢过程的重要辅助因子,有抗氧化作用。然而,在RP,膳食补充剂和维生素A,叶黄素,二十二碳六烯酸甚至在增加剂量导致视网膜功能没有明显的改善。相比之下,维生素E摄入量与ERG振幅下降更快。此外,一些研究测试的初步结果丙戊酸的抗炎活动不够鼓励追求进一步的调查。突变基因的更换损坏的部分视网膜由病毒载体是一个有趣的治疗方法。然而,一些问题,比如许多遗传模式,安全问题,目标,和较低的载货能力向量或必要性入侵管理的路线在术后玻璃体切除术,RP患者的问题。这些方法提出了可接受的安全水平但可怜的功效;因此,神经保护治疗RP的想法似乎是一个有前途的方向进一步研究[7]。神经保护作用是评估后眼内植入物与视网膜色素上皮(RPE)细胞转染人睫状神经营养因子(据)基因由于据生产。另一方面,干细胞和祖细胞(单亲中心)管理与RP个人预计将导致营养支持主机的感光细胞,特别是锥仍然活着。神经因素单亲中心发布的如“古典”神经营养因子(nt),包括脑源性因子(BDNF), neurotrophin-3 (NT-3)和neurotrophin-4(请)可以作为神经递质调节器,以增加其他不足的分泌神经营养保护性因素。我们此前报道称,来自人体的lineage-negative(林−)细胞富含成熟单亲中心大量表达几个nt包括脑源性神经营养因子、神经生长因子、NT-3,请和血管生成细胞因子如血管内皮生长因子(VEGF) [8]。重要的是,NT表现在林−细胞人口比,在无序从骨髓有核细胞(nc) [8]。我们还表明,这些分泌因素支持神经元生存条件培养基从林−人口(8]。intravitreal政府的影响林−视网膜细胞形态和功能的视网膜损伤的小鼠模型的主题我们先前发表的研究(9]。我们观察到,林−细胞的凋亡和神经活动相关的当地BDNF表达显著增加。具体地说,林−细胞的旁分泌特性注入眼睛允许连续分泌的神经营养和免疫调节因子(9]。事实上,我们发现细胞注射疗法的玻璃腔Rd6突变小鼠,用作模型慢性视网膜变性,存活至少3个月(10]。此外,这些细胞优先集成到视网膜层,这可能会大大促进特定目标neuroretina和救援受损视网膜细胞,所评估的ERG和免疫荧光染色10]。考虑这样的特征,通过细胞神经营养神经保护治疗提供了一个新的全方位慢性视网膜光感受器病态。

在这项研究中,我们调查了临床和形态变化的眼睛受到单一intravitreal注入自体林−RP患者的细胞。这项研究的目的是评估实现细胞疗法的安全性和有效性在12个月的随访期间。特别是,我们假设辅助细胞疗法可以产生特定的好处锥感光细胞的生理状态,因为他们仍然活着,尽管杆感光功能的丧失。

2。材料和方法

2.1。主题

这种前瞻性,非盲、非随机、单中心临床试验机构审查委员会批准的,遵循赫尔辛基宣言的原则。此外,这项研究是在确定注册号码NCT03772938作为一个干细胞临床试验在美国国立卫生研究院(NIH)https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21863221/。国家卫生部批准细胞采集、制备、和分布也得到。

