低氧诱导因子的化学活化可逆减少肌腱干细胞增殖,抑制其分化,并维护细胞未分化

文摘

成人干细胞治疗方法为组织再生提出了好几年。然而,成人干细胞通常数量有限,很难扩大体外,他们通常与段落往往会迅速失去效力,区分和变得衰老。培养干细胞在减少氧气紧张(21%以下)已被建议作为一个工具来增加细胞增殖,但许多研究报道相反的效果。特别是,细胞缺氧反应似乎非常特定的干细胞类型。然而,很明显,在这个过程中一个主要角色是由缺氧诱导因子(HIF),主调节器的细胞对缺氧的反应,从而影响细胞代谢和分化。在此,我们报告一个化学活化的低氧诱导因子在人类减少肌腱干细胞增殖和抑制其分化的可逆和剂量依赖性的方式。这些结果支持缺氧的概念,通过激活诱导因子,起着至关重要的作用在干细胞处于未分化状态保存在“缺氧利基市场”出现在组织他们居住在迁移之前更多的含氧地区愈合受损组织。

1。介绍

干细胞疗法已承诺在组织再生是一个有吸引力的方法,尤其是在发现成年组织拥有一个水库的祖细胞可以在体外分离和培养(1]。然而,已经遇到的主要障碍之一是相对较少的成体干细胞存在于组织和他们的非常有限的增殖能力。此外,干细胞可以很容易地与病人,他们通常会迅速失去其效力与段落体外,区分和变得衰老。一个可能的方法来克服这些限制是培养细胞在低氧含量(21%以下)2- - - - - -5]。然而,保持正确的体外培养条件下减少氧气的紧张关系是相当复杂的。事实上,它需要特殊的低氧室,以避免对细胞持续缺氧/复氧循环在介质的变化。此外,结果往往是相互矛盾的,因为许多作者称抑制和促进细胞增殖即使在中度缺氧(5 - 10%)6- - - - - -9]。显然,一个混杂因素是成体干细胞是非常异构类不同的细胞亚型,特定组织。此外,隔离技术和体外培养条件严重影响他们的表型。因此,我们可以推测,这些矛盾在文献中很可能由于不同的响应每个干细胞亚型缺氧。尽管如此,在减少氧气的紧张关系,这已是不争的α亚基缺氧诱导因子(HIF-1α)是稳定的(10),这将导致信号级联大大影响干细胞代谢和分化11- - - - - -14)(图1(a))。低氧诱导因子的激活机制的一个有趣特性是它的稳定性依赖于家庭的抑制prolyl羟化酶(博士),需要氧气工作;因此,他们的活动是减少饥饿(图下氧气1(b))。有趣的是,它已经表明,化学博士活动的抑制,使用例如2-oxoglutarate类似像dimethyloxalylglycine (DMOG),可以在激活诱导模拟缺氧的影响甚至在正常氧张力(图1(c))。因此,可以设想在培养基中添加这些抑制剂精细调节干细胞的增殖和分化,避免了复杂的氧张力的控制。

在此基础上,在这项工作中,我们研究了HIF-1的影响α稳定,化学抑制获得的博士学位,在人类肌腱干细胞,我们最近孤立首次从人类肩袖肌腱(15,16]。

2。方法

2.1。细胞隔离和文化

人类肌腱干细胞(及)隔绝冈上肌肌腱期间收集的标本关节镜肩袖修复,根据之前报道过程15]。协议研究是医院伦理委员会批准授权号码2642(2011年9月19日)。冈上肌肌腱(4 - 8毫米宽)的样本收集从6患者签署知情同意后,保存在HypoThermosol在4°C (BioLife解决方案),并分别处理在24 h,根据下面描述的过程。样本用磷酸盐(PBS) (Euroclone)洗净,切成小块,与胶原酶消化90分钟I型(3毫克/毫升;沃辛顿)和dispase(4毫克/毫升;在PBS Gibco,生活技术)37°C。离心后,细胞颗粒resuspended在以下培养基:α最小的基本介质(αmem) (Sigma-Aldrich)补充了2毫米谷氨酰胺(Euroclone), 1% antibiotic-antimycotic混合物(Euroclone)和20% (v / v胎牛血清(的边后卫)(HyClone热费希尔科学)。细胞被过滤单元过滤器(70毫米;BD猎鹰)和镀在150厘米²菜肴。贴壁细胞培养在37°C在湿润的气氛中5%的有限公司₂。每2 - 3天中被改变。所有实验细胞通道隔离(后四到六17]。

