文摘

快速吸收的脂肪组织移植使结果不满意的临床应用。在当前的研究中,脂肪组织移植和脂肪混合tissue-derived干细胞(对asc)改善保留脂肪组织移植,使脂肪移植的临床结果更加可靠。脂肪组织是单独注射(常规组)或对asc混合注射前(干细胞组)。在两组,脂肪组织是注入的轮廓在层组织到视觉临床与另一侧对称。注射脂肪移植物的体积测量72个小时和6个月后使用b型超声波设备与一个12 MH频率调查。减少注射脂肪的体积百分比,医师满意度(Ph-SCs),和患者满意度(P-SCs)也被记录下来。6个月后,有明显降低脂肪吸收干细胞组比常规组。的意思是医生和患者满意度显著提高干细胞组。没有明显的不利影响被发现在任何病人。显著降低吸收对asc移植由于使用改善传统脂肪移植的临床结果的轮廓畸形的脸。 The current preenrichment strategy is noninvasive, safe and can be applied to other diseases that require major tissue augmentation such as breast surgery. This trial is registered withNCT02494752。

1。介绍

自体脂肪移植是一种经常使用的手术在美容和整形外科手术。脂肪是一种多用途填料治疗脸部轮廓违规行为所带来的先天性疾病,获得疾病、创伤和发育畸形。与其他填料的合成起源,脂肪很容易获得以最小施主能级发病率。此外,它通常是可作为自体,因此没有免疫原性问题。此外,它的柔软和动态特性使得它特别有用在美容和整形外科手术1]。虽然脂肪组织移植是一个著名的技术来正确的轮廓不规则,快速吸收的脂肪在现场的应用程序是一个主要关心病人,以及临床医生(2]。脂肪吸收的速度可能达到90%由于缺氧和缺血环境后移植。临床上,这个不可靠性产生不满意,最后的临床结果不佳,因此,需要多个会话的脂肪移植,使这个过程昂贵和漫长的2,3]。为了提高生存的脂肪组织移植,移植的替代方法是必需的。在当前的研究中,自体脂肪移植与culture-expanded preenriched脂肪tissue-derived干细胞(对asc)加强保留移植嫁接,使临床结果更可靠。

间质血管分数(SVF)的脂肪组织是一个异构包含血细胞的细胞群,成纤维细胞,内皮细胞,对asc和周围的周。对asc研究表明血管生成、抗凋亡、免疫抑制和免疫调节特性,使它们适合临床使用(4]。最近的动物研究表明改善生存和保留移植脂肪的脂肪组织移植和对asc preenriched [5]。如果对asc浓缩的脂肪移植可以减少其吸收率,这种创新的策略可以使脂肪转移软组织扩张更可靠的选择。这绝对可以提高最终的临床结果以较低成本和减少施主能级发病率。

当前研究的目的是评估的影响对asc在脂肪组织移植的病人的生存和保留轮廓畸形的脸。自体脂肪组织是收获、加工和注射单独或混合体外扩大对asc的脸轮廓。减少的体积注射移植,医生满意度(Ph-SCs),和患者满意度(P-SCs)记录。结果表明,与对asc preenrichment显著减少脂肪吸收的网站应用程序和改善传统脂肪移植的临床结果表明Ph-SCs和P-SCs。我们所知,这是第一个研究进行了实际轮廓畸形的病人脸上显示的效果对asc preenrichment的脂肪组织移植。这种技术将打开一个新途径不仅增强轮廓畸形的脸也为其他条件要求等大型组织增强程序乳房重建。

