文摘

人类骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)和心脏祖/干细胞(年度"特别关注国")都进行了广泛的研究作为一个潜在的治疗治疗心肌梗死(MI)。先前的报道表明,低剂量的年度"特别关注国"需要改善心脏功能相对于骨髓同行。在这里,我们证实了这一观察和调查可能解释这种效应的表面蛋白表达谱。心肌梗死是裸体的永久性结扎大鼠左冠状动脉。细胞移植前后心脏功能和梗塞大小进行评估通过超声心动图和形态测量学,分别。分析了中国共产党和BM-MSC receptome biotin-labeled表面蛋白的蛋白质组学分析。大鼠移植年度"特别关注国"显示了更大的改善心脏功能与BM-MSCs MI比移植后,这是与小梗塞大小有关。分析receptome确定特别关注国和BM-MSCs表明基因本体生物过程和KEGG通路与粘附机制与BM-MSCs调节相比,年度"特别关注国"。此外,膜蛋白interactome年度"特别关注国"显示强大与生物过程的关系与细胞粘附而BM-MSCs interactome更相关的免疫调节过程。我们得出这样的结论:年度"特别关注国"的强大能力BM-MSCs嫁接在梗塞的面积可能与细胞粘附表达式程序更明显。

1。介绍

干细胞疗法已成为一种很有前途的治疗不同的疾病,包括心血管疾病,并可能为有效方法再生心脏损伤后,恢复心脏功能(1]。在这条线,心脏祖/干细胞(年度"特别关注国")已经提出和测试他们的参与心脏体内平衡和修复(2- - - - - -6]。最初的自体的细胞疗法的临床试验证明年度"特别关注国"的可行性,促进心脏修复心肌梗死(MI)后7,8),和后来的研究测试了其功效在同种异体的设置9,10]。

骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)也已证明,促进心脏修复急性心肌梗死(AMI)后,通过衰减左心室重构和促进neoangiogenesis [11,12]。这些影响主要是归因于BM-MSCs迁移到损坏或故障的能力组织(13,14和分泌营养因子或细胞外囊泡15和他们潜在的抑制免疫反应16]。然而,尽管动物模型成功的结果,结果在人体试验大部分失望(17- - - - - -20.),动力的重新评价其临床意义。而年度"特别关注国"的作用方式和BM-MSCs心脏修复仍有些不清楚,有一个共识,这两种类型的管理细胞释放生长因子促进血管生成和免疫调节分子,限制了dt -伤疤,防止心肌细胞凋亡和刺激居民年度"特别关注国"去修理损坏的地方,所谓的旁分泌作用[21- - - - - -23]。人们普遍认为MI后引发的免疫反应中发挥着重要作用的扩展缺血性损伤后的损伤和疾病进展(24,25]。从这个意义上说,这是表明人口管理的细胞与细胞之间的相互作用存在于心脏AMI后调节有利于炎症和组织再生的影响5]。这是支持的结果,虽然年度"特别关注国"可能不实现长期移植(2),在受伤部位的时间他们仍然足以引发组织修复(26,27]。

使用RNA序列的组合和定量质量spectrometry-based蛋白质组学,我们最近年度"特别关注国"的全面描述和比较蛋白质组和BM-MSCs,找到一个明确的群体中angiogenic-related细胞表面蛋白质在年度"特别关注国"28]。在目前的研究中,我们进一步分析了血浆的膜的蛋白质组成部分在年度"特别关注国"和BM-MSCs而言,与其他蛋白或组分子相互作用,为了理解机制,促进细胞保留和移植的心脏。血浆的蛋白质鉴定的蛋白质组学分析,生物素化的分数分为生物学过程相关年度"特别关注国"和BM-MSCs粘附过程。确定KEGG(京都基因和基因组的百科全书)途径通常表示在两种细胞类型。然而,只有年度"特别关注国"显示Rap1信号通路的参与,一个关键的中介integrin-mediated细胞粘附过程。此外,interactome分析receptome年度"特别关注国"与BM-MSCs显示细胞粘附机制的浓缩年度"特别关注国"而BM-MSCs显示一个强大的免疫调节表型。这些数据改善我们对年度"特别关注国"的作用机制的理解,BM-MSCs与心脏修复。

2。材料和方法

2.1。细胞,培养条件,慢病毒转导年度"特别关注国"

