il - 10基因改性的人类羊膜间充质干细胞增加再生由多个协同影响伤口愈合gydF4y2Ba

文摘gydF4y2Ba

间充质干细胞(msc)拥有一个增强皮肤伤口愈合的能力特征。然而,msc的治疗效果是有限的。修改MSC目标基因增加必要的生物效应是一种很有前途的伤口治疗的策略。白细胞介素- 10”(il - 10)是一种抗炎细胞因子,对伤口愈合有治疗效果。在这项研究中,我们修改人类羊膜间充质干细胞(hAMSCs)使用重组慢病毒载体表达il - 10和评估hAMSCs-IL-10在伤口愈合的疗效。我们阐明机制的影响。我们发现仍然坚持协同促进伤口愈合的影响hAMSCs和il - 10。hAMSCs-IL-10显示更强的生物效应加速伤口闭合,提高血管生成,调节炎症和调节细胞外基质重塑hAMSCs。hAMSCs-IL-10将更好地促进伤口愈合,提高治疗质量。这些数据可能会提供一个理论依据临床管理hAMSCs-IL-10皮肤伤口愈合和皮肤再生。gydF4y2Ba

1。介绍gydF4y2Ba

伤口愈合是一个复杂的过程,包括炎症、细胞增殖、血管生成、细胞外基质(ECM)改造(gydF4y2Ba1gydF4y2Ba]。伤口愈合后无疤痕再生人类胎儿的报道,努力针对调查潜在机制通过比较无疤和疤痕伤口愈合过程的多种动物模型。胎儿伤口愈合中确定的一个关键区别是低比产后伤口炎症反应。白介素- 10 (IL)对胎儿创伤的能力是至关重要的低炎症反应无疤再生伤口愈合(gydF4y2Ba1gydF4y2Ba,gydF4y2Ba2gydF4y2Ba]。失调的动力学过程可能导致延迟愈合和过度的疤痕,现在大挑战全球卫生保健系统。gydF4y2Ba

间充质干细胞(msc)广泛报道有一个活跃的功能在伤口愈合的过程中(gydF4y2Ba3gydF4y2Ba]。MSC-based皮肤工程结合基因重组msc的种子细胞和基因传递的载体伤口网站代表了最有前途的选择策略伤口治疗(gydF4y2Ba4gydF4y2Ba]。Alapure等人发现,骨髓msc与整合生物材料覆盖烧伤创面促进关闭,reepithelialization,肉芽组织形成,血管化烧伤伤口的gydF4y2Ba5gydF4y2Ba]。修改msc的肝细胞生长因子和血管内皮生长因子(VEGF)基因增加必要的生物效应和增强伤口愈合已经确认(gydF4y2Ba6gydF4y2Ba,gydF4y2Ba7gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

细胞因子il - 10是一种抗炎和antifibrotic。至关重要的胎儿的治愈能力再生(gydF4y2Ba1gydF4y2Ba,gydF4y2Ba2gydF4y2Ba]。il - 10可以概括无疤再生治疗产后组织通过多效性的影响。除了调节炎性反应,il - 10有小说功能作为管理者的细胞外基质,成纤维细胞功能和内皮祖细胞gydF4y2Ba8gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba10gydF4y2Ba]。鉴于此信息,我们假设超表达il - 10的msc对msc促进再生可能有益影响伤口愈合,防止疤痕形成。在这项研究中,我们评估疗效的il - 10基因改性hAMSCs (hAMSCs-IL-10)在抗炎和antifibrosis效果和促进伤口愈合。gydF4y2Ba

2。材料和方法gydF4y2Ba

2.1。动物和伦理批准gydF4y2Ba

野生型,7 - 8-week-old C57BL / 6小鼠动物实验中心提供的陆军军医大学(中国重庆)。人类胎盘从捐赠者获得正常或剖腹产手术后获得知情同意和批准后遵义医学院附属医院的机构审查委员会。所有实验程序依法进行指导方针和法规建立的遵义医科大学医学伦理委员会(遵义,中国)。gydF4y2Ba

