水飞蓟(gydF4y2BaSilybum marianumgydF4y2Ba)复合Silibinin抑制Cardiomyogenesis胚胎干细胞通过干扰血管紧张素ⅱ的信号gydF4y2Ba

文摘gydF4y2Ba

水飞蓟(gydF4y2BaSilybum marianumgydF4y2Ba(l)复合silibinin Gaertn)可能是一个血管紧张素ⅱ1型(的抑制剂gydF4y2Ba_1gydF4y2Ba)受体表达分化胚胎干细胞(ES)细胞,参与cardiomyogenesis的规定。在目前的研究中,这是证明silibinin治疗减少自发收缩心肌病灶的数目和心脏细胞区域从ES细胞分化以及收缩频率和频率的钙(CagydF4y2Ba^{2 +gydF4y2Ba})飙升。相比之下,血管紧张素ⅱ(Ang II)治疗刺激cardiomyogenesis以及收缩和CagydF4y2Ba^{2 +gydF4y2Ba}飙升的频率,废除silibinin的存在。细胞内钙gydF4y2Ba^{2 +gydF4y2Ba}Angⅱ瞬变引起的大鼠平滑肌细胞没有受损silibinin治疗,排除在复合行为的可能性gydF4y2Ba_1gydF4y2Ba受体。Angⅱ处理激活细胞外signal-regulated激酶1/2 (ERK1/2) c-Jun NHgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba终端激酶(物)和p38增殖蛋白激酶(MAPK)通路在拟胚体,废除silibinin预处理。总之,我们的数据表明,silibinin抑制cardiomyogenesis ES细胞通过干扰和第二信号的下游gydF4y2Ba_1gydF4y2Ba受体。gydF4y2Ba

1。介绍gydF4y2Ba

Silibinin是水飞蓟素的药物最重要的化合物含有不同flavonolignans和是一个从水飞蓟提取物(gydF4y2BaSilybum marianumgydF4y2Ba(l)Gaertn。,一个steraceae) [1gydF4y2Ba]。的药理作用silibinin主要归因于其王亚南和抗癌特性gydF4y2Ba2gydF4y2Ba]。然而,silibinin一直也证明是心血管系统的药物活性。在这方面,它已被证实能发挥心血管属性,例如,isoproterenol-induced心脏肌细胞损伤后(gydF4y2Ba3gydF4y2Ba,gydF4y2Ba4gydF4y2Ba]或doxorubinin-mediated毒性(gydF4y2Ba5gydF4y2Ba]。此外,silibinin降低血压和postocclusion心律失常的发生率在自发性高血压大鼠,并表明这种化合物可能是有益的,当用于高血压急性心肌梗死患者(gydF4y2Ba6gydF4y2Ba]。水飞蓟素表现出显著的抗高血压活性在DOCA盐高血压模型(gydF4y2Ba7gydF4y2Ba]。在麻醉开胸猫,silibinin降低舒张压的幅值和持续时间和产生明显抑郁的心脏收缩性(gydF4y2Ba8gydF4y2Ba),这表明silibinin影响心脏的血流动力学特性。gydF4y2Ba

中药物活性的机制silibinin心到目前为止不知道。最近,建议silibinin可以作为血管紧张素受体1拮抗剂(gydF4y2Ba_1gydF4y2Ba)因为它抑制Ang II-mediated CagydF4y2Ba^{2 +gydF4y2Ba}信号在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞overexpressinggydF4y2Ba_1gydF4y2Ba受体(gydF4y2Ba9gydF4y2Ba]。的生理影响和二世在成年人的心是到目前为止未充分调查。心肌细胞表达在gydF4y2Ba_1gydF4y2Ba以及gydF4y2Ba_2gydF4y2Ba受体(gydF4y2Ba10gydF4y2Ba]。在培养心肌细胞gydF4y2Ba_1gydF4y2Ba受体被证明调解细胞凋亡(gydF4y2Ba11gydF4y2Ba)或促进肥大(gydF4y2Ba12gydF4y2Ba,gydF4y2Ba13gydF4y2Ba),根据实验条件,在受体亚型的表达模式。gydF4y2Ba

