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体积2021年| 文章的ID3086122| https://doi.org/10.1155/2021/3086122

检查参与组成分泌腺向标准化:识别MSC-Derived治疗鸡尾酒的关键成分

奇亚拉Giannasi ,^1、2 普Niada ,² 埃琳娜•德拉莫提,² 莎拉Casati ,¹ Marica Orioli ,¹ 爱丽丝Gualerzi ,³ 和安娜特蕾莎修女Brini ^1、2

学术编辑器: Vasilis Paspaliaris

收到了 01 2021年6月

修改后的 2021年8月02

接受 07年8月2021年

发表 2021年8月26日

文摘

治疗潜在的条件培养基(CM)源自msc(间充质干细胞/基质细胞)在不同的医疗领域,从免疫学到骨科,已经广泛的建议在体外和在活的有机体内证据。MSC-CM用于临床应用之前,适当的质量控制是必要的,以评估其重现性。在这里,我们评估不同CM的特征,包括通用功能和精确的蛋白质和脂质浓度,3代表样本脂肪msc(对asc)。在细节中,我们第一次调查的规模和分布包含细胞外囊泡(EVs),脂质bilayer-delimited粒子的关键作用在细胞间通信已被广泛证实。然后,我们获得的拉曼签名,提供一个忽视ASC-CM组成的蛋白质,脂类和核酸。最后,我们分析了一组200个分子包括趋化因子、细胞因子、受体,和炎症和生长因子和寻找32脂质参与细胞信号和炎症。所有ASC-CM包含一个齐次和有关电动汽车的数量( 粒子每百万捐赠对asc)的平均大小 ,建议方法的适当性EV保留和浓度。此外,还拉曼光谱证实样本同质性很高,允许特定峰值的可视化对核酸、蛋白质和脂类。深入调查,关注200蛋白质参与相关生物学途径发现了在104年所有标本的因素存在。其中,26个分析物呈现高度的一致性,表明样本特别同质四分之一的量化分子。最后,lipidomic 7允许量化分析脂质和表示prostaglandin-E2 N-stearoylethanolamide最均匀的因素。在这项研究中,我们评估ASC-CM样本获得标准化协议存在稳定的特性从拉曼指纹特定标记浓度。总之,我们确定关键因素可能参与ASC-CM治疗作用和一致的水平可能代表一个有前途的质量控制的管道为临床应用做准备。

1。介绍

多年来,自体或同种异体干细胞移植,要么天真,不同影射,或转基因,铺平了道路成功的临床管理的几种疾病的药理以前未满足的需要。特别是,间充质干细胞/基质细胞(msc),由于再生和免疫调节的潜力1,2),获得了声望在不同的细胞疗法临床场景,从免疫性疾病3)整形条件(4]和中枢神经系统损伤和疾病(如创伤性脑损伤、帕金森氏病、缺血性中风)(5]。除了整体的有前景的结果,MSC移植(以及细胞疗法一般)需要明显的缺点,如伦理争议,问题与体外扩张,制造成本高。从2006年开始的Gnecchi et al。6),越来越多的证据指出旁分泌信号的主要效应MSC治疗行动,推翻最初假设承认细胞移植、分化、和替换为主要演员。因此,在2010年,卡普兰教授msc首先描述和命名他们的父亲,提出了新的医学术语信号细胞突出其分泌性质(7]。检查参与组成分泌腺这个词,创造了2000年初的Tjalsma和他的同事8),定义了不同性质的众多因素(脂质、核酸和蛋白质)分泌细胞,自由溶解和传达到细胞外囊泡(EVs)。MSC的范式转换模式检查参与组成分泌腺的作用提升细胞,是整个公式,选择分数(即。、可溶性和水泡子组件),小说类的生物疗法。事实上,过去几年见证了入口检查参与组成分泌腺的MSC几个临床试验,主要是在再生医学领域,追溯供者细胞的临床应用的路径9]。关键搜索ClinicalTrials.gov数据库,执行结束时,2021年4月使用或者关键字“secretome”,“条件培养基,”或“细胞外囊泡”和“介入”作为研究类型进行过滤,列出共有14个研究基于MSC-secretome管理。有趣的是,大部分的这些协议依赖于使用厘米( 与研究使用电动汽车)来源于同种异体msc ( 与专门研究后自体设置)。到目前为止,只有完成这些研究的第3 (NCT04315025,NCT03676400,NCT04134676),但不幸的,没有可用的结果。然而,这张照片让我们推断一些总论MSC-based艺术疗法:游离的状态(我)迄今为止,检查参与组成分泌腺完整的临床使用,占可溶性和水泡分数,似乎更容易比孤立的电动汽车适用的。然而,目前,电动汽车潜在的诊断仍是关键,大量的临床试验证实的依靠他们的使用在这个领域(2)同种异体设置广泛实施,确认没有免疫原性,允许减少interdonor可变性和避免需要执行额外的程序对病人细胞收获,也因此不包括施主能级发病率(3)捐赠者msc是从新生儿(主要是脐带)和成人(例如,脂肪组织和骨髓)组织来源(iv)至于MSC-based细胞疗法,针对性的病态的性质非常不同(其中,COVID-19肺炎、慢性伤口、脱发,和骨关节炎)

