鞘内注入自体脂肪再生细胞在自身免疫性难治性癫痫:安全性和有效性的评价

文摘

目的/目标。有效性和安全性的评价自体脂肪再生细胞(adrc)治疗自身免疫性难治性癫痫。病人。六个证明或可能的自身免疫性难治性癫痫患者(2与拉斯穆森脑炎、2与antineuronal血清自身抗体,与可能的火灾和2)包含在项目与生物伦理委员会的批准。方法。鞘内注射自体的自抗扰控制器通过抽脂酶进行隔离。这个过程重复了3次每三个月与每个病人。神经状态,大脑核磁共振、认知功能和抗癫痫作用是监控在12个月。结果。程序后,所有患者情况良好。在某些情况下,瞬态轻度升高体温,疼痛区域的吸脂,轻微的越来越多的在24小时观察癫痫发作。接下来的几个月里,一些改进在学校,社会功能和手动性能观察所有患者。一个病人被扣押释放试验的结束。在其他患者,癫痫发作的频率是不同的:从减少数量缺乏改善(3年随访)。结论。自体ADRC的治疗可能会成为一个有前途的选择一些自身免疫性难治性癫痫患者。根据我们的试验和其他临床资料,治疗似乎是安全、可行的。抗癫痫疗效证明是不同的;然而,一些能力改善所有的孩子。没有精神运动回归的迹象是观察在治疗后的第一年。

1。介绍

1.1。背景

癫痫是一种慢性的神经紊乱诊断在总人口的1%,近400000名患者在波兰。大约70%的患者积极回应抗癫痫治疗,和30%的癫痫患者仍然是耐火材料的任何管理药理和生物处理1]。频繁的癫痫发作导致认知恶化和病人社会隔离。

近些年的研究结果表明,在耐药性癫痫患者中,该集团与自身免疫性因素可能构成一个重要部分,边缘脑炎(通常没有完整的特性2,3]。他们中的大多数被发现有antineural抗体。除了体液免疫,细胞反应可能发挥致病作用,例如,在拉斯穆森的脑炎4]。此外,临床特征,例如,多种类型的癫痫或面部与臂的矛盾的癫痫,抗抗癫痫药物,个人或家庭成员的自身免疫,最近的或过去的瘤形成的历史,和中枢神经系统炎症的证据,可能表明,自身免疫性疾病的背景。对于这些患者,当标准immunomodulative疗法(静脉注射免疫球蛋白,类固醇,免疫抑制剂)是无效的或严重的副作用出现,限制他们的应用程序中,干细胞疗法可能是“希望”疗法。

在过去的几年中,它已经可以看到越来越多的正在进行的临床试验涉及的应用间充质干细胞自体或同种异体的(MSC)。临床试验与脂肪再生细胞(adrc)只有几年前开始,并从那时起,80年临床试验开始。今天,卓越的自抗扰控制器的有效性治疗已经证明主要与自身免疫性疾病背景等系统性红斑狼疮(系统性红斑狼疮)、类风湿性关节炎、人类的移植物抗宿主病,或节段性回肠炎。这些防护和消炎作用是严格与直接MSC对免疫细胞的影响。几组表明,MSC抑制免疫细胞的数量上不同的效应函数包括T细胞和B细胞、树突状细胞(DC),和自然杀伤细胞。MSC被认为促进T细胞的生存在静止状态5),抑制细胞分裂增殖不是通过细胞凋亡,但逮捕[6]。其他组织表明,间充质干细胞抑制B细胞增殖,免疫球蛋白生产,和B细胞分化antibody-secreting细胞(7]。自抗扰控制器的信仰积极影响癫痫耐药来自上述描述间充质细胞的迁移能力和解决在受伤的组织,但主要是由于他们immunomodulative强劲,特别是抗炎,属性。

然而,自抗扰控制器的保护特性严格依赖stage-related分化决定,等,他们的旁分泌活动。我们的数据聚集在临床前和临床实验表明新孤立的,未分化的、高度增殖MSC各基于辅助剂的治疗方法是最有效的(8]。与扩展文化,细胞分化及其保护作用下降与旁分泌/辅助功能的变化。

间充质干细胞来源于脂肪组织特别感兴趣的是由于只有适度侵袭性的隔离程序,以及每个细胞的数量相对效率高。即使干细胞/祖细胞的纯人口实际上还不到5%的总自抗扰控制器,它仍然发生在大约2500倍的频率标准中骨髓抽出物(0.002%)。因此,在大多数情况下,这种“技术”属性允许他们收集通过吸脂不再需要直接从脂肪组织细胞培养(9,10]。