2.2。隔离、文化和流式细胞术hAMSCs的识别gydF4y2Ba

分离、培养hAMSCs如前所述,轻微的修改(gydF4y2Ba11gydF4y2Ba]。羊膜与蛋壳分离机械,冲洗三次磷酸盐(PBS)与1% penicillin-streptomycin(美国Gibco,卡尔斯巴德,CA)。羊膜切成小块,用0.25%胰蛋白酶/孵化EDTA (0.05%, Gibco) 37°C 40分钟去除羊膜上皮细胞。与PBS冲洗后,羊膜片段被剁碎,与0.75毫克/毫升胶原酶消化II (Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州,美国)在37°C的90分钟温和的颤抖。同等体积的杜尔贝科修改鹰的介质(DMEM Gibco)补充10%胎牛血清(的边后卫,Gibco)添加到阻止酶反应,与100年和细胞悬浮液过滤gydF4y2BaμgydF4y2Bam网格单元过滤器。细胞悬浊液离心500×gydF4y2BaggydF4y2Ba5分钟,细胞颗粒resuspended, DMEM / F12培养基培养(Gibco)补充penicillin-streptomycin的边后卫为10%和1%。80%的融合,hAMSCs亚文化,细胞通过3被用于以下实验。gydF4y2Ba

流式细胞仪是用来识别特征hAMSCs和检测干细胞相关的细胞表面标记。流式细胞术,gydF4y2Ba 收集和沾抗体CD90 (FITC,克隆:5 e10汽油),CD105 (PerCP-Cy5.5,克隆:266),CD73 (APC,克隆:AD2), CD44 (PE、克隆:G44-26) CD34 (PE,克隆:581),CD11b (PE、克隆:ICRF44)、CD19 (PE、克隆:HIB19)、CD45 (PE、克隆:HI30) HLA-DR (PE、克隆:G46-6) mIgG1 (gydF4y2BaκgydF4y2Ba),FITC,克隆:X40 mIgG1 (gydF4y2BaκgydF4y2Ba),PerCP-Cy5.5,克隆:X40 mIgG1 (gydF4y2BaκgydF4y2Ba),APC,克隆:X40 mIgG1 (gydF4y2BaκgydF4y2Ba),PE,克隆:X40 mIgG2a (gydF4y2BaκgydF4y2Ba体育,克隆:g155 - 178)和mIgG2b (gydF4y2BaκgydF4y2Ba克隆:27-35)。所有抗体都是使用1:1000(美国Pharmingen BD)。样品在室温下孵化了30分钟,用PBS洗净,和分析MoFlo XDP流式细胞分析仪(贝克曼库尔特,沥青,CA) Kaluza软件(贝克曼库尔特)。gydF4y2Ba

2.3。骨生成和hAMSCs脂肪形成gydF4y2Ba

Multilineage分化hAMSCs进行了测试。诱导分化为骨细胞和脂肪细胞,细胞在骨细胞分化培养基培养或脂肪细胞的分化培养基。经过14天的分化,细胞染色茜素红S (Cyagen、广州、中国)或油红O (Cyagen)。gydF4y2Ba

2.4。建设和表征IL-10-Modified hAMSCsgydF4y2Ba

IL-10-overexpressing向量(携带绿色荧光蛋白)是来自上海创新生物技术有限公司的多重性感染(MOI) 30。慢病毒用于本研究LV-IL-10, replication-defective慢病毒表达il - 10和replication-defective LV-Null慢病毒不携带任何外源基因。转染了hAMSCs 30莫伊LV-IL-10 (hAMSCs-IL-10)或LV-Null (hAMSCs-Null)和荧光显微镜下观察48 h postinfection。il - 10的表达在hAMSCs-IL-10上层清液,hAMSCs-Null, hAMSCs是酶联免疫吸附试验(ELISA)检测到的。gydF4y2Ba

2.5。gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba动物研究gydF4y2Ba

全层皮肤缺损模型生成。C57BL / 6小鼠麻醉10 g / L腹腔注射戊巴比妥钠(0.4毫升/ 100克),和背部剃,脱毛,并与betadine清洗。两个全层切除伤口(1厘米gydF4y2Ba^2gydF4y2Ba)是两边对称的中线。小鼠随机分为四组和皮下注射伤口面积与生理盐水作为控制(100gydF4y2BaμgydF4y2BalgydF4y2Ba ),gydF4y2BaIL-10-hAMSCs (gydF4y2Ba 生理盐水,gydF4y2Ba ),gydF4y2BahAMSCs-Null (gydF4y2Ba 生理盐水,gydF4y2Ba ),gydF4y2Ba或hAMSCs (gydF4y2Ba 生理盐水,gydF4y2Ba )。gydF4y2Ba总值伤口愈合是评价的基础上,观察天1、3、7、14治疗后,伤口愈合率计算。gydF4y2Ba

