人体脂肪中提取干细胞促进伤口愈合Seawater-Immersed通过激活皮肤干细胞通过EGFR / MEK / ERK通路

文摘

海水(SW)浸泡可以增加皮肤伤口和生产耐火材料的损坏的伤口。然而,很少有研究调查机制进行西南浸在皮肤伤口。在我们目前的研究中,我们调查的影响人类脂肪干细胞(hADSCs) SW-treated全层皮肤创伤的修复和底层机制。结果表明,西南浸能减少EGF的表达和抑制MEK / ERK信号通路的激活。同时,皮肤干细胞的增殖和迁移被西南浸抑制,导致延迟伤口愈合。然而,hADSCs显著加速SW-immersed皮肤伤口的愈合通过促进细胞增殖和迁移通过上述机制。我们的结果显示一个角色hADSCs seawater-immersed皮肤创伤的修复和显示一个潜在的小说seawater-immersed伤口愈合的治疗策略。

1。介绍

慢性伤口伤口,不损伤后的30天内达到解剖和功能的完整性(1]。糖尿病、肥胖、持续感染和糖皮质激素的使用可使皮肤伤口难以愈合,可以导致慢性皮肤伤口,最终可能导致严重的后果,如感染、截肢甚至死亡(2,3]。海水(SW)浸泡也是一种常见的慢性伤口的人居住在沿海地区和参与海洋导航。西南,一个复杂的高渗碱性溶液的化学成分主要是氯化钠,还包括不同比例的氯化钾,CaCl₂,MgCl₂,MgSO₄等。全球SW平均盐度34.7和8 - pH值8.4,这是一个明显的高渗的碱性状态。此外,西南含有大量的微生物,特别是革兰氏阴性细菌(4]。上述特征意味着当皮肤伤口浸泡在SW很长一段时间,他们变得容易组织坏死和感染,皮肤伤口的愈合时间延长,导致慢性伤口。令人遗憾的是,已经有罕见的报道的影响,西南的伤口全层皮肤和其发生的机制。

干细胞治疗已成为治疗慢性伤口的新方向。人类脂肪干细胞(ADSCs)从脂肪组织中提取的干细胞多向分化潜力。ADSCs可以迁移到受损的网站和分化成皮肤附属物修复受损皮肤通过其多向分化潜力5- - - - - -8]。同时,ADSCs可分泌多种生长因子,抑制炎症反应,加速伤口血管生成,促进伤口愈合(9]。ADSCs也可以作为种子细胞,与创新修复材料;ADSCs可以生长在3 d文化可注射水凝胶支架上,据报道,增加ADSCs的保留率,促进伤口血管生成,加速慢性伤口的愈合10,11]。然而,并没有报告在SW ADSCs浸泡伤口修复的应用。

在这项研究中,我们建立了一个伤口模型西南浸,并与正常伤口愈合;比较两个条件,我们证实了SW浸可能大大延迟伤口愈合。干细胞是皮肤伤口愈合的重要细胞类型之一。皮肤干细胞可以从基底层逐渐上移,分化成表皮子代细胞促进伤口愈合(12]。我们假设ADSCs可以通过区分为促进SW-soaked伤口的修复皮肤干细胞,促进自体皮肤干细胞的增殖和迁移。以前的研究已经表明EGF是皮肤reepithelialization最重要的生长因子。此外,EGF的表达可以激活MEK / ERK信号通路,促进细胞增殖和迁移。因此,我们相信ADSCs能促进皮肤干细胞的增殖和迁移,加速伤口闭合的过程中通过调节表皮生长因子受体的表达和激活MEK / ERK通路,这说明新的伤口愈合的治疗策略。

