比较分析人类脐带血液的间充质干细胞在子痫前期和正常孕妇

文摘

子痫前期是一种综合症,其特征是产妇条件或胎儿病情的恶化。宫内不良环境由子痫前期成果转化为宫内生长受限和各种疾病的风险增加在未来的生活。鉴于胎儿血液循环的不良环境在preeclamptic条件,和间充质干细胞(MSC)的作用作为一个多能祖细胞,我们假设源自人类脐血MSC (hUCB-MSCs)从子痫前期获得不利改变或影响而正常怀孕。本研究的目的是分析生物学特性和比较的功能能力和基因表达模式hUCB-MSCs源自子痫前期孕妇使用和不严重。分离、培养hUCB-MSCs 28与重度子痫前期孕妇和30名正常孕妇。hUCB-MSCs获得女性的子痫前期较低增生性衰老和端粒酶活性较低和ROS活动高于细胞与正常妊娠妇女。此外,许多伴随老化(度)的差异表达基因通过微阵列基因表达谱分析,并与基因本体术语细胞衰老相关显著。总之,hUCB-MSCs子痫前期显示女性的糟糕的增殖,获得更多的衰老,端粒酶活性下降,这些字符可能与功能障碍相关的MSC子痫前期与细胞从正常怀孕。

1。介绍

间充质干细胞(msc)的发现Friedenstein等人于1976年提出了一个可能有用的模型,基因治疗,再生医学,和更好的和更先进的各种疾病的治疗策略,即使是那些似乎无法治愈的(1]。越来越多的报道表明,msc增殖潜力和广泛的能力分化成不同的细胞类型,包括成骨细胞的脂肪形成的,chondrogenic,肌原性的,神经源性细胞2- - - - - -5]。由于这些特性,众多的实验室正在研究msc治疗的临床安全性和有效性的病理条件下,如心力衰竭(6),脊髓损伤(7[],骨头和软骨疾病8]。而骨髓msc是第一个主要来源,最近的研究表明,msc可以获得人体的许多其他组织,如脂肪(9),脐带血,绒毛膜胎盘的10],羊水[11],外周血[12)、肺(13),骨骼肌(14),滑膜(15),肝组织(16),甚至脱落乳牙(17]。尤其值得一提的是,最近的研究表明,源自人类脐血msc (hUCB-MSCs)可以更有效地孤立和比msc源自成人发育原始组织(18]。对于来自脐带血造血干细胞,各种衰老阶段,他们的监管途径是众所周知的19- - - - - -21]。相比之下,msc的衰老和功能障碍的机制仍然未知,但最近的一些研究表明,msc与年长的捐赠者更衰老比孤立的从年轻的捐助者22,23]和msc有复制衰老途径涉及细胞内超氧化物堆积(24,25]。

子痫前期是一种并发症中发现2 - 8%的怀孕和孕产妇和围产期发病率和死亡率的主要原因(26- - - - - -30.]。子痫前期是一种综合症,其特征是恶化的产妇条件(高血压和蛋白尿有或没有multiorgan异常)或胎儿状况(宫内生长受限、减少羊水)[31日- - - - - -33]。子痫前期胎儿宫内生长受限是一个主要的并发症。虽然减少胎盘血流量(34,35),增加人类的胎盘血管血管收缩剂的敏感性已经被认为是可能的原因36),宫内生长受限在子痫前期的病理生理学尚不清楚。此外,孩子足月出生的母亲与子痫前期的风险增加各种各样的疾病,如内分泌、营养和代谢疾病以及疾病的血液和造血器官37]。这些发现在preeclamptic条件下可能产生适应胎儿的宫内不良环境。先前的研究已经解释这个不利条件给出比较没有子痫前期的脐带血。与正常妊娠组相比,增加抗血管新生因子,减少表达proangiogenic信号,高氧化应激和炎症反应增加已经成立于胎儿血清在子痫前期(38- - - - - -40]。