值得注意的是,到目前为止,临床使用的监管框架检查参与组成分泌腺的细胞,或其子积,并没有明确表示任何国家或国际机构如美国食品药品监督管理局或教育津贴。的成功翻译的诊所,仍有许多技术问题需要解决,主要是关于行动的模式,可伸缩性、标准化和表征。

近年来,我们的研究集中在调查的条件培养基(CM)从脂肪tissue-derived msc(对asc)的生化成分(10- - - - - -13)和治疗作用在体外(14,15),在活的有机体内(16,17]。大多数这些研究提供ASC-CM之间的比较,包括可溶性因子和vesicle-conveyed,和ultracentrifuge-isolated电动汽车。在这里,我们决定去检查参与组成分泌腺选择性地关注完成。目前的工作需要一步ASC-CM表征的角度量化宽板的分子(细胞因子、趋化因子受体,增长和炎症因子,和生物活性脂质)在3种不同的样品,为了定义一些质量控制标准根据其未来翻译成颗粒治疗的诊所是一个创新。

2。材料和方法

2.1。细胞培养

对asc的皮下脂肪组织分离3 nonobese ( )捐助者(1 2男性和女性, )接受全髋关节置换手术( )或抽脂( )。所有组织都收集在IRCCS史Ortopedico Galeazzi机构审查委员会批准。每一个捐赠者提供的书面知情同意。脂肪组织样本粉碎无菌手术刀,消化为30分钟0.75毫克/毫升I型胶原酶(卫氏生化公司,莱克伍德,新泽西,美国),100年和过滤μm细胞过滤器(美国纽约康宁合并,康宁)。对asc是生长在培养基由high-glucose DMEM (Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州,美国),10%胎牛血清(的边后卫,Euroclone,佩罗,意大利),2毫米谷酰胺,50 U /毫升青霉素,50μg / ml链霉素(Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州,美国)在37°C, 5%的公司₂。

2.2。厘米的生产

从V对asc七通道融合的90%是在饥饿条件下孵化(没有的边后卫)72 h。没有信号的细胞遭受有史以来期间。中被收集和离心机15分钟在4°C的目的,消除细胞碎片,死细胞和大型凋亡的身体。上层清液被集中通过离心法约60倍90分钟在4°C Amicon Ultra-15离心过滤设备与3 kDa分子量截止(美国默克密理博,伯灵顿,MA)。这个过程允许保留水泡组件检查参与组成分泌腺的细胞,如前所展示在12,13,15]。最终产品的安全性和有效性通过这个过程已经测试在体外(14,15),在活的有机体内(16,17]。

2.3。纳米粒子跟踪分析(NTA)