年度"特别关注国"取自Coretherapix SLU (Tigenix集团,马德里,西班牙)和被孤立的描述5]。解冻后,细胞培养结合杜尔贝科的修改鹰的媒介/营养混合物F12 (DMEM / F12)和Neurobasal介质(1:1),补充10%的边后卫ESCq(胎牛血清胚胎干细胞合格)、谷酰胺(2毫米)、青霉素、链霉素(P / S, 100 U /毫升和100年μ分别为g / mL), B27 (0.5×), N2补充(0.5×),insulin-transferrin-selenium(0.5×)(所有从热费希尔科学),β巯基乙醇(50μM, Sigma-Aldrich)、bFGF (10 ng / mL), IGF-II (30 ng / mL)和表皮生长因子(20 ng / mL)从Peprotech(所有)。细胞生长在湿润的37°C O室为3%₂的气氛。

人类BM-MSCs买来Inbiomed (Guipuzcoa Inbiobank,圣塞巴斯蒂安,西班牙),扩大后,制造商的指示。简单,细胞在DMEM培养过低(Sigma-Aldrich)补充10%的边后卫(康宁)和1% P / S。细胞生长在湿润的气氛中95%的空气和5%的公司₂在37°C。

确定特别关注国和BM-MSCs pSIN-EF1感染α之前-GFP-IRES-Puro慢病毒质粒标记细胞心肌内的移植。简单地说, 细胞被播种和孵化4.25毫升的病毒上清液与8μg / mL聚凝胺2天。细胞然后在1000×离心机1 h在37°C,培养基是补充,进一步和细胞培养2天,绿色荧光蛋白(GFP)分析。转导效率使用流式细胞仪定量测定GFP-positive细胞(CPC-GFP)转导细胞的百分比比nontransduced负控制细胞。GFP表达量化了MFI(平均荧光强度)GFP-positive细胞流式细胞术:表示值归一化MFI对应荧光强度的增加因子GFP-positive转导细胞相比GFP-negative控制细胞(= MFI (GFP +) / MFI (GFP−))。表达水平可以接受的在活的有机体内GFP-positive细胞荧光显微镜检测也视觉评估。

2.2。动物

总共30男裸大鼠体重200 - 250 g (HIH-Foxn1 rnu,查尔斯河实验室,Inc .)被用于本研究。动物被随机分为三个实验组,每组(CTRL作为控制、BM-MSCs和年度"特别关注国")。所有程序都是通过国家和当地伦理委员会(参考号2016 / VSC /豌豆/ 00006)和完全遵守欧盟指令2010/63 /欧洲议会的动物保护用于科学目的。

2.3。心肌梗死和细胞移植

永久性结扎左冠状动脉进行描述(29日]。简单地说,老鼠插管麻醉和O的混合物₂/七氟烷和100次/分钟的速度和2.5毫升的潮汐卷(683年哈佛仪器小动物呼吸机模式),开胸后,AMI引起永久性结扎左冠状动脉(小伙子)下行与6 - 0缝线(布朗)。结扎后立即梗塞的面积是可视化的发展远端心肌苍白的颜色。小伙子结扎后,老鼠立即收到了心肌内的注射磷酸盐(PBS) CTRL,或最后一剂 细胞(BM-MSCs或年度"特别关注国")通过2注射10μL 2点使用汉密尔顿注射器梗死边界区。与荧光微球细胞接种比1:40到检查注射进行正确。切口关闭3 - 0丝线缝合,和metamizole (0.4 g / mL)给出了腹腔内(0.5毫升/公斤),缓解疼痛。在四周postimplantation,老鼠安乐死注射了过量的氯胺酮(125毫克/公斤),安定(10毫克/公斤),和阿托品(50毫克/公斤);心被移除,用PBS,固定在2%多聚甲醛(PFA)。心被嵌入在石蜡,切成6μ片。

2.4。超声心动图

心脏功能评估是由超声心动图(描述29日),在基线和AMI后细胞移植后4周。简单地说,老鼠麻醉之前,超声心动图进行使用超声心动图系统(生动的7;通用电气医疗集团)与10 MHz线性阵列换能器。测量进行M-Mode和二维(2 d)图像在乳头肌水平。测量以下参数:左心室(LV)维度年底舒张(LVd)和结束收缩(LV),前和后壁(分别AW和PW)维度在舒张和收缩,舒张区(EDA),收缩末期面积(ESA)。百分比变化AW厚度(AWT)计算 。部分缩短(FS)计算 ,和部分区域变化(FAC)计算 。

