广泛的间充质干细胞特征表情新鲜孤立和标志在体外扩大人类脂肪干细胞从乳腺癌患者

文摘

细胞数量和功能的变化在脂肪组织中可能影响治疗结果和不良事件后在乳癌术后乳腺癌患者自体脂肪组织移植;然而,关于细胞组件相关的信息仍然是不完整的。异质细胞的表型特征子集在间质血管分数(SVF)流式细胞术从脂肪组织中分离出来了也仅限于一些分子的结合。因此,本研究开发了一种多色染色面板深入描述了新孤立SVF和扩大脂肪干细胞(ADSC)患者。ADSC主要被发现在SVF (CD45 ~ 65%^{- - - - - -}细胞)与同质CD13表型⁺CD31^{- - - - - -}CD34⁺CD45^{- - - - - -}CD73⁺CD90⁺CD105^{- - - - - -}CD146^{- - - - - -}~ (ADSC)总额的94%。内皮祖细胞(EPC)和周小(CD45 ~ 18% ~ 11%^{- - - - - -}细胞,分别与大的异质性。Downregulation CD34和upregulation CD105在ADSC深刻的通道3,显示类似于经典的表型从骨髓间充质干细胞。这项研究的结果表明,脂肪组织收集患者包含ADSC高度同质的表现型。的在体外这些细胞保持文化同质性修改CD34和CD105的表达,表明ADSC的从一个人口膨胀。

1。介绍

白色脂肪组织被认为是基质前驱细胞和干细胞的替代来源。通常情况下,脂肪组织可分为两种类型,包括白色和褐色脂肪组织根据他们的形态学和生理学。白色脂肪组织包含单个脂滴形成白色到黄色的外观和功能通过存储脂肪过多的能量,而褐色脂肪组织由多个小液泡,大量的含铁线粒体生成棕色和作品通过脂质燃烧热量生产(1- - - - - -3]。除了这些相异,褐色脂肪组织量在成年人和位于至关重要的地区如颈、锁骨上、腋窝(4]。白色脂肪组织主要被发现在皮下和内脏几个仓库(如腹部、臀部和大腿);因此,它成为一个明智的祖干细胞来源。

相比骨marrow-another推荐来源的干细胞,间充质干细胞(MSC)的收益率从白色脂肪组织能够达到0.5 - 细胞/克脂肪组织(5,6只有0.001 - -0.01%的孤立的细胞从骨髓(平均达到7)非常低,不足进一步传播用于细胞疗法。收获过程的这些骨骨髓来源干细胞(BMSC)也相对入侵到病人和成本更高。尽管BMSC被认为是黄金标准的成体干细胞,前面提到几个问题已经成为临床实施的限制。其他类型的干细胞包括胚胎干细胞(ESC)和诱导多功能干细胞(iPSC)限制了临床实践道德的考虑和细胞监管。因此,脂肪干细胞(ADSC)最近微创的治疗潜力更有吸引力,因为收割技术,成本便宜,更大的收益,和确认multilineage一样MSC分化能力特征(5,6,8,9]。

异构的基质血管分数(SVF)包含血管内皮细胞,内皮祖细胞(EPC)的周,浸润细胞造血的血统,脂肪干细胞(ADSC)可以隔绝lipoaspirates酶消化和机械加工8,10- - - - - -13]。ADSC广为人知的再生属性,然后他们不仅介绍了整形外科手术定位在软组织和皮肤的手术也在各个领域广泛的潜在临床应用(14]。Oncoplastic乳房手术的手术使用ADSC的应用程序通过乳癌术后重建乳房的脂肪移植乳腺癌患者(15- - - - - -17]。ADSC的临床结果依赖于能力在新的功能性脂肪细胞增殖和分化成熟的脂肪移植物体积与维护。因此,ADSC已成为潜力巨大的小说乳房重建方法和吸引近年来组织工程(18)而不是BMSC的报道占据更高的分化倾向比脂肪细胞(成骨细胞和软骨细胞19]。许多问题关于细胞生物学、肿瘤安全性、临床疗效、和细胞生产过程以及手术技巧和经验有关。

支持使用ADSC等临床应用cell-assisted lipotransfer (CAL)介绍了通过使用SVF和吸气为自体脂肪组织转移(20.]。卡尔技术能够增加疗效更高的存活率和持久性的移植脂肪相比,non-CAL(即。,吸气脂肪不ADSC)以及减少不利影响钙化、纤维化形成,和假性囊肿20.]。吸气脂肪当时担任注塑材料软组织扩张也是富含EPC和对促进血管生成和微脉管系统。然而,EPC关心催化肿瘤血管化(21,22]。详细的识别EPC和周lipoaspirates然后保证更好的理解他们的关系抽取脂肪的部分坏死或促进脂肪移植后的风险。