2。材料和方法

2.1。细胞隔离和文化

人体皮下脂肪组织样本来自10个健康女性的腹部抽脂长海医院隶属于第二军事医学大学。所有样品都是获得并使用病人的知情同意。接下来,脂肪组织样本用低糖DMEM(美国犹他州HyClone)去除过多的脂质滴。接下来,样本与0.075% II型胶原酶消化(美国大岛屿Gibco) 40分钟温和搅拌在37°C。与70年样本过滤μ米网过滤器,混合着低糖DMEM补充10%的边后卫(美国大岛屿Gibco)和1% P / S(美国大岛屿Gibco),然后在300×g离心30分钟。hADSC分数与PBS洗(美国犹他州HyClone)和离心机在300 g×10分钟,然后是浮在表面的被丢弃。细胞颗粒resuspended在低糖DMEM补充与10%的边后卫和培养湿润孵化器有限公司为5%₂。hADSCs后,媒介是改变每2 - 3天(13]。

HaCaT细胞代表人类上皮细胞系。我们获得HaCaT细胞从美国类型文化集合(美国弗吉尼亚州马纳萨斯)。HaCaT细胞培养在high-glucose DMEM(美国犹他州HyClone)补充10%的边后卫,媒介是改变每2 - 3天。

2.2。表征hADSCs

2.2.1。流仪鉴定

3通道后,hADSCs收集和统计。约 细胞被洗了,贴上fluorophore-conjugated抗体(美国BD生物科学)(CD105-FITC、CD90-PE-CyTM7 CD29-APC, CD49d-PE, CD45-PE-CyTM7,和CD34-PE)和在室温下孵化20分钟14]。这些细胞被染色同形像控制免疫球蛋白作为控制。分析的细胞被洗PBS和流式细胞术(Amnis ImageStreamX马克二世,西雅图,美国)。

2.2.2。多向分化特性

培养了hADSCs成骨的(Cyagen,广州,中国)或脂肪形成的(Cyagen、广州、中国)分化培养基为4周。然后,细胞被固定为4%中性甲醛与PBS 30分钟,洗两次。然后,细胞诱导成骨分化是沾染了茜素红S (Cyagen、广州、中国)5分钟,和脂肪形成的细胞诱导分化是沾油红O (Cyagen、广州、中国)在室温下30分钟。PBS的彩色细胞被洗,使用光学显微镜和图像捕获(日本奥林巴斯)观察和评估脂肪形成的分化或成骨分化的状态。

2.3。软件解决方案准备

实验软件的解决方案是根据配置标准第三国家海洋研究所的海洋。SW组件如下:氯化钠26.52 g / l, MgCl₂22.45 g / l, MgSO₄3.31 g / l, CaCl₂1.14 g / l,氯化钾0.73 g / l, NaHCO₃0.202 g / l, NaBr 0.083 g / l。SW配方如下:渗透压( )mOsm / l, pH值8.20,Na⁺( )更易与l, K⁺( )更易/ l, Cl⁻( )更易与l,海水的平均盐度为35%。实验SW 0.22过滤μ过滤器在使用前。

2.4。在活的有机体内研究

共有48个流行男性裸体Balb / c小鼠随机分为对照组、SW组织一个西南+ DMEM组,和一个西南+ hADSC组。其中,对照组不干预,而西南组只有海水浸泡没有其他干预。对照组与西南组证明海水浸可能延迟伤口愈合,形成慢性伤口。然后,SW + hADSC组相比,西南组证明hADSCs可以显著促进seawater-immersed伤口的愈合。因为注射hADSCs悬浮在DMEM, SW + DMEM组成立排除DMEM在伤口修复的效果和确认hADSCs的关键细胞修复。所有实验协议在本研究通过动物健康科学的指导方针政策和福利委员会与第二军医大学附属长海医院。