2。材料和方法

这是准实验研究“塑料&重建手术部”和“组织工程和再生医学实验室”生物医学科学系的,爱德华国王医科大学/梅奥医院,拉合尔。37例先天性或后天面部轮廓畸形为连续从2015年9月到2017年9月。以前地区的轮廓畸形患者,皮肤是附着在面部骨骼被排除在外6]。人口统计学和临床数据的患者收集后获取知情同意书。手术前一周,每组患者被建议停止服用阿司匹林,酒精,或任何其他草药药物。研究中使用的协议IRB的机构审查委员会批准的爱德华国王医科大学,拉合尔,巴基斯坦(信# 229 / RC / KEMU)。执行的研究是根据《世界医学协会道德规范(赫尔辛基宣言》),“审判在ClinicalTrials.gov注册(NCT02494752)。两种方法(脂肪移植或干细胞和脂肪移植)是提供给病人。病人同意传统脂肪移植(常规组)接受脂肪收获,准备,和移植当天,当患者给予同意ASC-enriched脂肪移植(干细胞组)接受脂肪收获两次,第一次分离,扩大对asc体外和第二(2 - 3周后)与对asc culture-expanded preenrich脂肪移植。的完整概述研究给出图1。

2.1。脂肪收获和加工

根据病人的欲望和可访问性,脂肪从腹部或大腿的外侧由我们集团[如前所述6]。简单,局部或全身麻醉下,脂肪收获区域渗透着肿起的解决方案组成的0.4%利多卡因和1:1000.000肾上腺素。脂肪是收获使用3毫米,两眼,冲插管Luer-Lok 10毫升注射器。10毫升注射器的柱塞回落只有几毫升在规避不必要的负压吸入,避免脂肪细胞破坏。所需的数量来填补轮廓畸形是收获相应的临床判断的基础上。

2.2。脂肪移植做准备

移植的脂肪组织是由使用巴希尔的方法等。6]。短暂,分离脂肪从液体部分,10毫升Luer-Lok注射器保持垂直(图5 - 10分钟2(一个))。肿起的液体和血液从底部流出。进一步净化从碎片和脂肪油,其余脂肪注射器是通过一个共同的过滤器(图2 (b))。然后用0.9%的生理盐水洗净残留。洗后,纯化脂肪收集10 cc Luer-Lok注射器和被转移到移植(图1毫升注射器2 (c))。

2.3。隔离Tissue-Derived脂肪干细胞(对asc)

对ASC隔离,脂肪组织是在局部麻醉的情况下收获和加工如前所述,我们(6,7]。脂肪组织(20 ml-30毫升)是在无菌条件下收获和转移到认证实验室批准的人类器官移植权威(HOTA)处理对asc和隔离。对asc被酶消化使用孤立和文化扩张良好生产规范(GMP),年级试剂。2周后,对asc被酶消化分离如前所述Choudhery et al。(7]。短暂,lipoaspirate 30分钟0.2%胶原酶IV型(美国σ)消化组织浆。病人血清用于中和胶原酶的活动。细胞悬液是通过70年μm过滤器移除未消化的组织碎片和残骸。过滤后的溶液在1000转离心10分钟4°C获得细胞颗粒。丸是用磷酸盐(PBS)和细胞悬液再次在1000转离心10分钟。完整的细胞培养生长介质,即。,MEM-alpha (Thermo Scientific, USA), supplemented with 1% each of nonessential amino acids, streptomycin/penicillin solution, and 5% autologous serum. The cells were resuspended in complete medium and were plated in 25 cm²培养瓶在37°C / 5%的股份有限公司₂和湿度。24小时后,不依从细胞被丢弃和新鲜的培养基是补充道。媒介改变了每周两次之后,直到细胞汇合的。使胰蛋白酶化、培养的细胞在75厘米²培养瓶。在80% - -90%融合,细胞分离使用trypsin-EDTA和使用血细胞计数器计数。细胞通过一个用于preenrichment脂肪组织移植。在此期间,在显微镜下细胞被定期监控任何类型的污染或形态变化。