因此,表型特征的ADSC是至关重要的细胞生物学的初始步骤确认。流式细胞术被广泛使用,因为它是细胞组成的黄金标准方法评估样本和功能相关的细胞表面标记表达式。尽管大量研究将努力通过使用广泛的表面标记ADSC识别,还有一个有争议的讨论一些表面蛋白分子的表达ADSC当天隔离,如CD105 [23,24]和CD146 [24- - - - - -26]。这种变化可能导致不同的单克隆抗体面板用于多色染色在单个样本,从生理区别新鲜和冻存的样本。孤立SVF或ADSC样本也获得健康的捐赠者在大多数乳癌术后重建乳房的报道而ADSC的使用需要自体脂肪移植。因此,本研究旨在调查深入描述ADSC, EPC,周在新鲜的抽脂吸入物从乳腺癌患者通过使用开发八色染色面板与流仪分析。串行ADSC表型变化的概要文件也探索了从细胞隔离的日子直到完成通道3。除此之外,multilineage扩大ADSC的分化能力评估,以确保他们的MSC的特点。

2。材料和方法

2.1。研究人群

22乳腺癌女性患者47岁至62岁的要求自体脂肪移植的乳房重建医学院里拉吉医院,曼谷,泰国Mahidol大学参与了这一研究。机构审查委员会批准的协议是(IRB)医学院里拉吉医院(COA数量580/2016)。书面知情同意之前也从每个主题研究。

2.2。样品收集

Lipoaspirates被撤出腹部肿胀技术使用一个3毫米直径真空吸入管加上10毫升注射器。收集到的组织被保存在新鲜的隔离和表征的注射器ADSC当天之前进一步系列使。

2.3。细胞隔绝Lipoaspirates

生lipoaspirates离心机在2000 g的3分钟之后删除石油和血液。剩余的脂肪组织与2毫克/毫升胶原酶消化I型(Gibco热费希尔科学,妈,美国)在37°C下60分钟震动。中和的酶活性是通过添加一个包含杜尔贝科修改鹰的完全培养基介质(DMEM Gibco,热费希尔科学、马、美国),10%胎牛血清(的边后卫,Gibco热费希尔科学、马、美国),1%谷酰胺(Gibco热费希尔科学,妈,美国),1% penicillin-streptomycin (Pen-Strep Gibco,热费希尔科学、马、美国),和0.01%庆大霉素(Gibco热费希尔科学,妈,美国)离心重400克,前4°C 10分钟。之后,收集到的颗粒在氯化铵钾resuspended (ACK)裂解缓冲(Gibco热费希尔科学,妈,美国)对红细胞(RBC)裂解和离心机重400克,4°C 10分钟,加拿大皇家银行。获得颗粒resuspended在磷酸盐(PBS、Gibco热费希尔科学、马、美国)含1%牛血清白蛋白(BSA、Sigma-Aldrich、美国),和细胞悬液过滤100和40μm细胞过滤器(美国纽约康宁)抛弃细胞碎片随后在400克,再次离心10分钟4°C。SVF颗粒收集和resuspended 1% BSA在PBS。细胞被台盼蓝排斥法计算。

2.4。细胞培养

三天的新鲜样品孤立SVF细胞隔离(D0)在DMEM培养完全培养基在10000个细胞/厘米²培养板。3天后,不依从细胞被清洗和丢弃。剩下的贴壁细胞然后扩大在完全培养基,并补货的新鲜培养基进行每3天。当confluency扩大细胞达到80%,他们脱离文化板块有0.25%胰蛋白酶(Gibco生活技术,CA)和被认为是在通道0 (P0)。孤立的细胞附着在P0然后不断扩大subcultivation通过通道3 (P3)。在每个通道(即扩大ADSC。,P0,P1,P2,和 P3) were counted by a trypan blue exclusion method and characterized by immunofluorescent staining and flow cytometric analysis.

2.5。表型特征

新孤立和扩大细胞的表型特征,他们沾fluorochrome-conjugated单克隆抗体包括CD13-allophycocyanin (APC), CD31-Alexa萤石®488,CD34-Brilliant紫™421 (BV421), CD45-peridinin-chlorophyll-protein (PerCP) CD73-phycoerythrin /炫™(PE /炫™)594年,CD90-Brilliant紫™510 (BV510), CD105-phycoerythrin青蓝7 (PECy7)和CD146-phycoerythrin (PE)。所有试剂都是来自BioLegend、钙、美国。样品被孵化前15分钟洗,并在450年resuspendingμL PBS。所有样本分析LSRFortessa流式细胞分析仪(美国BD生物科学)和FlowJo®软件(树明星,圣卡洛斯,CA)。

2.6。Multilineage分化

通道3月底,培养ADSC被确认为他们向脂肪细胞分化的能力,骨细胞和软骨细胞组织学分析。脂肪形成,扩大ADSC 40000细胞/在6-well板1毫升脂肪形成的分化培养基培养(干细胞™技术,加拿大)然后在37°C和5%孵化有限公司₂为14天。14天,诱导细胞被洗1 x PBS和固定两次30分钟的10%甲醛在PBS。之后,固定细胞用60%异丙醇(美国Sigma-Aldrich)在水沾油红O染色溶液(美国Sigma-Aldrich) 60分钟。染色细胞广泛用水洗去除游离染料,随后一个倒置荧光显微镜下观察(尼康,Ti-S Intensilight Ri1 NIS-D,日本)。代表图像的诱导细胞与对照组相比(例如在完整DMEM培养基培养,noninduced ADSC)。