2.2。流仪结果

在PBS及分离和收集2×10的浓度⁶细胞/毫升。与屏蔽解决方案特定的绑定网站被封锁(50% 1 x公安局,50%的边后卫)在室温下30分钟(RT)。细胞与人类抗体染色:PE-conjugated CD105, PE-conjugated CD90、FITC-conjugated CD73,共轭CD45, PerCP-eFluor 710 -共轭CD34和FITC-conjugated HLA-DR, 10分钟4°C。同形像抗体分别作为控制。细胞样本分析和Navios流式细胞分析仪(贝克曼库尔特)配备Kaluza软件(贝克曼库尔特)。

2.3。化学活化HIF-1α与DMOG

DMOG由溶解在H₂啊,作为制造商的建议的协议(西格玛奥德里奇)。24小时后播种,细胞培养96 h与不同浓度的正常生长介质DMOG(0.01毫米、0.1毫米和1毫米)或在正常生长介质没有DMOG(控制)。媒介是改变每48 h在所有的实验中,除非指定。研究可逆性的影响DMOG细胞生存能力和扩散能力,multilineage分化的潜力及有关测试在DMOG去除培养基。这个目的,细胞首先培养在不同浓度的DMOG 96 h,如上所述,洗两次与PBS、分离,然后受移植者,生长在正常没有DMOG介质。

2.4。免疫印迹分析

控制及有关或处理不同浓度的DMOG 96 h和冷PBS冲洗两次,收获,细胞溶解在里帕缓冲区包含蛋白酶和磷酸酶抑制剂。蛋白质浓度测定的皮尔斯™BCA蛋白质化验设备(热费希尔科学),遵循制造商的协议。蛋白质(30μg)被煮沸5分钟的样品变性缓冲区(6.5毫米Tris-HCl, pH值6.8,2% SDS (w / v),10%甘油(v / v),5% 2-mercaptoethanol (w / v),0.01%溴酚蓝(w / v))和10%的变性聚丙烯酰胺凝胶上分离条件。随后被转移到蛋白质硝化纤维膜通过electroblotting使用100伏2小时。然后,一夜之间,膜被孵化的Tris-buffered盐水(TBS: 10毫米Tris-HCl, pH值7.4,150毫米氯化钠),0.1% (v / v)渐变20 (TBS-Tween)含有5% (w / v)奶粉或5% (w / v)牛血清白蛋白(BSA);Sigma-Aldrich)阻断缓冲区。墨迹孵化了一种主要抗体特定HIF-1α(细胞信号技术)稀释1:1000在适当的屏蔽解决方案三个小时在室温下。膜与TBS-Tween然后洗四次10分钟,然后用适当的二次孵化抗体辣根过氧化物酶(合)共轭1小时在室温下。在TBS-Tween四洗后,乐队的蛋白质被发现使用ECL检测设备(热费希尔科学)所描述的制造商。数据计算相对蛋白表达水平正常化核纤层蛋白A / C,这是作为内部控制。

2.5。细胞形态及增殖

细胞被镀在浓度为2.6×10³细胞/厘米²在正常生长培养基培养,在DMOG(0毫米,0.01毫米,0.1毫米,1毫米),如上所述。细胞形态学检查用相差显微镜(Axiovert 40节能灯,蔡司,配有Moticam 2300相机,Motic)在每个时间点评估DMOG治疗及表型的影响。细胞生长曲线是准备与Trypsin-EDTA收割后的解决方案与伯爵夫人(Sigma-Aldrich)通过计算细胞细胞计数器(表达载体,生活技术),根据制造商的过程。细胞生存能力被台盼蓝染料排斥试验确定。所有分析都在为每个样本一式三份。