脂肪细胞再生细胞的孤立的异构分数(adrc)已被证明具有功能性营养和免疫调节特性(11),支持细胞多向分化的能力(12]。预处理和临床数据表明,自抗扰控制器改善血液循环,调节炎症反应,保护受损组织免受进一步的细胞变性和消除的风险。此外,与MSC来自其他来源相比,自抗扰控制器显示更大的可塑性,更长的生存时间和更高的vasculogenetic和谱系分化潜力特别是在细胞工程。自抗扰控制器可以被诱导分化为骨细胞或软骨细胞也归纳定义环境下肌肉,内皮,或neuroectodermal细胞谱系13]。有趣的是,在这样感应环境中,他们增加许多angiogenesis-related和营养细胞因子的分泌,如血管内皮生长因子(VEGF),胎盘生长因子(PGF)和转化生长因子β(TGF -β),以及确保适度的表达纤维母细胞生长因子2 (FGF-2)和检验1 (ANG-1)。由于这些属性,相信这些细胞可以跨多个应用时非常有前途的退行性条件拥有缺血性病因组件。

耐药性癫痫患者表现出癫痫神经元数量减少,与其他神经元活跃和故障。这样的一个典型,postinjury地区很受影响脑组织的可见癫痫发作后,增加。采用自抗扰控制器的治疗可以抑制局部炎症和诱导激活内源性神经发生和血管生成可能与缺血和有效竞争inflammation-dependent退化。在实验模型癫痫(kainate-induced神经元损伤),MSC治疗可以拯救海马神经元凋亡。此外,MSC-derived可溶性因子保护中枢神经系统神经元对谷氨酸会引起神经元(14]。它已经证明了自抗扰控制器显示强大的神经,immunomodulating,和凋亡特性,有可能减少癫痫发作的频率(15,16]。因此,一起服用,临床试验与自抗扰控制器解决耐药性癫痫患者会承诺在控制癫痫发作和共存的行为/精神病症状。

我们的项目的目标是评估影响的自抗扰控制器疗法,包括其自身免疫性耐药性癫痫患者的安全性和有效性。此外,我们试图孤立和注射的临床数据和属性相关细胞。新方法除了传统的药理的将希望降低癫痫的发生率,改善患者认知和社会功能应该导致总体生活质量的整体提高。

1.2。研究设计

这项研究是注册NCT03676569。它设计为非随机、前瞻性单中心,开放研究,没有安慰剂对照,评估安全性和有效性的自抗扰控制器移植到儿童难治性癫痫引起的自身免疫机制。病人被诊断出患有自身免疫性耐药性癫痫和符合设定的标准是有资格参加进一步检查。父母正式的书面同意后,儿童神经病学IMC,诊所的病人接受神经系统检查,常规实验室检测,脑电图,神经心理评估,然后自抗扰控制器鞘内注射3乘以每3个月。安全、不良事件、和有效性经神经状态,大脑核磁共振,认知功能,和24个月期间抗癫痫作用。研究方案(方案1)和知情同意过程研究所的生物伦理学委员会批准在华沙母亲和孩子。招生研究之前,每个参与者都给出详细的“信息研究参与者”和签署知情同意在副本2份,每一方。

1.3。病人

根据纳入及排除标准(表1),一群潜在的合格的患者被确认,包括在项目:6例(2个男孩,4个女孩)与10年的平均年龄和证明或可能的自身免疫性难治性癫痫:2与拉斯穆森脑炎、2与神经元自身抗体和2可能发热性感染相关性癫痫综合征(火灾)。所有患者出生正常参数,及其发展是难治性癫痫发作在正常范围内。分开的拉斯穆森综合症患者,他们的核磁共振成像没有任何异常。扩展代谢调查没有发现任何遗传疾病包括GLUT1缺乏症。

病人的基本医疗和心理数据如表所示2。

1.3.1。例1号(P1)

有一个16.5岁男孩的癫痫7岁开始。从一开始的疾病,他的左或一般tonic-clonic发作。脑部MRI显示萎缩的右半球拉斯穆森综合症的特征。他对待奥卡西平(光),卡马西平(卡马西平),丙戊酸(VPA) levetiracetam (LEV) clobazam (CLB)和托吡酯(TPM)的各种组合但没有显著的影响。运动皮层的神经外科削弱也没有明确的执行效果。从10岁,左进步轻偏瘫开始。在血清,anti-LGI-1抗体和寡克隆乐队被检测到。皮质激素脉冲和免疫球蛋白注入添加了抗癫痫药物但只有较短瞬态改善。由于频繁的发作没有药物反应,他克莫司是管理14岁明确但瞬态效应。他的家人有自身免疫性疾病的病史。 He demonstrated IQ in the low average score with significant visuospatial deficits relevant to right hemisphere lesion.