关于骨生成,ADSC在40000细胞/ 6-well板是在1毫升的成骨分化培养基培养(加拿大干细胞™技术),然后37°C和5%孵化有限公司₂为14天。14天,诱导细胞被洗1 x PBS和固定两倍70%乙醇(美国Sigma-Aldrich) 30分钟。之后,乙醇被和固定细胞染色茜素红S染色溶液(美国Sigma-Aldrich) 30分钟之前广泛用水洗。代表图像的诱导细胞被倒置荧光显微镜和而noninduction控制。

软骨形成,micromass文化系统。浓度的培养ADSC 200000细胞/ 10μL DMEM完全培养基投12-well盘的中心和孵化37°C和5%的公司₂而培养基1 h。之后,chondrogenic微分包含DMEM培养基补充了100 nM地塞米松(美国Sigma-Aldrich), 50毫克/毫升抗坏血酸(美国Sigma-Aldrich), 100年μg / mL丙酮酸钠(美国Sigma-Aldrich), 1: 100稀释+预混料(含6.25毫克/毫升混合胰岛素,转铁蛋白6.25毫克/毫升、6.25毫克/毫升亚硒酸,1.25毫克/毫升BSA,亚油酸和5.35毫克/毫升、BD生物科学,美国),10 ng / mL转化生长因子- 1 (TGF -β1,PeproTech®、美国)和40毫克/毫升脯氨酸(美国Sigma-Aldrich)添加到培养板和37°C和5%孵化有限公司₂21天。chondrogenic分化中每3天了。21天,细胞颗粒被冻结在Tissue-Tek®O.C.T.™化合物(日本樱花®)和液体N₂对低温恒温器切片通过CryoStar™NX70低温恒温器(美国热费希尔科学)。脾细胞样本放在显微镜载玻片,然后洗了三次1 x PBS和10%甲醛固定在PBS 10分钟前轻轻删除固色剂。固定细胞被沾染了阿尔新蓝染色方案(美国Sigma-Aldrich) 30分钟,分别用水洗,70%,80%,90%,绝对的乙醇和二甲苯。代表图像的诱导细胞被倒置荧光显微镜,而感应控制。

2.7。数据分析

统计分析使用GraphPad棱镜®软件7.02版本(GraphPad软件公司,拉霍亚,CA)。数据被表示为 (SD)。双向方差分析Bonferroni的多重比较测试是用来确定统计的数量差异SVF亚种群间充质干细胞(MSC)、ADSC, EPC和周。值< 0.05被认为是统计学意义。

3所示。结果

3.1。描述的细胞群SVF Lipoaspirates从乳腺癌患者

识别细胞种群SVF乳腺癌患者的白色脂肪组织,一个8-marker染色小组包括CD13、CD31、CD34、CD45、CD73, CD90、CD105, CD146开发多色仪分析流动。一个控制策略是用于细胞亚群的表型特征(图1)。新孤立SVF细胞首次封闭的双重歧视(数据未显示),然后,活细胞群被发现使用光散射特性(FSC-A比SSC-A)。在那之后,nonhematopoietic细胞(即。、CD45^{- - - - - -})被选中之前进一步识别分为三个亚种群SVF根据CD34的表达和CD31。ADSC因此被确认为CD31^{- - - - - -}CD34⁺,而EPC CD31被确定⁺CD34⁺。此外,CD31^{- - - - - -}CD34^{- - - - - -}进一步的特点是使用CD146的表达获得周(CD31吗^{- - - - - -}CD34^{- - - - - -}CD146⁺)。根据这一控制策略,CD31的最小标记,CD34、CD45、CD146足以识别三个主要异构SVF的子集。

新孤立SVF 22个病人被用于确定样本数量的每个SVF亚种。在一个活细胞群, 被确认为nonhematopoietic细胞。这个细胞进一步用于识别子集ADSC, EPC和周。大量的细胞CD31的亚种群^{- - - - - -}CD34^{- - - - - -}子集也追究的表达一组表面标记包括CD73 CD90、CD105(即。,视为MSC)。如图2,nonhematopoietic细胞部分SVF组成明显ADSC人口( )其次是类似的EPC号码和周( 和 ,分别)。相比之下,只有一小群细胞被确认为MSC ( ),建议多数SVF属于ADSC的干细胞。

3.2。表型资料和ADSC的亚种群,EPC和周

关于详细的表型的ADSC, EPC,和新鲜的周孤立SVF,表面表达CD13制造商CD73, CD90、CD105, CD146(图确定3)。ADSC,表达CD13、CD73, CD90观察强度高而CD105的表达和CD146没有发现。表面标记的EPC的表达,另一方面,表现出温和的表达CD13强度,CD90、CD105 CD146的高强度和缺乏CD73表达式。周,昏暗的表达CD13并观察CD90 CD146的表达与高强度被发现。CD73和CD105的表达也没有在周观察。这些结果表明ADSC人口是均匀的,而EPC和周是异构的。

