标志”src=

干细胞国际
PDF
干细胞国际/2018年/文章

研究文章|开放获取

体积 2018年 |文章的ID 8632950 | https://doi.org/10.1155/2018/8632950

于钱黄、红岩徐、吴羌族鑫Liu Chengchen Lufei,秀秦许,新福, ”ESCs STAT3-Inducible鼠标:一个模型来研究STAT3在ESC维护和谱系分化”,干细胞国际, 卷。2018年, 文章的ID8632950, 13 页面, 2018年。 https://doi.org/10.1155/2018/8632950

ESCs STAT3-Inducible鼠标:一个模型来研究STAT3在ESC维护和谱系分化

于钱黄,1,2 支徐,1,3 羌族吴,1,4 鑫刘,2 Chengchen Lufei,2 秀秦许,5 和 新福1,2,6

1生物化学、勇厕所林医学院,新加坡国立大学,8医疗开车,新加坡

2癌症科学研究所的新加坡,新加坡国立大学,14医疗开车,新加坡

3重点实验室的热带和亚热带渔业资源使用和培养农业部、珠江水产研究所、中国水产科学院,510380年广州,中国

4中药质量研究国家重点实验室的,澳门科技大学,704房间,块H,加拉卡斯围长,氹仔、澳门

5干细胞和再生医学研究所医学大学,厦门大学,厦门,福建361100年,中国

6生物学系,南方科技大学学苑大街1088号,瞿南山,深圳史,518055年广东盛,中国

学术编辑器:雅各布·h·汉娜
收到了 2018年1月12
修改后的 2018年5月22日
接受 2018年5月31日
发表 04年9月2018年

文摘

研究表明STAT3在胚胎干细胞维持自我更新至关重要(的ESCs)和调节ESC分化。然而,仍然有缺乏直接证据STAT3 ESCs函数和胚胎发生,因为本构STAT3基因敲除(KO) E6.5-E7.5老鼠胚胎是致命的,之前在早期发展可以评估潜在的功能作用。因此,在这项研究中,建立了两个诱导STAT3 ESC线,包括STAT3基因敲除(InSTAT3 KO)和pSTAT3过表达(InSTAT3 CA)使用Tet-on诱导系统中STAT3的表达可以通过强力霉素(阿霉素)严格控制刺激。通过基因分型结果,删除STAT3等位基因检测InSTAT3 KO ESCs后24小时内阿霉素的刺激。免疫印迹还显示,pSTAT3和STAT3蛋白水平显著降低在InSTAT3 KO ESCs居多的升高InSTAT3 CA ecs阿霉素的刺激。同样,发现STAT3-null ESCs会影响ESCs的分化为中胚层和心脏血统。综上所述,本研究的结果表明,InSTAT3 KO和ESCs InSTAT3 CA可能提供一种新的工具来澄清的直接目标STAT3在ESC维护和它的作用,这将促进机制的阐述,STAT3维护ESC多能性和调节ESC分化在哺乳动物胚胎发生。

1。介绍

信号传感器和转录激活3 (STAT3)属于统计和家人是唯一重要的早期胚胎发展以来STAT3零老鼠被发现在E6.5 E7.5(胚胎致死1]。随后,STAT3的组织功能已经被充分研究过使用Cre-loxP复合系统由离散子在特定组织解决STAT3在哺乳动物器官形成的关键作用。组织基因打靶表明STAT3功能在各种生理活动,包括伤口愈合在角质细胞,乳房退化,再生肝、神经元细胞生存,发展Th17和T细胞增殖,cytoprotection adenoviral期间呼吸道上皮细胞的感染(2- - - - - -8]。此外,它已经表明STAT3是一个著名的转录因子参与各种各样的生物过程,如胚胎干细胞多能性维护、胚胎发生,心脏保护、癌症和免疫1,9- - - - - -12]。

STAT3是一个重要的调停人的下游白血病抑制因子(生活)在维护ESC多能性。研究已经证明,STAT3激活是至关重要的维持ESC自我更新(13- - - - - -15]。在缺乏生活的情况下,本构激活STAT3足以抑制小鼠ESC分化(15]。通过条件主动STAT3系统,发现STAT3激活足够维持自我更新的ESCs [15]。然而,目前尚不清楚如何下游目标制药业/ JAK / STAT3信号发挥着卓越的作用在维护ESC多能性相互作用主监管机构的ESCs的多能性因素,也就是说,Oct4, Nanog, Sox2 [16,17]。直到最近,STAT3据报道,它直接调节Oct4和Nanog转录ESCs维持多能性和万能。击倒ESCs导致大幅削减Oct4 STAT3的表达。此外,STAT3直接绑定到远端增强剂的Oct4 Nanog和积极调节Oct4 Nanog维持多能性的ESCs [18]。相比之下,它曾被观察到,STAT3的中断会导致ESC分化(13,19]。STAT3的表达显性负突变体使用的诱导启动子的ESCs破坏由生活的ESCs的自我更新维护和促进分化(13,14]。