首先,全层皮肤缺损模型成立。小鼠皮下注射麻醉的Zoletil的混合物(0.1毫升/公斤)和Rompun(0.05毫升/公斤)。一双全层皮肤伤口是由两个8毫米活检拳背外侧的老鼠15]。随后,鼠标的伤口表面是完全沉浸在充满海水的量杯60分钟建立seawater-soaked伤口模型(原理图如图1 (c))。对照组的老鼠没有收到任何其他干预;SW集团老鼠沉浸在西南的伤口没有其他干预;和西南+ DMEM和SW + hADSC组,伤口表面沉浸在西南。然后,剩余的海水表面的鼠标用干净的纱布轻轻擦拭了。老鼠稳定后(约10分钟),SW-immersed伤口被注入了100μl(低糖DMEM或 六点hADSCs,悬浮在低糖DMEM注射部位皮下基地的伤口。最后,用凡士林纱布覆盖伤口表面的鼠标,和纱布加压包扎。所有的老鼠在单独的笼子里。着装后第三天,皮下的SW-immersed伤口与100年收到多点注射μl(低糖DMEM或 hADSCs,悬浮在低糖DMEM,之后没有其他注射治疗干预。

每个鼠标拍摄数码的伤口。从测量伤口面积计算了7天,14日和21日受伤后使用Image-Pro + 6.0软件(美国医疗控制论)。伤口愈合率计算如下:

2.5。免疫组织化学和免疫荧光研究

在14天、21日伤口皮肤组织切除,并进行组织学染色分析。切除皮肤样本在10%福尔马林固定,脱水乙醇梯度孵化。在石蜡样本嵌入,5μ米厚的部分被削减。组织部分受到他染色,马森的三色的染色组织学观察和评估胶原成熟状态,分别。

为在活的有机体内研究中,使用CM-Dil hADSCs都沾染了红色荧光染料(美国热科学表达载体)之前皮肤伤口注射治疗。SW + hADSC组的伤口皮肤组织切除14天,立即就被放置在组织的支持者。然后,组织被嵌入在一个tissue-embedding代理和冷冻准备10μ米厚的冰冻切片。

免疫组织化学和免疫荧光分析被执行之前报道14]。这个实验中使用的主要主要抗体是CK19 (Proteintech,武汉,中国)和Ki67 (Abcam、剑桥、马、英国)。作为衡量皮肤伤口修复、CK19染色进行评估皮肤干细胞的增殖;Ki67染色进行评估增殖细胞的水平。彩色部分收集的图片拍摄使用光学显微镜(日本奥林巴斯)。五个领域被随机选中的每个部分,并使用Image-Pro + 6细胞数。

免疫荧光,首先,组织部分是孵化主要抗体在一夜之间在4°C。接下来,与二次孵化的部分抗体在室温下了一个小时。第二抗体是Alexa萤石™594山羊anti-rabbit免疫球蛋白(H + L) cross-adsorbed二级抗体(美国热科学表达载体)和FITC-labeled山羊anti-rabbit免疫球蛋白(H + L) cross-adsorbed二级抗体(Beyotime生物科技公司、江苏、中国)。然后,部分是沾不变色安装代理(美国延长,热科学)包含DAPI。最后,部分满是甘油,并增加了盖玻片。进行上面的操作在没有光的时候。荧光染色法部分使用荧光显微镜拍摄,和执行的计算方法如上所述16]。

2.6。细胞治疗

探索西南的影响治疗HaCaT细胞,这些细胞被培养在high-glucose DMEM补充10%的边后卫。这些细胞被分成四组和海水混合到0%,1.75%,3.5%,和7%的盐浓度。

调查的影响hADSCs SW-treated细胞,HaCaT细胞与hADSCs cocultured six-well盘子和使用transwell系统(原理图如图2 (b))。hADSCs ( 细胞/)被播种到0.4μm聚碳酸酯膜在transwell(康宁配角、剑桥、马);HaCaT细胞( 细胞/镀)是在较低的房间,和细胞培养在一起2天。

2.7。细胞增殖实验

CCK8化验(Beyotime生物科技公司、江苏、中国)被用来检测SW对细胞增殖的影响。HaCaT细胞被播种在2000细胞/ 96 -孔板。经过12个小时的允许细胞附着,细胞培养与不同浓度的盐(0、1.75%、3.5%、7%)。分析了细胞生长24 h,治疗后48小时,72 h。一个10μl CCK8测试解决方案添加到每个好,和细胞孵化湿润孵化器有限公司为5%₂在37°C 2 h在每个时间点。OD测量在450 nm标仪(美国热科学Tecan)。数据显示是代表四个独立的实验。根据这些数据,我们确定一个合适的盐浓度对后续实验。