在0.22 ASC-CM样本适当稀释μ米triple-filtered PBS和分析NanoSight NS3000(英国索尔兹伯里莫尔文Panalytical)。三个视频,每一个持续1分钟,记录了每一个样本。所有测量受人尊敬的20 - 120粒子的质量标准/框架,的浓度 ,和有效的数量。捕获后,在构建的视频分析软件NTA NanoSight。

2.4。蛋白质阵列

未稀释的ASC-CM样本分析RayBiotech设施(美国GA RayBiotech, Norcross)。200年(pg / ml)分析物浓度的不同性质(细胞因子、趋化因子受体,和炎症和生长因子)研究使用Quantibody®人类细胞因子组4000装备,人类细胞因子的组合数组第四季度,人类趋化因子数组Q1,人类受体数组Q1,人类炎症数组Q3,人类生长因子数组Q1 (https://www.raybiotech.com/quantibody-human-cytokine-array-4000/)。获得值归一化在供体细胞数量(pg / 10⁶对asc)。

2.5。拉曼光谱

ASC-CM样本在无菌生理盐水稀释,分析拉曼显微分光镜(LabRAM阿拉米斯,Horiba Jobin Yvon S.A.S.、里尔、法国)配备一个波长532纳米的激光之前报道后协议(10,13]。CM样本储存在氟化钙幻灯片和风干,然后测量进行光谱范围600 - 1800和2600 - 3200厘米¹。至少15光谱样本被收购和加工(基线校正、单位向量规范化和postacquisition校准)利用集成软件LabSpec 6 (Horiba Jobin Yvon S.A.S.、里尔、法国)。

2.6。针对UHPLC-MS / MS-Based Lipidomics

多不饱和脂肪酸类花生酸,内源性大麻素,N-acylethanolamides量化QTRAP 5500三重四极线性离子阱质谱仪(Sciex,达姆施塔特,德国)加上一个安捷伦1200无穷泵超高压液相色谱(UHPLC)系统(美国安捷伦科技,帕洛阿尔托,CA)使用UHPLC-MS / MS方法之前报道[18]。简而言之,稀释ASC-CM样品(大约200μ信用证样本)掺入了氘内部标准和1毫升的冷乙腈加入蛋白质沉淀。离心后,上清液提取4毫升的二氯甲烷/异丙醇(8:2; )并再次离心。有机层分离,干燥,重组60μl甲醇。3μ分析了l整除内源性大麻素和N-acylethanolamides。与500年剩余的解决方案是添加μl盐酸酸(0.125 N)和4毫升乙酸乙酯/正己烷(9:1; )。有机相是干,残留在60重组μl乙腈。30μl整除甲醇从中性获得提取和30μl酸提取的整除合并,10μl分析对多不饱和脂肪酸和类二十烷酸的决心。数据采集和处理进行了使用分析师®1.6.2,MultiQuant®2.1.1软件(Sciex,达姆施塔特,德国),分别。

2.7。验证选择的蛋白质和脂类

验证选择蛋白质进行额外的5日ASC-CM样本(源于细胞收获从2女3男捐助者、 )。人类磁Luminex筛查试验Rk4yTGNI(研发系统,明尼阿波利斯,美国)是自定义包含5分子:MCP-4, PDGF-AA, TNF RI,消退,愤怒。副本的每个ASC-CM (50μl /样本)进行测试,未稀释的,阅读Bio-Plex多路复用系统(Bio-Rad、米兰、意大利)标准程序。数据分析与执行MAGPIX xPONENT 4.2软件(美国TX Luminex公司,奥斯丁)。海和PGE2水平的验证是通过UHPLC-MS / MS方法执行先前描述的5厘米来自额外的ASC数量(所有女性捐赠者, )。