除了维护ESC自我更新和多潜能,STAT3还实现了一个角色在胚胎发生和细胞命运的决心。STAT3在小鼠卵母细胞高表达,成为磷酸化,把4个核和后期胚胎,表明激活STAT3在胚胎植入前的胚胎(18]。在老鼠胚胎发生,高层STAT3的表达mRNA的提升者在E7.5胚胎本身。随后,STAT3信使rna被确认的组织包括卵黄囊内胚层,子宫肌层,头间质、血液群岛E9.5 [20.]。这些发现表明,STAT3早期胚胎发生至关重要,以及随后的分化成不同的细胞谱系包括许多特定的器官如肝脏的发展发展,骨髓细胞分化,皮肤重建,血管生成,astrogenesis需要STAT3激活(2,21- - - - - -24]。

传统所有组织STAT3基因敲除小鼠以前被发现早期胚胎致命E6.5 E7.5,由于胚胎迅速退化E6.5和E7.5之间没有明显的中胚层的形成(1]。事实上,STAT3消融导致embryonically致命小于1天前胚胎会发展成跳动的心肌细胞在E7.5 E8.5 [1,25- - - - - -27]。最早的证据表明STAT3是局限于区域内的胚胎,包括假定的心脏,和被激活时心肌细胞会发生E7.5 E8.5 (20.]。因此,近年来,越来越多的研究记录的重要性STAT3 cardiomyogenesis的起始。然而,很少有研究探讨STAT3在早期心肌细胞分化的作用,因为当时传统STAT3 KO胚胎致命的心肌细胞的生成在E7.5-E8.5和潜在的功能作用,可以评估心脏分化。因此,STAT3调节早期心肌细胞分化的机制尚未建立。

ESCs源自囊胚的内细胞团,这是一个早期的胚胎28,29日]。ESCs多能细胞有能力区分成年身体的所有细胞类型,他们可以无限期地培养在体外通过自我更新的部门30.- - - - - -32]。因此,ESCs适合研究哺乳动物器官发生的起始ESCs通过区分成定义类型的细胞(33- - - - - -37]。

因此,在这项研究中,一个在体外ESCs诱导STAT3 KO和STAT3 CA系统的鼠标是构造STAT3的表达可以通过强力霉素严格控制添加或取消。本研究试图利用InSTAT3 KO ESCs演示STAT3的作用在心脏谱系分化和起始的ESCs的心脏分化。研究结果将提供一个新工具,以精心设计的功能STAT3在ESC多能性和分化成特定的血统。

2。材料和方法

2.1。ESC文化

ESCs格拉斯哥保持未分化状态的最低基本培养基(Gibco,宏伟的岛,纽约,美国),补充ES-qualified 15%胎牛血清(美国Gibco), 1毫米丙酮酸钠(Gibco,宏伟的岛,纽约,美国),0.1毫米不必要的氨基酸(Gibco,宏伟的岛,纽约,美国),0.1毫米2-mercaptoethanol (Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州,美国),50 U /毫升青霉素(Gibco,宏伟的岛,纽约,美国),50微克/毫升链霉素(Gibco,宏伟的岛,纽约,美国),和1000 U /毫升小鼠生活(美国Chemicon ESGRO,微孔)gelatin-coated培养皿在37°C调湿空气中5%的股份有限公司2。媒介改变了每两天,细胞亚文化confluency时达到70 - 80%。细胞解冻后进行两个段落之前开始实验。

2.2。ESCs代诱导STAT3 KO和pSTAT3过表达

第三代Tet-on系统从Clontech购买实验室(猫。631167号)(美国豆类生物公司,CA)。这Tet-On 3 g系统是一种诱导哺乳动物细胞基因表达系统。系统由Tet-On 3 g反式激活因子,TetR(图S1A),并包含一个感兴趣的基因(GOI)的控制下TRE3G启动子(pTRE3G)(图印地,1 c),表达高水平的GOI由TetR与阿霉素诱导38- - - - - -41]。