鉴于胎儿血液循环的不良环境在preeclamptic条件,以及MSC作为多能祖细胞的作用,我们假设hUCB-MSCs获得子痫前期的不利改变或影响而正常怀孕。本研究的目的是分析生物学特性和比较的功能能力和基因表达模式hUCB-MSCs源自子痫前期孕妇使用和不严重。

2。材料和方法

2.1。研究对象和样本收集

我们研究了脐带血的孕妇访问韩国建国大学医院,30人没有孕期并发症(正常组)和28人重度子痫前期(子痫前期组)。只有女性由剖腹产没有劳动参与这项研究。脐带血当时从每个孕妇剖腹产。剖腹产孕妇的迹象之前没有子痫前期是剖腹产,先前的肌瘤切除术,臀先露,或横向谎言。所有受试者签署知情同意后参加本研究文档批准的机构审查委员会(IRB不:KUH1040005)。重度子痫前期被定义为高血压(的存在 和/或 )和蛋白尿(≥3 +试纸测试每24小时或5 g)超出了20^th怀孕的周(41]。至少两个连续测量所需的诊断。受试者被排除在本研究如果他们知道胎儿或孕妇并发症,如多个妊娠,胎儿结构或遗传问题,产妇慢性高血压、心血管疾病、肾脏疾病、肝脏疾病、糖尿病、传染性疾病、结缔组织疾病、自身免疫性疾病。

2.2。隔离和hUCB-MSCs修养

脐带血液样本(约50毫升)与EDTA作为抗凝剂收集从一个脐带静脉连着胎盘交付后由重力流。单核细胞(跨国公司)从脐带血样本通过密度梯度离心法分离Biocoll (Biochrom,柏林,德国)30分钟 和洗了三次磷酸盐(PBS) (Biochrom)。在跨国公司中,CD133 /选择c-kit-positive细胞分化成msc。CD133 / c-kit-positive细胞使用mac系统(Miltenyi研究,Bergisch格拉德巴赫,德国)。简单地说,跨国公司清洗和resuspended PBS缓冲。细胞培养与anti-CD133 / C - kit在人类免疫球蛋白的存在微磁屏蔽在4°C试剂30分钟。标记细胞被加载到一个列安装在一个磁场。列与PBS缓冲液冲洗,通过和消极的细胞。被困后细胞筛选了删除列的磁铁。隔离/ c - kit CD133阳性细胞被播种 细胞6-well盘子,涂以人类纤连蛋白(Sigma-Aldrich化学,慕尼黑,德国)在内皮基底medium-2 (EBM-2) (Clonetics、电池系统、圣Katharinen,德国)。媒介与内皮生长medium-2补充(EGM-2;Clonetics,包含胎牛血清的细胞系统),人类VEGF-A人类成纤维细胞生长因子b,人类表皮生长因子、胰岛素样生长因子1 (IGF1)和抗坏血酸。3天后,不依从细胞和新鲜培养基添加删除。文化是保持EGM-2补充。细胞的表型分析进行7天,13和15。

2.3。流仪结果

0.25%胰蛋白酶的msc治疗,与PBS洗一次,收集。下面的荧光标记的抗体被用于流仪hUCB-MSCs描述:anti-CD29(分子探针,尤金,或者),anti-CD73(圣地亚哥BD Pharmingen CA),和anti-CD90 (Abcam、剑桥、马)。杜尔贝科的PBS分离细胞被洗两次,离心机,洗在冰冷的杜尔贝科的PBS补充1%牛血清白蛋白(FCM缓冲区),和固定在2%多聚甲醛在FCM缓冲区。细胞培养与抗体结合异硫氰酸荧光素(FITC)或藻红蛋白(PE) (Pharmingen,欧洲BD生物科学、海德堡、德国)15分钟在冰上浓度在一个黑暗的房间里推荐的制造商。我们使用anti-IgG-FITC (33814 x;Pharmingen, BD欧洲生物科学)和anti-IgG-PE (33815 x;Pharmingen BD生物科学欧洲)同型的控制。清洗后,分析了细胞库尔特史诗XL-MCL流式细胞分析仪(贝克曼库尔特,Krefeld,德国)通过使用EXPO-32软件。仪器设置分散条件和背景荧光对未经处理的细胞进行调整。