1.3.2。例2号(P2)

一个16岁的女孩epilepsia partialis连续6岁时被诊断出。她的癫痫总是左路。在右半脑MRI显示轻度萎缩,拉斯穆森综合症的临床征象提示。几个抗癫痫药物管理:VPA,光CNZ (clonazepamum) PHT(苯妥英)和扫描隧道显微镜(sultiamum),但没有结果。此外,类固醇和免疫球蛋白注入脉冲。11岁的时候,从左进步轻偏瘫开始。Antineuronal anti-AMPA和anti-LGI-1血清抗体检测。他克莫司治疗6个月了。结果,未发现antineuronal抗体,虽然没有改善癫痫发作频率。她的智商平均得分与语言能力的优势。 Anxiety and depression symptoms were also periodically observed secondary to her health problem.

1.3.3。例3号(P3)

有一个8.5岁的男孩,与多态的癫痫发作开始的年龄为1.5岁。他被一些药物如VPA治疗,卡马西平,列弗,后跟Synacthen和TPM在不同药物组合,得到一个临时的年度缓解岁3 y,但发达瞬态cushingoid肥胖。4岁的癫痫复发和antineuronal anti-LGI-1血清抗体检测。皮质激素脉冲和免疫球蛋白静脉输液,加入抗癫痫药物只有短暂的改善。免疫抑制剂的加入硫唑嘌呤引起骨髓发育不全,治疗停止。

他的智商较低的平均分数。重大visuomotor赤字,注意力,观察和学习问题。

1.3.4。例4号(P4)

有一个12岁的小女孩,与多态的癫痫发作3岁开始。她被几个药物治疗VPA的各种组合,列弗,LTG,列弗,ETS (petinimid) TPM, CLB, CNZ PHT,和NTZ(硝基安定),只有暂态效应。6岁,antineuronal anti-AMPA anti-GFAP抗体和血清中检测到。一开始,她的脑电图显示广义异常变化hypsarrhythmia紧随其后。她的智商显示回归到中度精神发育迟滞。

1.3.5。例5号(P5)

有一个七岁女孩与难治性局灶性癫痫从4.5岁的时候,开始后发热性感染。抗癫痫药物管理的各种组合,VPA PB(苯巴比妥),TPM, VGB,列弗,CBM。火灾被诊断。轻度hypo-IgA和IgM immunoglobulinemia检测开始前免疫调节治疗。免疫球蛋白注入类固醇脉冲应用没有明显改善。5.5岁时,他克莫司与周期性发作的管理。她的智商平均分数,但她注意力和记忆力障碍。

1.3.6。例6号(P6)

有一个12岁的女孩与自身免疫性疾病的家族史,难治性局灶性癫痫开始的9岁后发热性感染。以前,她被诊断出患有hypothyreosis。她接受VPA、CNZ DZM(安定),卡马西平,光CLB, PHT,在各种组合没有结果。火灾的诊断。类固醇和免疫球蛋白输注管理只有短瞬态脉冲缓解。他克莫司也用于较短的1年的改进。她的智商是在较低的平均得分与赤字的口头技能。瞬态失语症症状观察期间癫痫发作的频率增加。

1.4。病人评估方案

病人的评估分为三个部分:神经系统状态、认知功能,和实验室测试(图1)和持续12个月。每5天住院期间临床观察是在IMC,包括预防和治疗潜在的副作用。虽然实验临床试验是解决12个月评估治疗的有效性,观察被延长到3年评估治疗的安全性。

脑部核磁共振进行1.5 T单元装置。SE / T1 -,工程师、t2加权和天赋获得的图像在轴向,冠状、矢状平面。

认知神经心理学评估(评价)是由韦氏智力量表对Children-Revised (WISC-R)年龄在6 - 16岁儿童产生一个智商,包括评估子集的语言能力、注意力、视觉空间的技巧,和算术能力。

蛋白质水平,寡克隆条带,免疫球蛋白g指数和GluR3 VGKC复杂/ LGI1 GM1, NT-3,迦得和脑脊液(CSF)中NMDAR抗体在4个时间点进行了分析:在细胞疗法之前,3、6和12个月后第一个ADRC的注入。