肾素-血管紧张素系统aldosteron(老城)可能是适当的胚胎发生的关键。组件老城的许多组织中高度表达在胚胎发育期间。在gydF4y2Ba_1gydF4y2Ba受体表达下调出生后不久,而在gydF4y2Ba_2gydF4y2Ba受体是调节,显示一个潜在的作用gydF4y2Ba_1gydF4y2Ba在细胞/组织分化过程中胚胎发生和潜在的作用gydF4y2Ba_2gydF4y2Ba在成人器官功能(gydF4y2Ba14gydF4y2Ba]。在胎儿绵羊的心肌细胞,Angⅱ刺激增生性的增长(gydF4y2Ba15gydF4y2Ba),这表明Angⅱ参与胎儿心脏的增长。在胚胎干细胞,Angⅱ可以调节葡萄糖吸收(gydF4y2Ba16gydF4y2Ba),支持的观念和II可能在胚胎发生在能量代谢中发挥作用。值得注意的是,Angⅱ已经证明刺激cardiomyogenesis [gydF4y2Ba17gydF4y2Ba和平滑肌分化gydF4y2Ba18gydF4y2Ba胚胎干细胞。在区分ES细胞衍生拟胚体,gydF4y2Ba_1gydF4y2Ba受体表达已经在心脏细胞的早期阶段的承诺。此外,除了胰岛素样生长因子(IGF)受体gydF4y2Ba_1gydF4y2Ba受体表达已被证明是存在于人类心脏干细胞(gydF4y2Ba19gydF4y2Ba),从而概述和第二信号的影响心脏祖细胞增殖分化和/或。gydF4y2Ba

在目前的研究中,我们调查的影响silibinin cardiomyogenesis胚胎干细胞。我们的数据表明,silibinin抑制心肌细胞分化和收缩频率。值得注意的是,silibinin废除Ang II-mediated procardiogenic效果和降低CagydF4y2Ba^{2 +gydF4y2Ba}飙升的频率没有干扰和II受体功能。总之,我们的数据表明,silibinin干扰Ang II-mediated信号通路的抑制增殖作用蛋白激酶(MAPKs)的下游gydF4y2Ba_1gydF4y2Ba受体。gydF4y2Ba

2。材料和方法gydF4y2Ba

2.1。材料gydF4y2Ba

Silibinin-C-2gydF4y2Ba ,gydF4y2Ba3-dihydrogen琥珀酸二钠盐(Legalon SIL)是一个慷慨的礼物梅达制药GmbH & Co . KG(坏的小礼帽,德国)。药物的物质如下:silibinin-C-2gydF4y2Ba3-dihydrogen琥珀酸,528.5毫克(对应476毫克mono - dihydrogensuccinate钠盐(高效液相色谱))相当于350毫克的silibinin。药物物质含有70毫克菊粉(USP)作为赋形剂。Angⅱ、FGF-2 L-NAME, LY294002从Sigma-Aldrich购买(德国慕尼黑)。Eicosapentanoic酸(EPA)是从Tocris生物科学(德国威斯巴登)。gydF4y2Ba

2.2。细胞培养的胚胎干细胞和胚状体的形成gydF4y2Ba

小鼠胚胎干细胞(CCE)行种植在mitotically灭活支线层主要小鼠胚胎成纤维细胞(从Amsbio购买,阿宾顿,英国)Iscove的基础培养基(Biochrom,柏林,德国)补充15% heat-inactivated (56°C, 30分钟)胎牛血清(FCS) (Sigma-Aldrich), 2毫米谷氨酰胺,(PAA、Colbe、德国),100年gydF4y2BaμgydF4y2BaM 2-mercaptoethanol (Sigma-Aldrich), 1% (v / v) NEA不必要的氨基酸原液(Biochrom), 1毫米NagydF4y2Ba^+gydF4y2Ba丙酮酸(Biochrom), 0.4%青霉素和链霉素(Biochrom),和1000 U /毫升白血病抑制因子(生活)(默克密理博,达姆施塔特,德国)在湿润环境中含有5%的股份有限公司gydF4y2Ba_2gydF4y2Ba在37°C,通过每2 - 3天。贴壁细胞酶分离使用trypsin-EDTA 0.05%磷酸盐(PBS)(热费希尔科学、沃尔瑟姆,妈,美国)和播种密度3·10gydF4y2Ba^6gydF4y2Ba细胞/毫升250毫升硅化转轮烧瓶(Fernwald CellSpin, Integra生物科学,德国)包含125毫升Iscove中补充的如上所述,但是缺乏生活。24小时后,125毫升中添加给最后一个250毫升的体积。旋转瓶介质在20 r.p.m搅拌。使用搅拌器系统(Integra生物科学)。每1440°旋转方向改变。每天125毫升细胞培养基是交换。gydF4y2Ba

