联合移植脂肪Tissue-Derived干细胞和内皮祖细胞改善糖尿病性勃起功能障碍大鼠模型

文摘

勃起功能障碍(ED)是一种常见的男性遭受与有糖尿病并发症。干细胞移植是一种很有前途的战略治疗糖尿病性ED (d)。在这项研究中,我们评估是否联合移植脂肪tissue-derived干细胞(ADSCs)和内皮祖细胞(epc)可以改善d大鼠勃起功能的模型。d大鼠通过腹腔注射链脲霉素诱导(50毫克/公斤),和ED接受阿朴吗啡(100毫克/公斤)。d大鼠被分成4组( 每个):d, ADSC、EPC和ADSC / EPC组。另一个14岁的同龄雄性SD大鼠与正常勃起功能是作为正常组。正常组和d组收到intracavernous注入与磷酸盐(PBS)。和其他组收到intracavernous注入ADSCs ( ),内皮祖细胞( ),和ADSCs /内皮祖细胞( / ),分别。总intracavernous压力(ICP)和平均动脉压(MAP)记录在注射后28天。的内皮、平滑肌和阴茎背神经cavernoursal组织内进行评估。注射后28天,ADSC / EPC组显示更重要的是增强ICP和ICP /地图比d或ADSC EPC集团( )。Immunofluorescent分析和免疫印迹显示改善勃起功能ADSC / EPC5组与表达增加有关内皮标记(CD31)和eNOS-cGMP-NO信号的校正。更多5-ethynyl-2 - - - - - -脱氧尿苷(EdU)能找到积极的内皮祖细胞衬海绵层内皮的ADSC / EPC组比EPC组,这是归因于的旁分泌血管内皮生长因子(VEGF)和stromal-derived因子- 1(由ADSCs SDF-1)。联合移植ADSCs和内皮祖细胞修复内皮功能的协同效应d老鼠,和底层机制可能是旁分泌VEGF和SDF-1 ADSCs,这提高了招聘和海绵体内皮祖细胞的增殖。

1。介绍

勃起功能障碍(ED),它被定义为无法获得和/或维持足够的阴茎勃起来达到满意的性交,是一种常见的和令人沮丧的男性遭受并发症糖尿病(1]。据报道,约有35% ~ 90%的糖尿病男性患有ED,这是健康男性的3倍2]。虽然5型磷酸二酯酶抑制剂(PDE-5Is)的一线治疗ED如今,糖尿病性ED患者的反应率较低(3),主要是因为cavernousum严重受损的内皮功能,随后减少平滑肌的内容和神经病变(4]。因此迫切需要探索小说cavernousum的再生策略,形态和功能。

干细胞(SCs)现在被认为是一个有前途的战略有糖尿病勃起功能障碍(d) [5]。到目前为止,各种干细胞,如间充质干细胞(msc) [6),脂肪tissue-derived干细胞(ADSCs) [7,8(usc) [], urine-derived干细胞9)已被证明是有效的治疗d。其中,ADSCs,可以获得的微创方法,很容易扩展,被认为是治疗d的一个理想的候选人。和旁分泌作用的主要机制被认为是ADSCs看看的治疗效果。在我们之前的研究中,ADSCs转基因与vegf - 165显示更大的治疗效果在改善勃起功能的d大鼠比未改性ADSCs [8]。然而,考虑到风险的外源基因整合到宿主基因组中,转基因技术在临床应用仍受限制。

内皮祖细胞(epc),特别是增长了内皮祖细胞,可引起成熟内皮细胞(ECs)在体外和在活的有机体内是至关重要的再生受伤的船在活的有机体内(10,11]。几个临床前研究了内皮功能的显著提高EPC移植的后肢缺血(12和冠状动脉缺血动物模型13]。研究表明,糖尿病患者内皮祖细胞的数量较低的健康男性相比,和EPC功能也大大受损,DM (14]。增长了内皮祖细胞的增殖和分化需要各种proangiogenic因素,如VEGF、angiongenin angionpioetin我,但这些内皮祖细胞几乎不能分泌这些因素自己(15]。此外,研究还表明,VEGF及其受体的表达降低的海绵组织内d大鼠(8]。高等人发现,移植内皮祖细胞转基因与vegf - 165可以部分恢复的勃起功能d大鼠(16]。