干预前,所有受试者评估资格委员会,由眼科、内科、移植和血液学专家。每个病人目前的情况建立了基于详细的体格检查,胸部x光检查,腹部超声检查、心电图、血液生化和炎症标记测试。考虑每个病人的整体系统性状态,血液测试,和眼科的条件、资格委员会决定重开手术病人的骨髓愿望林−孤立的细胞,是由intravitreal注入。因此,30 RP患者(12女性和18名男性)的平均年龄 (范围:19和64年)年报名参加了这项研究。RP的临床诊断是基于以下标准:特征与蜡状眼底视神经盘(图的苍白1(一)),减少视网膜血管直径和intraretinal midperiphery色素;夜晚的历史进步的障碍或彩色视觉,周边视觉丧失,畏光,视力减退,和长时间的暗适应;和外围收缩“隧道视野”视野检查的显著减少振幅的隐式的次数或unrecordable读数在electroretinography尔格(1]。根据病人的声明,在9个科目,症状开始不到十年前,在21个人,他们的症状已经持续了超过10年。在所有个人、基因检测与whole-exome测序(韦斯)方法。病人的遗传特征展示在表1。4例,遗传分析没有揭示突变负责临床RP的形象。分析仍在进行中。在那些个人,决定招生的研究是基于临床疾病的出现。以下入选标准一定是遇到了一起:RP的临床诊断,年龄18 - 65岁,BCDVA糟糕的眼睛接受治疗范围内0.1 - 0.5 Snellen信图表,以及书面知情同意的能力。任何其他眼疾。,significant cataracts, glaucoma, retinopathy, eye trauma, or ophthalmological surgery within 3 months, systemic disease (acute inflammatory or autoimmunological process, recent trauma, renal or hepatic failure, thyroid disease, cardiovascular or neurological disease, stroke, neoplasms, and DM), intake of medications or other diseases that could affect the cells’ effect, dietary supplementation or any other RP treatment during the course of the study, and previously applied stem cell-based therapies were defined as exclusion criteria.

2.2。骨髓采集和林-细胞的隔离

骨髓(BM)吸气后髂嵴的局部麻醉。干预前,所有患者把他们的知情同意的过程。的体积获得BM阻凝一起解决方案(肝素和盐)从48到149毫升不等。以下所有步骤的细胞隔离进行按照良好生产规范(GMP)在一个封闭的康涅狄格一家隔离器系统Xvivo (BioSperix,教区,纽约,美国)。获得了一个单核的细胞悬液通过离心分离淋巴细胞分离介质(MP生物医学,圣安娜、钙、美国)。在下一步中,林的负面隔离——使用商用谱系细胞进行细胞耗竭工具包(Miltenyi研究,赤褐色,半岛,美国),如前所述[8]。简而言之,这些细胞被混合biotin-conjugated单克隆抗体对抗原呈现lineage-positive细胞表面的(CD2, CD3、CD11b CD14、CD15 CD16, CD19、CD56、CD123,和CD235a)和antibiotin单克隆抗体绑定到微。然后,他们通过磁列。林获得未标记的人口——细胞被悬浮在无菌磷酸盐(热费希尔科学、沃尔瑟姆,妈,美国)。

2.3。Intravitreal注射过程

单个林管理局−细胞悬液与更高级的阶段,眼睛疾病定义为执行BCDVA较低。intravitreal注入在手术室进行。眼睛的准备包括局部麻醉的灌输。注射前,眼睛周围的皮肤面积,眼睑,睫毛10%聚维酮碘溶液清洗。之后,他们将一个无菌的褶皱,结膜囊冲洗另外5%聚维酮碘溶液。90秒后,用生理盐水冲洗眼睛,取决于镜头的状态,intravitreal注入了3.5到4.0毫米的距离从角膜缘下颞象限。在注射之前,林−细胞悬液离心。林管理−细胞的数量是10⁶悬浮在0.05毫升的磷酸盐。作为早期的预防眼内压(IOP)飙升,与auqeous paracenthesis幽默释放作为一个标准的程序执行。