2.4。半定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)

从细胞总RNA提取试剂盒的试剂盒(表达载体,卡尔斯巴德,CA)根据制造商的指示。简而言之,第一链互补DNA(互补)合成了1μ与上标2 g的总RNA逆转录酶,益生元(dT)引物,和10毫米核苷酸混合物(表达载体,卡尔斯巴德,CA)。互补脱氧核糖核酸混合(1μL)是用于PCR。放大的并行GAPDH基因进行了规范化。在DNA PCR进行热循环(模型ptc - 200;乔丹研究,科学支持,Inc .,沃尔瑟姆,MA)在下列条件:变性在94°C第一周期和5分钟30秒之后,退火60°C 30秒,在72°C和扩展30秒40周期。结果规范化GAPDH信使rna。给出了在表使用的引物1。

2.5。免疫荧光染色

msc被放在玻璃的底部盖玻片井24-well文化板块,用4%甲醛溶液固定,permeabilized Triton x - 100的0.3%。他们孵化3%过氧化氢甲醇十分钟阻断内源性过氧化物酶活性在PBS 5分钟,然后洗两次。细胞被孵化一夜之间在4°C以下主要抗体:鼠标反人类单克隆抗体αsmc (Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州),1:200;鼠标反人类单克隆抗体CD90 (Abcam、剑桥、马),1:100;和鼠标反人类单克隆抗体CD73(圣地亚哥BD Pharmingen CA), 1: 500。细胞被洗了三次与PBS包含Triton x - 100和安装Vectashield安装介质包含4 ,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)(向量实验室)。在PBS洗两次15分钟后,幻灯片是孵化(30分钟37°C)与二级抗体(抗体IgG抗体共轭Alexa 488或555;分子探针),然后与streptavidin-conjugated辣根过氧化物酶。幻灯片是3,3 - - - - - -diaminobenzidine tetrahydrochloride。

2.6。成骨分化

诱导成骨分化,我们镀24-well板在msc 细胞/厘米²。confluency 70%,细胞治疗与成骨的感应介质(低糖杜尔贝科修改鹰的媒介,10%的边后卫,10毫米β甘油磷酸盐,10 nm地塞米松,50μm抗坏血酸盐,抗生素)。媒介是改变每3 - 4天,和细胞形态学评估视觉每天长达3周。的分化,细胞碱性磷酸酶染色,与冯Kossa染色(42- - - - - -44]。

2.7。脂肪形成的分化

诱导脂肪形成的差异化,我们对待msc与脂肪形成的媒介(1μ地塞米松,0.5毫米3-isobutyl-1-methylxanthine 10μg / mL重组人胰岛素,0.2毫米消炎痛,10%胎牛血清)为3周。维护中包括只有重组人类胰岛素和10%胎牛血清代替每周两次,以每周的间隔和脂肪生成评估。控制细胞保存在脂肪形成的维护中。细胞与10%福尔马林固定,洗,沾0.18%油红O 5分钟解决方案。去证实了细胞内积累lipid-rich液泡,沾油红O (43- - - - - -45]。

2.8。Chondrogenic分化

诱导chondrogenic分化,我们讲究的 msc /在chondrogenic介质(high-glucose杜尔贝科修改鹰的媒介,1 x insulin-transferrin-selenium预混料、抗坏血酸2-phosphate 0.1毫米,10毫米丙酮酸钠,10 ng / mL转化生长因子-β1,100 nM地塞米松)三个星期。每周进行两次介质变化,软骨形成评估每隔2 ~ 3天。细胞被固定在4%甲醛、乙醇系列脱水,嵌入在石蜡块。块被削减,部分彩色的硫酸化蛋白聚糖与红色染料O(0.1%水溶液)(Sigma-Aldrich)评估chondrogenic分化[43,44]。

