系统性的扩大CD133输液⁺CD133细胞和扩大⁺细胞衍生EVs治疗缺血性心肌病大鼠AMI模型

文摘

心肌梗死是在所有心血管疾病死亡的主要原因。细胞疗法使用的细胞群富含内皮祖细胞(epc),扩大CD133⁺细胞,有承诺作为治疗药物治疗缺血性梗塞后区域。最近,分泌囊泡膜,包括液和微泡,被认为是新治疗候选人与细胞间和组织沟通的重要角色。扩大CD133⁺细胞能够产生细胞外囊泡(EVs);然而,他们的心脏的影响还是未知数。在目前的研究中,我们评估的有效性的系统性应用扩展CD133⁺CD133细胞和扩大⁺细胞衍生EVs治疗缺血性心肌病在急性心肌梗死(AMI)大鼠模型,研究假设电动汽车,因为他们从干细胞再生信号转移中发挥重要作用的受伤的组织,可能引起一个等于或比扩大CD133更好的治疗反应⁺细胞。我们证明CD133的系统性应用扩大⁺电池和电动汽车在梗塞的老鼠也有类似的影响。一些动物在几个心脏和肾脏每小组显示改进参数分析,但没有显著差异比较时观察组。系统性的路线可能没有有效治疗缺血性心肌病;尽管如此,它可能是一个有益的疗法治疗AMI的副作用如肾脏损害。

1。介绍

心血管疾病(CVD)贡献大约30%的全球发病率和死亡率,因此代表了一个重大的公共健康问题1]。几种类型的心血管疾病,急性心肌梗塞(AMI)仍然是一个主要全球医学问题所导致的冠状动脉闭塞和随后的缺氧缺血性脑损伤(2]。多项研究表明,心脏衰竭可能诱发急性或慢性肾损伤,相反,肾脏疾病本身可能是一个因素严重的心脏损伤。因此,一个精神错乱的心脏功能会导致肾脏疾病,这称为cardiorenal综合症(3]。演示的注入骨骨髓来源干细胞在缔约墙老鼠可以恢复心肌梗塞的区域的损伤和改善心脏功能已经成为一种很有前途的治疗心肌再生和恢复心室收缩性战略(4]。人口的细胞表达CD133标记和富含内皮祖细胞(epc)被认为是高度有效的细胞能够恢复受伤的组织,包括缺血后心肌(5,6]。在过去的几年中,CD133⁺细胞在临床研究旨在评估治疗心肌梗死患者,因此开辟新途径治疗缺血性的领域(5]。在这种背景下,我们组最近报道,移植扩大CD133⁺细胞改善梗塞的心脏和适合的再生血管系统在临床前研究中,展示强大的血管再生潜力(7]。尽管CD133的实际能力⁺细胞融入缺血性组织和促进愈合的促进局部血管生成(5,6,8),一些研究也表明,这些细胞施加有益的影响更有可能间接和依赖他们的旁分泌活动,包括分泌细胞外囊泡(EVs) [9,10]。这些天然纳米脂质双分子层囊泡是细胞间通讯的有效介质,至少部分通过转移独特的蛋白质分子,mrna,小分子核糖核酸和其他非编码rna的母细胞类型(11- - - - - -13]。电动汽车包括等液和微泡(MVs)。液通过胞外分泌释放晚期内体,通常多泡体的直径范围从30到100海里。MVs直接芽从质膜和展览直径从100纳米到1μm。鉴于信号由这些囊泡的多样性水平转移的功能分子,CD133⁺分泌EVs测试作为一个自由细胞疗法在动物模型和已被证明,以保护/修复受伤的组织[14,15]。然而,迄今为止,所有这些研究已经使用电动车隔绝CD133扩大⁺细胞来源于人类脐血心肌缺血的动物模型。在目前的研究中,我们评估的有效性的系统性应用扩展CD133⁺CD133细胞和扩大⁺细胞衍生EVs治疗缺血性心肌病大鼠AMI模型。我们检查假设电动汽车,因为再生信号转移中发挥重要作用的干细胞受伤的组织,可能引起一个等于或比扩大CD133更好的治疗反应⁺细胞。

2。材料和方法

2.1。道德

人类收集脐带Maternidade维克多费雷拉做阿马拉尔(库里提巴、巴拉那河、巴西)。样本获得签署知情同意后提供的病人的法定代表人。本研究回顾和研究伦理委员会和伦理委员会批准的天主教大学的使用动物做巴拉(批准号分别在1366年和763年)。