ADSC的子集,EPC,然后检查基于这些周围的周5表面标记通过使用布尔控制分析(表1)。结果表明,大多数ADSC CD13展出⁺CD73⁺CD90⁺CD105^{- - - - - -}CD146^{- - - - - -}表型( )剩下的ADSC人口CD146表达或CD105。不像ADSC,一个伟大的变化被观察到EPC的亚种。十个亚种群的EPC被确定多数CD13展出⁺CD73^{- - - - - -}CD90⁺CD105⁺CD146⁺表型( )。有趣的是,大约有15%的EPC显示同时表情CD73, CD90、CD105, 146 ( 为CD13⁺CD73⁺CD90⁺CD105⁺CD146⁺子集, 为CD13^{- - - - - -}CD73⁺CD90⁺CD105⁺CD146⁺子集)。值得注意的是,CD90和CD146的表达是最常见的EPC子集的子集表示,CD90 CD146表达和7的子集。周,因为他们CD146表达,8个亚种群特征基于微分表达CD13, CD73, CD90、CD105。主要展出CD13子集⁺CD73^{- - - - - -}CD90⁺CD105^{- - - - - -}CD146⁺表型( )和CD13紧随其后^{- - - - - -}CD73^{- - - - - -}CD90⁺CD105^{- - - - - -}CD146⁺子集( )。有趣的是,这两个子集与纯粹的差别导致了几乎一半的周CD13表达式。

3.3。表型变化后的ADSC连环使

虽然ADSC当天隔离(D0)没有CD105表达被认为是识别MSC(即制造商。,used in a combination with CD73 and CD90), the expression of CD34 was observed appearing to be similar to pericyte progenitors and hematopoietic stem cells. These results suggested that freshly isolated ADSC from SVF are distinct from MSC. Therefore, the phenotypic alteration during the在体外扩张的ADSC当时确定。ADSC在串行扩展使从SVF隔离的日子决定通过0时(P0),直到完成一段3 (P3)。表型分析了每个通道的扩展ADSC的多色流式细胞术使用8-marker染色面板。代表表型的扩大ADSC从4个不同的段落(P0, P1, P2, P3)被显示在图4。类似于刚从SVF孤立ADSC,表达CD13、CD73, CD90扩大ADSC仍持续高整个文化时期(图4),而表情CD45和CD31缺席扩大细胞群(数据没有显示)。CD34的差别更重要的是,一个了不起的对这些观察自P0及其表达逐渐减少,直到完全减少P3。相反,大多数的扩大细胞表现出显著的upregulation CD105自P0及其表达式保持整个文化时期。

描述细胞亚群细胞扩张,同时细胞表面标记物的表达进行了分析。虽然高度均匀ADSC CD13⁺CD31^{- - - - - -}CD34⁺CD45^{- - - - - -}CD73⁺CD90⁺CD105^{- - - - - -}CD146^{- - - - - -}表型观察新孤立SVF和主要贡献主要祖细胞扩张的文化,一个显著的降低P0观察这些细胞群,它的存在仍然是整个文化时期(表低2)。虽然许多不同的细胞子集在扩大观察的细胞群由于变化在细胞表面标记表达式中,约80%属于只有2主要包括CD13表型⁺CD31^{- - - - - -}CD34⁺CD45^{- - - - - -}CD73⁺CD90⁺CD105⁺CD146^{- - - - - -}和CD13⁺CD31^{- - - - - -}CD34^{- - - - - -}CD45^{- - - - - -}CD73⁺CD90⁺CD105⁺CD146^{- - - - - -}(表2)。有趣的是,与CD13扩大细胞的频率⁺CD31^{- - - - - -}CD34^{- - - - - -}CD45^{- - - - - -}CD73⁺CD90⁺CD105⁺CD146^{- - - - - -}表现型初略高于另一个子集P0,然后大大增加串行通道P3(大约70%)。由于这些表型的变化,扩大ADSC的特点(即。、CD13⁺CD34^{- - - - - -}CD45^{- - - - - -}CD73⁺CD90⁺CD105⁺CD146^{- - - - - -})在P3变得更加类似于骨髓MSC。

3.4。扩大ADSC的分化潜力

评价分化能力的前年底扩大ADSC P3,形态学观察ADSC的确认一个典型的呈附着外观(图5)。ADSC然后检查他们multipotency使用特定的感应和染色协议通过组织学分析。诱导和noninduced细胞被沾油红O检测中性脂肪形成的测定甘油三酯和脂滴,而茜素红S是用来确定钙沉积在成骨的检测和阿尔新蓝被用来观察蛋白多糖在chondrogenic协议。结果表明,ADSC能够分化成脂肪细胞和14天内骨细胞和软骨细胞在诱导条件下相比21天内到noninduced ADSC(图6)。