2.6。炎症反应gydF4y2Ba

评估IL-10-hAMSCs的抗炎效果,皮肤伤口周围收集3、7和14 d治疗后,观察炎性细胞浸润通过苏木精和伊红染色())。炎症因子il - 10的表达水平,肿瘤坏死因子-gydF4y2BaαgydF4y2Ba(肿瘤坏死因子-gydF4y2BaαgydF4y2Ba),il - 6与ELISA定量化验分析设备(Sigma-Aldrich)后,制造商的指示。实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)是用于检测相对mRNA水平il - 10, TNF -gydF4y2BaαgydF4y2Ba,il - 6。qPCR,伤口周围组织的总RNA提取使用RNAiso +试剂(豆类,大连,中国);2的互补脱氧核糖核酸合成gydF4y2BaμgydF4y2Bag总RNA SYBR PrimeScript rt - pcr试剂盒(豆类),并使用SYBR qPCR是PrimeScript rt - pcr试剂盒在Stratagene MX3005P qPCR系统(美国安捷伦科技,圣克拉拉,CA)。所有步骤都是按照制造商的协议执行。褶皱变化每个目标基因的归一化甘油醛3 -磷酸脱氢酶(gydF4y2BaGAPDHgydF4y2Ba)mRNA。gydF4y2Ba

2.7。评价血管化gydF4y2Ba

观察血管生成在伤口愈合过程中,微血管周围皮肤的伤口被收集,被组织化验)染色。血管生成因子的表达,VEGF和碱性纤维母细胞生长因子(bFGF)和ELISA检测。ELISA, VEGF和bFGF的浓度定量测量与Quantikine酶联免疫吸附试验设备(Sigma-Aldrich)后,制造商的指示。gydF4y2Ba

2.8。细胞外基质重塑的评价gydF4y2Ba

探讨IL-10-hAMSCs对ECM的影响生产和改造在伤口愈合过程中,伤口皮肤收集和胶原蛋白被马森化验三色的染色根据制造商的指示。胶原蛋白含量被ImageJ软件计算彩色区域总面积的比例的部分。转化生长因子的表达gydF4y2BaβgydF4y2Ba(TGF -gydF4y2BaβgydF4y2Ba),矩阵metalloprotein-1(金属蛋白酶- 1)和组织抑制剂metalloprotein-1 (TIMP-1)测量与ELISA和免疫组织化学染色。免疫组织化学染色,抗体对抗TGF -gydF4y2BaβgydF4y2Ba(1:150年,Abcam)、金属蛋白酶- 1(1:200年,Abcam),和TIMP-1(1: 250年,Abcam)。gydF4y2Ba

2.9。gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba跟踪gydF4y2Ba

遵循hAMSCs的命运gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba,untransfected hAMSCs被贴上一个细胞追踪CM-DiI(美国纽约表达载体,大岛)移植之前,根据制造商的指示。hAMSCs-IL-10 hAMSCs-Null表达绿色荧光蛋白。14天,伤口皮肤是收获,冻结部分做好准备的话。荧光显微镜下观察细胞的生存系统(IX71 FL、奥林巴斯、日本)。gydF4y2Ba

2.10。统计分析gydF4y2Ba

数据表示为gydF4y2Ba (SD)。单向方差分析比较不同组之间进行了使用SPSS 17.0软件(美国、IBM、纽约Armonk)。差异与gydF4y2Ba 被认为是具有统计学意义。gydF4y2Ba

3所示。结果gydF4y2Ba

3.1。表征hAMSCsgydF4y2Ba

流式细胞术hAMSCs表面标记的显示表达式。CD73 hAMSCs > 90%阳性CD105, CD44,和CD34 CD90和消极,CD11b CD19和CD45(图gydF4y2Ba1(一)gydF4y2Ba)。此外,hAMSCs HLA-DR呈阴性,表明他们具有低免疫原性(图gydF4y2Ba1(一)gydF4y2Ba)。hAMSCs分化为骨细胞通过积极茜素红染色和脂肪细胞通过油红O染色(图所示gydF4y2Ba1 (b)gydF4y2Ba)。这些结果表明,培养hAMSCs具有干细胞特性。gydF4y2Ba