2.4。脂肪移植的轮廓畸形的脸

常规组的患者,纯化脂肪收集在10毫升注射器被转移到1 cc注射器(使用双向连接器)移植到受体区域。病人的干细胞群,当天的脂肪移植,脂肪又收获,做好准备,为常规组和纯化如上所述。对asc体外扩大(10⁶每毫升脂肪细胞)与纯化脂肪混合,调到1 cc注射器(图2 (c))。在两组中,脂肪通过1.5毫米钝端插管注射,刺穿边孔使用小切口。脂肪被轻轻地在套管的撤军。脂肪是放在小分数在不同深度软组织从上方的骨膜和移动表面上(8]。临床终点的注脂术是通过视觉与另一侧对称。量的脂肪转移是毫升指出。患者给予静脉注射第一代头孢菌素72小时和出院一周之内口服抗生素。在每月的间隔随访6个月。

2.5。评估

主观和评估对象进行比较的结果在两组移植。 注射脂肪量过程以毫升(ml)所描述的6]。脂肪移植会话的数量和总量的脂肪注射达到临床对称每箱也指出。

2.6。外科医生的满意度和病人满意度的评估

这对临床进行对称(比较影响到不受影响)和整体外观。它是通过临床检查和比较术前和术后六个月(第一个和最后的脂肪移植会议之后)照片(6]。两个整形外科医生(失明组分配)独立评价术后外观用五分制的作为(1)非常不满意(总不对称和严重畸形),(2)不满意(显著的不对称和畸形),(3)既不满意也不满意(明显的不对称和畸形),(4)满意(几乎没有明显的不对称和畸形),和(5)非常满意(没有不对称和正常的外观)。相同的外科医生认为每个病人在间隔。同样,使用相同的五分制,病人被要求评论对称(比较影响到不受影响)和整体外观通过对比术前和术后六个月后(第一个和最后的脂肪移植会议)照片。

2.7。客观的评估

客观的评估,我们进行超声如前所述[612 MH)使用b型超声设备和高频探头(Sonoace X4, Medison)。每个病人都放置在直立位置,一层厚厚的水性凝胶治疗领域的超声波的传播。传感器探头放置在评估网站垂直于皮肤表面。正确的传感器位置决心区分噪声和适当的超声波反射。的线性测量软组织厚度的区域进行治疗。皮下组织的厚度测量在毫米一式三份,和三个读数的平均值用于分析。第一个测量软组织厚度是两组移植后72小时完成的。为了有一个重复测量在随后的检查中,操作员和精确的解剖标志具有里程碑意义的点记了下来不可磨灭的标记,保存数字图像备查。超声是在六个月后重复同样的操作员测量皮下治疗区域的厚度。测量的差异在术后72小时,在六个月后第一个脂肪移植会议是为减少脂肪移植物体积百分比记了下来。

2.8。再接枝于

需要再接枝于受灾地区的评估是基于病人和医生满意度。脂肪移植会议后重复相同的协议在对称的情况下被扭曲了。病人被拍到在每个后续在标准条件下的光,距离,视图和相机。

2.9。并发症

所有的患者观察到可能的并发症,如感染(肿胀和发红的肌肤水嫩,感觉热),擦伤(皮肤变色由于小血管破裂),肿胀(局部治疗区域的扩大由于炎性液体积累),皮肤坏死(皮肤和皮下组织的损失),血肿(异常的血液),血清肿(异常收集的液体),和凹凸不平的肌理(不规则、卵石和粗糙的皮肤表面)(6]。

2.10。统计分析

数据分析使用SPSS 16版。定性变量如性别、病因、脂肪收集站点,手术并发症被表示成比例。定量变量如年龄、病人和医生的评估分数,脂肪注入量在一个过程中,总量的脂肪注入每箱,和减少脂肪移植物体积百分比表示的意思是(SD)。为了比较定量数据,正常使用一个示例测试Kolmogorov-Smirnov测试。我们应用的独立样本 - - - - - -测试( 与正态分布相比)变量和Mann-Whitney测试变量没有正态分布( 是相比)。值≤0.05被认为是显著的。