一个EdU工具包(日博,广州,中国)是用于检测的影响hADSCs SW-treated细胞的增殖(17]。HaCaT细胞被播种 正常细胞/在24-well盘子和培养,直到他们confluency 70 - 80%。然后,细胞被分为三组:正常组,SW集团和西南+ hADSC组。正常组细胞培养在high-glucose DMEM。西南组和SW + hADSC群细胞被培养在high-glucose DMEM和3.5%盐。此外,西南+ hADSC群细胞被cocultured hADSCs使用0.4μm transwell聚碳酸酯膜(18]。细胞培养48 h后,EdU实验进行。首先,EdU试剂添加到细胞培养基稀释比例为1000:1,2 h的细胞被孵化。接下来,介质被丢弃,PBS的细胞被洗。第三,500年μl 4%的多聚甲醛是添加到每个好,其次是孵化为30分钟,然后500年μl 2毫克/毫升的甘氨酸的解决方案是添加到中和过量的甲醛。接下来,每个tritonx补充了0.5%——100年或10分钟permeabilize细胞,然后用PBS为他们洗5分钟。cytofluorescence染色,1 x阿波罗反应的解决方案是添加到培养皿的细胞培养在黑暗中在室温下30分钟。接下来,每个tritonx补充了0.5%——100年或10分钟permeabilize细胞。最后,1 x赫斯特33342年反应的解决方案是添加到培养皿,在室温下和细胞培养在黑暗中30分钟,然后用蔡司荧光显微镜观察(HLA100、上海、中国)。

2.8。细胞迁移试验

划痕测试是用来评估SW对细胞迁移的影响和ADSCs对SW-treated细胞的迁移能力的影响(19]。HaCaT仍分为三组:正常组,西南组和SW + hADSC组。细胞接种在6-well板块 正常细胞/好,他们培养的,直到细胞汇合的80% - -90%。然后,汇合的细胞单层挠了无菌10μl吸管提示,细胞被洗PBS。新鲜培养基被添加到细胞,培养法是一样的在上面的EdU实验。细胞观察,记录图像蔡司倒置相差显微镜(观察者。D1、上海、中国)在0、12、24和36小时后刮细胞。迁移面积测量利用ImageJ软件(美国马里兰州贝塞斯达)。下面的公式是用来评估细胞迁移能力: 其中A0表示初始划痕区域( h)和Ax代表剩余擦伤面积测量的时候( h)。

2.9。西方墨点法

皮肤伤口组织从每个小组每天14和21是孤立的,并与PBS样本清洗。然后,添加溶菌产物完全溶解的组织组织,和溶菌产物在1200 g离心10分钟收集包含蛋白质的上层清液的解决方案。上层清液含有等量的蛋白质添加到10% sds - page凝胶电泳,被转移到一个PDVF膜。膜堵塞在5% BSA 2 h在室温和孵化一夜之间在4°C的主要抗体的解决方案。主要的抗体识别GAPDH(细胞信号技术、马、美国)和表皮生长因子受体(细胞信号技术、马、美国)。最后,膜清洗3 - 4次TBS-T和孵化与山羊anti-rabbit HRP-conjugated二级抗体(细胞信号技术、马、美国)在室温下2 h。蛋白表达的强度是观察一个α成像仪扫描使用化学发光(美国热科学Tecan),使用ImageJ软件和表达分析。

2.10。定量实时聚合酶链反应

从皮肤伤口组织中提取RNA。总RNA分离用试剂盒®试剂(生活技术,美国)根据制造商的指示。一微克的总RNA reverse-transcribed进cDNA使用ReverTra Ace®qPCR RT大师与gRNA混合剂(TOYOBO,大阪,日本)。样本评估定量实时PCR反应使用QuantStudio™7 Flex实时PCR系统(美国生活技术)与SYBR®绿色实时PCR反应混合液(TOYOBO,大阪,日本)。PCR进行变性在95°C的初始步骤5分钟,其次是40 95°C的周期10年代,60°C 20年代,20年代72°C。融化曲线建立了反应,和规范化使用2折计算表达式^{- - - - - -ΔΔCt}方法。相关的引物序列表中列出1。