最近的研究表明,联合移植msc和内皮祖细胞可以提高骨生成和心脏心肌损伤后修复(17,18]。因此,我们首先假设ADSCs的旁分泌作用可以增强内皮祖细胞的增殖和分化;因此,这些细胞联合移植可以显示一个协同效应改善勃起功能和恢复德的海绵状结构。在目前的研究中,我们将调查ADSCs联合移植的疗效和内皮祖细胞治疗糖尿病性ED啮齿动物模型和底层机制。

2。材料和方法

2.1。道德声明

四枚男性Sprague-Dawley两星期(SD)大鼠(60 g - 80 g)和七十五年8-week-old雄性SD大鼠(280克- 320克)购买动物中心的中山大学(广州)和一个标准实验室条件下保存。整个程序批准的中山大学健康科学机构审查委员会。

2.2。隔离和内皮祖细胞的培养

分离和培养大鼠内皮祖细胞根据先前描述,与少量修改19]。短暂,在收集的胫骨和股骨骨髓单核细胞枚老鼠,两星期的细胞与磷酸盐(PBS)稀释,放置到Ficoll-Paque +(通用电气医疗集团生物科技,宾夕法尼亚州,美国),和离心机18°C 400 g 30分钟。然后,收集巴菲外套单核细胞和PBS洗两次。之后,这些细胞被resuspended EGM-2子弹箱系统(Lonza、巴塞尔、瑞士),由内皮基底介质,10%胎牛血清,高能,hFGF-B, VEGF, igf - 1、肝素钠、抗坏血酸。镀细胞纤连蛋白(美国Billerica的微孔,MA)涂在组织培养塑料。24小时后初始镀,交换的媒介是把不依从细胞和第一周每天交换。殖民地的内皮祖细胞出现初始隔离7 - 10天后,当细胞融合增长至80%,连续通道上fibronectin-coated表面。内皮祖细胞是段落4用于体外和体内实验。

2.3。隔离和ADSCs修养

一切程序都是隔离和文化根据我们先前描述(20.]。简而言之,收集从一枚SD大鼠两星期后,脂肪组织在0.1%胶原酶I型孵化(Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州,美国)45分钟37°C和动摇在每15分钟30秒。过滤后100μm细胞过滤器和离心,脂肪组织stromal-vascular分数(SVF)沉浸在ACK裂解缓冲在室温下10分钟。与PBS两次离心分离和洗涤后,剩余的细胞被resuspended杜尔贝科修改鹰的中/ F12媒体(DMEM / F12, Hyclone,热科学、钙、美国)有10%胎牛血清(美国的边后卫,Gibco,生活技术)和培养25厘米²细胞培养瓶。交换的媒介是每隔一天,在大约80%融合细胞通道。

2.4。体外研究

2.4.1。流式细胞术分析ADSCs和内皮祖细胞

细胞表面抗原的ADSCs(3)通过或内皮祖细胞(3)通过流式细胞仪测定分析。使胰蛋白酶化和清洗后, ADSCs或内皮祖细胞在流式细胞术resuspended缓冲区。ADSCs孵化了fluorescence-conjugated抗体(CD73, CD90、CD105)和内皮祖细胞孵化与抗体(CD 31、CD34、CD45 CD73, CD90、CD105, CD117、和CD133) (BD生物科学,富兰克林湖,新泽西,美国)在冰上30分钟,分别。细胞能整除然后冲洗两次与PBS和流式细胞仪探测到(流式细胞仪石中剑,BD生物科学,新泽西,美国),和数据分析与FlowJo vX软件(树明星、亚什兰或)。