持续的耐心观察在门诊条件进行以评估癫痫发作的频率和整体健康状态信息提供的病人和他们的亲属。体检后3、6和12个月。

2。材料和方法

2.1。外科手术

2.1.1。抽脂术

从腹部皮下脂肪脂肪组织或大腿内侧部分与克莱恩渗透后的解决方案(基于乳酸林格氏液解决方案和6.5毫升1%利多卡因肾上腺素0.5毫克/ 500毫升乳酸林格氏液)在局部麻醉。为了保护细胞的再生能力,脂肪收集了在低压力,使用注射器吸脂。我们获得了大约250 - 100毫升的lipoaspirate收获套管在每个过程中使用1 - 2毫米。

2.1.2。自抗扰控制器隔离

在手术室的情况下,立即集合后,lipoaspirate CellCelution 800系统中处理(圣地亚哥Cytori Therapeutics Inc . CA)。它被删除免费血液脂质和消化Celase 800 (Cytori Therapeutics Inc .)酶释放基质血管分数。经过一系列的离心步骤,通过一个筛子各种孔隙系统,基质分数集中,悬浮在铃声和5毫升的自抗扰控制器的解决方案是准备移植:4毫升的目的是对病人的治疗,而1毫升的遗迹间质血管分数被用于在体外分析。

2.1.3。鞘内注射干细胞

通过腰椎穿刺鞘内注射干细胞。腰椎针放置在L3、L4椎骨的水平,以便引入针进入水平以下的脊髓结束。首先,5毫升的收集脑脊液蛋白质水平,寡克隆乐队,免疫球蛋白g指数和GluR3 VGKC复杂/ LGI1 GM1, NT-3迦得,NMDAR抗体分析。接下来,通过相同的插管,细胞悬液(4毫升)注入/ 2分钟紧随其后的是盐水注射(1毫升/ 30秒)。从每个派生自抗扰控制器样品,1毫升收集进一步的生化和生物分析。

2.2。细胞分析

临床特征的自抗扰控制器根据ISCT指南和另外扩散率(PDT),具备干细胞的遗传稳定性低于5%氧气和维护属性一起承诺向中胚层细胞分化方向已经完成和发表28]。

2.3。流式细胞术分析

分离细胞的培养皿中,Accutase细胞分离解决方案(Becton Dickinson)使用。离心细胞( )分析所需的悬浮在一个寒冷的污点缓冲区(正)。使用人类的MSC分析工具包(正),根据制造商的协议,每个管增加了适当的稀释fluorochrome-conjugated抗体针对APC CD73 FITC CD90、和PerCP-Cy™5.5 CD105(积极的标记),PE CD34、PE CD11b, PE CD19, PE CD45,和体育HLA-DR(负面标记)和孵化30分钟在室温下,受光。孵化后,细胞与污点洗两次缓冲区,悬浮在500年μl的缓冲和立即分析使用FACSCalibur II血细胞计数器(正)。10000事件是计算使用FACSDiva软件计算机程序。

2.4。CFU-F化验

为自我评估的能力和效率,新鲜孤立的细胞被播种6-well板密度100细胞/好,培养未来10天的标准培养条件。天11文化PFA RT 15固定为4%和沾0.5%甲苯胺蓝20分钟在35%乙醇。彩色殖民地组成的得分超过50个细胞CFU计数。CFU-F效率进行计算根据已知的公式:

2.5。分泌特性的自抗扰控制器在病人CSF

自抗扰控制器和CSF(细胞注射前)则来自于每个病人。当自抗扰控制器文化达到semiconfluency,媒介改变了自体CSF (300μ信用证为48小时)。时间后,CSF收集并存储在-80°C。脑脊液样本后coculture使用Luminex装备与自抗扰控制器进行分析如下所述(如果是2.4.4)评估分泌细胞在炎症反应因子的性质提出了病人的脑脊液。

2.6。趋化因子和细胞因子的确定

102趋化因子或细胞因子的定性分析是进行脑脊液样本使用人类蛋白质组分析器XL细胞因子数组工具包(研发系统)后,制片人的协议(表3)。300一夜之间,膜被孵化μl(每个样本,然后清洗和检测鸡尾酒,孵化与streptavidin-conjugated辣根过氧化物酶(研发系统),最后用化学发光试剂。点被融合FX6可视化(Vilber Lourmat)与EvolutionCapt FX6。注册信号成比例的数量的分析物(图2)。