2.3。免疫组织化学gydF4y2Ba

作为主要的抗体,鼠标单克隆抗-gydF4y2BaαgydF4y2Ba辅肌动蛋白抗体(Abcam,剑桥,英国)(稀释1:100)是使用。拟胚体固定在冰冷的甲醇为20分钟−20°C和用磷酸盐(PBS)含0.01% Triton x - 100 (PBST)。阻塞与非特定的绑定进行60分钟在室温下以10% heat-inactivated FCS (AppliChem,达姆施塔特,德国)溶解在PBST。拟胚体随后被孵化一夜之间在4°C主要抗体(稀释1:100)溶解在PBST补充FCS为10%。之后洗了三次拟胚体和PBST reincubated 1 h与Alexa萤石在黑暗中在室温下647只羊anti-mouse免疫球蛋白二次抗体(美国杰克逊ImmunoResearch实验室、西树林、PA)稀释1:100年PBST FCS包含10%。与PBST洗涤三次后,组织存储在PBST直到检查。gydF4y2Ba

2.4。免疫印迹分析gydF4y2Ba

蛋白质提取进行了洗后拟胚体在PBS和赖氨酸里帕裂解缓冲(50毫米Tris-HCl (pH值7.5),150毫米氯化钠,1毫米EDTA (pH值8.0),1毫米甘油磷酸盐,0.1% SDS和1%诺乃清洁剂p 40)补充了蛋白酶抑制剂鸡尾酒(PXBioVisioN,汉诺威,德国)和磷酸酶抑制剂在冰鸡尾酒(Sigma-Aldrich) 20分钟。样本离心机,享年24700岁gydF4y2BaggydF4y2Ba10分钟4°C颗粒碎片。确定后使用洛瑞蛋白质测定蛋白质含量,20gydF4y2BaμgydF4y2Ba克蛋白质样品在70°C煮10分钟,在页面的前女友分开预制凝胶(4 - 12%)(Lonza,科隆,德国)和转移到PVDF膜的伊势亚SureLock Mini-Cell污点模块(英杰公司)为90分钟180毫安。膜被封锁(wt /卷)5%干脱脂奶粉Tris-buffered盐水和0.1%渐变(TBST)在室温下60分钟。孵化的主要抗体是在一夜之间在4°C。使用初级抗体phospho-ERK (Thr202 / Tyr204), phospho-38 (Thr180 / Tyr182), phospho-JNK (Thr183 / Tyr185),和裂解半胱天冬酶3 (Asp 175)(细胞信号技术欧洲,法兰克福,德国)。主要vinculin或抗体gydF4y2BaβgydF4y2Ba肌动蛋白(Sigma-Aldrich),管家蛋白,用于吸去的标准化。与0.1% TBST洗涤后,细胞膜是孵化与辣根过氧化物酶(合)共轭二次抗体(稀释1:1000)(Abcam,剑桥,英国)在室温下60分钟。这个污点被开发使用一种增强化学发光(ECL)解决方案产生的化学发光信号。量化,在免疫印迹蛋白质乐队的密度图像,利用收购Peqlab凝胶文档系统(VWR国际,达姆施塔特,德国),被ImageJ评估(gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba]。最后的量化反映了蛋白质的相对量的比例每个目标蛋白质带各自的家务。gydF4y2Ba