2.5。形态测量学和免疫组织化学分析

心被固定为2% PFA, LV梗塞大小测量10 - 12的横向部分6μ每200米(1片μm的组织从顶点到基地)沾着马森的三色的。图像捕获光下徕卡显微镜DMD 108。纤维区被淡蓝色的颜色,和疤痕区域是由电脑平面几何的纤维化区域使用ImageJ软件(美国国立卫生研究院)。梗塞大小表示为左心室总面积的百分比,意味着从每一片心。左心室壁厚(LVW)测量和用毫米表示的。

2.6。Biodistribution实验

CPC-GFP细胞intramyocardically移植到梗塞的心,老鼠安乐死2、10和细胞移植后21天。以下器官提取:血液、骨髓、脾脏、心脏、肾、肝、脑、肺、睾丸。提取后,放在criovials的组织,然后沉浸在液体N₂在-80°C,直到他们的处理和存储。基因组DNA分离使用试剂盒DNAeasy组织工具包(试剂盒)。

人类DNA的数量在每个大鼠器官是追踪使用定量和高度敏感的人运算器sequence-specific实时聚合酶链反应(qPCR)分析。人类DNA的数量在每个大鼠组织决定通过比较检测DNA的荧光信号,从正控制DNA标准使用TaqMan™技术。数据被表示为动物的百分比,人类DNA检测。

每天两只动物的牺牲的器官是固定在2% PFA,嵌入在石蜡和加工的形态测量学和免疫组织化学分析检测注入GFP-labeled细胞组织学部分。

2.7。生物素标记的表面蛋白

确定特别关注国和BM-MSCs表面生物素化的和所述处理30.]。短暂,细胞被孵化为0.5毫克/毫升的sulfo-NHS-SS-biotin(热费希尔科学)30分钟在4°C。然后,细胞被清洗和细胞溶解在50 mM消息灵通的pH值7.4,140毫米生理盐水、10%甘油、1% Triton x - 100, 1毫米EDTA, 2毫米EGTA, 0.5%脱氧胆酸盐。Biotin-conjugated细胞表面蛋白质纯化了30μL streptavidin-agarose树脂(Sigma-Aldrich)。树脂洗两次,随后与Laemmli样品变性缓冲区进行蛋白质组学分析。

2.8。蛋白质组学分析

蛋白质组学分析描述(31日]。简单地说,30μ克蛋白质样本用于丙烯酰胺12.5% sds - page电泳和蛋白质含量与胰蛋白酶消化。消化是停止以1%三氟乙酸,5μL(每个样本加载液相色谱串联质谱分析(质/ MS)。数据分析使用ProteinPilot默认参数(ProteinPilot v4.5开发。搜索引擎,AB Sciex)。未使用的蛋白得分,测量计算蛋白质的信心从肽的肽的信心从光谱,用于蛋白质。只显示一个未使用的蛋白质 和确认 被包括在分析中。

生物信息学分析识别功能浓缩基于传播的方法实现Bioconductor clusterProfiler [32]包从R (R开发核心团队2008),使用基因功能信息本体(去)33)和KEGG通路数据库(34]。

最后,结果总结和图形表示使用dotplots [32)和treemap REVIGO web应用程序(35]。维恩图是使用开源的在线工具创建的Venny 2.1.0 (JC, Oliveros CNB-CSIC。http://bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/)。

2.9。Interactome分析

蛋白质interactome被匹配的重要蛋白质筛选针对BioGRID数据库(36]。基因集富集分析(GSEA) (37)进行完整interactome,检测重要的生物过程,分子功能,和细胞组件。

2.10。统计分析

数据被表示为 (SE)。统计分析进行了使用GraphPad棱镜6软件(GraphPad软件公司,拉霍亚,CA)。统计学意义是用单向方差分析和适当的决定事后分析。被认为具有统计显著性差异 95%的置信区间。

3所示。结果

3.1。共产党比BM-MSC更有效改善心脏功能,减少梗塞大小

评估的影响党和BM-MSC移植在梗塞的老鼠,我们进行超声心动图研究前基线和牺牲(4周)所有实验群体。由于再生能力归因于BM-MSCs [11,38),他们被移植在同一剂量的年度"特别关注国",被用来作为一个积极的控制。超声心动图参数分析了未经处理的动物(ctrl)显示更强的心脏收缩功能的恶化与动物相比,接受年度"特别关注国"(表1)。老鼠接受细胞移植明显改善所有超声心动图参数测量在四周posttransplantation相比,控制动物:%前沿空中管制官 在中国共产党组织 BM-MSC组 CTRL组( )和% FS是 在中国共产党组织 BM-MSC组 CTRL组( )。显著差异% AWT条款,也观察到 在中国共产党组织, BM-MSC组 在CTRL集团( )(图1(一))。