在passage3,内皮祖细胞被固定为endothelium-specific标记(CD31、vWF、和KDR) (Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州,美国)免疫荧光染色。和人类脐静脉内皮细胞(HUVECs,通道3)担任积极控制。

2.4.2。VEGF和SDF-1 ADSCs体外条件培养液的水平

VEGF和SDF-1水平的条件培养基ADSCs体外测定使用VEGF ELLISA工具包(RRV00、研发系统,明尼苏达州,美国)和SDF-1 ELLISA工具包(研发系统)根据制造商的协议。

2.4.3。体外管内皮祖细胞的形成、ADSCs ADSCs /内皮祖细胞

基底膜基质(50μL /;美国BD生物科学)第一次被添加到96孔板,然后在37°C孵化1 h。 内皮祖细胞, 内皮祖细胞, ADSCs或 ADSCs镀/内皮祖细胞分别在50μL DMEM和培养37°C公司为5%₂2 h;然后,人工基底膜管形成的相衬显微镜下计数(尼康、日本)。EPC / VEGF组控制 内皮祖细胞和50 ng在DMEM / mlVEGF。

2.4.4。Coculture化验

Coculture试验是在一个transwell室与聚碳酸酯膜装置,根据制造商的指示。简而言之,EPC悬架( 细胞/毫升)EBM-2添加到上层舱室,而ADSCs DMEM / F-12仅含有10%的边后卫或介质加载下室的室。coculture系统保持在湿润的气氛中含有5%的股份有限公司₂和95%的空气在37°C。交换的媒介是每隔一天。14天孵化后,ADSCs对EPC可行性的影响被检测到3 - (4 5-dimethylthiazol-2-yl) 2, 5-diphenyltetrazoliumbromide coculture系统(MTT)测定在天1日7和14。内皮祖细胞与10补充μl MTT (Beyotime生物技术研究所、海门、中国)和孵化4 h。丢弃后上层清液的愿望,200年μl二甲亚砜(DMSO)添加到溶解紫甲瓒30分钟。然后,OD值与光谱仪测定490海里。

2.5。在活的有机体内研究

2.5.1。糖尿病性勃起功能障碍大鼠模型的建立在活的有机体内移植

糖尿病性勃起功能障碍(d)引起的大鼠模型链脲霉素(STZ)根据建立在我们先前的研究方法。简而言之,所有老鼠收到一剂量STZ(50毫克/公斤)(σ,圣路易斯,密苏里州)通过驯化一周后腹腔内注射。注射STZ后2天,血液样本得到从尾巴戳破随机血糖测量血糖仪(罗氏,曼海姆,德国)。这些老鼠的血糖水平高于300 mg / dl被选为糖尿病大鼠。注射STZ十二周后,阿朴吗啡(APO, 100μ克/公斤)(σ)是用来确定ED老鼠根据希顿的方法(21]。APO皮下注射后,56/65(86.15%)的老鼠被筛选为d大鼠。

老鼠与戊巴比妥钠麻醉后通过IP(40毫克/公斤),总共 ADSCs内皮祖细胞或 ADSCs /内皮祖细胞悬浮在200年μl PBS或200μl PBS就注入阴茎海绵体在中间水平。内皮祖细胞是孵化EdU(美国表达载体,卡尔斯巴德,CA)移植前48小时。一个橡皮筋固定阴茎的底部在注入细胞和维持细胞注射后2分钟。

d大鼠随机分为4组( 每个):ADSC组老鼠收到一封intracavernous注入ADSCs ( 细胞);内皮祖细胞(EPC集团打了一针 细胞);ADSC / ADSCs /内皮祖细胞(EPC集团打了一针 / 细胞);和200年的d组注射μl PBS负控制。此外,正常组由14年龄正常老鼠作为积极的控制。