2.4。评估当地的治疗干预的效果和安全性

为了提高警惕在peri-interventional时期,每个病人被眼科部门和术后5天发布。确保林−细胞治疗的安全性,在第7天额外的评估详细检查视力,眼压,以及前、后段眼进行治疗。然而,随访检查用于统计分析是基于完整的眼科检查双眼之前执行林−细胞注射1、3、6、9和12个月后的程序。那家伙的眼睛(FE)被认为是一个虚假的手臂。考试包括测量遥远的附近(BCDVA)和(BCNVA)最佳矫正视力测量BCDVA ETDRS图表,BCNVA斯内伦视力表,对比敏感度(Pelli-Robson图表),眼压(动态轮廓张力测定法、SMT瑞士AG)制造技术、端口、瑞士),视网膜光相干断层扫描(OCT、海德堡工程、海德堡、德国),10和30 (W-W)静态视野测量(,蔡司、都柏林、CA)和裂隙灯检查。是特别重视维护相同的光照条件在所有后续检查。眼睛眼底ultra-widefield成像(美国光电子、马尔堡马)和全球范围内超声(宾夕法尼亚州莫尔文Accutome Inc .)由于执行监控细胞分散在玻璃腔(数字1(一)- - - - - -1 (f))。

在所有后续检查,患者按照以下顺序进行电生理检查由于瞳孔直径要求:模式electroretinography (PERG, RetiScan系统,罗兰查阅、德国),多病灶的electroretinography (mfERG, RetiScan系统,罗兰查阅、德国),、细致electroretinography (ERG UTAS-E 2000年,LKC技术,盖瑟斯堡,马里兰州,美国)。录音是根据国际社会获得临床视觉电生理学(ISCEV)标准11- - - - - -13]。

PERG录音得到单方面使用黑白颠倒棋盘上显示一组计算机CRT显示器参数根据标准的波美拉尼亚的医科大学(PMU)实验室14]。检查的大小是1°,亮度的白色元素等于120 cd / m²,黑色和白色的正方形之间的对比(迈克尔逊对比)设置为97%,和时间频率设定在4.0 rp(2.0赫兹)。以下参数记录系统的使用:放大器灵敏度:20μV / div;滤波器的频率带宽:1 - 100赫兹;切口过滤器:;扫描时间:250 ms(时间基地,25 ms / div);和人工制品拒绝阈值:95%(放大器 );和平均:200波形。前面的病人被监视的眼睛固定在中心点,和学生们不需要扩张。适当的景象修正一个eye-screen如果需要使用0.5米的距离。一个线程Dawson-Trick-Litzkow(迪泰)电极(Diagnosys LLC洛厄尔,马萨诸塞州,美国)被定义为一个活跃的电极。一个黄金盘皮肤电极(Roland咨询、勃兰登堡、德国)放置在横向眼角在同一边,被定义为一个参比电极。类似的电极在中间的额头和作为地线。刺激重复了两次,然后postacquisition中的两个波形的平均时间。振幅( )和峰值时间( )P50波的振幅( )N95波进行分析。

准备mfERG包括最大膨胀的学生10%盐酸去氧肾上腺素和奇观修正为0.3米的距离。单侧刺激的黑白矩阵103六边形失真系数设定为4。中央固定使用。矩阵覆盖30°的中心到边缘显示注视点。亮度是等于100 cd / m²和迈克耳逊对比97%的应用。一个线程迪泰电极(Diagnosys LLC洛厄尔,马萨诸塞州,美国)作为一个活跃的电极。黄金光盘皮肤电极(Roland咨询、勃兰登堡、德国)放置在侧外眼角作为参比电极。类似的电极连接在前额中间(Fpz)和地线。减少随机偏差,每只眼睛是6次测试,结果取平均值。此外,自动双postacquisition平滑和线干扰减少以及进行手动调整光标位置。以下参数记录系统的使用:放大器灵敏度:20μV / div;过滤器:10 - 300赫兹;切口过滤器:;情节:83毫秒;和人工制品拒绝阈值:8%(放大器 )据当地实验室标准(15]。响应密度(nV /学位²)和高潮时间( )的 - - - - - -波在六环进行分析。