4所示。讨论

我们的研究表明细胞亚种群的存在在多功能ADSC, EPC,周在新鲜分离SVF乳腺癌患者的腹部脂肪。目前,ASDC的表型特征和属性,EPC,周是通常限于SVF健康的捐赠者,但只有很少的研究报道细胞亚群刚孤立SVF从乳腺癌患者21,22,27]。大多数以前的细胞特性是通过多参数执行immunophenotypic分析单个标记或4生物标记的组合(24,25,27- - - - - -29日)这可能不足以明确阐明的亚种。然后我们开发了八色染色和流式细胞仪面板广泛、准确描述ADSC, EPC,与他们周围的周细胞在乳腺癌患者lipoaspirates子集。典型的MSC标记蛋白质包括表面酶CD13 (amino-peptidase)和CD73 (5ecto-nucleotidase)和细胞外基质蛋白CD90 (Thy-1)、CD105 (endoglin)和CD146 (Muc18)以及CD34造血细胞谱系标记(mucusialin)和CD45(白细胞共同抗原,LCA, Ly-5)和内皮细胞CD31标志(血小板内皮细胞粘附molecule-1 PECAM-1)选择immunophenotypic识别。

我们的研究结果表明,ADSC、EPC和周能够有个最低的4标记包括CD31、CD34、CD45、CD146。当所有三种细胞不表达CD45, ADSC只有表达CD34和EPC和CD31表达CD34。周,另一方面,没有除了CD146表达所有的标记。这个识别的三个主要群体是同意先前的研究(22,26,27,30.]。在我们刚孤立SVF, ADSC最丰富的其次是EPC和周( , ,和 CD45的^{- - - - - -}细胞,分别),不同于Agostini发现等。显示ADSC 和EPC CD34的⁺CD45^{- - - - - -}细胞(27]。数字的差异可能会影响从CD45的不同表现在细胞百分比(%^{- - - - - -}细胞CD34和%⁺CD45^{- - - - - -}细胞)、样本大小的变化( vs。 ),和donor-dependent可变性,尽管从乳腺癌患者相同的样本来源和类似的表面标记用于表征。此外,我们的大多数nonhematopoietic血统(CD45^{- - - - - -}在SVF)由CD34⁺细胞(CD45的80%以上^{- - - - - -}细胞),这意味着ADSC的百分比和EPC时将更大的报告CD34的%⁺CD45^{- - - - - -}细胞。凭手机号码CD45的%^{- - - - - -}细胞,它允许我们识别居住在周围的周CD34^{- - - - - -}CD45^{- - - - - -}人口。

与MSC表达CD73, CD90、CD105 CD105的表达新孤立ADSC缺席。为了确定预定义的MSC的存在,然后检查是否存在任何与CD34细胞^{- - - - - -}CD45^{- - - - - -}CD73⁺CD90⁺CD105⁺表型在新鲜SVF孤立。因为一个小MSC发现人口 CD45的^{- - - - - -}细胞,结果表明,更大比例的ADSC可能发挥重要作用lipotransfer后再生的影响。验证三个主要群体的同质性和异质性SVF(包括ADSC、EPC和周),一组表面标记包括CD13、CD73, CD90、CD105, CD146考虑在内。新孤立ADSC (CD31^{- - - - - -}CD34⁺CD45^{- - - - - -})均匀作为主要人口与CD13属于细胞⁺CD73⁺CD90⁺CD105^{- - - - - -}CD146^{- - - - - -}表型( ADSC)。此外,两个小子集CD146或CD105表达的变化( 和 分别为ADSC)被确定。大部分的存在高度均匀ADSC建议同质性的再生能力和担任的主要来源在体外ADSC扩大。

相反,EPC和周是异构的存在若干子集。大多数EPC被确认为CD13⁺CD73^{- - - - - -}CD90⁺CD105⁺CD146⁺细胞数量最多的 EPC和较小的比例分布在其他9表达的不同组合这些子集5标记。而被认定为周围的周细胞CD31^{- - - - - -}CD34^{- - - - - -}CD45^{- - - - - -}CD146⁺表型,几乎一半的一部分与CD13被确认为周围的周细胞⁺CD73^{- - - - - -}CD90⁺CD105^{- - - - - -}CD146⁺( )和CD13⁺CD73^{- - - - - -}CD90⁺CD105^{- - - - - -}CD146⁺( )表型。其他7周的子集显示变化表达CD13, CD73, CD90、CD105。Agostini等。也报道了类似的刚从乳腺癌患者分离出ADSC的剖析;然而,与不同表型的CD13 EPC被发现^{- - - - - -}和CD73⁺(27]。这些差异可能是导致不同组合的细胞表面标记研究中使用最多4表面标记(即同时进行了分析。组合的CD34、CD45和7-aminoactinomycin (7-AAD)与其中一个标记包括CD31、CD73 CD90、CD105,或CD146)。这个限制在多色流式细胞术预防同时检测不同的标记在我们的研究中观测到的。我们发现CD13^{- - - - - -}CD73⁺CD90⁺CD105⁺CD146⁺细胞只有子集 EPC总并没有表示为EPC的大部分。然而,所有ADSC的相当大的表型,EPC,本研究从乳腺癌患者对与那些从健康的捐赠者23]。