2.5.2。勃起功能评价

勃起功能是由总例压力(ICP)和平均动脉压(MAP)在4周后intracavernous注入如前所述。首先,老鼠与戊巴比妥钠麻醉(40毫克/公斤,IP)。然后,PE-50管装满肝素化盐水(250国际单位/毫升)当时插管到孤立左颈动脉监测地图。ICP的录音,25 g针插入左侧阴茎小腿,然后连接到另一个压力传感器。当海绵神经(CN)是识别和孤立的,一个双相钩电极连接到一个信号发生器(Taimeng、成都、公关中国)被左边CN与单相矩形脉冲电刺激。刺激参数设置5 v, 20赫兹,0.2宽女士,60年代的持续时间。提单的压力被记录和分析起来仿佛是新世纪2.1软件(Taimeng)。规范化系统性血压的变化,给出了勃起功能比ICP /地图。总ICP测定ICP曲线下的面积根据文献中描述的方法。然后,老鼠牺牲超过剂量戊巴比妥钠通过IP和阴茎是收获组织学分析和免疫印迹。

2.5.3。组织学和Immunohistological分析

马森的三色的染色,准备石蜡部分准备根据我们先前发表的研究。然后部分处理的标准协议马森的三色的染色。分析了定量图像分析Image-Pro + 6.0软件(美国媒体控制论,马里兰州贝塞斯达)。

免疫荧光,冷冻阴茎组织部分与初级孵化CD31抗体(Abcam,剑桥,英国),nNOS (Abcam),或β微管蛋白(细胞信号技术、马、美国)一夜之间在4°C,而控制部分没有孵化的主要抗体。与PBS三次洗涤后,部分被孵化的alexa - 594或alexa - 488(山羊anti-mouse或山羊anti-rabbit表达载体,卡尔斯巴德,CA,美国)在1:200稀释1小时在室温下保护。然后,部分已孵化和CD31孵化与新配置的点击反应包含alexa鸡尾酒- 488在室温下30分钟没有光。然后4 ,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI;表达载体,卡尔斯巴德、钙、美国)染色细胞核的可视化应用。部分都被记录下来,然后用徕卡显微镜拍摄和分析由Image-Pro + 6.0软件。

2.5.4。免疫印迹分析

从阴茎中提取蛋白质,由BCA蛋白质含量进行了分析测定工具包(Beyotime生物技术研究所)。然后,等量的蛋白质被装载在一个十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳。将蛋白质硝化纤维膜后,一夜之间,主要的抗体被孵化在4°C。美国GAPDH (Proteintech Rosemont, IL)被用来加载控制。信号与《奥德赛》获得红外成像系统。主要包括抗体CD31 (Abcam,剑桥,英国),以挪士(Abcam), VEGF(细胞信号技术)和SDF-1(圣克鲁斯生物技术、钙、美国)。

2.5.5。没有水平和cGMP(环鸟苷酸)水平测定

没有海绵组织水平和cGMP水平每组测量使用一氧化氮比色测定试剂盒(K262 Biovision,旧金山,美国)和cGMP直接免疫(K372 Biovision)根据制造商的协议。

2.6。统计分析

组间比较分析了使用GraphPad棱镜v.7.0软件(美国GraphPad软件,拉霍亚,CA)。被表示为连续变量 。多个组比较采用单向方差分析其次是Student-Newman-Keuls事后测试。 被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。对培养ADSCs和内皮祖细胞

贴壁培养鼠ADSCs呈形态在倒置相差显微镜下观察展出。和流式细胞仪分析表明,这些ADSCs MSC标记CD73强阳性,CD90、CD105,我们先前的研究显示^20.(数据1(一)和1 (b))。ELISA试验表明,ADSCs可以秘密大量VEGF和SDF-1,已被证明是重要的内皮祖细胞的增殖和分化(图1 (c))。

河鼠EPC殖民地镀2周后出现。这些细胞表现出典型的cobblestone-shaped外观(图1 (d))。流式细胞仪分析表明,这些内皮祖细胞CD31阳性,CD73 CD105, CD133(图1 (e))。免疫荧光染色证实培养内皮祖细胞可以表达CD31 HUVEC表面标志,vWF、KDR(图1 (f))。