2.6。MTT测定细胞生存能力

及镀在12-well板块(1×10⁴细胞/)和不同浓度的处理DMOG或独自生长培养基中培养。在每一个时间点(0,24、48和72小时),两个小时前集合,重组3 - (4 5-dimethylthiazol-2-yl) 2, 5-diphenyl-2H-tetrazolium溴化(MTT)(在PBS 5毫克/毫升;Sigma-Aldrich)添加到培养基(最终体积的10%)。后两个小时孵化在37°C,细胞被添加一个数量的细胞溶解MTT增溶解等于原始培养基体积,轻轻移液完全溶解MTT甲瓒晶体。MTT还原spectrophotometrically测量的波长570 nm。

2.7。细胞生存能力分析由RealTime-Glo™

细胞生存能力评估使用RealTime-Glo MT细胞生存能力分析(Promega) 48和96 h DMOG治疗后(0毫米,0.01毫米,0.1毫米,1毫米)根据制造商的协议。发光信号测量48和96小时使用维克多X3™Multilabel板读者。简单地说,太细胞生存能力衬底和NanoLuc®酶都是稀释1:1000年在培养基最终成交量为100μL /。细胞被播种的密度在96 - 500细胞/板。数据规范化治疗控制。

2.8。由CellTox细胞毒性试验方法

CellTox™细胞毒性试验(Promega)被用来调查DMOG治疗的细胞毒性效应,改变膜完整性的检测措施,由于细胞死亡发生。简单,细胞被播种在96孔板的浓度500细胞/好,孵化48和96 h DMOG(0毫米,0.01毫米,0.1毫米,1毫米)和测试根据制造商的协议。每次孵化后,同等体积的100μL CellTox缓冲区包含1:500稀释CellTox绿色染料添加到每个好,室温下孵化15分钟。信号测量使用维克多™X3 Multilabel板读者的激发波长485 - 500纳米和520 - 530海里排放过滤器。数据规范化治疗控制。

2.9。细胞生存能力的膜联蛋白V /π流仪测定

细胞生存能力是衡量流式细胞术对细胞培养96 h与不同浓度的正常生长介质DMOG(0、0.01、0.1, 1毫米)使用膜联蛋白V-FITC凋亡检测设备(eBioscience),根据制造商的协议。

简单,贴壁细胞使胰蛋白酶化,洗在PBS温柔颤抖,resuspended的浓度 细胞/ 200毫升μL特定绑定的缓冲区(10毫米玫瑰/氢氧化钠,pH值7.4;140毫米氯化钠,2.5毫米CaCl₂)包含5μL的膜联蛋白V-FITC。孵化后10分钟在黑暗中在室温条件下,细胞被洗在PBS, resuspended在190年μL具有约束力的缓冲区,然后沾10μL propidium碘(20μg / mL)。样本立即获得与Navios流式细胞分析仪(贝克曼库尔特)和分析使用Kaluza 1.2软件(贝克曼库尔特)。

2.10。RNA提取和实时PCR

总RNA分离使用试剂盒®试剂(Ambion,生活技术),和1μg中提取RNA的反向转录cDNA使用iScript互补脱氧核糖核酸合成装备(BioRad),根据制造商的指示。实时PCR进行的96孔板10 ng cDNA作为模板,0.2μM引物,1 x权力SYBR®绿色PCR反应混合液(应用生物系统公司,生活技术)20μL最终体积每口井使用StepOnePlus™实时PCR系统(应用生物系统公司)。mRNA水平的血管内皮生长因子(VEGF), Nanog同源框(Nanog) octamer-binding转录因子4 (OCT4) Kruppel-like因子4 (KLF4) Tenascin C,胶原蛋白I型alpha - (COL1A1)、过氧物酶体proliferator-activated受体-γ(PPAR -γ)、脂蛋白脂肪酶(LPL),人类的碱性磷酸酶(ALP), SRY-box9 (SOX9)进行评估。核糖体蛋白S14系列(S14系列)被用来看家基因定量分析(表1)。