在这项研究中,表型变化扩大ADSC的串行使也被观察到。尽管新孤立ADSC始于CD34⁺CD45^{- - - - - -}CD73⁺CD90⁺CD105^{- - - - - -}CD146^{- - - - - -}表型,这人口失踪以来通道(P0),表明ADSC的表型分化发生在扩张的早期阶段在体外文化。结果还显示,在体外扩大ADSC仍然保持CD13⁺CD31^{- - - - - -}CD45^{- - - - - -}CD73⁺CD90⁺CD146^{- - - - - -}表型,尽管CD34表达逐渐下调一起CD105的表达显著增加,因为P0维持在高水平文化时期如前所述[6,27]。最重要的是扩大ADSC显著和稳定CD34展出^{- - - - - -}和CD105⁺表型通道3 (P3)被Agostini与报道一致等。(27]。

更重要的是,大部分的特点扩大ADSC (CD13⁺CD31^{- - - - - -}CD34^{- - - - - -}CD45^{- - - - - -}CD73⁺CD90⁺CD105⁺CD146^{- - - - - -})成为类似于从骨髓MSC特征(CD34^{- - - - - -}CD45^{- - - - - -}CD73⁺CD90⁺CD105⁺)[31日]。然而,与CD13扩大ADSC的一小部分⁺CD31^{- - - - - -}CD34⁺CD45^{- - - - - -}CD73⁺CD90⁺CD105⁺CD146^{- - - - - -}表型检测。表示虽然这群CD34类似新鲜孤立的ADSC, upregulation CD105是观察,表明存在中间层有区别的子集,可能后来下调CD34的表达。此外,培养ADSC从乳腺癌患者的表型相似,从健康的捐赠者28,32ADSC),表明再生功能和MSC应该冷漠后扩张。这可以部分支持的证据表明,乳腺癌患者的培养ADSC具有相同的多功能向脂肪细胞分化的能力,骨细胞和软骨细胞。因此,观察表型相似性至少可以肯定使用的ADSC重建手术的乳腺癌患者。尽管流仪染色immunophenotypic表征策略在这项研究中,使用的ADSC组学方法也被另一种方法进行进一步的分子识别MSC区分MSC不同细胞来源和细胞亚型之间利用核糖核酸(RNA)深测序一起nano-liquid色谱法(LC)质谱分析(MS) / MS分析(33]。然而,这后一种方法更复杂和更昂贵的有几个问题可能高估的区别生物核糖核酸测序技术的噪声和动态范围限制在女士的方法。

对于乳癌术后重建乳房临床翻译,有两个初步方法lipoinjection用新鲜孤立SVF或培养ADSC一起吸气脂肪软组织扩张和组织缺陷修复。足够数量的ADSC新鲜孤立SVF没有在体外可以实现扩张治疗如果可以收集大量抽脂的吸入物脂肪组织来源。另外,选择特定的细胞治疗与临床相关性子集可能提供一个有益的选择。从我们的研究结果提供承诺标准特定细胞的特征子集,可能导致上级组织重建结果。虽然在新鲜分离ADSC SVF一直视为最小操纵比培养的细胞提供更多的安全,他们可能需要浓缩达到治疗数量在某些情况下,如患者低脂肪组织,低体重患者或患者广泛的重建过程。此外,抽脂的有用性吸入含有EPC和周仍存在争议是否提供治疗支持优势或劣势在癌症推广(34,35]。值得注意的是,新鲜的孤立和长期冻存ADSC本身不太可能导致肿瘤发生和低温贮藏ADSC能够维持正常水平的肿瘤抑制标记,端粒酶活性,端粒长度没有严重的DNA损伤在低温贮藏3个月(36]。识别细胞组件SVF然后是必要的,应该用来确保ADSC的表型和功能特点,EPC和周lipoaspirates用于重建过程。除了使用ADSC乳房重建,ADSC也被广泛地研究了其它治疗潜力等缺血性疾病治疗通过旁分泌生物活性因子的分泌,促进组织修复和血管生成37),通过加速伤口愈合和组织的辐照损伤的伤口振兴(38),周围神经损伤的治疗促进轴突再生,髓鞘的形成,恢复去神经肌肉萎缩(39),和治疗股骨头坏死的股骨头(AVNFH)通过多血管的增加和新骨形成40]。这些不同的临床应用从而使ADSC一个有前途的治疗候选人先进的细胞治疗许多疾病。

5。结论

在这项研究中,我们深入ADSC的特点决定的,EPC,连同周围的周子集在新鲜分离SVF 22乳腺癌患者通过使用我们的开发multiparametric表现型基于使用8流仪分析表面蛋白标记。表型变化和多能干细胞分化能力的扩大ADSC也证实和类似于MSC的特点。SVF综合表型观察到在这项研究可能与临床结果,转移脂肪组织的存活率,促进乳癌术后乳房重建后的风险。功能相关的细胞表面标记的识别个体的细胞子集也是很重要的治疗功能的进一步调查,以确定其贡献或副作用。