2.11。统计分析

所有数据都表示为 ,和单向方差分析是用于多个组比较。所有统计分析使用GraphPad棱镜软件(版本7.0,拉霍亚,CA)和SPSS统计软件包版本15.0(美国芝加哥,IL)。值< 0.05被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。表征hADSCs

根据先前的研究方法、提取hADSCs和成骨的脂肪形成的分化潜力进行了分析(14,20.]。主要hADSCs开始坚持井,和细胞形态学是典型的3 - 7天后文化,如图3(一个)。确认hADSCs被成功分离出人类脂肪组织,hADSCs诱导分化成脂肪细胞,成骨细胞,脂肪形成的分化和成骨分化能力的细胞被茜素红S染色证实成骨细胞(图3 (b)脂肪细胞的)和油红O染色(图3 (c)),分别。流式细胞术结果(图3 (d))表明,细胞表面强阳性标记CD29、CD105, CD90、CD49d,但他们对CD34、CD45不利。上述特征是与先前的研究结果一致,表明我们获得高质量的hADSCs。

3.2。的影响hADSCs Seawater-Immersed伤口的治疗

评估的影响hADSCs seawater-immersed治疗的伤口,我们观察到小鼠皮肤伤口的愈合过程(数据1(一)和1 (b)),发现以下几点:老鼠的伤口沉浸在SW显示较慢的愈合率比对照组,显示和SW + hADSC组明显高于伤口愈合率( )。此外,显微观察伤口部分(数据4(一)和4 (b))表明,皮肤在西南组和SW + DMEM组比对照组明显更薄和SW + hADSC集团( )。同时,更多的胶原沉积和再生的皮肤附属物(数字4 (c)和4 (d)),如毛囊和汗腺,观察对照组和SW + hADSC组相比,西南组和SW + DMEM组( )。

首先,我们建立了一个全层皮肤缺损模型,伤口完全沉浸在人工海水。治疗期间在天7和14日reepithelialization和关闭seawater-immersed伤口低于控制伤口的观察,证明海水阻碍伤口愈合(21]。随后,hADSCs或同等体积的DMEM注入在伤口,并观察到伤口hADSC注入效率有一个更好的闭包。最后,组织部分被用来进一步观察伤口修复的形态变化(20.]。也证实,海水浸阻碍了形态修复伤口,伤口和hADSCs降低海水的影响,宣传他们的修复。因此,我们相信hADSCs可以显著促进seawater-immersed伤口的愈合。

3.3。影响hADSCs SW-Treated细胞的增殖和迁移在体外

表皮细胞的增殖和迁移在伤口愈合中起关键作用22),因此我们研究的影响hADSCs的扩散和迁移SW-treated HaCaT细胞。的CCK8化验结果HaCaT细胞(图2(一个))表明,低盐浓度(1.75%)可以在一定程度上促进HaCaT细胞的增殖。然而,细胞的增殖明显抑制在3.5%盐( )。因此,3.5%的盐浓度作为后续研究实验浓度。

EdU分析被用来评估SW和hADSCs细胞增殖的影响。结果(数据2 (e)和2 (f))表明,西南组的细胞增殖率明显低于对照组和hADSC coculture集团( )。

细胞划痕测试是用来评估SW和hADSCs细胞迁移的影响。结果(数据2 (c)和2 (d))表明,西南组显示显著延迟关闭12小时与对照组相比 ),和hADSC coculture组减少了SW对细胞迁移能力的影响,显著促进细胞迁移( )。此外,对照组和hADSC coculture群HaCaT细胞基本上愈合划痕在48小时内,而西南组留下了一个大的无法愈合区域。