ERG录音了双眼使用Burian-Allen双相(汉森眼科发展实验室,珊瑚镇,爱荷华州,美国)与地面参考电极(Planegg Natus欧洲GmbH,德国)放在一个耳垂。事前测试病人的准备包括作品的0.5%丙美卡因以及膨胀的学生tropicamide 1%和10%盐酸去氧肾上腺素。然后,病人将被放置在一个黑暗的房间里闭着眼睛,覆盖着黑色谷歌30分钟的暗适应。第一杆完全适应黑暗环境的反应是获得使用昏暗的白色闪光强度等于0.012 cd·s / m²;然后,一个更强大的白色flash 1.6 cd·s / m²引发了一场rod-cone响应。使用相同的刺激强度的感应振荡势。波振幅(房价)和峰值时间(从刺激开始闪光到特定的波峰)在黑暗基本特性进行分析。以下参数记录系统的使用:放大器灵敏度:10-20-50μV / div;过滤器:0.3 -500 Hz,异常振荡电位提取75 - 500赫兹的带宽使用过滤器;切口过滤器:;时基:5 ms / div;和人工制品拒绝阈值:0μ诉ERG设置被描述的详细描述其他地方(14]。

副作用的发生是评估使用常见的不良事件(CTCAE)分类术语标准16]。所有的受试者失访。

2.5。生活质量(QoL)的评估

NEI VFQ-25问卷是分布在一项访谈式格式之前林−细胞注入和6、9和12个月后的程序。本问卷旨在评估慢性眼疾患者的生活质量(17]。NEI的发现VFQ-25问卷分析作为一个点的总数。

2.6。统计分析

统计分析了使用Statistica 13.3版(美国加州TIBCO软件有限公司)软件。大多数参数的Shapiro-Wilk试验表明,分布从正态分布明显不同;因此,非参数测试。研究的动态变化,Wilcoxon符号秩检验进行比较预处理条件及后处理两个主观和客观条件,分别随访点。同样,Wilcoxon符号秩检验被用来治疗眼睛的比较参数与有限元的参数。预处理条件和连续跟踪变量之间的相关性进行了测试使用斯皮尔曼等级相关系数(Rs)。评估的区别两个子组,Mann-Whitney测试使用。显著性水平是设定在一个值低于0.05。给出的结果 ,除非另有声明为变量的偏离正态分布。

3所示。结果

3.1。主观的影响

意味着基线BCDVA眼睛受到intravitreal与林−细胞疗法 ,这是 在菲斯。显著改善BCDVA观察从一个月到12个月后(表的过程2)。手术后的一个月,患者平均阅读 ( )字母ETDRS图表。在3个月的访问,结果是 字母( );在6个月的访问,这是 ( ),在九个月的访问,这是 ( );12个月的访问,这是 ( )。手术后的前6个月内,16个病人(53.33%)有经验BCDVA改进。因此,在九个月和12个月的随访,观察BCVA增加19(63.33%)眼睛和17(56.67%)的眼睛,分别。以来波动BCDVA菲斯在后续也观察到,比较分析BCDVA双眼的病人进行的变化。之间没有显著差异的眼睛治疗和随访时间点都发现(表2)。识别的因素可能会影响眼睛的BCDVA变化intravitreally注射林−细胞,我们分析了基线BCDVA之间的联系和选定的功能和形态黄斑参数。据透露,BCDVA和对比敏感度在所有后续考试与ETDRS字母的数量呈正相关,阅读之前林管理局−细胞(表3)。此外,以观察BCNVA最多后续分负相关(表3)。这些结果表明,患者阅读更多ETDRS字母前细胞疗法实施保持更好的BCDVA和BCNVA 12个月的随访期间。有趣的是,不到10年前开始出现症状的患者 疾病持续时间较长的信件,而获得 字母在治疗眼林−细胞注射后12个月的随访期间( )。此外,基线对比敏感度与RP组眼睛诊断比10年高于短与长眼睛的疾病。中位数是25个字母( )和20个字母( ),分别为( )。此外,评估基线黄斑形态的影响在BCDVA治疗后,眼睛受到林−细胞疗法分为三个子组基于基线OCT图像。因此,黄斑水肿被定义为感觉神经的视网膜中浆液的积累导致视网膜中央增厚超过300μ涉及或接近凹。相反,黄斑萎缩为特征的特性不完整的视网膜色素上皮细胞,外层视网膜萎缩和/或中央视网膜变薄小于200μm。在缺乏的情况下这些特性在黄斑区在10月,检查眼睛被视为正常的斑点。因此,黄斑萎缩中检测出11眼,黄斑水肿8的眼睛,和11例正常黄斑。有趣的是,在该集团与黄斑水肿,基线之间显著负相关视网膜黄斑区的体积和BCDVA 1个月( , ),6个月( , ),和9个月( , )干预后观察。因此,基线之间显著负相关黄斑卷和改善BCDVA注入的眼睛(定义为不同ETDRS数字在后续的计算和基线BCDVA) 1个月( , )和6个月( , )的随访中被发现。相反,与正常组中斑点或黄斑萎缩,基线之间没有显著相关性黄斑体积在个月( , ;和 , ,分别),6个月( , ;和 , ,分别),九个月( , ;和 , ,分别),12个月( , ;和 , ,分别)后续点被发现。同样,在两组中,没有实质性的基线之间的相关性黄斑体积和改善BCDVA注入的眼睛在任何的后续访问。这些发现表明,更好的视觉改善应对林−细胞疗法在眼睛那么严重黄斑水肿。