2.9。扩散分析

组间比较hUCB-MSCs的倍增时间,细胞被播种在六T-25烧瓶。在每个连续六天,细胞从一个瓶是获得和枚举。的意思是数量计算。平均人口倍增时间(PD)是用以下公式计算: ,在哪里培养液的细胞数量,是收获的细胞的数量,和是文化的持续时间(小时)46]。

2.10。Senescence-Associatedβ牛乳糖化验

的senescence-associatedβ牛乳糖(SA -β加)测定进行了区分衰老细胞(47]。SA -β加活动的hUCB-MSCs通道3测量和比较两组之间。短暂、hUCB-MSCs洗在PBS、固定3分钟(室温)在2%多聚甲醛,洗,孵化24小时与新鲜的SA - 37°Cβ加(1毫克/毫升5-bromo-4-chloro-3-indolyl染色的解决方案β亚铁氰化钾-D-galactopyranoside 5毫米,5毫米铁氰化钾,150毫米氯化钠,MgCl 2毫米₂0.02%,0.01%钠脱氧胆酸盐,诺乃清洁剂p 40)。hUCB-MSCs与DAPI复染色(0.2μ在10毫米Tris-HCl g / mL, pH值7.0,EDTA 10毫米和100毫米氯化钠)10分钟。明显染色细胞被相衬显微镜观察。的意思是染色强度SA -β-gal-positive细胞计算从四个随机选择的微观领域(×200放大)由微(48]。

2.11。端粒酶活性测定

定量地分析hUCB-MSCs的端粒酶活性,我们进行了端粒重复扩增协议分析使用TeloTAGGG端粒酶PCR酶联免疫试剂盒(罗氏分子生化药剂,布鲁塞尔,比利时)根据制造商的协议。hUCB-MSCs通道3的端粒酶活性测定和比较两组之间。简单地说, hUCB-MSCs是颗粒状,享年3000岁10分钟4°C,洗两次冷PBS,孵化20分钟与200年在4°CμL(预冷裂解缓冲工具包(方案1),离心机,享年16000岁20分钟。端粒重复添加了第一反应期间biotin-labeled底漆,然后,延伸产品被PCR扩增。最后,固定化PCR产品检测anti-digoxigenin-peroxidase抗体和可视化为底物的颜色反应产物3,3 ,5、5 - - - - - -四甲基联苯胺。吸光度的测定在450海里一式三份,通过阅读对一个空白的吸光度在690海里)(参考。样本被视为telomerase-positive如果吸光度的差异( )大于0.2 [49,50]。

2.12。活性氧(ROS)活性测定

内源性过氧化物生产评估使用氧化荧光染料dihydroethidium(她)。ROS hUCB-MSCs活动通道3之间的测量和比较两组。细胞被镀上12-well盘子,用Krebs-HEPES缓冲区(pH值7.4)洗净,沾染了她15分钟在孵化器37°C。与多聚甲醛固定后,幻灯片和安装介质盖玻片和照片51,52]。

2.13。光密度分析

SA -β-gal-positive细胞和DHE-stained细胞被光密度扫描可视化使用发光图像分析仪(las - 1000,富士胶片影像有限公司,东京,日本)和数字分析软件(图像读者las - 1000 Lite,富士图电影有限公司)。

2.14。微阵列表达hUCB-MSCs分析

5微克的总RNA从hUCB-MSCs杂化Human-GE 4 x44k v2微阵列(人类全部基因;安捷伦科技,圣克拉拉,CA)。两种类型的hUCB-MSCs进行了分析和比较:N3(细胞通道3,正常怀孕)和P3(细胞通道3,子痫前期)。用于样品制备的标准协议和微阵列处理安捷伦科技是可用的。表达数据分析使用安捷伦的GeneSpring GX软件(Genomictree Inc .、大田、韩国)。

2.15。差异表达基因的途径网络分析(度)

(度)的差异表达基因功能之间的相互作用分析GeneMANIA web服务器(53]。GO术语被用来创建度和额外的基因之间的相互作用网络通过使用人类作为一个物种来源。度被映射到GeneMANIA调查这些基因是如何相互影响和额外的基因相关的一组查询基因通过使用一个非常大的功能交互数据集。通过整合这些关系,网络度和其他相关基因之间构建了度集的交集N3与P3。确认基因网络创建度,GO术语中富集分析基因网络中。