2.5。细胞内钙的录音gydF4y2Ba^{2 +gydF4y2Ba}浓度gydF4y2Ba

细胞内钙gydF4y2Ba^{2 +gydF4y2Ba}被记录在单个心肌细胞收缩。单细胞的准备工作是通过酶消化7-day-old拟胚体为30分钟37°C PBS包含2毫克/毫升胶原酶B(罗氏,曼海姆,德国)。分离单个细胞被镀到gelatin-coated封面滑落24-well细胞培养板(他一一Bio-One GmbH, Frickenhausen,德国)和培育Iscove中补充的FCS为15%。文化的24小时后,细胞无血清培养系统装载在1gydF4y2BaμgydF4y2BaM Fluo-4 / AM(技术)30分钟。随后,封面都转移在新鲜细胞无血清培养基的孵化室共焦激光扫描显微镜(Bensheim徕卡SP2, aob,徕卡,德国)。荧光激发了488海里,发射被记录在500 - 550海里。采样率是2帧/ s。单个细胞的荧光发射是评估通过使用共焦图像分析软件的设置。gydF4y2Ba

2.6。统计分析gydF4y2Ba

统计分析,GraphPad InStat统计软件(GraphPad软件公司,拉霍亚,CA)是使用。数据给出平均值±标准差(美国)gydF4y2BangydF4y2Ba表示的数量与独立的ES细胞培养实验进行。在每个实验中,至少20文化对象进行了分析,除非另有指示。学生的gydF4y2BatgydF4y2Ba以及未配对数据和单向方差分析应用适当的统计分析。的值gydF4y2Ba 被认为是显著的。gydF4y2Ba

3所示。结果gydF4y2Ba

3.1。抑制Cardiomyogenesis ES细胞和分化的心肌细胞的收缩性gydF4y2Ba

检查silibinin分化的心肌细胞的影响,拟胚体治疗从第三天到第十天与不同浓度的silibinin (1gydF4y2BaμgydF4y2Ba10米,gydF4y2BaμgydF4y2Ba米,20gydF4y2BaμgydF4y2Ba50米,gydF4y2BaμgydF4y2Ba米)。从7天到第十天,心脏收缩焦点的数量,大小的gydF4y2BaαgydF4y2Ba-actinin-positive心脏地区,收缩频率进行评估。是观察silibinin治疗剂量依赖性降低收缩焦点(图的数量gydF4y2Ba1(一)gydF4y2Ba)的大小gydF4y2BaαgydF4y2Ba-actinin-positive细胞区域(图gydF4y2Ba1 (b)gydF4y2Ba),收缩频率(图gydF4y2Ba1 (c)gydF4y2Ba)。详细调查时间的心脏地区,收缩频率的下降10天大的胚状体和20具尸体被孵化gydF4y2BaμgydF4y2Ba米silibinin和收缩频率的下降是评估。这是观察到的1 h内孵化收缩频率发生明显放缓,进一步降低8 h(图gydF4y2Ba1 (d)gydF4y2Ba)。排除的可能性silibinin诱导细胞凋亡在拟胚体,裂解caspase-3评估7天后孵化20或50gydF4y2BaμgydF4y2BaM silibinin。是证明silibinin不诱导细胞凋亡的实验条件下,本研究(补充图gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

3.2。Silibinin对血管紧张素II-Induced Cardiomyogenesis和收缩频率gydF4y2Ba

之前的研究表明,Angⅱ刺激cardiomyogenesis胚胎干细胞(gydF4y2Ba17gydF4y2Ba]。此外,最近的一项研究表明,silibinin可能充当Angⅱ受体1(在gydF4y2Ba_1gydF4y2Ba)拮抗剂gydF4y2Ba9gydF4y2Ba]。由于数据的研究证明,silibinin下降的cardiomyogenesis ES细胞和宫缩的频率,我们调查是否silibinin干扰和II-induced cardiomyogenesis和收缩频率。描述silibinin的影响和II-mediated cardiomyogenesis ES细胞,心脏收缩焦点的数量计算细胞培养的7天14天没有或silibinin的存在。很明显,Angⅱ(1gydF4y2BaμgydF4y2Ba米)增加心脏焦点的数量,这是完全钝化在coincubation silibinin (20gydF4y2BaμgydF4y2Ba米)(图gydF4y2Ba2(一个)gydF4y2Ba)。此外,我们评估的大小gydF4y2BaαgydF4y2Ba-actinin-positive细胞地区14天证明Angⅱ明显增加心脏细胞区域,这是完全废除在silibinin的存在(图gydF4y2Ba2 (b)gydF4y2Ba)。调查是否收缩频率受silibinin Ang II的处理,我们计算每分钟宫缩的频率。我们发现,收缩频率明显增加和II的处理与未经处理的控制,而silibinin (20gydF4y2BaμgydF4y2Ba米)显著降低收缩频率。预培养与silibinin废除增加收缩频率达到Angⅱ(图gydF4y2Ba2 (c)gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