3.2。hAMSCs的转染效率和il - 10表达gydF4y2Ba

纺锤状细菌培养hAMSCs nucleus-to-cytoplasm比率相对较高(图gydF4y2Ba2(一个)gydF4y2Ba)。慢病毒感染(LV-IL-10和LV-Null)后,hAMSCs荧光显微镜下观察48 h postinfection。细胞表现出均匀轴形状和转染率高90%(数据gydF4y2Ba2 (b)gydF4y2Ba和gydF4y2Ba2 (c)gydF4y2Ba)。我们发现il - 10水平在上层的ELISA hAMSCs感染后48 h。il - 10的表达从hAMSCs-IL-10 hAMSCs-Null相比增加和hAMSCs (gydF4y2Ba )gydF4y2Ba(图gydF4y2Ba2 (d)gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

3.3。il - 10促进伤口恢复gydF4y2Ba

完整的皮肤伤口愈合有良好的上皮形成被一般的观察评估。伤口愈合hAMSCs-IL-10组比其他三组更迅速。在细胞移植后3天至7天,hAMSCs-IL-10, hAMSCs-Null和hAMSC组显示显著提高伤口愈合比控制。hAMSCs-IL-10组伤口大小明显小于其他组3和7天之间。14天,hAMSCs-IL-10 hAMSCs-Null, hAMSC组实现完整的伤口愈合,而对照组仍有无法愈合伤口(数字gydF4y2Ba3(一个)gydF4y2Ba和gydF4y2Ba3 (b)gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

3.4。IL-10-hAMSCs已经在愈合过程中抗炎作用gydF4y2Ba

)染色periwound皮肤部分显示大量的炎症细胞浸润在所有组3天。炎症细胞的总数hAMSCs-IL-10组明显低于其他三组。7天,炎症细胞的数量在hAMSCs-IL-10, hAMSCs-Null, hAMSC组减少;hAMSCs-IL-10组显示最少的炎症细胞浸润,和许多炎性细胞被认为在对照组的渗透。14天,对照组没有炎症细胞浸润,而且几乎没有炎症细胞观察,hAMSCs-IL-10 hAMSCs-Null, hAMSC组(数字gydF4y2Ba4(一)gydF4y2Ba和gydF4y2Ba4 (b)gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

我们发现主要的抗炎细胞因子il - 10水平和促炎因子il - 6和TNF -gydF4y2BaαgydF4y2Ba通过ELISA和qPCR。抗炎细胞因子和促炎因子3天达到顶峰,之后逐渐下降(图gydF4y2Ba5(一个)gydF4y2Ba)。hAMSCs-IL-10组的il - 10的水平显著高于其他三个小组。il - 6和TNF -的水平gydF4y2BaαgydF4y2BahAMSCs-IL-10组明显低于其他三组(图gydF4y2Ba5(一个)gydF4y2Ba)。il - 6和TNF -的水平gydF4y2BaαgydF4y2Ba较低,hAMSCs和hAMSCs-Null组的il - 10高与控制天3相比,7和14。hAMSCs和hAMSCs-Null组之间没有显著差异被认为炎症因子的表达。的表达il - 10、il - 6和TNF -gydF4y2BaαgydF4y2Ba证实了qPCR(图gydF4y2Ba5 (b)gydF4y2Ba)。相对mRNA的表达水平的il - 10、il - 6和TNF -gydF4y2BaαgydF4y2Ba与ELISA结果是相一致的。gydF4y2Ba

3.5。IL-10-hAMSCs调节血管生成因子的表达,促进了血管生成gydF4y2Ba

在细胞移植后第七天,伤口新血管形成发生在所有四组。新血管形成是由微血管计数量化的。与对照组相比,hAMSCs-IL-10, hAMSCs-Null和hAMSC组有更多的微血管。此外,hAMSCs-IL-10组的微血管数量明显高于hAMSCs-Null和hAMSC组(数据gydF4y2Ba6(一)gydF4y2Ba和gydF4y2Ba6 (b)gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