2.8。数据分析和统计

执行统计数据与GraphPad棱镜7软件(美国GraphPad软件,拉霍亚,CA)和Excel。值< 0.05被认为是具有统计学意义。NTA克鲁斯卡尔-沃利斯检验分析的数据来评估interdonor可变性。拉曼光谱,描述性和多元统计分析Origin2021 (OriginLab,北安普顿,妈,美国)。主成分分析(PCA)进行,以减少维数的拉曼光谱,光谱数据和强调差异与由此产生的主要组件(PC)代表这些光谱差异随着比例的方差。蛋白质阵列数据,帮助和皮尔森综合正常测试用于确定样本来自一个高斯分布。没有一个数据集通过了正常测试和相关(枪兵 ),和线性回归分析被执行。变异系数(CV,也称为相对标准偏差或相对标准偏差)的比例计算标准差的意思。一个被设置为阈值。主成分分析和聚类是由ClustVis (https://biit.cs.ut.ee/clustvis)。过程/路径分析是由字符串(https://string-db.org/默认设置后)。

3所示。结果

厘米获得的样本,如前所述,从对asc汇合的收获的培养基培养3天在无血清条件和集中的离心过滤设备约60倍。由于电动汽车代表一个基本组件检查参与组成分泌腺的细胞,CM描述侧重于粒子的第一步分析。NTA透露类似的所有样本(数据之间的大小分布1(一)- - - - - -1 (c)),意味着电动汽车的规模 (图1 (d))。模式的值(图1 (e))进一步证实了准备之间的同质性,表明中最常出现的尺寸粒子的数量范围从110到150纳米。所有样本统计相关的电动汽车数量,平均的粒子每百万捐赠对asc(图1 (f)),确认是否合适我们的协议在保留水泡组件检查参与组成分泌腺的细胞。没有观察到显著差异在任何参数(非参数测试克鲁斯卡尔-沃利斯, )。

(一)

(b)

(c)

(d)

(e)

(f)

CM样本的特征拉曼光谱,一种振动光谱学方法,已经被证明是有效地描述检查参与组成分泌腺MSC的可溶性和水泡组件,验证颗粒制剂的纯度和再现性10,13]。获得的平均光谱(图2(一个))提供详细的生化信息样本,与拉曼指纹占蛋白质(酰胺我1.650厘米¹),脂质(2700 - 3200厘米¹)和核酸(720 - 820厘米¹与之前报道的数据),在协议(13]。特别是,CM光谱显示出良好的信噪比和良好的重现性,报告评估的标准偏差(灰色阴影区域在图2(一个))。化学成分的相似性样本,进一步验证了多元统计分析:PC1和PC2分数获得三个考虑样本显示的散点图(图。在很大程度上有重叠2 (b))。

(一)

(b)

为了识别和量化的关键因素参与ASC-CM治疗作用,我们分析了一组200趋化因子、细胞因子、受体、炎症和生长因子(40分子/类别)。在所有的样品104蛋白质被可靠地量化(19趋化因子,14个细胞因子、24受体和37炎症和10个生长因子),而44分子总是察觉(10 5趋化因子,细胞因子、7受体和1炎症和21个生长因子)(补充表1和2)。主成分分析在104年推出了类似的异质性量化因素(图3样本3(一个))。热图进一步证实缺乏标本(图之间的主要区别3 (b))。相关分析,对整个数据集(图执行3 (c)26日)和选择因素的变异系数(CV)低于33%(图3 (d)和图4(一)),表现出强烈的样本之间的定量变量之间的关系。事实上,回归直线的斜率总是倾向于1(数字3 (c)和3 (d))。此外,斯皮尔曼总是导致高于0.8,证实了一个高度显著的直接相关性标本(数据3 (c)和3 (d)、非参数斯皮尔曼相关 )。

(一)

(b)

(c)

(d)

图3

聚类和关联分析,104年所有因素量化ASC-CM样本。的分析,每个分析物的水平(pg / ml)规范化在供体细胞数量和表达为pg / 10⁶对asc。(a) PCA情节和(b)热ASC-CM1地图可视化的蛋白质含量,ASC-CM2, ASC-CM3。(c, d)相关分析的所有因素(c) 104和26的分子(d)变异系数在33%以下( )。对于每一个图,回归直线的方程报道,斯皮尔曼在一起值。