盲人和完全随机研究比较四组划分如下:对照组(控制):没有执行外科手术或治疗,其目的是建立参数评估在健康动物( );AMI组(车辆):老鼠提交到急性心肌梗死与PBS和治疗( );AMI组(EVs):老鼠进行了急性心肌梗塞和CD133治疗⁺细胞衍生lv ( );和AMI组(CD133⁺):老鼠进行了急性心肌梗塞和治疗细胞( )。

2.2。CD133⁺细胞分离、扩张和鉴定

CD133⁺细胞被孤立和扩大如前所述,我们组(16]。简而言之,单核细胞的隔离(跨国公司)根据Boyum[的方法执行17)、修改使用Histopaque™1.077密度梯度(Sigma-Aldrich,圣保罗,巴西)。内皮祖细胞(CD133⁺配(微)选择使用CD133-coupled磁Miltenyi研究)根据制造商的指示。CD133⁺细胞被镀的密度 细胞每厘米²在培养瓶和生长在补充EBM-2(内皮细胞生长介质)(Lonza Clonetics)。瓶是在湿润孵化器孵化37°C公司为5%₂张力。培养基是改变每3 - 4天,直到细胞达到融合。汇合的时候,贴壁细胞分离使用的浓度0.25% trypsin-EDTA和山肩 细胞每厘米²。实验,细胞之间使用通道6和8。CD133的表型特征⁺细胞进行根据我们之前报道的方法(科雷亚et al ., 2018)。CD133的可行性进行评估⁺细胞EV隔离时,细胞凋亡和坏死化验进行如前所述,我们组(18]。

2.3。孤立的细胞外囊泡

EVs源自CD133扩大⁺从CD133细胞分离获得的条件培养基⁺细胞培养。细胞达到融合后,他们洗两次EBM-2 (Lonza Clonetics)补充2%的边后卫耗尽避免crosscontamination囊泡。孵化24小时后,条件培养基是离心机 五分钟去除细胞碎片,然后离心机 20分钟去除凋亡的身体。电动汽车收藏,浮在表面的细胞培养的离心器 1 h和20分钟在4°C和丢弃,和囊泡然后从底部的管中恢复过来。这个过程进行连续三天,第三天,年底的囊泡在稀释30毫升的PBS和第二超速离心法 为清洁2 h在4°C。最后,CD133的纯化电动汽车⁺细胞培养是resuspended PBS的小卷,之后EV样品的蛋白质含量是决定使用一个量子位®2.0(生命科技™,英杰公司)测定。所有的分数都储存在-80°C到使用。

2.4。透射电子显微镜法

最佳浓度的纯电动汽车来自扩大CD133⁺细胞被加载到300 -网格niquel / formvar-coated网格(电子显微镜科学),1 h(吸收的formvar之后,网格和4%多聚甲醛固定(电子显微镜科学)10分钟。染色,然后在电镜下观察网格以前沉浸在阻断缓冲区(PBS / 2% BSA)一块/透化作用一步30分钟前标签与主在适当的稀释1 h抗体在室温下(1:200 anti-CD63, ab59479 Abcam;1:100 anti-CD105, 555.690, BD生物科学;1:100 anti-CD31, 555.444, BD生物科学)。冲洗后,网格是孵化与特定的抗体结合到15纳米金纳米粒子(25.233 1:20,电镜科学)在室温下了40分钟。网格是后缀,2.5%戊二醛(Sigma-Aldrich) 10分钟,然后染色对比使用2%醋酸双氧铀10分钟。样本检查在一个传输JEOL jem - 1011电子显微镜(JEOL Ltd .)电镜设施(大学联邦德圣卡塔琳娜州(UFSC)和大学联邦做巴拉(UFPR))操作的加速电压80 kV。

2.5。纳米粒子跟踪分析

分析电动汽车的大小分布和数量来自扩大CD133⁺细胞是由同一运营商NanoSight LM10 (NanoSight有限公司)的乐器。扩大CD133⁺细胞衍生EVs被涡流,随后稀释混合particle-free PBS (0.02μ过滤)获得推荐的测量范围内的浓度( 粒子/毫升),相应的从1:稀释50比1:200取决于最初的样品浓度。通过纳米粒子跟踪分析(NTA),粒子大小自动跟踪和基于布朗运动和扩散系数。实验分析了视频捕捉后使用NTA 3.6分析软件脚本控制方式(3 60年代的视频/测量)。获得的结果显示在一个直方图图大小分布的频率。