检查细胞移植对梗死的影响大小,截面与年度"特别关注国"动物的心脏移植,BM-MSCs和控制动物沾着马森的三色的牺牲(图1 (b))。纤维疤痕组织区域较小的BM-MSC——比控制和CPC-transplanted动物动物(图1 (c)),尽管控制和共产党之间的显著差异被发现只有组( vs。 ,分别 )。治疗之间的显著差异也发现LVW而言: 的控制, BM-MSC组 在中共集团(图1 (d));控制与年度"特别关注国" ( )和BM-MSCs与年度"特别关注国" ( )。

3.2。人类年度"特别关注国"显示大鼠心脏移植的心

发展的主要障碍之一的细胞疗法是细胞生存的低利率和移植接受者的心。msc被用于细胞疗法因其强大的免疫调节特性而不是他们能够区分和灌输受伤的组织(39]。的确,我们先前的研究显示很少或根本没有保留BM-MSCs在心脏和贫穷改善心脏功能当次优剂量的细胞被使用(小于10⁶细胞/动物)[38]。

从最初的心肌内的移植 人类年度"特别关注国"梗死边界在梗塞的裸体老鼠,我们量化的存在人类细胞在不同器官和血液样本虽然人类特有的检测运算器由qPCR序列(图1 (e))。人类发现了年度"特别关注国"的75%,33%,和21%的裸大鼠在2治疗,10日和21天后细胞,分别。人类细胞也观察到血液中,肺、脑、肾、性腺、骨髓、肝、脾细胞后2天。细胞在这些器官的检测表明,大部分的注入年度"特别关注国"达到了冠状循环和成功的分布式系统即使在心肌内的管理。然而,年度"特别关注国"在这些器官的数量减少到检测不到的水平在10天内和细胞只有在心灵治疗的33%的老鼠。的年度"特别关注国"清除了在大多数器官posttransplantation 10天,我们检查年度"特别关注国"的存在在老鼠的心牺牲了21天,发现这些细胞中21%的治疗大鼠的心。此外,分析空间biodistribution CPC-GFP细胞的免疫荧光组织部分证实,细胞被发现在周围的心肌梗塞的面积细胞注射后第二天,心中仍然至少21天,虽然细胞的数量明显下降沿。分析心脏注射BM-MSC牺牲21天posttransplantation显示缺乏GFP信号(补充图1)。

3.3。确定特别关注国和BM-MSCs有不同的原生质的膜蛋白

表面蛋白是参与许多细胞过程包括细胞粘附,信号传导,细胞外基质的组织。我们进行比较细胞表面生物素酰化识别最常见的原生质的膜蛋白表达BM-MSCs年度"特别关注国"。虽然相同数量的总蛋白从细胞的两组样本进行了分析,我们发现显著差异在确定蛋白质年度"特别关注国"和BM-MSCs之间。蛋白质组学分析,生物素化的膜分数显示,59例(30%)的蛋白质通常表示年度"特别关注国"和BM-MSCs之间(图2(一个)),这些属于整合素的蛋白质和胶原蛋白的家庭。此外,81年年度"特别关注国"蛋白质(40.6%)专门检测和58例(29.4%)在BM-MSCs(图2(一个))。值得注意的是,蛋白质与细胞粘附是最广泛的表达在细胞类型:15蛋白质粘附相关(26.3%)表示在两种细胞类型,20(35.1%)特别是在年度"特别关注国",并在BM-MSCs 22 (38.6%)。然而,未使用的蛋白得分,衡量检测蛋白质的蛋白质信心用于排名蛋白质,显示年度"特别关注国"值最高为几乎所有的蛋白质鉴定。总蛋白质组学分析确定特别关注国和BM-MSCs补充表中可以找到S1和S2,分别。