放大协议:初始变性在95°C 3分钟紧随其后40 5秒每个周期在95°C和30秒57°C。相对量化的目标基因进行了一式三份,分析使用2^−ΔΔCt方法和归一化到相应S14系列值。

2.11。脂肪形成的分化

细胞被镀在3×10的浓度⁴细胞/厘米²和培养DMEM-low葡萄糖(Sigma-Aldrich), 10%的边后卫(HyClone热费希尔科学),4毫米谷酰胺(Euroclone),和1% antibiotic-antimycotic混合物(Euroclone)的间充质干细胞脂肪生成工具(微孔)21天,根据制造商的指示。脂肪形成的媒介改变了每隔一天。在21天,油红O解决方案(微孔)是用于染色派生的脂肪细胞的脂质滴,根据制造商的程序。显微照片都获得一个Axiovert 40显微镜(蔡司)配有Moticam 2300摄像头(Motic)。脂肪形成的标记包括PPAR -的mRNA的表达γ和LPL也在天7和21日评估,实时PCR,如上所述[17]。

2.12。成骨分化

细胞被镀在3×10的浓度⁴细胞/厘米²和成骨诱导培养介质,它是构成DMEM-low葡萄糖(Sigma-Aldrich), 10%的边后卫(HyClone热费希尔科学),4毫米谷酰胺(Euroclone),和1% antibiotic-antimycotic混合物(Euroclone),补充了0.1μ50 M地塞米松,μg / mL L-ascorbic acid-2-phosphate, 10毫米β甘油磷酸酯(所有试剂从Sigma-Aldrich) 17天。成骨的媒介改变了每隔一天。在17天,茜素红溶液(微孔)是用于检测钙沉积在派生的成骨细胞,根据制造商的指示。显微照片都获得一个Axiovert 40显微镜(蔡司)配有Moticam 2300摄像头(Motic)。高山的表达成骨的标志是由实时PCR天5和17,如上所述[17]。

2.13。Chondrogenic分化

Chondrogenic分化进行了使用StemPro软骨形成分化工具包(技术),根据制造商的指示。简单地说,细胞在生长介质resuspended 1.6×10的浓度⁷,5μL液滴被播种在多井盘井的中心。两个小时后,软骨形成感应媒介提供的工具包是补充道。chondrogenic媒介改变了14天每隔2 - 3天。阿尔新蓝的解决方案(Bio-Optica)被用来染色酸性黏多糖在分化过程中形成的。chondrogenic标记的表达SOX9由实时PCR天5和14,如上所述[17]。

2.14。统计分析

使用GraphPad棱镜v 6.0执行统计分析软件(GraphPad软件Inc .)。数据是典型的结果从三个复制实验的每个六patient-derived细胞系,表示为平均值±标准偏差(SD)。Shapiro-Wilk正常测试是用来评估样本的正态分布。

单向方差分析(方差分析),其次是双尾,成对的学生的t以及或Mann-Whitney测试根据数据分布的特点,适用的地方,用于多个比较。线性对比被用来评估的变化和增加剂量的DMOG平均值。显著性水平是设定在值低于0.05。