2.6。的AMI大鼠实验模型

这个动物模型建立了根据我们小组以前描述的方法(19]。短暂麻醉,麻醉诱导前老鼠premedicated 2毫克/公斤/ IM nalbuphine随后感应(~ 4%)和异氟烷麻醉维护(Chiarorn) (~ 2.5%)。围神经的麻醉的3^{理查德·道金斯}4^th,5^th左肋间神经与0.75%利多卡因剂量的3毫克/公斤也开胸之前执行。执行无菌手术技术。第四个左肋间空间的开胸,然后,左冠状动脉被确认和阻挡6.0丝线,从它的起源大约2 - 3毫米,心房之间的左心房和肺动脉的沟。在术后期间,所有的动物都收到nalbuphine(1毫克/公斤/ IM, TID 24 h), meloxicam(5毫克/公斤/ SC,竞购24 h),和enrofloxacin(10毫克/公斤,IM)。

2.7。超声心动图和心电图描记的评估

经胸廓的超声心动图(TTE)进行24 h后AMI(预处理)和扩展CD133后28天⁺CD133细胞或扩大⁺移植细胞来源EV(后处理)由一位经验丰富的专业没有实验的知识群体。左心室超声心动图变量舒张末容积(类别)、收缩末期容积(ESV),和左心室射血分数(LVEF)和测量使用辛普森的方法(20.]。老鼠在LVEF不到45%,表现出心室功能障碍,是包括在这项研究中。在手术后24小时,心电描记法中执行DI, DII, DIII、AVR、AVL, AVF确认和评估梗塞大小确定电轴和病理性Q波迪推导根据Pimentel et al。21]。

2.8。移植细胞和电动汽车

动物治疗AMI后24 h后不久(所有基线的确定超声心动图参数)。细胞或电动车移植或磷酸盐(PBS)管理是由一个在侧尾静脉注射异氟烷麻醉(感应4%和维护1.5 -2%)。进行细胞移植或电动汽车用1毫升含胰岛素注射器 细胞或50μg(对应于 来 电动汽车/扩大CD133的动物)⁺细胞衍生EVs稀释0.6毫升particle-free PBS (0.02μ米过滤)。在汽车集团,同样的注射器充满了0.6毫升的PBS和使用。从麻醉复苏后,老鼠回到家中的笼子里,他们一直在28天在相同条件下描述的部分2。6。28天后,第二生态进行安乐死紧随其后。老鼠被麻醉过量人道安乐死。最初,氯胺酮(100毫克/公斤)与甲苯噻嗪(10毫克/公斤)是由肌内注射。镇静后,动物被放置在一个玻璃感应室充满异氟烷用于诱导麻醉。确认后死亡,每只老鼠尸体剖检。

2.9。心脏和肾脏的组织病理学

安乐死后,老鼠尸体剖检,心脏和肾脏组织病理学分析收获。心脏和肾脏在多聚甲醛固定使用整个动物灌注固定技术。短暂,preperfusion PBS是由灌注针穿过左心室的切口,直到达到升主动脉。PBS是用来冲洗身体,直到液体退出老鼠很明显的血液。此后,4%多聚甲醛被用作固定剂解决洒遍全身。灌注完成当所有肌肉收缩停止,肝脏和肠系膜血管变白,所需的大量的防腐剂已经通过循环系统。心脏和肾脏是用生理盐水洗净和嵌入在一夜之间10%福尔马林固定剂解决方案。formalin-maintained样品在水中清洗,使用一个提升酒精系列脱水,然后嵌入石蜡。心脏和肾脏切片和染色与马森三色的检测胶原蛋白沉积在心肌或他揭示一般组织病理学。分析估计梗死大小、幻灯片使用禅宗2.1 lite检查软件(蔡司)。 For renal injury evaluation, slices were scanned in an Axio Scan Z1 (Zeiss) with a 20x objective and then analyzed using Zen 2.1 Lite software with a 3% increase. Three central areas were randomly selected in the left and right kidney cortex. Renal damage was evaluated using the scoring system (scale 0 to 4) according to Jablonski et al. [22]在肾小球和小管坏死的鉴别。如此规模的,0代表不组织学损伤和4代表严重的急性肾小管坏死。得分进行保存和受损的肾皮质的部分。