3.3。Silibinin对Ca的影响gydF4y2Ba^{2 +gydF4y2Ba}振荡对血管紧张素ⅱ的治疗gydF4y2Ba

自发收缩,心肌细胞动作电位有节奏的Ca相关联gydF4y2Ba^{2 +gydF4y2Ba}振荡。由于我们的数据表明,Angⅱ治疗刺激cardiomyogenesis胚胎干细胞,我们调查和II的处理是否会影响心脏细胞的功能。为了实现这一目标,合同拟胚体(细胞培养的第7天)开始分离,标以CagydF4y2Ba^{2 +gydF4y2Ba}敏感的荧光染料Fluo-4, 8天,细胞内CagydF4y2Ba^{2 +gydF4y2Ba}振荡后被记录在单个心肌细胞的不同时间孵化(200年代、600年代和1500年代)与Angⅱ(1gydF4y2BaμgydF4y2Basilibinin(20米)gydF4y2BaμgydF4y2Ba米),或两者的结合。很明显,silibinin治疗Ca的频率下降gydF4y2Ba^{2 +gydF4y2Ba}峰值(图gydF4y2Ba3gydF4y2Ba(b)和gydF4y2Ba3gydF4y2Ba(e))比未经处理的控制数据gydF4y2Ba3gydF4y2Ba(一)和gydF4y2Ba3gydF4y2Ba(e))。相比之下,飙升的增加频率观察和II的处理(数据gydF4y2Ba3gydF4y2Ba(c)和gydF4y2Ba3gydF4y2Ba(e))。然而,当与silibinin Angⅱ应用,Ca的刺激gydF4y2Ba^{2 +gydF4y2Ba}飙升的频率被废除,这表明silibinin干扰Ang II-mediated信号通路(数字gydF4y2Ba3gydF4y2Ba(d)和gydF4y2Ba3gydF4y2Ba(e))。gydF4y2Ba

3.4。Silibinin对盎II-Induced CagydF4y2Ba^{2 +gydF4y2Ba}在大鼠平滑肌细胞的反应gydF4y2Ba

在CHO细胞overexpressing以前的报告gydF4y2Ba_1gydF4y2Ba建议silibinin受体可能是一个gydF4y2Ba_1gydF4y2Ba受体拮抗剂抑制盎II-mediated CagydF4y2Ba^{2 +gydF4y2Ba}反应(gydF4y2Ba9gydF4y2Ba]。检查这个假设,大鼠平滑肌细胞,这是众所周知的表达gydF4y2Ba_1gydF4y2Ba受体(gydF4y2Ba21gydF4y2Ba),暴露在Angⅱ(1gydF4y2BaμgydF4y2Ba米)没有或silibinin (20gydF4y2BaμgydF4y2Ba米)(图gydF4y2Ba3gydF4y2Ba(f))。这是观察到Angⅱ提高CagydF4y2Ba^{2 +gydF4y2Ba}即使在silibinin的存在,这表明silibinin并不影响gydF4y2Ba_1gydF4y2Ba受体的功能,但可能会干扰Ang II-mediated信号通路的下游gydF4y2Ba_1gydF4y2Ba受体。盎II-induced CagydF4y2Ba^{2 +gydF4y2Ba}响应不能抑制silibinin浓度高达100gydF4y2BaμgydF4y2Ba(补充图gydF4y2Ba2gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