(一)

(b)

(c)

图4

蛋白质相互作用和功能预测的26个最均匀的因素量化ASC-CM样本。(a)的清单26所选因素有变异系数在33%以下( )和(b)相应的字符串分析蛋白质-蛋白质之间的关系了。(c)前15名KEGG路径选择与26蛋白质基于错误发现率(罗斯福)值(日志₁₀罗斯福值报告为橙色酒吧)。褶皱浓缩计算如下: 并报告为蓝色的酒吧。

因为我们的目标是在暗示CM质量控制标准,进一步的分析集中于选择整个样品分析物特别是均匀。在细节,在25%左右(n= 26)提供了一个量化的因素 ,表示高度的均匀性在所有CM(图4(一)补充表3)。值得注意的是,这些炎症因子(补充表153)。字符串分析强调严格的这些因素(图之间的联系4 (b))。正如预期的那样,一个强大的浓缩蛋白参与免疫系统调节通路分析(补充表4)。特别是,罗斯福(图的排名前15名通路4 (c))蛋白质参与cytokine-cytokine交互列表(cytokine-cytokine受体交互/ Jak-STAT信号通路)和T细胞调节(T细胞受体信号通路/ Th1、Th2细胞分化)。

除了蛋白质,脂类也可能在免疫调节发挥重要作用。出于这个原因,在厘米样本,我们分析了面板的内源性大麻素和类花生酸参与炎症。七个脂质分子,即。,arachidonoyl acid (AA), eicosapentaenoyl acid (EPA), docosahexaenoic acid (DHA), prostaglandin-E2 (PGE2), prostaglandin-F2α(PGF2α),N-palmitoylethanolamide(豌豆)和N-stearoylethanolamide(海)(补充表5),被可靠地量化UHPLC-MS ASC-CM样品/ MS分析。除了2-arachidonoylglycerol (2 ag),量化在2的3样本,另24脂质总是检测不到或无法量化的(<钟表或定量限)。变异系数低于33%的海洋和PGE2分子被发现(数字5(一个)和5 (b)补充表5),这表明一个好的学位3厘米的均匀性。有趣的是指出,在厘米,比前体生物活性脂质副产品更均匀。这可能表明,主要是一种受控的方式在第一次被释放。事实上,分析颗粒的供者细胞以及前兆DHA, AA、EPA提出了强烈类似的浓度在细胞内水平(补充表6)。

(一)

(b)

自量化特定分析物可以成为ASC-CM好质量控制步骤,我们分析的一个子集的浓度因素在较大的验证组( ASC-CM蛋白质和脂质验证)。关于蛋白质,我们的研究结果证实了存在和同质性选择的因素分析样本(图6(一))。值得注意的是,虽然愤怒的平均浓度( ),TNF RI ( ),和MCP-4 ( )很好地适应中观察到的原始设置(图4(一)),发现PDGF-AA值( )和消退( )分别是低,高于预期。这种差异可以归因于不同的免疫学技术的实现,因此可能有不同的敏感性和特异性,可能依赖于抗体的使用提高了对不同区域的分析物。相反,脂质执行验证通过同一个UHPLC-MS / MS方法用于测试原始设置,如图6 (b)海( )和PGE2 ( )在整个量化ASC-CM脂质浓度范围内验证群强烈重叠之前观察到(图5(一个))。

(一)

(b)

4所示。讨论

检查参与组成分泌腺的间充质干细胞/基质细胞是生物活性成分的混合物的个人作用仍然是未知的。然而,他们协同行动产生一个明确的治疗效果支持调查其临床潜力的理由。本研究旨在定义关键要素生产的检查参与组成分泌腺ASC根据我们的协议,考虑90%的文化融合性的细胞72小时血清剥夺和以下的浓度条件下媒介3 kDa分子量切断过滤器。其他团体目前实现一个类似的过程(19,20.),虽然在文学,有很多替代品(21]。因此,根据格言”过程是产品,生产过程中的任何变化无疑将影响到最终的产品。此外,它应该指出ASC-CM从而产生保留大量的电动车确实和以前的证据证明水泡超速离心法[获得的收益率更高的比13,15]。