2.10。统计分析

多个组的统计分析比较了使用单向方差分析(方差分析)其次是Bonferroni测试。并呈现出正态分布的变量(ESV和产品类别),学生的 - - - - - -测试使用配对样本。没有说明的变量分布常态(LVEF和梗塞大小),非参数Wilcoxon测试被用来比较每组的中位数预处理和后处理。比例精确费雪的检验是用来确定的利率是否发生组肾小管上皮病变的不同。动物死在研究过程中被排除在统计分析。值< 0.05被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。急性心肌梗死大鼠

在大鼠急性心肌梗死(AMI)是常用的模拟人体心室功能障碍导致心脏衰竭。在这项研究中,我们使用一只老鼠模型的心肌梗死冠状动脉左前降枝是阻挡(图1(一))。AMI的感应是成功的在所有28个老鼠,导致大量梗塞的区域视觉观察左心室后左前冠状动脉闭塞。超声心动图记录显示AMI后24 h电轴右偏差和负Q波推导D1(图1 (b))。心电图数据也证实存在心肌梗死(对照组相比显著减少LVEF)以及梗塞大小相似的所有动物在治疗之前,表明首次缺血性损伤组之间无显著差异(图1 (c))。梗塞的心脏组织病理学分析揭示了存在的梗塞区纤维化和强烈的胶原蛋白沉积在左心室的自由墙(看到更多的细节部分3所示。3)。

3.2。扩大CD133的表征⁺CD133细胞和扩大⁺细胞衍生电动汽车

扩张后,CD133的表型⁺在亮场显微镜下细胞群获得endothelial-like形态学观察(图1 (d))。细胞的生存能力是90.31%,表面和胞内的平均百分比标记如下:CD133 18.8%, 10.2% CD34、CD45 0.5%, 1.13% CD14, 100% CD105, CD31 46%, 60.4% CD309 CD146 97.5%, 99.2% vWF(图1 (e))。

评估电动汽车的大小分布和浓度,使用纳米粒子进行跟踪分析。扩大CD133⁺细胞衍生EVs显示异构人口组成的35纳米到800纳米的粒子(图1 (f))。总粒子数恢复 扩大CD133⁺细胞是 。平均而言,每个扩展CD133⁺细胞产生的 电动汽车。透射电子显微镜显示大部分电动汽车30 - 100 nm直径,虽然较大和较小的囊泡也观察(图1 (g)),与NTA结果一致。电动汽车与球形形态和双膜也被TEM,放大图片突出显示(图就是明证1 (g))。染色显示然后TEM与电镜下观察CD133扩大⁺细胞衍生EVs CD31阳性和tetraspanin CD63,表明微泡的存在和液纯化EV示例(图1 (g))。

3.3。扩大CD133的影响⁺CD133细胞和扩大⁺细胞衍生EVs重构和梗塞的心脏的心脏功能

汽车组死亡率25%(2 8)10和11天后观察移植。有趣的是,没有死在那组收到注册扩展CD133⁺CD133细胞或扩大⁺细胞衍生EVs期间的这项研究中,虽然观察两组之间没有明显的统计学差异。

我们以前的工作表明,扩大CD133的心肌内的移植⁺细胞在老鼠和改善心脏功能适用于血管系统的再生(9]。评估更真实和微创治疗方法,我们测试了扩大CD133的静脉移植的疗效⁺电池和电动汽车来自CD133⁺细胞培养的临床前模型的AMI。超声心动图心功能分析进行4周后治疗。结果显示没有统计上显著的增加LVEF的预处理和后处理组收到CD133扩大⁺CD133细胞或扩大⁺细胞衍生的电动汽车。此外,车辆之间没有显著差异观察和治疗组治疗前后(图2)。虽然没有统计上显著的差异观察全球LVEF评估,当每只动物分别进行了分析,表达增加LVEF某些动物接受治疗(CD133扩大⁺细胞或电动车,图2 (b))。在收到扩大CD133的集团⁺细胞衍生电动车,两个八个动物表现出更大程度的提高LVEF,从38.6到54.8 ( )从28.1到45.2 ( ),在收到扩大CD133的集团⁺八个动物的细胞,三个显示LVEF的表达增加,从19.9到34.6 ( ),从25.8到36.5 ( ),从40.3到56.7 ( )。另一方面,我们的研究结果还表明,两只动物从每个治疗组LVEF(表的表达减少S1)。这种行为不是汽车组中观察到,在动物幸存下来没有呈现相同的变化,无论是积极的还是消极的,LVEF。