3.5。ERK1/2 Silibinin抑制Ang II-Mediated激活,物和p38gydF4y2Ba

自从silibinin并不影响Ang II-mediated CagydF4y2Ba^{2 +gydF4y2Ba}反应,我们认为它可能会干扰下游信号级联。之前因为它已经表明,Angⅱ激活ERK1/2物,p38区分胚胎干细胞(gydF4y2Ba17gydF4y2Ba),我们调查是否silibinin (20gydF4y2BaμgydF4y2Ba米)将取消激活MAPK在治疗与Angⅱ(1拟胚体gydF4y2BaμgydF4y2Ba米)。实际上,silibinin治疗6-day-old拟胚体有效地废除了Ang II-mediated激活ERK1/2(图gydF4y2Ba4(一)gydF4y2Ba),p38(图gydF4y2Ba4 (b)gydF4y2Ba)和物(图gydF4y2Ba4 (c)gydF4y2Ba)作为评估使用phosphospecific抗体。这些数据证实了我们的假设silibinin干扰和第二信号下游的gydF4y2Ba_1gydF4y2Ba受体。gydF4y2Ba

3.6。影响Silibinin FGF-2和EPA-Induced Cardiomyogenesis ES细胞gydF4y2Ba

治疗区分ES细胞与FGF-2 [gydF4y2Ba22gydF4y2Ba)或ω- 3多不饱和脂肪酸EPA (gydF4y2Ba23gydF4y2Ba刺激cardiomyogenesis就得以证实。调查silibinin是否会阻止其他代理的刺激效果的cardiomyogenesis ES细胞,治疗拟胚体从第三天到第十天的分化与FGF-2 (10 ng / ml)和EPA (50gydF4y2BaμgydF4y2Ba米)没有或silibinin (20gydF4y2BaμgydF4y2Ba米),自发收缩心脏疫源地的数量评估(数字gydF4y2Ba5(一个)gydF4y2Ba和gydF4y2Ba5 (b)gydF4y2Ba)。我们的数据表明,silibinin完全抑制刺激的cardiomyogenesis FGF-2(图gydF4y2Ba5(一个)gydF4y2Ba)。相比之下,刺激cardiomyogenesis通过环保局不能阻止在coincubation silibinin(图gydF4y2Ba5 (b)gydF4y2Ba)。在进一步的实验中,我们调查是否干扰信号通路,即。,phosphoinositide 3-kinase PI3-K or nitric oxide (NO) which have been previously shown to be important in silibinin-driven cellular changes [24gydF4y2Ba),将阻止cardiomyogenesis silibinin的抑制效果。这些实验的结果(图gydF4y2Ba5 (c)gydF4y2Ba)显示,确实抑制PI3-K LY294002 (5gydF4y2BaμgydF4y2Ba米)废除了anticardiomyogenic silibinin甚至cardiomyogenesis刺激所产生的未经处理的控制水平。此外,抑制内皮没有合酶(以挪士)部分废除的不利作用的cardiomyogenesis silibinin ES细胞。gydF4y2Ba

4所示。讨论gydF4y2Ba

之前的研究表明,血管活性的激素和II刺激cardiomyogenesis [gydF4y2Ba17gydF4y2Ba]以及平滑肌细胞分化[gydF4y2Ba18gydF4y2Ba胚胎干细胞。此外,最近的一项研究证明,silibinin可能充当gydF4y2Ba_1gydF4y2Ba受体拮抗剂(gydF4y2Ba9gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