3所示。结果

3.1。在HIF-1 DMOG的影响α稳定在及

化学激活HIF-1α,及培养下normoxia DMOG的存在在不同浓度(0.01毫米、0.1毫米和1毫米)96 h,而控制细胞培养的正常生长介质没有DMOG(图2)。分析HIF-1α核本地化通过免疫印迹显示因子被激活DMOG剂量依赖性的方式(图2(一个))。同样,分析VEGF主要HIF-1之一α目标基因,显示一个表达式增加实时PCR DMOG的浓度成正比的培养基(图2 (b))。细胞形态学分析相差显微镜检查并没有发现明显的差异控制和DMOG-treated及有关(图3(一个)96 h DMOG治疗)。然而,DMOG在1毫米浓度诱导细胞痛苦,液泡的形成和细胞增殖逮捕在培养板(图可以观察到3(一个))。DMOG对细胞增殖的影响的评估显示轻微,虽然不显著,增加细胞治疗时0.01毫米DMOG(图3 (b))。另一方面,存在剂量依赖的相关性降低可能是最初观察到0.1毫米72 h后治疗,达到明显降低51%,72.6%,和77.7%的1毫米DMOG 48, 72,和96 h,分别与控制细胞(图3 (b))。这些结果证实了MTT细胞代谢活动分析,DMOG剂量依赖性降低可以观察到在所有时间点(24、48和72 h),达到减少53.1%在1毫米,而控制细胞(图3 (c))。同样,RealTime-Glo™细胞生存能力测试显示DMOG摄入量有关信号减少,除了0.01毫米DMOG显示显著增加96 h与控制细胞(图3 (d))。细胞毒性测试显示没有显著差异DMOG浓度在48和96 h,除了0.01毫米DMOG显示一个小,但统计学意义,降低细胞毒性在96 h。细胞死亡分析膜联蛋白V测试显示没有明显的细胞凋亡检测DMOG浓度(图3 (f))。

3.2。HIF-1的影响α在具备干细胞及稳定

评估DMOG的影响及具备干细胞,干细胞标记物的表达NANOG, OCT4、KLF4是由96 h后实时PCR DMOG治疗0.01毫米,0.1毫米,1毫米和相比控制细胞(图4(一))。结果显示一个显著的趋势增长的mRNA水平NANOG, OCT4、KLF4,控制细胞相比,这是成正比的浓度DMOG(红色的趋势线,图使用4(一))。Tenascin C和COL1A1肌腱标记的mRNA水平测量的实时PCR及暴露于不同浓度(0.01毫米、0.1毫米和1毫米)DMOG 96 h。结果显示一个显著的趋势减少肌腱的mRNA水平标记,这是成正比的浓度DMOG(红色的趋势线,图使用4 (b))。特别是Tenascin C和COL1A1的表达显示轻微,虽然不明显,增加细胞0.01毫米DMOG处理时,控制细胞相比。另一方面,显著减少,浓度依赖性,可以观察到0.1毫米和1毫米DMOG,达成8.1——2.1倍减少Tenascin C和COL1A1,分别在1毫米DMOG浓度(图4 (b))。

3.3。HIF-1的影响α上稳定及分化

评估HIF-1的影响αmultipotency的激活及有关,细胞诱导分化成骨细胞,脂肪细胞,内层和适当的分化培养基的培养他们17日21日和28天,分别在DMOG在不同浓度(0、0.01、0.1,1毫米),如(图的方法5)。脂肪形成的分化是由油红O染色显示定性评估的数量的减少细胞内脂滴,这是成正比的DMOG培养基(图5(左列)。成骨分化的定性评估是茜素红染色,这表明,钙沉积的量明显减少,在剂量依赖性的方式,当细胞培养在DMOG的存在,而控制细胞(图5,中央列)。chondrogenic分化被阿尔新蓝染色定性评估,显示出沉积的细胞外基质蛋白在细胞培养DMOG的存在,特别是在1毫米,而控制细胞(图5,右列)。HIF-1的影响α激活脂肪形成和骨也通过确定脂肪形成的标记的mRNA水平定量分析了PPAR -γ和LPL、成骨的标记高山和chondrogenic标记SOX9的实时PCR(图6)。结果显示所有标记的显著下降,DMOG使用(图的浓度成正比6)。特别是,PPAR -γ显示2.8,31.7,和59.7倍表达减少,而LPL显示2.3,10.1,和109.2倍下降为0.01毫米,0.1毫米,和1毫米DMOG治疗,分别与控制细胞(图6)。成骨分化的DMOG抑制,所揭示的一个重要的高山减少DMOG使用(图的浓度成正比6)。特别是高山显示3.7,15.1,和386倍减少细胞孵育0.01毫米时,0.1毫米,1毫米DMOG,分别与控制细胞(图6)。