数据可用性

本研究中所有生成的数据或分析包括在发表的这篇文章。

的利益冲突

作者没有经济利益冲突。

确认

作者感激地感谢博士Worapitcha Trongkamonthum博士Poramet Leungon为捐赠lipoaspirates援助和所有病人临床资料用于本研究。作者也很感激的技术支持细胞分化化验李刚教授和他的团队从矫形和创伤学,香港中文大学的威尔士亲王医院,新界,香港特别行政区。本研究财务支持的医学院里拉吉医院,Mahidol大学(批准号R016033006)和里拉吉基金会(D003917)。PT,六世,没有支持Chalermphrakiat格兰特从医学院里拉吉医院,Mahidol大学。

引用

1. d . Langin”招聘的棕色脂肪和白色转化为棕色脂肪细胞:策略对抗肥胖的代谢并发症?”Biochimica et Biophysica学报,卷1801,不。3、372 - 376年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. d . Ricquier和f . Bouillaud线粒体解偶联蛋白:从线粒体能量平衡的规定,“《生理学,卷529,不。1,3 - 10,2000页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. r·k·茨威格,c . f . Guerrero-Juarez诉霍斯利和m . v . Plikus“解剖、生理和功能多样性的脂肪组织,”细胞代谢,27卷,不。1,第83 - 68页,2018。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. n . e . Wehrli g . Bural m . Houseni k . Alkhawaldeh a . Alavi和d . a . Torigian”的决心与年龄相关的皮肤的结构和功能的变化,脂肪组织,骨骼肌和计算机断层扫描,磁共振成像,正电子发射断层扫描,”在核医学研讨会,37卷,不。3、195 - 205年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. m . j . Oedayrajsingh-Varma s . m . van火腿,m . Knippenberg et al .,“脂肪tissue-derived间充质干细胞tissue-harvesting影响产量和生长特性的过程中,“Cytotherapy,8卷,不。2、166 - 177年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. x y朱,t·刘,k歌,风扇,x, z和崔,“脂肪干细胞:干细胞比BMSC,”细胞生物化学和功能,26卷,不。6,664 - 675年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. m . f . Pittenger a . m .麦凯s c·贝克et al .,“Multilineage成年人类间充质干细胞的潜力。”科学,卷284,不。5411年,第147 - 143页,1999年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. p·a·祖克m·朱h .美津浓et al .,“Multilineage从人类脂肪组织细胞:细胞疗法,”组织工程,7卷,不。2、211 - 228年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. l·欧斯特b·德夫林s . j .促进et al。”产生的人类从吸脂吸入物、脂肪中提取成人干细胞”Cytotherapy》第六卷,没有。1、7 - 14,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. p·a·祖克m·朱p Ashjian et al .,“人类脂肪组织是一个多功能干细胞的来源,”细胞的分子生物学,13卷,不。12日,第4295 - 4279页,2002年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. y . w .加工,j·李,杨m . s . et al .,“快速隔离储存的脂肪干细胞tissue-derived lipoaspirates,”延世医学杂志,52卷,不。6,999 - 1007年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. l·s·巴普蒂斯塔,r·j·f·c·阿马拉尔,r . b . v . Carias m . Aniceto c . Claudio-da-Silva和r . Borojevic”隔离的另一种方法间充质基质细胞来源于lipoaspirate样本,”Cytotherapy,11卷,不。6,706 - 715年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. m·p·弗朗西斯·p·c·萨克斯l·w·爱尔摩和e·s·霍尔特”分离脂肪间充质干细胞lipoaspirate血液和盐水分数,”器官发生》第六卷,没有。1,11 - 14,2014页。视图:谷歌学术搜索
14. m·洛克,j·温莎和p·r·邓巴”人类脂肪中提取干细胞:隔离、表征和应用在手术,”澳新银行(ANZ)外科杂志》,卷79,不。4、235 - 244年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. 诉Lohsiriwat j.y.小,k·b·克劳夫et al .,“肿瘤的结果和直接在乳腺癌患者手术并发症的注脂术:一项多中心研究——Milan-Paris-Lyon 646注脂术手术的经验,“整形外科,卷128,不。2、341 - 346年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. rosseto m . Rietjens f . de Lorenzi f . et al .,“安全辅助癌症治疗后的乳房再造的脂肪移植,”塑料、杂志和审美重建手术,卷64,不。4、477 - 483年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. j . y .小m . Rietjens大肠Botteri et al .,“评估患者的脂肪移植安全上皮内瘤:对比研究的一项研究中,“《肿瘤学,24卷,不。6,1479 - 1484年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. d·考特尼n O ' halloran m·j·凯瑞恩和a·j·罗沃利,”脂肪中提取干细胞乳房重建新方法:他们是否适合组织工程和肿瘤安全性,”乳腺癌卷。11日,p。1178223417726777, 2017。视图:谷歌学术搜索