评估心脏功能和重塑,左心室收缩末期和舒张末期容量的预处理和分析具有重要的意义。收缩末期和舒张末期容量的值显著增加在所有梗塞的组28天具有重要的动物相比,对照组(表1)。

没有观察到显著差异在ESV或产品类别28天后处理中车辆和治疗组(数字3(一个)和3 (b))。然而,该组织接受CD133扩大⁺细胞衍生EVs展出一个小保护收缩末期和舒张末期容量从0.40毫升到0.57毫升,从0.60毫升0.85毫升,分别在汽车集团,这些值的范围从0.39毫升0.71毫升,从0.67到1.0毫升,分别。虽然没有统计上显著的差异观察的全球评估ESV和产品类别在梗塞的组织,当每只动物分别进行了分析,观察轻微下降,ESV收到扩大CD133的两只动物⁺细胞衍生的电动汽车。一种动物显示ESV从0.367毫升下降到0.259毫升( )另一个从0.443毫升到0.36毫升( )。有趣的是,同样的两只动物显示减少ESV也同样显示LVEF(表表达增加S1)。尽管没有减少ESV观察CD133的动物收到扩大⁺细胞,两三个动物展示表达增加LVEF保持类似的预处理和后处理。

梗塞大小的可靠的和可再生的评估是至关重要的在确定心脏衰竭和死亡。在这项研究中,我们使用超声心动图,广泛用于临床分析梗塞大小的测量。超声心动图显示数据没有统计上的显著差异疤痕大小预处理和后处理中内部和梗塞的组织(图4 (b))。然而,尽管没有观察到显著差异的全球评估梗塞大小,两只动物对待CD133扩大⁺细胞衍生EVs显示表达减少梗塞大小,从35.16到19.95 ( )从47.6到25.87 ( )(表S1和图4(一))。值得注意的是,这两种动物也表现出大幅提高LVEF以及减少后处理。有趣的是,三种动物,表现出一种治疗后LVEF扩大CD133表达增加⁺细胞也提出了一个减少梗塞大小,从45到40 ( )。

3.4。CD133体内的影响扩大⁺CD133细胞和扩大⁺在肾损伤细胞衍生EVs梗塞的老鼠

除了梗塞大小,我们寻找肾损伤的证据。多项研究表明,充血性心力衰竭是一种进行性慢性肾损伤的主要原因,相反,慢性肾脏疾病本身就是严重心脏损害的主要因素。在这项研究中,进行组织学分析左和右肾治疗后28天。汽车组,83.3%(5 6)的动物有肾损伤的迹象,就是明证的形成血管充血,肾小管坏死细胞,与肾小管的Tamm-Horsfall (THP)蛋白(数字4 (c)和4 (d))。有趣的是,更少的形态学损伤组中观察CD133接受扩大⁺CD133细胞(62.5%)和扩展⁺细胞衍生电动汽车(37.5%)与对照组(数字4 (c)和4 (d))。值得注意的是,动物表现出一种治疗后LVEF扩大CD133表达增加⁺CD133细胞或扩大⁺细胞衍生电动车也没有表现出相同的动物肾损伤。

4所示。讨论

我们以前异形EVs源自人类的蛋白质含量扩大CD133⁺细胞。基因本体论分析表明,蛋白质也参与各种angiogenesis-related功能,此外,在肾滤过屏障的正常运行,结构和信号功能(18]。为了测试CD133的推定功能扩展⁺细胞和他们的电动汽车,我们进行了临床前研究评估的有效性的系统性应用细胞及其EVs治疗缺血性心肌病大鼠AMI模型。

我们的协议表明,诱导大鼠急性心肌梗死是有效的,相似的形态和功能变化发生在人类心肌梗死后,如前所述[23]。AMI组表现出明显降低ESV LVEF和大幅增加,产品类别,梗塞大小。此外,组织病理学分析显示梗塞的心脏组织病理学特征,类似于那些由他人已报告(24,25]。我们所知,没有先前的研究评估扩大CD133的系统性应用的效果⁺电池和电动汽车来自相同的细胞治疗缺血性心肌病的来源。超声心动图结果显示在左心室功能的恢复没有显著差异在车辆和移植后治疗组。此外,超声心动图显示数据无显著差异在疤痕大小预处理和后处理和梗塞的组。