3所示。结果

两组患者的总人数是37岁。患者的平均年龄 和 年17(81%)和9(56%)的女性在传统和干细胞组,分别。脂肪移植最常见的指标是特发性半面萎缩在10(48%),9例(56%)患者随后先天性颅面矮子在5(24%)和4(25%)、创伤后畸形5例(24%)和2(13%),和postinfective畸形1例(4%),1例(6%)患者在常规和干细胞组,分别。病人接受67脂肪移植会议(51会话21例常规组)和16个会话(每组16个病人的干细胞)的24个月。

没有统计上的显著差异分布根据性别的患者,术前软组织厚度,和平均体积的脂肪转移到每个会话(表1)。然而,有统计上的显著差异在平均年龄的病人的数量和脂肪移植会议在两组(表1)。6个月后,有一个明显的显著降低脂肪吸收百分比减少 干细胞组相比 在传统组(值< 0.001)。图3(一个)显示了超声波测量软组织厚度72小时后,和图3 (b)显示测量注射后6个月。比较两组的平均百分比减少脂肪吸收后六个月1^圣脂肪移植会话被显示在图3 (c)。

意味着病人和医生满意度一直是描绘在图4。是医生的满意度评分的平均值 常规组 干细胞组。同样,意味着病人满意度评分( )常规组较低相比,在干细胞组( )。总的来说,如图4(一)- - - - - -4 (c),有相当高的病人和医生的满意度和ASC-enriched脂肪移植的病人。代表两组病人的照片清楚地表明减少吸收的脂肪富含脂肪组织移植时对asc culture-expanded(图5)。

所有的患者在或手术后严重的并发症;然而,轻微并发症两组中均有可比性的指出。例如,观察术后肿胀在所有程序后,观察和擦伤后36(71%)会议在2 - 3周内解决。收件人网站开发的蜂窝组织炎三种(6%)例定居在两周口服抗生素在两种情况下,在一个案例中,它发展到放电的脓注射部位需要第四clarithromycine基于文化的一个月报告。干细胞组中,最常见的并发症是术后肿胀也解决的所有(100%)的患者中观察到在2 - 3周。只有一个(6%)患者接受网站蜂窝织炎,在两周内解决口服抗生素。擦伤是观察11例(69%)患者。没有一个病人血清肿、血肿或皮肤坏死两组。

4所示。讨论

在目前的研究中,脸部的轮廓畸形的临床治疗结果与常规脂肪移植比较,体外扩大ASC-enriched脂肪移植前瞻性。我们所知,这是第一个研究,进行患者的面部轮廓畸形对asc使用丰富。结果表明,preenrichment对asc的脂肪组织移植可以显著减少脂肪吸收,从而使更好的临床结果的轮廓畸形病人的脸。虽然自体脂肪移植是一种安全有效的技术恢复体积轮廓畸形的脸,重要的吸收是在几项研究包括当前的研究(表1)。这一发现值得注意的是由于这一事实意味着术前软组织厚度、体积的脂肪转移,和软组织厚度72小时后第一个脂肪移植会话两组相似(表1)。病人和医生满意度尤其是面部整形手术有一个关键的角色。在我们的研究中,病人和医生满意度6个月后第一个会话明显高于脂肪移植干细胞组比常规组(图4)。多数患者在常规组经历了不止一个脂肪移植会议由于脂肪吸收的高容量;然而,没有一个病人的干细胞组需要第二个会话(表1)。