最后,它是测试是否HIF-1的影响α激活可以恢复。这个目的,及生长在0.01毫米,0.1毫米,1毫米DMOG 96 h,收获,山肩在同一细胞浓度,然后在正常生长培养基培养(图7(一))。细胞被收获,每24小时4天计算,播种后24小时开始。细胞生长分析表明,细胞使用0.01毫米和0.1毫米DMOG可以恢复正常的增殖能力,类似于控制细胞,当转回正常的生长培养基(图7 (b))。另一方面,细胞治疗1毫米DMOG并未完全从DMOG恢复治疗,至少在实验的时间,因为他们表现出明显减少扩散在72 h,达到减少58.4%在96 h,而控制细胞(图7 (b))。MTT检测证实细胞生长实验,揭示DMOG治疗效果切换后72小时内可以恢复细胞正常生长介质,除了1毫米DMOG,仍然显示显著减少在72 h(大约36.2%),而控制细胞(图7 (c))。然后,HIF-1的可逆性的影响α激活细胞分化是确定。这个目的,细胞首先进行预处理与DMOG 96 h,紧随其后的是96 h在正常生长介质恢复正常增殖,然后分化DMOG-free媒介。脂肪形成的分析,成骨的chondrogenic分化标记显示DMOG之间没有显著性差异进行预处理和控制细胞浓度( )(数据7 (c)和7 (d))。

4所示。讨论

成体干细胞被发现存在于缺氧组织隔间通常被称为“干细胞利基市场。“虽然微环境和分子信号领域中只有部分阐明,现在接受的是,一个低氧张力有助于保持未分化状态的祖细胞(18,19]。此外,它已被证明,在低氧培养干细胞体外孵化器模仿”,“至少部分和细胞似乎保持他们的力量没有区分18,20.]。然而,正如已经报道介绍,低氧对成体干细胞的影响似乎非常相关的变量和细胞亚型,它也被报道,它可以减少干细胞增殖和分化。显然,找到一种放大干细胞而不损及自己的能力是至关重要的细胞治疗应用所需的数字。沿着这条线,使用低氧孵化器已被证明是可行的,和药物模拟缺氧的可能性代表一个简单的和具有成本效益的替代。化学模拟缺氧利基有几个优势培养细胞在低氧:(a)的药物很容易大规模合成,(b)的方法不需要特别设计和昂贵的孵化器,(c)药物剂量可以很容易地调整和控制,和(d)治疗可以随时暂停。另一方面,控制氧张力可能非常麻烦,尤其是当细胞培养时间延长和媒体需要取代没有暴露细胞普通氧气张力。这个只能与特别设计的和昂贵的培养腔,不常用在大多数实验室或研究医院。实际上,大多数研究在缺氧条件下执行正常的孵化器与氮罐;因此,细胞不断暴露于低/高氧的周期。不幸的是模拟缺血/再灌注条件下维持干细胞,这可能是有害的,因为他们可以刺激他们的分化,凑巧的是,例如,心脏梗塞后(21]。