2.7。细胞因子和趋化因子与Luminex化验设备

Bio-Plex 200™系统(Bio-Plex®200系统,美国)和6-plex人类磁Luminex化验(研发系统,猫。不。LXSAHM-06)被用来测量细胞因子或脑脊液样本的蛋白质浓度。分析物包括骨桥蛋白、血管生成素,il - 10, tnf, CXCL12 / SDF-1。在价值观得到使用Luminex 200浓度V2.1软件。标准曲线是细胞因子浓度梯度产生的参考。所有的样品都准备以同样的方式;CSF后收集、样本立即运送2 - 8°C到实验室,分成更小的部分并存储在-80°C。所有与CSF分析程序在冰上进行。每个样本都被冻结/解冻只有一次。

2.8。统计分析

记录数据统计分析使用GraphPad棱镜5^th版本软件(La Jolla、钙、美国)。的 计算所有样本;使用学生的决定意义 - - - - - -测试或单向方差分析其次是足够的事后考验。的值被认为是重大的价值 ( , , ,和 )。

3所示。结果

3.1。临床结果

3.1.1。发作频率、副作用和神经影像

一个病人(P3)与100年发作/前一天治疗控制发作了今天(响应)。他没有副作用的治疗。轻度或瞬态改善癫痫在两个病人(P1和p6 - 50%减少癫痫发作持续今天),这些病人被称为轻微的反应。在P4,改善瞬态抗扰控制器后第一次输液。在最后一个P5,观察任何改善。P4和P5称为nonresponders。只有P3的脑电图记录显示瞬态改善(图3 - 4个月后1)。

所有患者除有轻微副作用如瘀伤和痛的抽脂或发热1-2-day反应。两个孩子(P1和P4)癫痫发作的数量的增加在第二和第三天之后第一个移植(表4)。

所有的孩子,只有一个除外,他短暂的轻微低丙球蛋白血症,可能造成移植前免疫抑制治疗,免疫球蛋白和睾丸的正常结果评估细胞免疫(图片:淋巴细胞转化试验和血细胞计数)。

MRI检查并没有显示任何变化相比之前的状态。

3.1.2。认知功能

在考试心理,没有智商的变化或神经缺陷被发现。然而,改善一般functioning-general兴趣,精神驱动,注意耐久性,认知能力、一般活动。显著提高写作和绘画技巧在P3(图观察3)。此外,任何精神运动回归的迹象观察一年结束后治疗。

3.1.3。鞘内免疫球蛋白的合成

鞘内免疫球蛋白合成是在所有患者自抗扰控制器的治疗。此外,一个病人有积极的脑脊液寡克隆乐队。自抗扰控制器输液后,观察免疫球蛋白合成减少在所有患者最少6个月后第一次输液的价值。减少程度的免疫球蛋白水平并没有与癫痫发作频率。不幸的是,在治疗后12个月(6个月后注射),倾向于增加免疫球蛋白合成观察(图4)。

3.1.4。脑脊液中细胞因子和趋化因子

为了相关的疾病与注射细胞所分泌的因素,分析了102细胞因子/趋化因子前后病人的脑脊液样本细胞治疗(材料和方法)。使用定性分析、蛋白质组分析器。浓度的差异(超过10%)是Aggrecan注意到,血管生成素,Chitinase-3-like 1 D补充因素,半胱氨酸蛋白酶抑制物C, DPPIV, EMMPRIN, IGFBP-2, IL18-BPa,骨桥蛋白,RBP4, SHBG, TIM-3, vCAM-1(图2(一个))。

基于上述结果和可能的参与epileptogenesis,我们选择血管生成素和骨桥蛋白(图2 (b))进行进一步的定量分析。此外,il - 10、tnf和CXCL12 / SDF-1阿尔法被添加到分析。

在定量分析(图5)、血管生成素CXCL12 / SF1alpha, CSF和il - 10水平增加细胞疗法后的几个月,从nonresponder没有应答差异。他们之间显著不同的因素是骨桥蛋白。在病人CSF来自应答器,骨桥蛋白浓度显著降低后第一个自抗扰控制器应用程序开始低(大约5倍)从非常高的级别( )在低水平在整个时间和维护实验治疗。温和nonresponders,其浓度增加在每个时间点分析(图5)。

3.1.5。自抗扰控制器分析体外

找到负责不同的细胞疗法疗效的因素,1毫升的自抗扰控制器暂停,仍在每个临床应用,分析在体外。结果从三个选择患者(根据临床资料:应答器,轻微的反应,和nonresponder)。