确定潜在影响的hAMSCs-IL-10伤口血管生成,血管生成因子VEGF的含量和bFGF在皮肤的伤口被ELISA检测。VEGF的表达水平和bFGF在hAMSCs-IL-10 hAMSCs,和hAMSCs-Null组明显高于对照组,而hAMSCs-IL-10 VEGF和bFGF的表达最高。hAMSCs-Null和hAMSC组无显著差异(图gydF4y2Ba7gydF4y2Ba)。这些结果表明,hAMSCs-IL-10伤口血管生成增加。gydF4y2Ba

3.6。治疗期间IL-10-hAMSCs加强适当的ECM事件gydF4y2Ba

伤口愈合的ECM的合成是一个重要的过程,ECM和胶原蛋白是主要的组成部分。调查可能hAMSCs-IL-10对ECM的影响生产和改造在愈合过程中,分析了胶原蛋白的积累马森三色的染色。所有三个hAMSC治疗组有显著upregulation皮肤中胶原蛋白的积累与对照组相比在7天(数字gydF4y2Ba8(一个)gydF4y2Ba和gydF4y2Ba8 (b)gydF4y2Ba)。胶原蛋白积累IL-10-hAMSC集团还显示高于其他组,定期安排了和胶原蛋白。14天,胶原蛋白积累在对照组显著高于其它三组,和胶原蛋白排列不规则。IL-10-hAMSC组显示胶原蛋白积累显著低于hAMSCs-Null和hAMSC组。gydF4y2Ba

在ECM重塑MMP和TIMPs是重要的。TGF -gydF4y2BaβgydF4y2Ba1调节金属蛋白酶- 1的表达和TIMP-1。我们使用TGF - ELISA分析表达式gydF4y2BaβgydF4y2Ba1、MMP和TIMPs细胞移植后不同时间点。与对照组相比,hAMSCs-IL-10, hAMSCs和hAMSCs-Null组显示的重要upregulation TGF -gydF4y2BaβgydF4y2Ba1,hAMSCs-IL-10集团在7天(图显示最高的表达式gydF4y2Ba9(一个)gydF4y2Ba)。结果逆转14天,和表达的TGF -gydF4y2BaβgydF4y2Ba1在对照组显著高于其它三组hAMSCs-IL-10组显示最低的表达式(图gydF4y2Ba9(一个)gydF4y2Ba)。7天,hAMSCs-IL-10金属蛋白酶- 1的表达,hAMSCs, hAMSCs-Null组显示,与对照组相比,差别明显对这些和hAMSCs-IL-10组的最低水平。这种结果是14天,与金属蛋白酶- 1的表达,hAMSCs-IL-10组显著高于其他组(图gydF4y2Ba9 (b)gydF4y2Ba)。TIMP-1的表达显著增加7天,14日在伤口治疗hAMSCs-IL-10, hAMSCs,或hAMSCs-Null与对照组相比,hAMSCs-IL-10组显示(图的最高水平gydF4y2Ba9 (c)gydF4y2Ba)。TIMP-1 /金属蛋白酶- 1的比率是最高的hAMSCs-IL-10集团7天,14天(图最低gydF4y2Ba9 (d)gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

3.7。hAMSCs殖民和生存gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba

观察hAMSCs的殖民和生存gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba,hAMSCs沾CM-DiI, hAMSCs-IL-10 hAMSCs-Null表达绿色荧光蛋白,细胞移植后14天。伤口皮肤是固定的,冰冻切片荧光显微镜下准备和检查。组荧光分布表明,hAMSCs hAMSCs-IL-10, hAMSCs-Null殖民组织(图并存活下来的gydF4y2Ba10gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