19. r . Rohban和t·r·Pieber”间充质干细胞和祖细胞再生:组织特异性和再生潜力,”干细胞国际卷,2017篇文章ID 5173732, 16页,2017年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. 佐藤d松本,k, k Gonda et al .,“Cell-assisted lipotransfer:支持使用人类脂肪细胞与lipoinjection软组织扩张,”组织工程,12卷,不。12日,第3382 - 3375页,2006年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. Martin-Padura, g . Gregato p Marighetti et al .,“lipotransfer过程中使用的白色脂肪组织是一个丰富的CD34水库⁺祖细胞能够促进癌症恶化,”癌症研究,卷72,不。1,第334 - 325页,2012。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. s . Orecchioni g . Gregato i Martin-Padura et al .,“人类脂肪CD34的补充数量⁺祖细胞促进增长、血管生成和转移的乳腺癌,”癌症研究,卷73,不。19日,5880 - 5891年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. k . Yoshimura t . Shigeura d松本et al .,”表征的新孤立和培养细胞来源于抽脂的脂肪和流体部分吸入物、”细胞生理学杂志,卷208,不。1,第76 - 64页,2006。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
24. m . j . Oedayrajsingh Varma r·g·m·Breuls t.e.思et al .,“表型和功能特征的新孤立脂肪tissue-derived干细胞”干细胞与发展,16卷,不。1,第104 - 91页,2007。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. k·麦金托什,j·b·米切尔s Zvonic et al .,“Immunophenotype人类脂肪细胞:颞stromal-associated和茎细胞相关标志物的变化,“干细胞,24卷,不。2、376 - 385年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. l . Zimmerlin v . s . Donnenberg, m . e . Pfeifer et al .,“间质血管祖细胞在成年人类脂肪组织,”血细胞计数部分,卷77,不。1,比如22 - 30,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. f . Agostini f·m·罗西d Aldinucci et al .,“改善操纵lipoaspirates GMP兼容的方法,同行基质血管分数,和扩大xeno-free脂肪干细胞的媒体,“干细胞研究与治疗,9卷,不。1,p。130年,2018。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
28. p·c·贝尔s Kuci m . Krause et al .,“全面的人类/脂肪基质干细胞的表型特征及其子集的高通量技术,”干细胞与发展,22卷,不。2、330 - 339年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
29. a·c·w·Zannettino s·佩顿,a·亚瑟et al。”Multipotential人类脂肪基质干细胞表现出血管周的表型在体外和在活的有机体内”,细胞生理学杂志,卷214,不。2、413 - 421年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
30. l . Zimmerlin v . s . Donnenberg, j·p·鲁宾,公元Donnenberg,“在人类脂肪干细胞/祖细胞的间叶细胞标记,”血细胞计数部分,卷83,不。1,第140 - 134页,2013。视图:谷歌学术搜索
31. m . Dominici k·勒布朗,穆勒et al .,“最低限度标准定义多功能间充质基质细胞。被国际社会公认为细胞治疗位置声明。”Cytotherapy,8卷,不。4、315 - 317年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. e·t·卡米尔·m·p·Gustafson a Dudakovic et al .,“识别和验证的多个细胞表面标记clinical-grade脂肪间充质基质细胞作为良好生产practice-compliant小说发布标准生产,”干细胞研究与治疗,7卷,不。1,p。107年,2016。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
33. a . m .计费Ben Hamidane h . s . s . Dib et al .,“全面的转录组和蛋白质组学特征的人类间充质干细胞显示源特定的细胞标记,”科学报告》第六卷,没有。1,p。21507年,2016。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
34. 诉Lohsiriwat g . Curigliano m . Rietjens a . Goldhirsch j.y.小,“在乳腺癌患者自体脂肪移植:“沉默”或“加油”癌症的复发?”乳房,20卷,不。4、351 - 357年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
35. f .名导、诉Lohsiriwat j.y.珀蒂,和m . g . Kolonin“脂肪组织细胞,lipotransfer和癌症:科学家面临的挑战,肿瘤学家和外科医生,”Biochimica et Biophysica学报,卷1826,不。1,第214 - 209页,2012。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
36. k . w .勇w . k . z . w . Safwani徐f . et al .,“评估tumourigenic长期冻存人类脂肪干细胞的潜力,”组织工程和再生医学杂志》上,11卷,不。8,2217 - 2226年,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
37. 崔k . w .勇j . r . m .穆罕默a . p . Mitha a . Sanati-Nezhad和a·森“间充质干细胞治疗缺血性组织,”干细胞国际卷,2018篇文章ID 8179075, 11页,2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
38. t·s·h·Wu Shirado, t . Mashiko et al .,“人类脂肪细胞产品的治疗效果在辐照组织受损的伤口愈合,”整形外科,卷142,不。2、383 - 391年,2018页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
39. y索,t . Kishida t Imura et al .,“脂肪中提取干细胞促进周围神经再生在活的有机体内没有分化成Schwann-like血统。”整形外科,卷137,不。2,页318 e - 330 e, 2016。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
40. 黄懿慧王,a . Abudusaimi y Aihemaitijiang l .崔s Maimaitiming和m . Abulikemu“脂肪中提取干细胞促进骨再生血管坏死股骨头的兔子,“《国际医学研究杂志》上,39卷,不。5,1852 - 1860年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

版权

版权©2020 Premrutai Thitilertdecha等。这是一个开放的分布式下文章知识共享归属许可,它允许无限制的使用、分配和复制在任何媒介,提供最初的工作是正确引用。