因为视野损失代表RP患者的主要问题,分析静态视野测量参数。观察,平均偏差(MD)值在静态视野测量10明显改善治疗眼睛在干预后的12个月( , )相对于基线值( , ; )。消除这种变化的可能性是一个偶然的波动,在双眼MD值的比较分析。的MD明显改善治疗眼睛的眼睛(相比 , 对治疗眼睛, , 菲, )手术后12个月。30没有显著差异(W-W)静态视野测量参数检测在细胞疗法的实施RP的眼睛。

林在intravitreal−细胞治疗RP的眼睛,没有明显的对比敏感度的变化或BCNVA被检测到。

3.2。客观的影响

棒的有限反应客观电生理测试与RP诊断是相一致的。评估响应中央视网膜黄斑区作为一个影响自体林−细胞intravitreal注入,mfERG。我们专注于锥系统的评价函数中发现mfERG的前两个戒指。基线的平均响应密度 - - - - - -波振幅在第一环 在治疗眼睛, 在菲斯。随后的分析 - - - - - -波振幅在第一环治疗眼睛都有了明显的改善与预处理相比值在大多数后续考试(表4,数据1 (g)- - - - - -1(我))。相比之下,最多在菲斯,明显降低后续点。因此,分析之间的区别对待的眼睛和菲斯。重要的是,响应的密度 - - - - - -波振幅在第一环治疗眼睛的显著高于在菲斯后续点(表4)。

此外,响应的密度 - - - - - -波在第一环显示正相关的基线值随访时间点这个参数,表明越高值之前林−细胞intravitreal注入,在后续反应越高。有趣的是,术后12个月,响应的密度 - - - - - -波在第一环与BCNVA负相关在这个后续点(Rs -0.41, )。这表明更好的锥系统生物电函数与高等BCNVA眼睛受到林−细胞疗法。在响应的密度没有明显的统计学差异 - - - - - -波在环2的眼睛发现了治疗。阅读mfERG外围的R2环对应的外parafoveal地区nondiagnostic;因此,他们不包括在分析中。

的高潮时间的差异 - - - - - -波在这两个环的治疗眼睛和菲斯大多数后续点未达到统计上的显著水平。PERG相似,无显著变化的振幅和峰值时间P50波或波的振幅对眼睛和菲斯被发现。

ERG无显著差异,中央视网膜厚度,或脉络膜的体积在RP眼睛细胞疗法的实施后被检测到。

3.3。细胞疗法对生活质量的影响和安全问题的林−细胞Intravitreal注入

评估的影响,林−细胞intravitreal注入病人的日常活动,一个标准化的生命质量问卷进行分析。平均数量的基线点的生命质量问卷 和明显改善 6个月的随访中( ),来 在九个月的访问( ),和 12个月的后续访问( )(图2)。此外,基线生命质量得分呈显著正相关与价值观确定连续随访检查,表明患者生命质量更高的林−细胞intravitreal注入前12个月的随访期间保持更高的分数。