在这里,我们专注于关键参数,可以利用一般质量控制,如水泡组件和喇曼签名,或特定的标记,如量化选定的蛋白质和脂类。总结提出的生产过程和质量控制是显示在图7。为了完整性,尽管核酸等microrna并没有调查在最近的研究中,讨论他们的角色很大程度上由其他人(例如,[22)使他们有趣的附加或替代候选人质量控制检查。

考虑到电动汽车的生物相关性,他们决心在CM中是第一个分析进行这项研究。电动汽车在所有样本丰富。他们的数量和大小分布均匀和相干与先前的发现13,15]。值得注意的是,过滤协议允许保留和浓度的水泡组件过程更快,更容易,要求低于对照的过程(即。、超速离心法)(15]。由于电动汽车战略航天飞机生物制品,我们建议他们在CM中量化准备一般质量控制。加上EV量化,拉曼光谱还可以提供全面的CM组成的照片。它揭示了大分子和指出整个样本差异和相似之处,这里,在一项研究报道13]。

不同,选择的因素的调查和量化可以适应下游根据特定的应用程序。

广泛分析200蛋白质扮演关键的角色在各种生物过程突出的存在3 ASC-CM 26个高度保守的分子。在这其中,我们选择验证5分析物,每个属于一个不同的面板:趋化因子MCP-4 ( ),细胞因子消退( ),愤怒的受体( ),炎性介质TNF RI ( ),和生长因子PDGF-AA ( )。所有这些分析物,同质性很高ASC-CM样品确认。鉴于我们有前途在体外(14,15),在活的有机体内(17)结果ASC-CM的治疗作用抵消骨关节炎(OA),在此,我们集中我们的注意力在这帧每个分子的潜在作用。

单核细胞化学引诱物蛋白4 (MCP-4,也称为CCL13)是显示的CC趋化因子家族中的一员,除了一个强大的对免疫细胞趋化性,各种各样的免疫调节功能,从诱导细胞因子释放抗菌活性(23]。有趣的是,MCP-4可以进行蛋白水解乳沟,基质金属蛋白酶(MMPs),导致生物活性肽,施加相反行动趋化作用和炎症(24]。这方面尤其引人注意自异常MMP的活动代表OA进展的里程碑之一25]。在这个角度看,ASC-CM治疗潜在可能也依赖的可能性利用MCP-4代谢物的消炎原位生成的基质金属蛋白酶。

消退(Dickkopf-1)是一个chondroprotective因素,作为抑制剂的Wnt /β连环蛋白信号通路。大量激活这个途径参与OA等疾病(26),有条件的积累β一起连环蛋白影响软骨细胞诱导肥厚性表型的超表达基质金属蛋白酶(27]。有趣的是,最近在体外证据描述积极表达的变化β连环蛋白由软骨下骨母细胞后消退(管理28]。因此,其丰度ASC-CM抵消OA进展可能代表一个有前途的线索。

高级糖化受体的终端产品(愤怒)出现相当同质ASC-CM样本。生理和病理上,这是一个跨膜受体的配体激活的交互触发细胞内信号导致增加活性氧的释放和促炎细胞因子(29日]。愤怒的存在在ASC-CM不能引起这种反应可能充当诱饵受体。这可能是利用治疗病态的呈现减少可溶性愤怒(sRAGE,“传统”愤怒诱饵受体),连同增加的配体。在办公自动化,减少sRAGE与年龄的增加水平滑液(29日,30.]。在这种背景下,我们假设ASC-CM注入在有限的空间里,如滑膜环境可以减轻病理sRAGE /年龄不平衡。