上述结果表明,西南可以显著抑制HaCaT细胞的增殖和划痕的关闭。与hADSCs coculture后,细胞的增殖和迁移能力明显恢复。因此,我们相信hADSCs促进seawater-soaked伤口的愈合诱导表皮细胞的增殖和迁移。

3.4。Ki67和CK19表达水平Seawater-Immersed hADSC治疗后伤口

以前的研究已经表明Ki67是一个重要的核内蛋白对细胞增殖,和CK19皮肤干细胞增殖的重要膜蛋白(16,20.,23]。细胞的增殖(特别是皮肤干细胞)在皮肤创伤的修复中发挥着重要作用。因此,我们进一步分析了西南的监管效果和hADSCs Ki67和CK19在伤口愈合的细胞。免疫组织化学和免疫荧光分析的皮肤部分小鼠模型被用来评估伤口修复。首先,冰冻切片免疫荧光分析(图4 (e))表明,hADSCs分化成皮肤干细胞,促进伤口愈合。第二,免疫组织化学染色Ki67的和红的增殖细胞进行荧光标记物,和增殖细胞的数量和比例计算。结果(数据5(一个)- - - - - -5 (d))显示的数量和比例在对照组和增殖细胞SW + hADSC组显著高于西南组( )。CK19免疫组织化学和皮肤干细胞(数字immunofluorescent标签5 (e)- - - - - -5 (h))表明,皮肤干细胞的数量和比例在对照组和SW + hADSC组显著高于西南组( )。

上述结果表明,西南浸显著减少Ki67和CK19的表达在皮肤创伤修复和增加皮肤的损伤的伤口,虽然hADSCs促进Ki67的表达和CK19在皮肤细胞,减少伤口,西南的影响,加快伤口愈合。

3.5。hADSCs影响MEK / ERK信号通路激活在SW-Treated伤口

我们进一步分析了在SW-treated伤口hADSC功能背后的潜在机制。之前的文献表明,伤口修复表皮生长因子通路密切相关(24),因此我们假设hADSCs引起伤口修复细胞的增殖和迁移通过激活表皮生长因子受体。EGF蛋白(数字的表达水平6(一)和6 (b))表明,hADSCs促进皮肤伤口表皮生长因子受体的表达。此外,先前的研究已经表明,表皮生长因子受体可以调节MEK / ERK通路[的活动25]。因此,我们研究了MEK / ERK通路的活动修复伤口。结果表明,胶原蛋白1型、3型胶原蛋白,ERK mRNA(图6 (c))水平在对照组和SW + s组明显高于在西南组和SW + DMEM组( )。这些结果表明,hADSCs可以激活MEK / ERK通路通过调节表皮生长因子受体。

4所示。讨论

海洋产业发展近年来,和海洋工作者可能发生各种开放损伤(26]。一些先前的研究报道,西南浸导致大量炎症因子,如引发、TNF,不,从受伤部位释放,造成体内多个器官损伤和播散性血管内凝血的概率增加,最终导致死亡率的增加(4,27- - - - - -31日]。然而,SW浸的影响对伤口修复全层皮肤缺陷及其机制还没有文献报道。在我们的实验中,我们建立了一个西南浸在活的有机体内模型和观察到SW-soaked伤口的愈合效率明显延迟。我们还发现,表皮细胞的增殖和迁移能力明显抑制人工SW治疗后使用在体外实验。上述结果表明,西南浸可以显著延迟伤口愈合。

伤口ADSCs可以抑制炎症反应,促进血管化和上皮形成的伤口通过释放多种生长因子,如表皮生长因子、胶质瘤、TGF -α,抑制促炎和增强抗炎作用的因素,如il - 10 (32,33]。因此,我们假设ADSCs可以显著促进SW-soaked伤口的修复。hADSCs被注入SW-soaked伤口的基础模型,结果表明hADSCs可以减少皮肤的损害造成的伤口SW和加速SW-immersed皮肤伤口的愈合。此外,我们cocultured表皮细胞与人造SW hADSCs治疗模式。结果证实,hADSCs可以显著促进SW-treated表皮细胞的增殖和迁移。此外,先前的研究已经报道,ADSCs可以分化为上皮干细胞促进皮肤伤口修复,这是使用特定组织化学标记所示(CK19)修复组织可能区分愈合细胞的来源13]。我们的研究也证实了这一现象。