完整的鼠标野生型STAT3 cDNA从池的ESCs cDNA克隆PCR,本构激活STAT3 (CA-STAT3)或超表达得到pSTAT3的pXJ40-CA(请曹教授提供的新民)[42从商业实体,NlsCre购买。CA-mSTAT3和NlsCre克隆到一个TetR响应矢量控制的四环素敏感元素(株),分别融合C-T2ACherry和C-IRESzsGreen(图S1)。

2.3。转染

转染细胞生长时完成confluency的70 - 80%。细胞转染Lipofectamine 2000(美国生活技术,卡尔斯巴德,CA),和制造商的协议之后。5μg的质粒DNA在Opti-MEM稀释介质(Gibco,宏伟的岛,纽约,美国)的最后一卷50μl。2μl Lipofectamine 2000在48稀释μl Opti-MEM介质之后5分钟在室温下孵化。稀释DNA添加到Lipofectamine 1: 2000稀释1比和孵化在室温下20分钟。孵化后,DNA / Lipofectamine混合物添加到每个好,轻轻飞舞混合。转染细胞在37°C和5%孵化有限公司2。大约4到6小时后,媒体被删除,取而代之的是新鲜的媒体。然后,细胞被搬回37°C孵化器有限公司为5%2直到达到完整confluency收获细胞,转染效率是荧光显微镜检查通过查看。

2.4。基因分型

STAT3删除(STAT3D)PCR扩增协议由一个初始变性步骤5分钟在95°C,紧随其后的是35周期:变性30年代(95°C),退火30年代在65°C,在72°C和扩展两分钟。PCR扩增样品受到后续凝胶电泳。2%的琼脂糖凝胶用于可视化STAT3D乐队。电压100伏的凝胶电泳运行约40分钟。这种凝胶在紫外线。基因片段的大小是100年由DNA碱基对梯(热费希尔科学、卡尔斯巴德、钙、美国)。列表中使用的引物pcr都包括在表中S1。

2.5。RNA分离和定量实时PCR(存在)

总RNA提取使用试剂盒试剂(热费希尔科学、卡尔斯巴德、钙、美国)根据制造商的指示,纯化的RNeasy迷你包(试剂盒、希尔登,德国),然后反向转录使用M-MLV逆转录酶系统(WI Promega,麦迪逊,美国)的互补。互补的产品被用于半定量rt - PCR和KAPA SYBR®快速普遍2 x qPCR大师混合(KK4600) (KAPA生物系统公司,开普敦,南非)使用7300实时PCR仪(应用生物系统公司)。所有的基因表达分析规范化对管家GAPDH基因。使用的引物序列包括在表中S2。每个样品一式三份完成分析。

2.6。蛋白质提取和免疫印迹

细胞被洗两次冰冷的PBS和细胞溶解在缓冲补充完整的细胞提取蛋白酶抑制剂(美国印第安纳波利斯罗氏公司)。上层清液通过离心收集,和蛋白质浓度测定用BCA化验(Bio-Rad、钙、美国)。蛋白质的溶解产物的吸光度就用GeneQuant 1300机器波长595纳米。适量的溶解产物样品与样品混合缓冲,隔开SDS-polyacrylamide凝胶电泳凝胶的百分比取决于靶蛋白的大小,并转移到聚乙二烯二氟化物(PVDF)膜(默克密理博,达姆施塔特,德国)在寒冷的房间。与5%的脱脂牛奶清洗缓冲阻塞后,膜被孵化的主要抗体(表表示S3一夜之间)在4°C。洗后,他们孵化辣根过氧化物酶,(合)共轭二次抗体。免疫反应性的乐队是可视化使用西方SuperSignal Pico化学发光底物在audiographic电影(美国罗克福德热科学)是由一个胶卷暗盒。等于加载墨迹图所示β肌动蛋白水平。

2.7。Immunofluorescent染色

幻灯片用PBS溶液洗净,与4%多聚甲醛固定(Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州,美国)在室温下10分钟,和permeabilized 0.2% Triton x - 100 (Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州,美国)在PBS 10分钟。然后用3% BSA幻灯片被封锁(Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州,美国)在PBS 10分钟特里同x - 100为0.1%,其次是孵化与表示主要抗体(表S3一夜之间)在4°C。然后幻灯片被洗了三次PBS Triton x - 100 0.1%,每次10分钟和孵化fluorescence-labeled二级抗体在黑暗的室温1小时。原子核是由DAPI可视化(分子探针,尤金,俄勒冈州,美国)染色。盖玻片被安装到幻灯片VECTASHIELD HardSet安装介质(向量实验室Inc .,伯林盖姆、钙、美国)。标记的部分是用尼康A1R-A1共焦显微镜成像系统。