2.16。统计分析

报告数据 。病人的特征、细胞群体倍增时间,SA -光密度值β-gal-positive细胞端粒酶活性,ROS Mann-Whitney活动组间比较测试。其他的变量,包括细胞数量,通过学生的比较 - - - - - -测试使用SPSS 12.0版(SPSS,芝加哥,IL)。一个被认为具有统计显著性值小于0.05。

3所示。结果

3.1。临床特征的参与者在正常和子痫前期组

患者的临床特点为这项研究提供了脐带血展示在表2。母亲的年龄没有显著差异或在交付之间的正常胎龄和子痫前期组。出生体重在子痫前期组明显低于正常组。收缩压和舒张压在子痫前期组明显高于正常组。

3.2。分化和hUCB-MSCs的表征

跨国公司从脐带血中,CD133 / c-kit-positive细胞被选择并分化成msc。msc分化从CD133 / c-kit-positive细胞与形态学特征(图1(一)(图),流仪分析1 (b)),半定量的RT-qPCR(图2)和免疫荧光染色(图3)。hUCB-MSCs从20正常怀孕被用于获得MSC描述分析。

3.3。hUCB-MSCs体外分化的研究

成骨分化hUCB-MSCs成骨表型的检测证实了组成的碱性磷酸酶的表达,增加了silver-stained的沉积矿化矩阵(图4(a))。证实了Chondrogenic分化的形成一个球体cartilage-specific micromass文化和分泌的蛋白聚糖与红色染料可染色的O(图4(b))。脂肪形成的分化的细胞被证明了的积累中性脂质空泡油红O染色(图4(c))。

3.4。减少增生性hUCB-MSCs从子痫前期的潜力

比较的增殖能力hUCB-MSCs女性的正常妊娠和子痫前期,一个扩散试验。很明显,扩散hUCB-MSCs子痫前期是女性相比显著降低与正常妊娠(图5(一个))。这些数据表明hUCB-MSCs子痫前期女性有更低的扩张潜力比正常女性的怀孕。

3.5。增加hUCB-MSCs从女性与子痫前期的衰老

SA -β加试验获得的hUCB-MSCs正常女性的怀孕或子痫前期进行评估体外细胞老化的特点。SA -的数量β在hUCB-MSCs -gal-positive细胞明显高于女性的子痫前期(64.5%;范围58.8 - -70.2%)比正常女性的怀孕(39.8%;范围35.0 - -44.6%; )(图5 (b))。平均在子痫前期组染色强度明显高于正常组( vs。 ; )(图5 (c))。

3.6。降低了端粒酶活性与子痫前期hUCB-MSCs从女性

Preeclampsia-related改变端粒酶活性的hUCB-MSCs进行评估。端粒酶活性降低40%在hUCB-MSCs子痫前期组与正常组相比(图6(一))。此外,ROS能导致细胞衰老,细胞凋亡,或致癌作用,ROS-induced细胞损伤也会导致干细胞老化(54]。如数据所示6 (b)和6 (c)、荧光的ROS增加在hUCB-MSCs与子痫前期的女性。

3.7。比较正常的基因表达在hUCB-MSCs和子痫前期组使用微阵列分析

hUCB-MSCs获得2正常妊娠子痫前期被用于基因表达的比较包括使用微阵列基因表达模式,分层聚类分析差异表达的基因,基因本体分类,两组之间和通路网络分析。

数据处理后,表达谱分析散点图和马(对数比率和平均)图(图7(一))。hUCB-MSCs从正常通道3组(N3)与细胞通道3的子痫前期组(P3)。在故事情节,红点代表信号强度较高的基因在hUCB-MSCs子痫前期组比hUCB-MSCs从正常组。绿点代表信号强度下降。散点图和马情节显示N3之间的差异表达基因(度)和P3。