作为一种重要的细胞组织再生工程,ADSCs显示显著的修复效果在促进皮肤伤口愈合(特别是慢性皮肤伤口愈合)通过各种机制,如多向分化和旁分泌途径激活(5,34- - - - - -36]。此外,EGF分泌ADSCs皮肤reepithelialization的增长是最重要的因素。以前的研究已经表明EGF的表达可以激活MEK / ERK信号通路,促进细胞增殖和迁移25]。我们发现有一个长期的EGF表达在皮肤伤口SW浸泡后,进一步阻碍了MEK / ERK信号通路的激活和延迟的reepithelialization皮肤伤口,如图6 (d)。然而,ADSCs可以导致伤口EGF的表达和激活MEK / ERK信号通路促进皮肤干细胞增殖和迁移。

在这项研究中仍有一些缺陷。SW用于我们的实验是无菌人工西南。我们没有研究细菌对伤口的效果。然而,如果细菌被添加到西南,皮肤伤口更有可能导致严重的污染,和皮肤伤口更有可能形成慢性伤口。陈等人。37干细胞的细胞因子水平相比)液和干细胞通过抗体阵列技术。结果表明,干细胞液明显富含EGF与干细胞本身。因此,我们假设在coculture系统中,ADSCs分泌液富含EGF促进上皮细胞的增殖和迁移。此外,我们计划比较ADSC的修复效果和ADSC液SW-immersed皮肤上的伤口探索干细胞在创伤修复液的作用。随后,单细胞测序技术将被用于比较修复组织细胞和分子组件更彻底地探索修复机制。

5。结论

总之,我们发现ADSCs可以分化成皮肤干细胞,促进自体皮肤干细胞的积累通过激活EGFR / MEK / ERK通路,从而实现SW-immersed伤口的恢复。我们的研究结果提供了新的治疗seawater-immersed再生的皮肤伤口。

缩写

CCK8:	细胞计数kit-8
DMEM:	杜尔贝科修改鹰的媒介
EdU:	5-Ethynyl-2 - - - - - -脱氧尿苷
表皮生长因子:	表皮生长因子
的边后卫:	胎牛血清
hADSCs:	人类脂肪干细胞
他:	苏木精和伊红
HGF:	肝细胞生长因子
IL:	白介素
OD:	光密度
PBS:	磷酸缓冲盐
P / S:	青霉素、链霉素的解决方案
西南:	海水
TGF -α:	转化生长因子-α
VEGF:	血管内皮生长因子。

数据可用性

我们申报材料中所描述的手稿,包括所有相关的原始数据,将免费提供给任何科学家用于非商业应用程序,没有违反参与者保密。

的利益冲突

作者宣称没有利益存在竞争。

作者的贡献

Jiachao Xiong, Boyao霁,刘军王贡献在项目概念和设计,帮助在数据的收集,分析和解释数据,写的手稿,并提供金融支持;Yazhou燕和刘Zhixiao提供学习材料,帮助收集的数据;林建兴Minjuan吴、王曰歌贡献在项目概念和设计,分析和解释数据,提供行政支持,手稿的最终批准。阅读和批准所有的作者都最后的手稿。Jiachao Xiong, Boyao霁,刘军Wang和Yazhou燕同样这项工作。林建兴歌,王悦,吴Minjuan相应的作者。

确认

这项工作得到了国家重点研究和开发中国干细胞与转化研究计划重点项目(批准号2018 yfa0108301), Industry-University-Research医疗项目(批准号12 dz1940405),中国国家自然科学基金(格兰特数字31971109、81772075和81701923),上海卫生系统优秀人才培养计划(批准号2017 yq028和2018 yq38),和上海科委青年科技明星(批准号17 qa1405400)。

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