本研究的数据表明,silibinin剂量依赖性抑制cardiomyogenesis ES细胞。此外,silibinin减速Ca的频率gydF4y2Ba^{2 +gydF4y2Ba}峰值在分化的心肌细胞。调查是否silibinin cardiomyogenesis和心脏细胞的功能的影响是由于盎II-mediated信号通路的抑制,我们调查silibinin治疗是否会废除cardiomyogenesis实现的刺激和II区分ES细胞的治疗。与吴的数据证实et al。gydF4y2Ba17gydF4y2Ba),我们观察到的刺激cardiomyogenesis孵化后Angⅱ。此外,Ang II的处理增加了心脏的收缩频率领域从胚胎干细胞分化和Ca的频率gydF4y2Ba^{2 +gydF4y2Ba}峰值在分化的心肌细胞。cardiomyogenesis以及增加的刺激gydF4y2Ba^{2 +gydF4y2Ba}飙升的频率实现与Angⅱ完全废除在cotreatment silibinin,支持二认为silibinin干扰和信号。先前的研究的吴et al。gydF4y2Ba17gydF4y2Ba和郑et al。gydF4y2Ba18gydF4y2Ba]建议的影响和二世在心肌和平滑肌细胞分化是通过在介导gydF4y2Ba_1gydF4y2Ba受体,因为特定的gydF4y2Ba_1gydF4y2Ba受体拮抗剂洛沙坦废除了观察效果。值得注意的是,silibinin讨论作为一个gydF4y2Ba_1gydF4y2Ba受体拮抗剂在CHO细胞稳定转染的人类gydF4y2Ba_1gydF4y2Ba受体(gydF4y2Ba9gydF4y2Ba]。因此,我们调查silibinin是否会废除盎II-mediated CagydF4y2Ba^{2 +gydF4y2Ba}反应在平滑肌细胞是众所周知的表达gydF4y2Ba_1gydF4y2Ba受体(gydF4y2Ba25gydF4y2Ba]。有趣的是,这是观察到silibinin无法抑制CagydF4y2Ba^{2 +gydF4y2Ba}幽默反应和二世即使在高(100gydF4y2BaμgydF4y2Ba米)浓度。因此,本研究的数据反驳的参与gydF4y2Ba_1gydF4y2Ba受体抑制由silibinin至少在生理浓度Angⅱ(1gydF4y2BaμgydF4y2Ba米)用于我们的实验。gydF4y2Ba

如果在gydF4y2Ba_1gydF4y2Ba受体活性和钙gydF4y2Ba^{2 +gydF4y2Ba}信号不受影响,下游silibinin可能干扰信号级联。老鼠新生儿心肌细胞中描述之前,Angⅱ激活ERK1/2, p38,和物,即磷酸化p38和物的依赖活性氧(ROS)生成(gydF4y2Ba26gydF4y2Ba]。在目前的实验研究中,silibinin显著地抑制ERK1/2, p38,和物活动比未经处理的控制,而MAPK观察刺激和II的处理。根据我们的假设,silibinin完全废除MAPK家族的所有成员的刺激和二世,这表明复合干扰MAPK信号级联的下游gydF4y2Ba_1gydF4y2Ba受体。此外,silibinin FGF-2 procardiomyogenic效应减弱,应该会因为FGF-2信号有几个跨界车和第二信号,包括MAPK通路的激活。相比之下,silibinin未能废除cardiomyogenesis EPA-induced刺激,表明环保局激活信号通路是有别于Angⅱ和MAPK信号激活。最近的数据从我们的团队gydF4y2Ba24gydF4y2Ba)表明,silibinin增加一氧化氮(NO)生成和激活内皮没有合酶。值得注意的是,抑制没有代L-NAME部分逆转cardiomyogenesis silibinin的不利影响。此外,抑制PI3-K逆转silibinin效应,甚至刺激cardiomyogenesis高于未经处理的控制水平。PI3-K是众所周知的激活以挪士生成没有(gydF4y2Ba27gydF4y2Ba]。因为没有众所周知作为活性氧自由基清除剂(gydF4y2Ba28gydF4y2Ba),它可能认为对MAPK silibinin活动的抑制作用可能是由于其没有浓度提高组织的能力。之前的其他数据显示,silibinin保护H9c2从氧化应激,抑制phenylephrine-induced肥大心肌细胞,可能通过镇压ERK1/2 phenylephrine-induced磷酸化的激酶(gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba),是指向同一个方向。此外,silibinin的财产作为自由基清除剂已被验证在几项研究[gydF4y2Ba24gydF4y2Ba,gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba,gydF4y2Ba31日gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