3.1.6。MSC表型

自抗扰控制器隔绝所有的病人表达了对MSC的典型特征,要求ISCT细胞治疗(国际社会),例如,呈形态(图5(d)), mesodermal-line分化,单独使用潜力,确定模式的表面抗原(数据没有显示,莱赫et al ., 2016)。典型MSC表面标记(cd105 cd73 cd90 - 99.8%——99.7%——99.6%, CD34, CD11b, CD19、CD45、和HLA-DR细胞的0.1%)被证实(图6(一))。

3.1.7。单独使用的潜力

CFU-F(克隆形成单位纤维母细胞频率)应答器(P3)和轻度应答与每个随后的抽脂,增加和P3为27%和33%,分别在温和的回答者(P6)的14%和28%,分别为(图6 (b))。在nonresponder (P4),分别CFU-F从44%减少到18%。

大多数克隆形成单位提出了形态典型的paraclone-like殖民地(主要由松散,扩大细胞平均密度,但异常与大直径)和meroclones不规则轮廓,较小的直径大小,组成的小更紧密的细胞和大松散细胞边缘。第三类型的群落结构,类似于holoclones,由小和最紧密的细胞,没有注意到(图6 (c))。

3.1.8中。CSF ADRC的分泌性质的影响在体外

自抗扰控制器在脑脊液培养从应答器收集,nonresponder,轻微的细胞疗法之前响应者。血管生成素分泌il - 10, CXCL / SDF1α和肿瘤坏死因子-α增加在每种情况下,但显然在细胞暴露于应答器CSF。有增加血管生成素响应者CSF的影响下的50%,而在nonresponder和温和的应答器增加了28%和12%,分别。il - 10在应答器增加了80%,轻度和nonresponder分别为47%和12%。CXCL / SDF1水平α增加了97%的回答者CSF,温和nonresponder 84%和47%,分别。增加肿瘤坏死因子-α浓度在应答器是87%,而在温和的反应61%和nonresponder只有8%。自抗扰控制器后只骨桥蛋白浓度显著降低接触病人的脑脊液,响应者CSF 60%,轻度响应者至83%,并在nonresponder 73%(图6 (e))。

4所示。讨论

在某些病人患有难治性癫痫,障碍的体液和细胞免疫反应,可以负责癫痫的发病机制。在这些组患者,药物治疗(抗癫痫药)和其他治疗方法往往不能有效。癫痫发作的持久性是伴随着认知功能和生活质量的重大进步的障碍,而不安的社会生活。上述问题在我们所有的病人。更糟糕的功能表现为冷漠,缺乏日常活动,沉默,逐渐知识回归。

根据文献,病史和诊断测试,与自身免疫背景难治性癫痫,在大约10 - 20%的患者的免疫球蛋白水平的变化(例如,血清中IgA)已被描述。在我们的病人,其中一个IgM的病史,IgA-class hypoimmunoglobulinaemia。患者的自身免疫系统癫痫、外周淋巴细胞数量的变化也进行了描述。Th4辅助淋巴细胞的数量通常是低,虽然Th8抑制淋巴细胞数量的增加,NK(自然杀伤细胞)细胞数量减少,由单核细胞和细胞因子的生产停止了。增加产量的促炎细胞因子,即。白介素- 1 (IL)α,il - 1βil - 6,被发现在血清和脑脊液17]。

癫痫的诊断自身免疫性的标准除了antineural抗体的血清和CSF还包括其他的存在血清中的抗体特定神经元组件,例如,对monosialoganglioside (GM1)、鞘磷脂神经节苷脂(LM1),谷氨酸受体片段(GluR3),或对谷氨酸脱羧酶(18]。上述antineural抗体检测患者血清或脑脊液(表2)。

自身免疫性癫痫患者通常对免疫调节治疗反应很好,即。,输注免疫球蛋白、脉冲类固醇或免疫抑制治疗。期间不良反应发生的高剂量的免疫球蛋白(0.4克/公斤体重/天)是罕见的,例如,抑制免疫反应。immunomodulative疗法后,近30%的患者完全控制发作,而大约40%的经验意义重大,但暂时的,临床改善,以及改善脑电图仪的检查。效率高也取得了与类固醇或免疫抑制剂治疗后,即、硫唑嘌呤或他克莫司。不幸的是,这种治疗有严重副作用的风险,即。骨髓发育不全,我们看到在我们的病人3号(P3)。

示例清单由耐药性癫痫的症状,认知退化,自身免疫性背景Rasmussen-type脑部炎症(P1和P2)和火灾P5和P6。

由于缺少抗癫痫药物效应在我们的组患者和免疫抑制治疗后发生严重的副作用,使这种积极的药物治疗的延续,我们决定开始实验应用程序MSC。

我们的研究结果表明,在3年随访,ADRC的治疗是可行的,安全的,完全由儿科患者耐受良好。严重不良反应细胞的管理并没有观察到。只有吸脂区域内瞬态发热和疼痛。类似轻微不良MSC鞘内注射后被其他组织(19]。