此外,分析选择性眼科参数对生命质量的影响。因此,生命质量数量和MD值10之间的正相关关系在治疗眼睛观察相应的访问( , ; , ; , ;6个月、9个月和12个月后实现的细胞治疗,分别)。同样,术后12个月,30中相应的MD值之间的正相关关系自动观察视野测量和生命质量( , )。这可能表明患者更好的视野测量结果在治疗的过程中声明一个更好的生活。

之间显著负相关性主观的进展率和生命质量6和9个月后干预检测( , ;和 , ,分别)。

前和后段的详细评估的眼睛以及全球超音波并没有透露任何特性的局部炎症或葡萄膜炎。此外,眼内压分析排除任何早期峰值和确认稳定值保持到12个月的后续访问。然而,在两种情况下,本地牵引性视网膜剥离次要适应症增殖检测治疗后3个月和12个月。因此,术后玻璃体切除术与C3F8 endotamponade。结果,完成视网膜附件实现而不影响最终的视力。患者与第三级CTCAEs由于表示手术干预。此外,在一个个体,本地化遥远的外围牵引性视网膜脱离的眼睛后,发现细胞疗法,但没有实现需要进一步治疗。这种情况下符合无症状视网膜脱离列为一级CTCAE。

4所示。讨论

本研究的主要目的是评估单一的生物效应intravitreal林−细胞注入色素性视网膜炎患者。值得注意的是,它是第一个科学报告记录的临床试验结果使用自体骨骨髓来源的林−RP患者的细胞群。虽然在3治疗眼睛,视网膜脱离是指出,由于仔细监测和早期玻璃体切除术过程,不会留下永久损伤视网膜形态学观察和功能。因此,我们得出的结论是,这项研究发现没有这个过程的重要临床不良反应,这进一步证实骨髓是一个可行的细胞群来源intravitreal程序。值得注意的是,我们观察到RP患者对这种创新的移植过程,因为他们生物电黄斑响应菲斯相比有显著的改善,维持12个月的时间。在先前的研究中,我们观察到,林−细胞疗法的有益作用的神经营养活性是由于释放丰富的营养因素与神经保护功能(18]。林前临床研究我们的团队与实验−细胞治疗神经退行性疾病表明医疗改善没有快速或者短期的。例如,鞘内林−肌萎缩性脊髓侧索硬化(ALS)患者的细胞移植诱导的最佳医疗结果大约四到八周后细胞管理和纵向保持至少16周(19,20.]。我们的临床前数据也表明,移植林−细胞产生神经保护作用对急性视网膜损伤。这种效应是显著相关的能力林−细胞群表达神经营养因子和凋亡属性(9]。我们组观察到intravitreal管理来源于林−的骨细胞在小鼠眼睛急性视网膜损伤导致的集成林−外层视网膜细胞层,从而提高10月分析和诱导分子形态视网膜结构变化的差别,比如对这些proapoptotic信号通路和本次的感应,部分通过分泌神经营养因子,特别是脑源性神经营养因子。有趣的是,林−细胞内的急性心肌梗死患者负责的等离子体水平的增加一些血管生成因子,血管内皮生长因子等,而基本成纤维细胞生长因子、血小板源生长因子在平行于BDNF产量的增加,表明林−细胞也有价值的来源的血管生成营养因素与系统性活动(21]。