4所示。讨论gydF4y2Ba

虽然骨髓干细胞(bmsc)都已经被广泛地研究过了伤口愈合,他们收集与侵入性程序和数量相对较低。bmsc下降随着供体年龄增加的数量(gydF4y2Ba12gydF4y2Ba]。寻找方便和侵入性程序获得msc一直专注于其他人体组织,如胎盘。hAMSCs孤立于人类医疗废弃物的羊膜与最小的伦理问题。与其他来源的msc相比,简单的酶消化分离hAMSCs程序从一个羊膜超过10gydF4y2Ba^7gydF4y2Ba细胞增殖能力高(gydF4y2Ba13gydF4y2Ba]。hAMSCs表达低水平的古典mhc i和不表达mhc ii,他们在immunocompatibility不匹配的同种异体移植受者生存。他们承诺在再生医学领域的应用程序(gydF4y2Ba14gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

il - 10受到关注,因为它的多个生物效应。这是一个关键因素在伤口愈合gydF4y2Ba8gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba10gydF4y2Ba]。il - 10交付的支架材料,如collagen-silica [gydF4y2Ba15gydF4y2Ba),聚已酸内酯(PCL) [gydF4y2Ba16gydF4y2Ba],转基因辅助D-mannose [gydF4y2Ba17gydF4y2Ba),和病毒(gydF4y2Ba18gydF4y2Ba)已被调查。然而,il - 10半衰期较短gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba(gydF4y2Ba19gydF4y2Ba]。时空的控制释放生物活性分子可以实现最优功效[gydF4y2Ba19gydF4y2Ba]。msc可以通过传感伤口微环境,调节旁分泌信号和il - 10 msc的免疫调节特性的关键因素gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba,gydF4y2Ba21gydF4y2Ba]。除了生物效应,促进伤口愈合,再生msc再生医学是一个有吸引力的基因传递的工具(gydF4y2Ba4gydF4y2Ba,gydF4y2Ba6gydF4y2Ba,gydF4y2Ba7gydF4y2Ba]。因此,一个优秀的策略将msc作为il - 10的车辆交付伤口再生愈合。然而,il - 10交付的生物效应msc在伤口愈合仍不明朗。gydF4y2Ba

在这项研究中,我们使用了il - 10基因修改hAMSCs起到协同作用,如调节炎症,促进血管生成,并调节ECM重塑,促进再生伤口愈合。我们发现hAMSCs-IL-10分泌il - 10的水平高于未改性hAMSCs。伤口处理hAMSCs-IL-10显示关闭伤口更快和更好的愈合质量。gydF4y2Ba

炎症是一个重要的,非特异性,先天免疫反应涉及组织和清除细胞破裂,胞外,致病性碎片。然而,在外部有害刺激的存在导致组织损伤,炎症会延长和提高。il - 6是一种促炎细胞因子,对多个影响直接反对抗炎细胞因子il - 10,比如增加炎症细胞浸润(gydF4y2Ba22gydF4y2Ba]。提供的证据是疤痕的形成与il - 6的胎龄的胎儿,应无瘢痕愈合(gydF4y2Ba23gydF4y2Ba]。与il - 10在胎儿再生伤口愈合功能,这些发现导致“细胞因子假说”,认为,胎儿组织是宽容的再生治疗由于相对高浓度的抗炎细胞因子表达与促炎细胞因子,导致抗炎伤口环境(gydF4y2Ba1gydF4y2Ba,gydF4y2Ba2gydF4y2Ba]。肿瘤坏死因子-gydF4y2BaαgydF4y2Ba,也是一个重要的促炎细胞因子,是一种涉及分子和具有关键作用在炎症和随后的伤口愈合gydF4y2Ba24gydF4y2Ba]。我们的研究结果表明,hAMSCs-IL-10减当地伤口的炎症反应通过减少炎性细胞浸润以及生产的促炎细胞因子il - 6和TNF -gydF4y2BaαgydF4y2Ba。hAMSCs-IL-10政府清楚地表明,抗炎作用的协同作用增强了hAMSCs和il - 10。gydF4y2Ba

VEGF是最强有力的proangiogenic的因素之一。它由角化细胞和巨噬细胞分泌,促进血管内皮细胞的增殖(gydF4y2Ba25gydF4y2Ba]。bFGF是一种强有力的血管生成因子,刺激血管内皮细胞的迁移和增殖,促进毛细血管的形成。在伤口愈合,VEGF和bFGF协同刺激内皮细胞增殖,促进血管化,加速伤口愈合的过程(gydF4y2Ba26gydF4y2Ba]。几项研究表明,msc在伤口区域可以分泌细胞因子如VEGF、bFGF,和PDGF,导致增强血管再生和伤口愈合。一些来自msc分泌的可溶性因子诱导内皮细胞生存,血管分支,和周皮细胞招聘gydF4y2Ba27gydF4y2Ba]。我们的研究发现,hAMSCs-IL-10调节VEGF和bFGF和增加微血管的密度在当地的伤口。我们假设hAMSCs-IL-10通过旁分泌VEGF和bFGF增加加速伤口愈合伤口血管生成。gydF4y2Ba