自体脂肪移植Neuber报道在1893年已经成为最广泛的接受整形手术软组织扩张,重建和复兴(9,10]。大量的技术细节的自体脂肪移植一直声称优势的一种描述4,11]。多数研究发现没有区别脂肪细胞脂肪的数量从腹部,大腿,侧面,膝盖左右(12]。不同的研究比较收获方法发现更多的可行的组织细胞功能较好的syringe-aspirated脂肪移植。同样,许多研究比较处理脂肪移植的重力和洗涤和离心过滤后显示不影响细胞的生存能力(13]。在当前的研究中,脂肪组织是收获少创伤注射器愿望的方法获得的最大可行的细胞数。收获脂肪组织是最低限度的处理,并迅速处理重力和过滤(图2)。小整除注射在组织层提高长期的细胞存活率。此外,意味着和注射脂肪的总量在单个会话与那些描述在文献[14]。最近评论,脂肪移植的结果由一个多因子的过程显示高度变量保留利率(20%到95%)2,3,14]。我们还发现高度变量减少软组织厚度在常规组(12% - -66%)6个月。然而,有趣的是,在干细胞组,减少软组织厚度(1.06%对12.62%)远远少于常规组(图3)。这个结果的差异可以归因于增加体外扩大对asc的脂肪移植干细胞组(数字3 (c)和5)。在另一项研究中,脂肪富含SVF样品表现出更好的生存和保留15]。相当大的吸收速率的差异强调这一事实对asc SVF包含异构的细胞群包括(16]。此外,对asc的确切数字出现在SVF个别病人和身体之间不同的网站获得lipoaspirate [17]。使用的基本原理对asc是获取一个潜在的更多的更多的再生细胞(对asc) [18]。ASC-enriched脂肪移植显示大量的移植脂肪组织和新成立的结缔组织,减少坏死组织后121天(19]。尽管先前的研究已经使用不同数量的细胞preenrich脂肪组织移植(18,19),在当前的研究中,通过添加10有利的结果⁶对asc每毫升脂肪。这个数字的细胞可以很容易地获得初始段落的细胞。

对asc有能力分化成多种细胞系包括软骨细胞,脂肪细胞,细胞,成骨细胞(20.,21]。对asc也产生不同的secretomes(“血管内皮生长因子”,“基本的纤维母细胞生长因子,”和“肝细胞生长因子”)拥有provasculogenic和免疫调节特性(20.]。各种体内模型分析了对asc的有利影响糖尿病患者的伤口,缺血皮瓣,心肌缺血的复制品22,23]。最近的研究已经确定了ASC-induced neovasculogenesis生存作为主要贡献者的脂肪移植(14,24]。我们建议转移脂肪可能充当天然支架和临时填料对asc立即恢复卷而将开始参与组织再生的多个参数。该模型支持“主机更换理论”,提出了描述脂肪移植后移植物存活(18]。在这项研究中,两个光度评价和容积评估(治疗区域的软组织厚度)进行了使用b型超声[6),无损伤,具有成本效益的,容易在机构和避免辐射10]。在当前的研究中,频率的术后并发症与文献中所描述的那些原则。肿胀是所有患者中观察到定居在3 - 4周。感染管理保守。本研究有一些局限性。这是一个单中心研究限制了其普遍性。此外,患者没有选择随机选择偏见的可能性。我们研究的另一个限制是小样本大小和短期随访6个月。尽管它是不可能确定的长期命运转移脂肪,先前的研究显示逐步减少软组织的厚度在稳定的操作后最初3个月这些利率从术后3到6个月。建议的优越性体外扩大ASC-enriched lipotransfer相对于传统的注脂术应该作进一步的调查。

缩写

对asc:	脂肪干细胞tissue-derived
SVF:	间质血管分数
IRB:	机构审查委员会
GMP:	良好生产规范
HOTA:	人类器官移植的权威
PBS:	磷酸盐
MEM:	最低必要的媒介
Ph-SCs:	医生满意度
P-SCs:	病人满意度。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的结果包括在本文中。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

确认

本研究工作是资助和支持格兰特从爱德华国王医科大学,拉合尔,巴基斯坦。作者感谢他们的同事的评论这个手稿。我们也感谢法伊扎阿齐兹女士为她在实验室日常的帮助。作者感谢阿西夫•哈尼夫先生帮助分析数据。