虽然没有观察到显著差异的全球评估心脏功能和重塑梗塞的团体,值得强调的是,一些动物对待要么扩大CD133⁺CD133细胞或扩大⁺细胞衍生EVs所有心脏和肾脏之间表现出一致的正相关参数进行了分析。三个八个动物对待CD133扩大⁺细胞显示大量增加LVEF还显示没有肾损伤,和一个动物有一个减少梗塞大小。有趣的是,两个八个动物对待CD133扩大⁺细胞衍生EVs显示表达增加LVEF及梗塞面积的减少和肾损伤的缺失。扩大CD133⁺CD133细胞或扩大⁺细胞衍生EVs似乎有潜力改善心脏功能,减少肾损害;然而,似乎剂量调整和/或替代路线需要测试。尽管所有的动物都有 移植前,梗塞模型用于这个研究导致了射血分数差异很大,在所有组从大约20%到45%。

几个临床前研究使用的注射内皮祖细胞(5,26,27]或扩大CD133⁺细胞(7,28)直接进入全球受损的心脏显示改善心脏功能,降低心肌纤维化。汗和同事(29日)表明,老鼠ESC-derived液直接注入MI边境地带有能力提高新血管形成和心肌细胞生存和减少纤维化postinfarction。此外,先前的研究已经表明,EVs心肌内的管理导致心脏功能改善梗塞的心(30.,31日]。虽然直接心脏内的注入干细胞/祖细胞或电动汽车被用于动物实验,试图优化心肌损伤后心脏功能,这种技术被认为是更具有攻击性的做法,可能导致动物死亡。在这方面,其他路线的政府仍然需要探索和测试。在我们的研究中,我们调查了一个系统性的管理协议,它可以很容易地应用于临床研究。我们表明,CD133的系统性应用扩大⁺CD133细胞或扩大⁺细胞衍生EVs,事实上,没有一个适当的治疗缺血性心肌病。

之前的研究表明,系统应用后,EVs倾向于积累主要在肝脏,其次是脾、胃肠道和肺部32,33]。此外,其中的一个研究小组报道差异EV本地化管理皮下注射时,腹腔内,或静脉注射,显示不同的路线系统性应用程序可能会影响电动车的组织分布。我们假设电动汽车由系统性的路线可能会保留在其他器官,心中积累较差。画眉山庄和同事(32)报道,贴上EVs显示更大的特异性受伤的肾脏健康的相比,证明EVs本地化与肾脏疾病的能力。几项研究已经显示证据表明错乱的心脏功能可能诱发急性或慢性肾损伤(3,34]。在我们的研究中,我们观察到65%以上的动物对待CD133扩大⁺细胞衍生EVs没有表现出肾损伤。EVs积累的特异性受伤肾脏及其贫困分布心中或许可以解释为什么在我们的研究中,我们没有观察到相当有益影响的系统性应用心肌梗死后心脏功能恢复。此外,在这项研究中,50μ电动汽车是由系统性应用程序的g。我们推测,实现对心脏有益的影响通过系统性的路线可能需要更高剂量的囊泡,甚至多个应用程序。

5。结论

总之,我们表明,CD133的系统性应用扩大⁺电池和电动汽车在梗塞的老鼠也有类似的影响。一些动物在几个心脏和肾脏每小组显示改进参数分析,但没有显著差异比较时观察组。系统性的路线可能没有有效治疗缺血性心肌病;尽管如此,它可能是一个有益的疗法治疗AMI的副作用如肾脏损害。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

作者的贡献

及Addeli B.B. Angulski和路易斯Guilherme a Capriglione同样这项工作。

确认

作者感谢所有的员工而言de Tecnologia Celular (PUCPR)和西班牙卡洛斯恰加斯(Fiocruz-PR)实验室和行政支持。我们尤其感谢碱液Miyague她在超声心动图分析和图像采集技术援助;米菲Marcon电子显微镜的样品制备和图像采集;达妮埃拉Boccasanta,她Forti弗朗西斯科,塞吉奥Adriane Bezerra·德·莫拉(UFRN)肾脏组织学分析的技术支持。这项工作是支持Fundacao南洋杉(批准号1005/2013),MCTI / CNPq / CT-Saude / CT-Biotecnologia /女士/ SCTIE /十进数字(批准号457344/2013-0),和MCTI / CNPq /女士(批准号404656/2012-9)。及本研究的部分经费(Addeli B.B. Angulski奖学金)由Coordenacao de Aperfeicoamento de Pessoal de含量Superior-Brazil(披肩)金融代码001。

补充材料

补充信息包含一个与LVEF的所有测量获得的Excel文件,产品类别,ESV和梗塞大小预处理和后处理,可以发现本文在线。(补充材料)

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