类似的考虑可以适合TFN的RI (TNFRSF1A)。这种受体通常参与各种炎症/压力刺激的传导激活的NF -κB和随之而来的特定基因转录,导致生产的促炎和异化的因素(31日]。的分子出现在ASC-CM介质时不能触发这些细胞内事件可能与细胞受体竞争。这可能是特别相关的治疗病态与TNF相关的增加有关,如风湿性关节炎(32),克罗恩病(33),和办公自动化34]。在后者,ASC-CM关节内的政府可能是特别有益的,因为增加的TNF滑液,滑膜、软骨、软骨下骨也增加TNFRI滑膜成纤维细胞,进一步放大的信号(34]。

血小板源生长因子(pdgf)在骨代谢关键球员,特别是PDGF-AA是参与软骨下骨和关节软骨之间的串扰在OA发病(35]。此外,最近的证据表明,PDGF-AA促进remyelination和增加组织修复脊髓损伤的大鼠模型,整体改善运动功能恢复(36]。

最近以来,参与脂质在生理和病理过程中已被广泛证明;在我们看来,他们的分析至关重要。随着下一代质谱(MS),发生lipidomics领域的重大进步。我们的UHPLC-MS / MS方法(18)旨在分析大量的生物活性脂质类属于结构相似,包括多不饱和脂肪酸、类花生酸,内源性大麻素,N-acylethanolamides。对asc因为可想而知,这些脂质释放可能在炎症过程中发挥作用,我们进行了一个绝对量化32分子由于三重四极质谱的高灵敏度和特异性和标签的使用脂质。在量化脂质、海和PGE2显示相关的一致性,因此在大型ASC-CM队列进行验证。海是一种内源性脂质属于N-acylethanolamides家庭作为抗炎、免疫调节代理多种促炎细胞因子的差别通过对这些37]。相反,PGE2施加一个众所周知的炎症作用。然而,在办公环境中,它可以发挥对软骨细胞和synoviocytes合成或分解代谢的影响取决于它的浓度(38- - - - - -40]。PGE2的证据也表明,通过促进Th1细胞分化和免疫刺激作用扩大Th17 T细胞(37]。

5。结论

总之,在这项工作中,我们发现检查参与组成分泌腺ASC的关键成分,可能参与其治疗作用和稳定的水平在不同ASC-CM批次可能代表有前途的质量控制标准。事实上,这些迹象可能相关的快速和方便的再现性评估ASC-CM之前使用不同的应用程序。

然而,我们建议不要客气地关注所选组件,而是在获取目标的概述这个有前途的治疗游离的复杂性,其强度精确依赖多种生物活性因子的存在不同的性质。在这里,我们提出多个步骤检查参与组成分泌腺的标准化,要么提供一个忽略的成分通过NTA和拉曼光谱或特别关注不同性质的关键分子的量化。

数据可用性

所有数据用于支持本研究的结果中包括补充信息和/或文件上传zenodo库(https://doi.org/10.5281/zenodo.5211269)和/或可从相应的作者。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

作者要感谢马可·乌拉•威佳诺博士,乔凡尼Lombardi博士和玛尔塔博士Gomarasca他们宝贵的帮助。这项研究是由意大利卫生部(格兰特数字RC L1038和RC L1039 IRCCS史Ortopedico Galeazzi)和生物医学、外科和牙科,米兰大学(批准号RV_PRO_RIC16ABRIN_M)。

补充材料

补充表1:蛋白质浓度(pg / ml)的因素量化ASC-CM样本。补充表2:列表的因素在所有ASC-CM样品检测不到。补充表3:因素量化ASC-CM样本,规范化的供体细胞数量,排名由变异系数(CV)。补充表4:KEGG通路富集分析字符串(罗斯福< 0.05)。补充表5:脂质量化ASC-CM样本,规范化的供体细胞数量,排名由变异系数(CV)。补充表6:脂质量化ASC丸,规范化的供体细胞数量,排名由变异系数(CV)。(补充材料)

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