似乎合理的细胞疗法与神经活动创造了一个非常有前途的治疗选择慢性RP,无论在RP基因遗传。这种潜在的新型治疗尤其是会用于更广泛的个人与RP基因治疗。在这项研究中,我们观察到视网膜功能改进BCDVA增加,林后−细胞intravitreal RP患者的注射。这个结果随后证实,显著改善mfERG发现在第一环(视网膜中央凹)。这表明林−细胞的保护作用在视网膜受到RP锥函数。这些观察结果支持假设大谷et al。22),提出,基于他们的临床前研究,感光RP下降可能是由于血管萎缩为退化提供代谢减少供应视网膜细胞(9)。此外,大谷et al。22)观察到锥的改进功能可能是由于视网膜血管的稳定在所有三个血管丛。也同样,它已经表明,脑源性神经营养因子刺激新血管的形成通过当地增加VEGF浓度,表明当地区域的脑源性神经营养因子,同时,提供了一种可能的小说的机制诱导neoangiogenesis导致减少锥光感受器变性(22]。

最近,许多初步的临床前和临床试验显示良好的耐受性和长期intravitreally移植治疗性干细胞和祖细胞的影响。例如,在培养人类的视网膜下移植foetal-derived视网膜祖细胞在晚期视网膜色素变性患者8例,中度改善BCDVA观察2到6个月后治疗5 8个人。3个人,BCDVA稳定甚至在12个月复诊,在24个月的访问,1眼仍然提出了改进。这种机制的本质并没有详细测试,和作者分析了只有单亲中心到外核层的结合。他们透露,10月胎儿光感受器外核层的厚度增加,由于假定的细胞迁移。虽然没有免疫负面影响被观察到,这种疗法可能会引起道德争议的单亲中心来源(23]。在另一项研究中,测试的可行性视网膜下外源的脂肪tissue-derived间充质干细胞注射,只有1的11个学科终末期RP经历BCVA细胞移植后改善。然而,同一个人也提出了改善ERG和视野测量6个月的随访中(24]。公园等人报道,intravitreal注射后自体骨骨髓来源CD34 +细胞,观察一个RP患者改善BCDVA和视野测量6个后续访问。然而,没有发现影响ERG, mfERG或microperimetry [25]。另一项研究基于34个RP眼睛注射外源的脐带沃顿的jelly-derived msc subtenon空间呈现显著改善BCDVA和24-2视野观察到干预后的期限6 - 12个月(26]。与我们的研究不同,显著改善在BCDVA 12个月访问只发现在常染色体显性遗传、常染色体隐性形式的RP (26]。有趣的是,在6个月的观察,初步研究Ozmert亚斯兰也发现一个重大的改善波振幅和隐式时间在mfERG环1 - 3 (27]。我们的研究结果是一致的观察,确认中央视网膜移植细胞的旁分泌作用的影响最大。负责这一行动的可能机制是激活休眠光感受器在predegeneration阶段,Muller细胞肥大,或异位突触发生。与我们的研究中,可能由于个人报名BCDVA更高,作者还可以证明一个显著改善在细致的闪光ERG 6个月的访问。

维斯和税28]报道提高平均7.9 Snellen行45.5%的17个病人(33眼)与RP在6个月的随访结合政府总有核细胞自体骨骨髓来源的途径。同样,80%十的眼睛与亚瑟综合征经验视力平均提高36.4% logMAR规模相同的研究协议后1年(29日]。维斯和列维还表示,视网膜变性的疾病持续时间或严重性可能会影响细胞疗法的疗效[28]。同样,在我们目前的研究中,我们观察到RP患者不到10年前开始出现症状BCDVA经历了更大的提高。

在另一项研究中,一个瞬时效应与RP 32个人3个月检测外源的脐静脉输液后cord-derived msc (30.]。然而,在BCDVA没有显著变化,视野敏感性,或VEP治疗过程中观察研究。这可能表明大多数细胞治疗眼外路线的政府在RP患者无效,确认细胞注射静脉注射不能穿透血视网膜屏障成为积累,然后消除(30.]。因此,我们可以预计,细胞治疗的潜力和最有益的影响在RP的个人可以获得只有眼内注射(例如,intravitreal)细胞。