不幸的是,只有一个6例(P3)患者(没有发作超过3年),三个六轻度和短暂的发作频率减少和两个六没有影响。这是不太乐观的结果比其他组。Hlebokazov等人形容80%的患者反应,其中30%患者缓解期(20.]。可能的解释我们的研究结果可能与许多长期的癫痫患者癫痫发作导致大脑组织的神经退化。

癫痫发作的病人免费第一次自抗扰控制器后注入(P3)是唯一一个在他的病史免疫抑制剂和MSC之前注入后骨髓发育不全。下这个因素可以被考虑作为未来MSC治疗的积极因素。意外对我们在他的情况下,减少囊内的免疫球蛋白合成是无关紧要的。此外,其他病人,减少免疫球蛋白合成鞘内并不总是与发作减少。我们认为最大的免疫球蛋白水平下降9个月后AD-MSC政府可能反映了瞬态降低大脑的炎症。不幸的是,12个月后,免疫球蛋白水平又开始增加,这可能是与细胞的逐渐枯竭,从而停止他们的行动。

AD-MSC的抗炎和免疫调节作用可能导致减少大脑的神经炎症过程和可能减少癫痫活动。但是,自身免疫性炎症过程在我们的病人的大脑一直长久的和非常复杂的,可能完全消除它们,更长、更复杂的治疗应该是必要的。此外,底层的几种病理过程和慢性神经炎症导致神经退行性变的不可逆,负责难治性癫痫。

在分析在体外自抗扰控制器从他的脂肪组织分离,我们发现他们形成扩散中心的最佳形态:细胞小,包装与圆形或梭形(图6的数量),尽管CFU-F nonresponder相媲美,。

唯一nonquestioned积极影响中所描述的所有患者细胞疗法改善后的日常运作(图1),例如,更大的活动和交流的意愿。与此同时,在神经心理学测试,没有发现改善认知能力有显著效果。因此,我们把这种效果与情绪改善(抗抑郁效应)和增加推进。在过去的三年里,我们还没有找到进一步发展回归我们的病人。Shwartz集团描述相似的效果在抑郁症的动物模型和连接,增加谷氨酸吸收和分泌在海马体(亲神经的因素21]。可能机制参与积极的自抗扰控制器效应包括缓解或短暂发作减少类似于在其他自身免疫性疾病,即。红斑,红斑或风湿性arthritis-immunomodulation和病理系统稳定状态由于佐剂MSC属性。植入细胞的影响通过可溶性体液因素和监管产生免疫细胞转换。这样的抗炎效应可能是由于有限的瞬态细胞生存我们(22,23)和其他(20.之前有报道)。MSC移植后被认为保留2到3个月,这使得必要的重复应用但增加治疗的安全性。有限的细胞生存antineuronal抗体的鞘内合成的影响,在治疗有所下降,但结束后又开始增加在5 6例(图4)。

只要在脑脊液自抗扰控制器存在,它们产生广泛的抗炎细胞因子、趋化因子和生长因子。免疫调节MSC在其他临床试验效果观察。Kwon等人表明,il - 10, TGF -β后,在CSF和il - 6水平增加鞘内注射msc。作者解释说,鞘内注射MSC导致外周免疫细胞浸润的患者的中枢神经系统和转换这些细胞调节性T淋巴细胞和Th2淋巴细胞,进而释放抗炎细胞因子il - 4、il - 10, TGF -β(24]。另一组描述双(静脉输液和鞘内)MSC治疗后的差别,对这些基因的激活淋巴细胞抗原递呈细胞,导致减少30 - 60% CD86 + CD83 + HLA-DR +骨髓树突状细胞,激活CD40 +细胞,增加72% CD4 + CD25 +调节性T细胞(25]。额外注入MSC描述抗癫痫的影响可能与神经保护,通过gaba ergic中间神经元的损失减少,髓过氧化物酶水平低,海马的细胞因子和抗炎基因编码;upregulation也报道(26]。

在我们的病人,102年CSF细胞因子分析中,只有5的水平发生了重大的变化:血管生成素1,il - 10,基质细胞衍生因子1 (CXCL12 / SDF-1),骨桥蛋白和肿瘤坏死因子-α。