基因的表达是hUCB-MSCs从正常和子痫前期组之间相比,和基因表达模式(数据集群7 (b)和7 (c))。N3和P3细胞之间的比较,两倍和四倍的差异表达(向上)的差别,或者对这些发现2684基因和659个基因,分别。

N3和P3细胞之间的基因差异表达与每组中识别特定的度。两个,表达下调的基因被用于这些比较。我们确认1227调节和1457个表达下调基因共同N3和P3(图之间的关系8(一个))。层次聚类后伴随老化度,我们构建了一个系统树图显示集群(图8 (b))。四十伴随老化度确定。

3.8。功能分类的差异表达基因和通路网络分析伴随老化(度)

基因本体论(去)术语被用来创建之间的交互网络伴随老化度和额外的基因通过使用人类作为一个物种来源。基因之间的关系网络中包括coexpression、物理交互,通路,colocalization,蛋白质域相似。列表中伴随老化度是丰富对某些条款。在GO术语与衰老有显著关系,由错误发现率较低(罗斯福),是与细胞周期相关的基因,显示出很强的与所选择的基因(表之间的关系3)。

在40伴随老化度,我们确定了八个基因与过滤条件的微分表达式超过两个N3和P3然后进行了富集分析这些基因。特别是,我们研究了这些基因的任何关系。八伴随老化度有两个网络。GeneMANIA网络分析这些基因建议浓缩7基因与细胞衰老”术语,包括NM_078467 NM_058197, NM_001114121, NM_145862, NM_003483 NM_014397, NM_003483(基因库,图中红色圆圈9)。大多数coexpressed基因之间的关系。网络中,术语“细胞老化”与FDR-corrected大大丰富价值 。在57个基因与细胞老化,“七个基因都淹没了。

4所示。讨论

子痫前期是一种疾病,其特征是妊娠高血压和蛋白尿,影响2 - 8%的怀孕(31日,32,34]。在这个条件的女性,子宫内的环境是修改的变化信号模式和底物运输胎儿(55,56]。这种修改会导致胎儿生长受限和日后对疾病的易感性增加,如心血管、内分泌、营养、代谢,有与血液相关的疾病。子宫内环境的变化在子痫前期也可以诱导脐带血液循环的因素。胎儿血液循环在子痫前期可能会增加循环反血管增生等因素sFlt-1(可溶性fms-like酪氨酸激酶1)和可溶性endoglin或减少proangiogenic信号的表达式和活动,如血管内皮生长因子或腺苷酸(57,58]。一些研究发现更高浓度的蛋白质氧化产物(ex、蛋白质羰基)和增加氧化应激和脂质过氧化的脐带血preeclamptic怀孕相比,血压正常的怀孕(59]。脐血清炎症标志物水平(白细胞介素- 6、interleukin-8和肿瘤坏死因子-α)在妊娠并发子痫前期相比明显增加正常妊娠(60]。因为这些病理条件的脐带血的女性与子痫前期,我们假设循环hUCB-MSCs preeclamptic怀孕不能功能受损。

最近的研究表明,在女性与子痫前期,脐带血内皮祖细胞(epc)或循环内皮细胞克隆形成是减少和功能摄动,这可能导致未来心血管事件的风险增加(20.,61年]。然而,胎儿生长受限和疾病发生在出生后不能简单地解释为改变内皮干细胞来自脐带血。有很多种多功能脐带血干细胞包括epc和msc。因为msc可以自我更新,具有高增殖能力,并能分化成各种细胞类型,如软骨细胞,骨细胞,脂肪细胞,细胞,神经元,hUCB-MSCs极有可能与子痫前期女性功能受损。在目前的研究中,结果表明:hUCB-MSCs获得女性的子痫前期不增生性衰老和超过细胞的正常怀孕的女性,和许多伴随老化度是由基因表达谱的分析。