TGF -gydF4y2BaβgydF4y2Ba1在伤口愈合的过程中有多个功能。首先,TGF -gydF4y2BaβgydF4y2Ba1参与炎症反应的调节。在伤口愈合的早期阶段,TGF -水平gydF4y2BaβgydF4y2Ba1低,促进中性粒细胞和巨噬细胞的迁移。伤口愈合的中间阶段,TGF -水平gydF4y2BaβgydF4y2Ba1增加迅速,可以抑制淋巴细胞和巨噬细胞的迁移和活化,和导致减少炎症gydF4y2Ba28gydF4y2Ba]。第二,TGF -gydF4y2BaβgydF4y2Ba1是参与调节增殖和分化的成纤维细胞通过自分泌和旁分泌的影响。低浓度的TGF -gydF4y2BaβgydF4y2Ba1促进成纤维细胞的增殖和分化,导致胶原沉积增加。高浓度的TGF -gydF4y2BaβgydF4y2Ba1抑制成纤维细胞的增殖和分化,减少胶原蛋白沉积gydF4y2Ba28gydF4y2Ba]。第三,TGF -gydF4y2BaβgydF4y2Ba1参与金属蛋白酶- 1的规定和ECM TIMP-1。金属蛋白酶- 1是一个主要因素在ECM的降解的胶原蛋白。TIMP-1是一种特殊的金属蛋白酶- 1的抑制剂。金属蛋白酶- 1和TIMP-1构成紧凑复杂与动态平衡比例调节ECM的退化和淀积(gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba,gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba]。高水平的TGF -gydF4y2BaβgydF4y2Ba1表达下调的金属蛋白酶- 1的表达,从而导致增加TIMP-1响应。最终,胶原沉积的增加和ECM的降解减少,导致瘢痕增生(gydF4y2Ba31日gydF4y2Ba]。我们的研究结果表明,hAMSCs调节TGF -的表达gydF4y2BaβgydF4y2Ba1在伤口愈合的早期和中间阶段和表达下调TGF -的表达gydF4y2BaβgydF4y2Ba1在中间和伤口愈合的后期阶段。在伤口愈合的中期和后期阶段,hAMSCs增加金属蛋白酶- 1的表达和TIMP-1和减少TIMP-1 /金属蛋白酶- 1的比率。通过减少炎症和纤维化,hAMSC政府加速伤口愈合,缓解疤痕形成。hAMSCs il - 10增强这些影响,hAMSCs-IL-10比hAMSCs更强的生物效应。gydF4y2Ba

hAMSCs-IL-10移植促进伤口愈合和治疗品质更有效地提高了移植的il - 10的表达,调节炎症,促进血管生成,促进肉芽组织形成和调节ECM重塑。因此,这些数据可能为临床提供理论基础管理hAMSCs-IL-10皮肤伤口愈合和皮肤再生。在这项研究中,在细胞移植后14天,我们观察到,在组织细胞被殖民,幸存下来。然而,很长一段时间后hAMSCs的命运值得进一步调查。跟踪和验证是复杂的,有遗留问题有待解决,如细胞融合前的最终目的地变得清晰。gydF4y2Ba

数据可用性gydF4y2Ba

使用的数据来支持本研究的结果包括在本文中。gydF4y2Ba

的利益冲突gydF4y2Ba

作者声明没有竞争的经济利益。gydF4y2Ba

作者的贡献gydF4y2Ba

所有作者同意手稿的内容。大理王Shune小实验设计;Guangtao黄进行了细胞生物学实验和统计分析。志远刘和Kaiyu聂进行动物试验。黄成梁邓手稿准备期间提供了很多建议,肖Shune写的手稿。Shune肖和黄Guangtao同样co-first作者。gydF4y2Ba

确认gydF4y2Ba

这项工作得到了国家自然科学基金(81871570号,81801916,和81801921)和贵州省科技合作项目(2016 - 2910和2015 - 07)。gydF4y2Ba

引用gydF4y2Ba

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