3.2。ADSCs增强内皮祖细胞的增殖和Angiogenisis体外

在transwell培养14天,内皮祖细胞的数量ADSCs明显高于培养内皮祖细胞单独培养通过MTT试验( )(图2(一个))。更多的管上形成基底膜基质 / ADSCs /内皮祖细胞, 内皮祖细胞, 内皮祖细胞+ 50 ng / ml VEGF,比 内皮祖细胞( ),虽然其中三组无显著差异( )(图2 (b))。

3.3。血糖浓度和体重不改变d细胞移植后大鼠

后STZ腹腔内注射,血糖浓度显著增加,体重明显下降在糖尿病大鼠与正常相比控制大鼠( )。细胞移植后28天,血糖水平和d大鼠体重没有显著变化。此外,没有d老鼠死于本研究(表1)。

3.4。联合移植内皮祖细胞和ADSCs更好的恢复在d大鼠勃起功能

只有一个EPC组大鼠死亡细胞移植后22天,排除在这项研究。注射STZ后8周,ICP和ICP /地图比率降低d大鼠相比正常控制大鼠( ),指示在d大鼠勃起功能的障碍。ADSC组和EPC组均显示大大增加ICP和ICP /地图比例相比d组但仍明显低于正常对照组( ),证明ADSCs和内皮祖细胞可以部分恢复d大鼠勃起功能的。同时,ADSC / EPC cotransplantation表现出极大地勃起功能的保护作用。总ICP的ICP /地图比率ADSC / EPC组 和 分别为%,高于在EPC值组和ADSC组和86%和90%的正常对照组中的值(数据3(一个)- - - - - -3 (c))。

3.5。联合移植ADSCs和内皮祖细胞更好地增加海绵在d大鼠内皮功能

内皮标记CD31表达水平的海绵组织细胞移植后28天由免疫荧光染色和免疫印迹(数字4(一),4 (c),4 (d))。结果显示,CD31在d大鼠相比显著降低正常控制大鼠( ),同时结合ADSCs和内皮祖细胞移植可能几乎完全恢复内皮内容海绵组织( )。同时,ADSCs或内皮祖细胞也可以部分恢复内皮内容,和这两组之间没有显著差异( )。图4(一)显示更多EdU-positive内皮细胞层细胞被发现在ADSC / EPC组比EPC组,虽然移植内皮祖细胞的数量在ADSC / EPC组只是一半的EPC组,暗示ADSCs可以增强体内内皮祖细胞的增殖和分化。此外,免疫印迹证实有更多CD31表达ADSC / EPC组比在EPC或ADSC组。

内皮功能eNOS-NO-cCMP信号是非常重要的。免疫印迹显示大幅减少以挪士表达式在d大鼠的海绵组织(数字4 (b)- - - - - -4 (d))。此外,血清中浓度和cGMP d大鼠的海绵组织中浓度也显著低于正常大鼠。以挪士的表达水平,没有集中,cGMP浓度显著增加细胞移植后28天ADSC / EPC组比ADSC, EPC, d组( ),表明联合移植ADSCs和内皮祖细胞能有效地恢复受损eNOS-NO-cCMP用d大鼠(数字信号4 (e)和4 (f))。

3.6。移植ADSCs增加VEGF和SDF-1海绵组织中表达水平

在海绵组织中VEGF的表达水平在d组明显低于正常对照组,当评估免疫印迹,我们先前的研究显示[8]。与ADSCs intracavernous注入后或ADSCs /内皮祖细胞,VEGF的表达水平显著增加海绵组织内与d大鼠相比,虽然没有EPC组和d组之间的差异,表明这是ADSCs但不是内皮祖细胞的旁分泌作用显著增加cavernousum中VEGF含量。此外,免疫印迹证明SDF-1 ADSC组表达水平在海绵组织和ADSC / EPC组明显高于其他组( )(数据5(一个)和5 (b))。