在此基础上,有这么多矛盾的结果,很难想出一个概貌。然而,很明显,在缺氧,任何干细胞激活一个共同的响应机制,这主要是受低氧诱导因子。特别是,HIF-1α低氧张力下被激活,已被证明在干细胞分化发挥关键作用[11,18]。特别是,HIF-1的激活α已表现出抑制干细胞分化(3,22]。此外,激活HIF-1α众所周知,提高对凋亡细胞防御机制(23- - - - - -26]。干细胞疗法,这是另一个关键问题是大多数注射细胞通常会死亡,因为他们必须生存在一个充满敌意的环境,并试图到达受损组织。事实上,通过激活HIF-1预处理干细胞α注射后被证明能增加他们的生存,最终获得更好的再生结果(27,28]。因此,在这项研究中,我们测试了HIF-1的影响α成人肌腱干细胞激活,我们最近与肌腱套冈上肌肌腱(15]。这个组织很缺氧,血管浸润不良的成年人,这可以解释,至少部分,其愈合能力有限。在HIF-1有更好的控制α激活,我们决定用药理调节方法在不同浓度使用DMOG,允许方便地调整HIF-1α表达式。我们预期,在这项研究中,我们发现肌腱干细胞培养的DMOG减少扩散能力和所使用的效果与浓度成正比。这是在协议与其他报告成体干细胞培养缺氧(下29日,30.]。实际上,倾向,虽然不显著,对扩散增加可以观察到非常低的DMOG浓度(0.01毫米),这也是与其他文献报道一致,表明中度缺氧可以刺激干细胞增殖,而极端缺氧诱发他们退出细胞周期和进入静止状态9]。尽管如此,我们发现DMOG对细胞增殖的影响是可逆的,当细胞可以恢复其增殖能力一旦分子从培养基中删除。我们还发现干细胞标记NANOG OCT4、KLF4稍微调节DMOG补充和增加DMOG浓度成正比。此外,tendon-specific标记减少DMOG治疗期间,支持认为化学诱导缺氧能保持干细胞未分化状态。此外,DMOG影响肌腱干细胞分化成骨细胞和脂肪细胞也被评估。结果表明,微分HIF-1时受阻α被激活的DMOG,抑制DMOG使用的浓度成正比,支持认为干细胞存在于组织缺氧利基市场,HIF-1哪里α被激活和分化受到抑制,直到细胞迁移到更含氧的地区。实际上,文学在这个问题上很有争议的。事实上,虽然一些报告显示直接增加hypoxia-activated分化标记在体外分化的间充质干细胞(29日,31日- - - - - -34),其他报告显示明显减少分化(3,18,22,30.,35- - - - - -40]。事实上,虽然一般的概念是一个更原始的干细胞应该给更好的再生效果,可以认为一个更定向造血干细胞比一个不成熟的人更容易区分,特别是当比较不同干细胞祖细胞分化时间相同。事实上,在这个阶段,我们不能排除DMOG预处理细胞,当他们表现出更高的干细胞标记物的表达,可以更有效的在体内受损组织再生。

5。结论

总之,在这项研究中,我们发现HIF-1的化学活化α减少人类肌腱干细胞增殖,增加干细胞标记物的表达,减少他们的承诺向肌腱表型。这些影响是可逆的DMOG删除从培养基。此外,DMOG分化培养基中可逆地抑制干细胞分化。进一步的研究来测试DMOG预处理是否有利影响体内在肌腱干细胞再生能力正在发生在我们的实验室。

缩写

高山:	碱性磷酸酶
COL1A1:	胶原蛋白I型alpha -
DMOG:	Dimethyloxalylglycine
HIF-1α:	缺氧诱导因子- 1α
KLF4:	Kruppel-like因子4
LPL:	脂蛋白脂肪酶
NANOG:	Nanog同源框
OCT4:	Octamer-binding转录因子4
博士:	低氧诱导因子prolyl羟化酶
PPAR -γ:	过氧物酶体proliferator-activated受体-γ
S14系列:	核糖体蛋白S14系列
SOX9:	SRY-box9
VEGF:	血管内皮生长因子。

信息披露

作者仅负责内容和论文的写作。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

所有作者都阅读和批准最终提交的手稿。

确认

这部分工作由格兰特(Fondi线2,Tipologia B)生物医学科学系的的健康,米兰大学、米兰、意大利。

补充材料

补充图1:特征及流式细胞术。流仪分析抗原CD34、CD45、HLA-DR, CD73, CD90、CD105。山峰的特定抗原所示绿色山峰的各自同形像控制红色所示。(补充材料)

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