3.4。共产党原生质的膜蛋白质参与粘附过程中明显富集

我们创建了一个treemap大大丰富的生物过程中确定年度"特别关注国",并使用REVIGO BM-MSCs(数字2 (b)和2 (d))。在这种表示,每个矩形代表单个集群,集群是加入到超星系团的松散相关术语、可视化与不同的颜色和矩形的大小反映了价值。生物素化的蛋白质在中共集团主要分为integrin-mediated信号通路、细胞粘附由整合素,主要胚层的形成,和细胞连接组装超星系团;最重要的流程集群integrin-mediated信号通路,细胞粘附,细胞连接组装(图2 (b))。对于BM-MSC生物素化的蛋白质,生物过程主要是分为胶原代谢,细胞连接装配,integrin-mediated信号通路,cell-matrix粘附超星系团(图2 (d))。作为一个补充表示,重要的生物过程描绘成dotplots,每个生物过程描述了它的重要性价值及其代(数字2 (c)和2 (e)),代表总数的比例量化相关蛋白质的功能。Integrin-mediated信号通路和细胞连接组装超星系团也过多,而且大部分的生物过程中确定年度"特别关注国"也在BM-MSCs dotplot图形(数据中反映出来2 (c)和2 (e))。总在年度"特别关注国"生物过程明显的过多和BM-MSCs补充表中列出S3和S4,分别。KEGG通路后也获得了类似的调查结果分析研究的分子网络大大丰富了在这两种细胞类型。最重要的过多KEGG通路中确定年度"特别关注国"和BM-MSCs是列在表中2。需要特别注意的是Rap1信号通路,在年度"特别关注国"专门过多。Rap1信号参与血管生成、细胞粘附、增殖和迁移过程,可能会带来一个额外的机制在年度"特别关注国"促进细胞粘附和迁移。

3.5。目标基因的鉴定蛋白质中共原生质的膜粘附过程

我们下一年度"特别关注国"进行了一次interactome分析和BM-MSCs研究目标基因表达的蛋白质的原生质的膜以及它们是如何相互作用的。要做到这一点,去生物过程被确定使用GSEA和Cytoscape软件v3.7.2(数据可视化3(一个)和3 (b))。同意上述结果,生物过程相关的粘附机制被浓缩在年度"特别关注国"的原生质的膜,而蛋白质曲目中BM-MSCs更相关的血浆的膜免疫进程(补充表5和6)。

4所示。讨论

据世界卫生组织统计,3240万例心肌梗死或中风全球每年发生。因为当前的治疗降低疾病进展不贡献显著,修复,心脏再生在心脏病治疗的一个重要目标。确定特别关注国和msc都展示了他们潜在的再生梗塞的心在不同的动物模型(AMI后5,26,29日,38,40),他们的有益影响左心室功能已被广泛证明尽管他们的低灌注后移植和保留4,41]。

在这里,我们显示了卓越的能力确定特别关注国在BM-MSCs提高心脏功能参数,减少梗塞大小在老鼠模型中诱导MI。BM-MSCs已广泛应用于临床前研究心脏再生;然而,在符合先前的研究[27),年度"特别关注国"似乎更有效地改善功能心脏参数比BM-MSC使用低剂量。在这项研究中,剂量评估改善心脏功能很明显当共产党移植与控制以FAC的变化相比,FS和AWT。我们观察到类似的结果而言,可行的心肌,只有年度"特别关注国"生产显著改善LVW减少疤痕组织,增加的厚度。BM-MSCs确实展现出了一种积极的趋势这些参数,但是他们未达到统计上的显著水平,可能由于细胞低剂量使用。这些结果表明,虽然两种类型的细胞能够促进功能改善所有测量参数对心脏修复的影响更明显使用年度"特别关注国"。

鉴于溢出相关血浆的膜受体的作用和渗透,我们寻求更好的描述血浆的膜蛋白质表达谱的年度"特别关注国",BM-MSCs通知机制有利于心脏的再生。前面描述的那样,中国共产党高度嫁接在梗塞的心2,4]。因此,蛋白质推定地与上级移植和保留在年度"特别关注国"相对于BM-MSCs研究了生物素化的表面蛋白的蛋白质组学分析。

比较蛋白质组学分析中共与BM-MSC膜蛋白透露更多的蛋白质胶原蛋白和整合素对应家庭通常表现在年度"特别关注国"。整合蛋白是细胞粘附受体广泛描述的家庭结合多种配体和细胞表面粘附蛋白(42]。有趣的是,大部分的整合素形成胶原蛋白——描述,纤连蛋白和laminin-binding受体(43)确定了年度"特别关注国",这或许可以解释年度"特别关注国"的强大能力继续道。我们确定了整合素亚单位α2,α3,α5,β1,β3,β5、形成胶原蛋白的一部分,vitronectin,纤连蛋白受体。此外,胶原蛋白亚基α1,α2,α3,不同的蛋白质与细胞粘附fibulin-1等连环蛋白β1、nectin-2和cadherin-13也在年度"特别关注国"与BM-MSCs,按照以前的结果(23,28]。某些蛋白质中确定BM-MSCs包括整合素的血浆的膜αV,β1,α11,α5作为粘附分子(44]。因此,我们的数据表明,正如所料,年度"特别关注国"和BM-MSCs运通血浆蛋白参与细胞粘附的规定,但在年度"特别关注国"富裕概要显示更综合监管网络参与细胞粘附,这借口强保留的潜力。事实上,没有heart-specific粘附分子显著地出现在我们的分析,表明中国共产党的粘附能力不是组织具体而广泛。这些特性可能是背后的事实,我们已经能够检测只在不同的组织,而不是BM-MSCs共产党。前所述,BM-MSCs保留和检测在不同的组织包括心脏(45),但这些研究中使用的细胞剂量高于本研究中使用的一个可能解释这种差异。