尽管他是一个有前途的工具在再生医学,msc仍有争议。这是因为msc的临床有效性,造成multipotency和广泛的可访问性,是反击的有限的增殖能力。许多因素影响msc在体外的增殖和衰老,如复制衰老、供者年龄和文化条件(62年- - - - - -64年]。因此,许多研究msc已经产生了矛盾的数据显示增长潜力巨大的差异。这项研究的结果表明,hUCB-MSCs子痫前期女性增生性很差,更多的衰老,端粒酶活性降低,增加活性氧的活动。这些preeclampsia-associated hUCB-MSCs变化无关供者年龄、复制衰老和文化条件。因此,可能存在一个未知的途径与MSC衰老有关。层次聚类相比,基因表达分析发现40伴随老化度。这些基因将在未来潜在的研究目标的研究msc。

目前,msc广泛culture-expanded状态特征,很少有人知道他们的体内生物属性。一般来说,ROS能导致细胞衰老,细胞凋亡,或致癌作用。ROS-induced细胞损伤也会导致干细胞老化(54]。最近的一项研究表明,人类msc有很高的抗氧化应激死亡,这与一个低水平的细胞内ROS清除活性物种由于有效,组成型表达管理所需的酶氧化应激,和高水平的总细胞内谷胱甘肽(65年]。此外,许多研究表明,端粒和端粒酶在体外和体内衰老有重要作用(66年]。端粒酶,包含一个模板RNA的核糖核蛋白复合体亚基,延长端粒长度增加端粒重复染色体末端(67年]。的高生产活性氧导致氧化应激状态,后来导致衰老与端粒的缩短68年]。,端粒酶telomere-independent凋亡、cytoprotective proproliferative影响端粒酶或保护线粒体DNA氧化应激除了端粒延长(69年]。在这项研究中,所有的细胞都在相同的常氧条件下培养。然而,hUCB-MSCs子痫前期一直更多女性的衰老,ROS活动和较低的端粒酶活性高于女性正常组。这些发现可以解释衰老的hUCB-MSCs子痫前期。

比较和聚类分析N3和P3细胞之间的基因差异表达显示1227调节和1457度使之抑制常见的两组,并减少相关的函数hUCB-MSCs与子痫前期的女性。通过交叉分析的微阵列数据,我们消除了错误,或者表达下调度,这可能造成误解的微阵列数据。通过术语分类和通路网络分析,我们证实,所选择的基因具有高度增殖和细胞周期相关,都是细胞衰老的重要原因或影响。的伴随老化度在两个网络可能主要与增加衰老有关preeclamptic hUCB-MSCs。这些基因显示网络coexpression模式,其中一些肯定是参与细胞衰老过程。伴随老化的基因识别在这个研究可以进一步分析在很多不同的方式。

潜在的新途径MSC衰老建议在我们的结果应该通过senescence-associated基因的验证和分析研究。如果hUCB-MSC标记与宫内生长受限和疾病发生在以后的生活中发现,这些病理preeclamptic怀孕的后果可能会解决。msc的未来的研究应该集中在有效促进长期细胞扩张,通路相关的识别重复的疲惫,和最大增长能力没有损失的区分能力。

5。结论

总之,脐带血的病理条件与子痫前期的女性会导致胎儿生长受限和增加对疾病的易感性。hUCB-MSCs获得女性的子痫前期不增生性衰老,增加了活性氧活动和减少细胞端粒酶活性与正常女性的怀孕,和许多相关伴随老化度被基因表达谱的分析。因为这些preeclampsia-associated hUCB-MSCs与供体年龄的变化,复制衰老,和文化条件,与MSC衰老相关的另一个途径应该学习在不久的将来。40伴随老化度确定在本研究将潜在的未来的研究目标的研究msc。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。

信息披露

这手稿提交论文在研究生院,延世大学,2015年。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

这项研究受到了基础科学研究项目通过韩国国家研究基金会(NRF)由教育部(NRF - 2019 r1i1a1a01059738)。这项研究受到了基础科学研究项目通过韩国国家研究基金会(NRF)由科技部,ICT和未来规划(NRF - 2017 r1c1b2010487)。这项研究受到了韩国卫生技术研发项目的资助通过韩国健康产业发展研究所(KHIDI),由卫生部&福利,大韩民国(批准号:HI17C1713)。

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