2.8。ESC心脏分化

ESCs分离使用0.1% trypsin-EDTA (Gibco大岛,纽约,美国),悬浮在格拉斯哥最低基本培养基补充春节系统批准了15%胎牛血清(豆类生物公司,山景、钙、美国),丙酮酸钠1毫米,0.1毫米不重要的氨基酸,0.1毫米2-mercaptoethanol, 50 U /毫升青霉素、链霉素50微克/毫升、抗坏血酸和50微克/毫升(Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州,美国)(EB介质)43]。ESCs被分化成胚状体的身体(EBs)使用悬滴法之前报道(44]。挂滴每25 ul,包含1000个胚胎干细胞被播种在10厘米的盖子2细胞培养皿,这道菜充满了PBS EBs,防止干燥。挂滴在37°C调湿空气中孵化有限公司为5%23天。EBs然后播种gelatin-coated板块分化的第四天。阿霉素分化培养基中添加的最后1 ug /毫升的浓度在一天对应的图(图中注明1(一))。EB媒介改变了每两天。跳动的心肌细胞可能观察到的最早的一天8。

(一)”name=
(一)
(b)”name=
(b)
(c)”name=
(c)
图1
使用InSTAT3 KO ESCs研究中胚层谱系分化。实验策略是(a)原理图说明。(b)的大小和形态的EBs如果EBs(阿霉素)和STAT3 KO EBs(阿霉素+)。STAT3删除后,STAT3 KO EBs(阿霉素+)的大小没有明显不同如果EBs(阿霉素)相比,这表明STAT3没有影响细胞生长和形态学的EBs STAT3被删除时形成的。(c)删除STAT3导致显著减少中层标记当STAT3的表达被删除从第0天起的ESCs的心肌细胞分化。EB克隆用于qPCR数量30 EBs在每个时间点。
2.9。显微成像

图片诱导ESCs被捕的蔡司AxioVision 4.7或尼康A1R-A1共焦显微镜系统。照片拍摄后24小时阿霉素诱导。

3所示。结果

3.1。ESCs代诱导STAT3 KO和STAT3 CA

确定ESCs的STAT3的生物功能,我们生成的ESCs的转基因小鼠窝藏Dox-inducible Cre mCherry转基因和STAT3 CA GFP转基因使用诱导Tet-on系统,设计为InSTAT3 KO和ESCs InSTAT3 CA。监管向量STAT3 pEF1a-Tet转染到鼠标液氧/液氧(F / F) (45ESCs]或野生型的ESCs E14灯头。在G418 2轮的选择之后,这些G418-resistant细胞克隆转染与pTRE3G-CreT2ACherry和pTRE3G-STAT3 CA-IRESzsGreen,分别(图S1)。由嘌呤霉素转基因细胞克隆,贝尔Dox-inducible Cre和STAT3 CA Tet-on积极ESC克隆获得和传播。在这些克隆,mCherry或GFP,表明STAT3-KO或pSTAT3-overexpression,可以开启或关闭阿霉素添加或删除(图2(一个))。

(一)”name=
(一)
(b)”name=
(b)
图2
ESCs代诱导STAT3 KO和STAT3 CA。(一)原理图选择ESCs诱导STAT3 KO和STAT3的CA。(b)消融的STAT3基因组DNA在480年发现了诱导STAT3 KO ESCs碱基对片段。心脏的心STAT3 KO小鼠(C / F / D)(巷1,STAT3等位基因被删除),杂合的(C / F / +)(巷2,一个野生型STAT3基因和一个删除STAT3基因),和STAT3液氧/液氧老鼠(F / F)(3车道,STAT3与两个等位基因液态氧网站插入页)。诱导Cre (iCre)(4车道,STAT3阿霉素诱导后删除)和STAT3液氧/液氧(F / F)的ESCs(巷5,STAT3与两个等位基因液态氧网站插入页)。