值得一提的是,报告研究的一些局限性必须指出(即。,noncomparable individuals in parallel groups, different stages of retinal degeneration, no electrophysiological or perimetry evaluations, follow-up evaluations performed by several doctors and with different equipment, consequently doubtful repeatable lighting conditions, and BCDVA measurements on the less sensitive Snellen chart in comparison to the ETDRS chart) [28]。这相当大的异质性的临床研究和组织在同一研究限制的可能性直接结论对于不同的细胞治疗RP患者的影响。尽管,因为这些都是初步研究在RP的细胞疗法,我们可以预期数之间的差异进行研究。此外,一些眼睛波动函数在RP的自然过程。然而,没有之前报道的研究分析了治疗眼睛和菲斯之间的区别。据我们所知,这是第一个报告,评估这些变化。

值得强调的是,眼内注射可能会造成一些负面影响。在目前的研究中,三个牵引性视网膜脱离病例确诊。应该强调,RP患者尤其容易结病理适应症,如非典型后玻璃体脱离,后vitreoschisis或形成玻璃体(浓缩纤维总量的31日]。维护RPE完整细胞执政期间可能有助于防止这种不良后果的人工细胞移植(24]。这可能说明intravitreal的优越性在RP患者的视网膜下注入和玻璃体切除术。

重要的是,林-细胞直径小,粘性较低,因此,允许他们进入深入视网膜层。林−细胞的上述特征指定他们的优势在其他细胞临床试验RP迄今为止,包括非常大的直径和高度胶间充质干细胞或缺乏丰富单核细胞。最后,林−细胞的自体来源许可期间缺乏免疫抑制策略的终身治疗RP相比外源的移植胎儿单亲中心或成人感光细胞基因转导。这强调了临床前研究的意义基于动物模型在搜索最优协议和管理临床试验前的细胞。在我们看来,林−细胞intravitreal管理优化,高效能诱导神经保护受伤的视网膜在临床前研究(9]。

自然进步病程与预期的视力丧失表明细胞疗法可能造成的影响在患者生命质量进行intravitreal细胞注入。Siquiera et al。32)公布vision-related显著提高生命质量,观察3个月后实施自体骨移植前骨髓来源单亲中心相对于基线值。然而,在12个月的访问,一个恶化的生命质量得分是在这项研究中发现。有趣的是,一个正相关的生命质量与黄斑敏感性microperimetry描述(33]。因此,生命质量分数分析显示在3个月后显著改善脐静脉管理cord-derived msc (30.]。此外,短期改善BCDVA也观察到在这个组30.]。在我们的研究中,我们观察到一个改善生命质量分数为9个月。有趣的是,我们还观察到一个积极的生命质量评分之间的相关性和MD 10和30值,证明生命质量更高的值依赖于视野测量结果。然而,参加研究的RP患者的心理特点也可能影响最终结果。我们观察到RP患者基线生命质量提出了更高更好的态度通过几个后续访问。此外,高基线主观RP进展率导致低质量分数在6和9个月后治疗实验性干预。

5。结论

总的来说,这是第一个临床研究评估来源于lineage-negative的自体骨细胞的治疗活动管理intravitreally在一个同质大群RP患者。我们证明,林——细胞治疗是安全有效的长期12个月,尤其是考虑到改善BCDVA, MD视野测量10, - - - - - -波响应密度在第一环mfERG,生命质量为一组精选的RP患者保持良好功能的视网膜中央凹锥。需要进行进一步的临床研究在未来完全定义的确切治疗角色林-细胞生物治疗RP。这项临床试验的结果可能有助于在未来选择病人的细胞疗法改善其疗效和限制的不利影响的风险。

数据可用性

数据请求。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

确认

作者感谢安娜从基因组Boguszewska-Chachulska S.A.参与RP患者的遗传分析。这项工作是支持的国家研究和发展中心(批准号STRATEGMED1/234261/2NCBR / 2014)和Minigrant创新孵化器2.0(批准号MNISW / 2019/172 / DIR)。

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