老城已经产生了对心脏的影响深度的发展(gydF4y2Ba32gydF4y2Ba]。在人类中,所有组件的老城表达在胚胎发育早期阶段(每次30 - 35天的妊娠)在不同的器官,这表明Ang II可能发挥作用在各种organotypic细胞的生长和分化gydF4y2Ba33gydF4y2Ba]。虽然三淘汰赛gydF4y2Ba_1gydF4y2Ba,在gydF4y2Ba_{1 bgydF4y2Ba},在gydF4y2Ba_2gydF4y2Ba受体是可行的和肥沃的,缺乏在gydF4y2Ba_1gydF4y2Ba亚型与萎缩性改变心肌,减少冠状动脉流量,减少左心室收缩压(gydF4y2Ba34gydF4y2Ba,gydF4y2Ba35gydF4y2Ba]。最近,它已经概述了抗高血压药物的孕妇与先天性心脏病的风险增加。这是治疗的情况下gydF4y2BaβgydF4y2Ba阻断剂以及肾素-血管紧张素系统阻断剂的使用(gydF4y2Ba36gydF4y2Ba]。水飞蓟的种子以及他们的药物活性成分经常用作膳食草药补充剂主要是肝脏解毒。由于本研究的数据表明,silibinin抑制心脏胚胎干细胞的分化和影响和II-mediated信号级联,孕妇应该避免使用的。gydF4y2Ba

缩写gydF4y2Ba

Angⅱ:gydF4y2Ba	血管紧张素ⅱgydF4y2Ba
在gydF4y2Ba1gydF4y2Ba:gydF4y2Ba	血管紧张素ⅱ1型gydF4y2Ba
CagydF4y2Ba2 +gydF4y2Ba:gydF4y2Ba	钙gydF4y2Ba
赵:gydF4y2Ba	中国仓鼠卵巢gydF4y2Ba
DOCA:gydF4y2Ba	去氧皮质酮乙酸酯gydF4y2Ba
发射极耦合逻辑:gydF4y2Ba	增强化学发光gydF4y2Ba
以挪士:gydF4y2Ba	内皮没有合酶gydF4y2Ba
环保局:gydF4y2Ba	Eicosapentanoic酸gydF4y2Ba
ERK1/2:gydF4y2Ba	细胞外signal-regulated激酶1/2gydF4y2Ba
FCS:gydF4y2Ba	胎牛血清gydF4y2Ba
FGF-2:gydF4y2Ba	纤维母细胞生长因子2gydF4y2Ba
合:gydF4y2Ba	辣根过氧化物酶gydF4y2Ba
物:gydF4y2Ba	C-Jun NHgydF4y2Ba2gydF4y2Ba终端激酶gydF4y2Ba
IGF:gydF4y2Ba	胰岛素样生长因子gydF4y2Ba
MAPK:gydF4y2Ba	增殖蛋白激酶gydF4y2Ba
没有:gydF4y2Ba	一氧化氮gydF4y2Ba
PBS:gydF4y2Ba	磷酸盐gydF4y2Ba
老城:gydF4y2Ba	肾素-血管紧张素系统aldosterongydF4y2Ba
ROS:gydF4y2Ba	活性氧物种。gydF4y2Ba

数据可用性gydF4y2Ba

没有数据在当前研究已发表。gydF4y2Ba

的利益冲突gydF4y2Ba

作者没有利益冲突声明。gydF4y2Ba

确认gydF4y2Ba

这项工作得到了奖学金的e·侯赛因·阿里的高等教育和科学研究、镇的大学,伊拉克以及卓越集群心肺系统(ECCPS)(德国研究基金会)。gydF4y2Ba

补充材料gydF4y2Ba

补充图1:silibinin效应在区分细胞凋亡诱导ES细胞。拟胚体治疗从3到10天的分化与silibinin (20、50gydF4y2BaμgydF4y2Ba米)和裂解半胱天冬酶3表达评估通过免疫印迹(gydF4y2Ba )。gydF4y2BaβgydF4y2Ba肌动蛋白作为加载控制。n。,not significant. Supplemental Figure 2: effect of preincubation (60 min) with silibinin (100 μgydF4y2Ba米)和II-induced CagydF4y2Ba^{2 +gydF4y2Ba}瞬态在成年大鼠平滑肌细胞。gydF4y2Ba(gydF4y2Ba补充材料gydF4y2Ba)gydF4y2Ba

引用gydF4y2Ba

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