骨桥蛋白是唯一一个应答器和nonresponders之间的不同。回答者的浓度下降,最重要的是在第一次自抗扰控制器管理,什么与癫痫发作的缺乏有关。OPN在神经退行性疾病的作用引起广泛关注。OPN可能是一种有效的治疗神经退行性疾病的目标,但与此同时,其他研究人员组显示其参与发病过程。骨桥蛋白已被报道是调节受伤后,缺血(30.),kainate-induced发作(31日实验性自身免疫性脑脊髓炎)或(32]。然而,在提到的疾病,其效果评估在两个方面。骨桥蛋白是描述大脑缺血性损伤的神经保护作用[33),但相比之下,据报道,促进炎症和自身免疫性疾病恶化。骨桥蛋白是调节也为了应对癫痫发作。另提到表示细胞趋化因子在epileptogenesis扮演重要的角色。

血管生成素(ANG)是多功能因子,在血管生成中扮演的角色也在自身免疫性疾病抗炎剂。和减少的mRNA表达interleukin-1β(il - 1β)、il - 6、引发和TNF -α受体(TNFR) 1和2和因子-α(TNF -α)和增加的mRNA表达il - 4和il - 1034]。

il - 10、抗炎剂、发热性癫痫患者显著下调(FS)较正常对照组(35,36]。CSF的低水平的il - 10可能在FS的发病机理中发挥作用。此外,il - 10被发现提供直接的营养和prosurvival提示神经元在开发过程中。建议外源性il - 10可能直接管理有益影响神经元(37]。增加抗炎il - 10的水平可以和感应的结果或可能的结果直接分泌激活炎性环境MSC。

肿瘤坏死因子-α在epileptogenesis的一个关键的角色。每次发作后水平增加。anti-TNF -α治疗癫痫症被认为是虽然不是应用由于疑似感染和癌症的风险开发(38]。肿瘤坏死因子-α增长可能与瞬态有关炎症引起的MSC注入,但另一方面,其海拔增加MSC移植到受伤组织(39]。

除了分泌特性,MSC迁徙能力对损坏或慢性激怒地区是很重要的。为此,基质细胞衍生因子1 (SDF-1 / CXCL12)趋化因子受体CXCR4和CXCR7应该激活受损组织。减少SDF-1表达式的结果降低了ASC迁移。SDF-1 / CXCR4和SDF-1 / CXCR7途径似乎发挥重要作用在大脑可塑性,成年神经发生在DG和调节GABA释放突触地区。总的来说,这趋化因子系统可能的一个关键球员的神经免疫环境(40]。

我们也观察到,自抗扰控制器在响应因素出现在患者的脑脊液分泌性能增加。最重要的细胞激活后观察到接触脑脊液从应答器淹没。机制自抗扰控制器对脑脊液的反应可能取决于,例如,对疾病的持续时间(炎症因素存在于脑脊液),二级神经退行性过程,遗传背景,或者以前的药理免疫调节治疗的历史。

尽管骨髓间充质transdifferentiate的能力在体外成神经细胞样的类型是证明了我们和其他的团队27- - - - - -29日),细胞替代在活的有机体内仍然是不确定的。有限的MSC移植到CSF(3个月生存22]排除了,而现在恢复理论。

因为我们只有一小单中心研究,本文提供的数据是临床观察而不是一个临床试验的结果。低病人数量不允许我们创建统计上显著的建议;相反,它们是指导进一步的研究。

5。结论

治疗与自抗扰控制器在自身免疫性难治性癫痫似乎是安全、可行的。不幸的是,最有可能只有一小群自身免疫性病因患者将受益于这种疗法,但我们不能排除,MSC治疗的结果会更好,当应用于早期的疾病进展。我们仍然不知道的因素使我们能够预测哪些病人急救员。有可能是骨髓发育不全可以使更好的结果。ADRC的注入不会改变永久脑电图,尤其是长期癫痫发作导致焦退化。然而,MSC治疗改善这些患者的一般功能。考虑到脑脊液细胞因子水平的变化,似乎骨桥蛋白可能是最好的生物标志物和预测结果的治疗,免疫球蛋白的变化鞘内合成不符合治疗的结果。同种异体的移植MSC治疗自身免疫性疾病可能被认为是在未来疗法。

数据可用性

临床研究的数据用于支持本研究的发现可以从Elzbieta Szczepanik教授(elzbieta.szczepanik@wp.pl),从基本的研究从相应的作者。

的利益冲突

作者声明没有竞争的经济利益或利益冲突有关的出版。

确认

这部分工作由国家研究和发展中心,批准号Strategmed 1/234261/2 / NCBR / 2014。

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