3.7。移植ADSCs单独或与内皮祖细胞增加nNOS表达式在d大鼠阴茎背神经

免疫荧光染色显示nNOS表达式在d大鼠阴茎背神经显著低于在正常控制大鼠( )。细胞移植后,老鼠ADSC组和ADSC / EPC组都显示高nNOS表达式的阴茎背神经比d组( ),虽然没有显著差异nNOS EPC组和d组之间的表达式( )(图6)。

3.8。联合移植ADSCs和内皮祖细胞更好的增加平滑肌含量Covernosa d老鼠

马森的三色的染色显示,SMC /胶原蛋白比例显著降低d的老鼠比正常老鼠控制( )。Intracavernous注射内皮祖细胞或者ADSCs可以改善SMC /胶原蛋白比( ),但这仍低于正常大鼠( )。有趣的是,联合移植ADSCs和内皮祖细胞可能几乎完全恢复SMC /胶原蛋白比(数字7(一)和7 (b))。

4所示。讨论

糖尿病性勃起功能障碍与内皮功能障碍密切相关,平滑肌萎缩,神经变性(22]。PDE5抑制剂的响应率,如西地那非、d患者低(3]。研究表明内皮祖细胞的数量在糖尿病性ED患者的外周血健康男性相比明显减少,内皮祖细胞的功能也受损,表明,内皮祖细胞可能参与d[的发病机制23,24]。Intracavernous注射内皮祖细胞或ADSCs仅能部分恢复勃起功能在d大鼠模型(7,16]。在这项研究中,我们发现cotransplantation epc和ADSCs修复内皮功能的协同效应,从而显著提高勃起功能在STZ-induced糖尿病大鼠模型。此外,类似于其他研究[17,18],cotransplantation EPC和ADSCs是安全的,没有老鼠的ADSC / EPC组死于我们的研究。

研究表明,内皮祖细胞可以招募到船和分化成血管内皮细胞受损,从而修复血管壁,使血管再生(它有前途的战略25]。慢性的褪黑素可以防止在糖尿病大鼠可能通过动员骨髓内皮祖细胞的(26]。在目前的研究中,intracavernous注射内皮祖细胞就可以部分恢复d大鼠勃起功能的改善内皮功能。我们先前的研究发现,VEGF信号系统在d大鼠的海绵组织受损,导致内皮功能障碍和勃起功能障碍(8,27]。研究表明,内皮祖细胞的增殖和分化所需的若干proangiogenic因素,尤其是VEGF (28,29日]。d大鼠的叛逃VEGF信号通路可能解释的部分修复效果intracavernous注射内皮祖细胞。高等人表明intracavernous注入VEGF165-transfected内皮祖细胞可能大大恢复勃起功能d大鼠(16]。

ADSCs,可以通过微创方法和有巨大潜力的multidifferentiation和旁分泌作用,广泛应用于组织再生区域(30.,31日]。加西亚等人首先证明ADSCs可以部分恢复通过旁分泌d大鼠勃起功能的影响(7]。此外,我们先前的研究发现,intracavernous注入ADSCs转基因与VEGF几乎可以恢复d大鼠勃起功能的,可能通过修复叛逃VEGF信号系统(8]。然而,基因改造可能改变宿主染色体基因组的风险,阻碍了其临床应用。斯特拉斯堡等人表明ADSCs可以增强内皮祖细胞体外血管生成可能通过分泌VEGF (32]。我们目前的研究还发现,ADSCs可以显著改善内皮祖细胞体外的增殖transwell化验。