识别KEGG调节通路的通路富集分析显示细胞外matrix-receptor交互,粘着斑和细胞粘附分子最明显的过多年度"特别关注国"和BM-MSCs过程。值得注意的选择性表达Rap1年度"特别关注国"的信号通路,的一个关键调解人integrin-mediated细胞粘附过程。成员Rap1 Ras总科的小GTP-binding蛋白质,是守恒的心血管信号调节器。几个基本函数直接受Rap1信号,包括细胞粘附、细胞增殖、细胞连接的形成由connexion-43 [46,47]。此外,Rap1调节血浆的膜过程,integrin-mediated细胞粘附[48]。这些结果表明,Rap1可能参与机制,促进细胞粘附/移植心脏的年度"特别关注国"。根据我们的分析,考虑到文学,我们认为我们的工作加强了年度"特别关注国"的理念,增强移植的治疗益处和负责Rap1嫁接的信号通路是一项重要的监管机构。将会进行进一步的研究来更好地理解的确切作用Rap1观察表型。

虽然大多数蛋白质的一般表示在两种细胞类型,interactome分析显示,生物过程调节与粘附在年度"特别关注国"大多是相关的,而在BM-MSCs调节功能主要是与免疫调节过程有关。关于BM-MSCs,我们的发现与当前的知识一般协议后立即发生AMI的生物过程,包括先天和适应性免疫细胞的动员包括单核细胞,中性粒细胞,肥大细胞和巨噬细胞25,49),著名的BM-MSCs调节免疫应答的能力(50,51免疫细胞)和目标(21]。

总之,我们的研究表明,CPC细胞的原生质的膜含有蛋白质积极参与生物过程与细胞粘附相关机制。年度"特别关注国"强烈灌输到心脏的心肌内注射后,明显改善心脏功能。因此,这些发现支持了进一步评估和发展强有力的候选细胞疗法的年度"特别关注国"心脏修复。

5。结论

在一起,我们的结果表明,CPC细胞能够改善心肌梗死后心脏功能和促进组织修复由于梗塞的地区的灌输更强的能力。数据加深机械的年度"特别关注国"和BM-MSCs之间的差异,表明这两种细胞类型可能是互补的治疗策略。

数据可用性

的数据支持本研究的发现可以从相应的作者在合理的请求。

的利益冲突

作者声明没有竞争的利益冲突。

确认

蛋白质组学研究进行了瓦伦西亚大学蛋白质组学单位,成员ISCIII ProteoRed蛋白质组学平台。Imelda Ontoria-Oviedo承认PlaGenT博士后的合同,Generalitat Valenciana (CDPT-01/20-A)。我们感谢肯尼斯·McCreath博士建设性的评论的手稿。这项工作是PI16/0107赠款支持,PI19/00245和RETICS程序(RD16/0011/0004)研究院祝您健康卡洛斯三世得到菲德尔“una manera de欧罗巴。”

补充材料

补充1。补充图1。代表荧光的心脏图像GFP-CPCs GFP-BM-MSCs 2, postimplantation 10日和21天。红色荧光微球与细胞coinjected本地化管理网站。在10倍放大图像获得的。

补充2。补充表1。生物素化的蛋白质的蛋白质识别心脏祖/血浆的膜分数的干细胞。

补充3。补充表2。从血浆的膜蛋白质的识别生物素化的蛋白质分数的骨髓间充质干细胞。

补充4。补充表3。生物过程的生物素化的蛋白质识别心脏祖细胞的原生质的膜/干细胞。

补充5。补充表4。生物过程的生物素化的蛋白质中确定骨髓间充质干细胞的原生质的膜。

补充6。补充表5。生物过程被确认的interactome分析心脏祖/干细胞。

补充7。补充表6。生物过程被确认的interactome骨髓间充质干细胞的分析。