Cotransplantation msc和内皮祖细胞的协同效应在心血管疾病的治疗33)和脑血管疾病(34)和骨再生(35]。方舟子等人报道,结合periprostatic移植msc和内皮祖细胞能显著改善勃起功能的海绵没有创伤性ED鼠模型(36]。机制可能是msc可以通过分泌恢复海绵不含有神经生长因子和VEGF的生成因素,而内皮祖细胞可以增强msc的旁分泌作用。在我们目前的研究中,ICP和ICP /地图比结果表明intracavernous注入 / ADSCs /内皮祖细胞可能近几乎d大鼠勃起功能的恢复,同时移植 ADSCs或 内皮祖细胞仅只是部分恢复勃起功能,这表明ADSCs的协同效应和内皮祖细胞治疗d。此外,nNOS表达式ADSC组和EPC / ADSC组明显高于PBS组和EPC组,表明ADSCs的神经保护作用。但在方的研究,细胞被移植periprostatically,表明ADSCs的疗效和/或内皮祖细胞主要是通过旁分泌活动。虽然在我们的研究中,干细胞移植到阴茎海绵体,从而能够直接参与修复的海绵组织,特别是内皮受损。

我们只标记内皮祖细胞与EdU研究的原因,其他人和我们之前的研究都表明,ADSCs不能发现28天移植后的海绵组织。EdU-positive细胞能找到在海绵体的内皮细胞层细胞移植后28天。有趣的是,移植内皮祖细胞的总数在EPC / ADSC组只是一半的EPC组,但更EdU-positive细胞被发现在EPC / ADSC组比EPC组,这可以部分归因于旁分泌VEGF的cotransplanted ADSCs。ADSCs不仅可以旁分泌proangiogenic因素还基质细胞衍生因子1 (SDF-1),这是一个良好的细胞因子,调节内皮祖细胞的招聘网站neo-angiogenic利基市场的受伤组织(37- - - - - -39]。免疫印迹结果显示高SDF-1表达式被发现在海绵组织ADSC组和EPC / ADSC组,这或许可以解释为什么EdU-positive细胞被发现在EPC / ADSC组相比EPC组。SDF-1提高动员、迁移、导航和血管发生高血糖通过激活SDF-1 /下内皮祖细胞的趋化因子受体CXCR4轴(10]。此外,研究甚至发现,VEGF和SDF-1协同的影响内皮祖细胞的血管生成属性(40]。我们推测,SDF-1也可能招募内源性内皮祖细胞到cavernousm修复受损内皮功能,但它需要更多的调查。

有几个限制在当前的研究。首先,我们不能确定是否CD31 EdU double-positive内皮细胞和内皮祖细胞或成熟的ECs,他们表达CD31,没有单一的标志可以区分他们。其次,研究表明,干细胞疗法可能有长期影响治疗盆腔neurovacular创伤性ED (41]。考虑到高血糖可能影响ADSCs和/或内皮祖细胞的作用随着时间的推移,内皮祖细胞的长期疗效和ADSCs cotransplantation需要长期随访。第三,移植的最佳数量和比例ADSCs和内皮祖细胞需要进一步研究。

5。结论

在目前的研究中,我们证明intracavernous cotransplantation epc和ADSCs修复内皮功能的协同作用,大大提高了勃起功能在2型糖尿病大鼠模型。下属的机制可能是旁分泌VEGF和SDF-1 ADSCs提高了招聘和海绵体内皮祖细胞的增殖。此外,cotransplantation还可以增加海绵体平滑肌和nNOS表达式在d大鼠模型中。因此,cotransplantation epc和ADSCs可能对d病人提供新的治疗机会。

数据可用性

可用的数据联系相应的作者。

的利益冲突

作者声明没有二元性与此相关的手稿。

作者的贡献

Qiyun、杨Wanmei、陈和张气贡献同样这项工作。

确认

这项工作得到了国家自然科学基金(格兰特数字81671449,81671834,81671834,81871110);的前沿和关键技术创新特殊基础广东省中国(批准号2016 b030230001);中国广东省自然科学基金(2015 a030313013格兰特数字,2016 a030313229, 2018 a030310286);医疗合作创新基金重大项目的广州市,广东省,中国(批准号201604020189);和中山大学的青年教师培训项目(批准号ykpy68 17和18 ykpy09)。中山大学的基本科研项目(批准号18 zxxt14)。

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