STAT3删除(STAT3D)等位基因被PCR分析根据前面的研究(45使用底漆对1和3(表)S3)。STAT3的D发现了480个碱基对片段。诱导Cre (iCre)阿霉素诱导和STAT3 ESCs后24小时液氧/液氧ESCs (F / F)基因分型。老鼠心脏组织样本包括心从STAT3-deficient老鼠(C / F / D),杂合的(C / F / +)和STAT3液氧/液氧老鼠(F / F)被用作积极控制。STAT3的D等位基因检测到480个基点的片段在STAT3-deficient心脏(C / F / D)和STAT3 ESCs KO(图2 (b)通道1和4)。这一对引物,它放大一个大约1.5 kb片段和杂合的480个基点(C / F / +)心脏示例(图2 (b)巷2),而只有1.5 kb片段STAT3的检测液氧/液氧(F / F)心脏和F / F的ESCs(图2 (b)车道3和5)。

3.2。重组的ESCs允许Dox-Inducible删除STAT3 (InSTAT3 KO)或pSTAT3过度(InSTAT3 CA)

InSTAT3 KO和InSTAT3 CA ESC系统,可以暂时STAT3特别是诱导对阿霉素添加或删除。诱导Cre STAT3 CA Tet-on积极ESC克隆选择和传播。阿霉素刺激后24小时,强烈表达Cre-T2A-mCherry(图3(一个))和STAT3 CA-IRES-GFP(图3 (b))被观察到。检测mCherry代表Cre基因被诱导表达,和删除STAT3的重组酶活动的功能液氧/液氧在体外,导致突变STAT3蛋白缺失Src-homology2 (SH2)域为STAT3函数(图是至关重要的3(一个)),而GFP表达表明STAT3在ESCs(图持续激活3 (b))。

(一)”name=
(一)
(b)”name=
(b)
图3
重组的ESCs允许Dox-inducible删除STAT3 (InSTAT3 KO)或pSTAT3过度(InSTAT3 CA)。(a)在pTRE-CreCh / pEF1aTetR-inducible STAT3 ESCs KO, mCherry观察阿霉素诱导后24小时,表明Cre删除STAT3的表达和功能在体外。(b)在pTRE-STAT3 CA / pEF1aTetR-inducible STAT3 CA的ESCs, GFP表达阿霉素诱导后24小时,这表明STAT3表达。
3.3。pSTAT3和STAT3蛋白表达可以有效应对阿霉素治疗

通过免疫印迹分析,pSTAT3和STAT3的表达水平在这些诱导的ESCs阿霉素诱导后检查。ESCs的结果表明,在pTRE-Cre, pSTAT3蛋白质水平是有效地切除和未被发现而STAT3蛋白水平的下降,但仍可检测阿霉素诱导(图48小时之后4(一))。ESCs pTRE-STAT3 CA, pSTAT3阿霉素诱导(图24小时后迅速调节4 (b))。自从STAT3抗体可以检测总STAT3包括pSTAT3和STAT3蛋白,因此,STAT3蛋白水平调节略在阿霉素诱导由于增加pSTAT3蛋白水平的表达。此外,观察表明,克隆# 1稍微更高层次的pSTAT3感应与克隆对阿霉素诱导# 2(图4 (b))。Flagged-STAT3 CA表达式使用anti-flag抗体检测。STAT3 CA阿霉素后迅速调节刺激控制(图中是无法觉察到的4 (c))。

(一)”name=
(一)
(b)”name=
(b)
(c)”name=
(c)
图4
pSTAT3和STAT3蛋白表达可以有效地应对阿霉素诱导。(一)pTRE-CreCh / pEF1aTetR ESCs,强力霉素诱导后,pSTAT3减少和未被发现的48小时后感应,当STAT3在48小时后下降但仍可检测。(b)在pTRE-STAT3 CA / pEF1aTetR ESCs pSTAT3 STAT3和强力霉素诱导迅速调节后24小时。(c)在pTRE-STAT3 CA / pEF1aTetR ESCs,强力霉素诱导后,发现flagged-STAT3 CA表达,这表明CA-STAT3在这些细胞表达。
3.4。使用InSTAT3 KO ESCs研究中胚层谱系分化

接下来,诱导STAT3 KO系统是用来识别STAT3在ESC谱系分化的作用。删除STAT3在心肌细胞分化的影响的ESCs的检查。实验策略说明示意图(图1(一))。STAT3被删除从第0天起的ESCs的心肌细胞分化。ESCs未分化和分化EBs在第0天收集,3、6、9、12、15天,qPCR分析执行中胚层的标记和心脏转录因子的表达在这些STAT3 KO-differentiated EBs uninduced EBs相比。同时,EBs STAT3时形成的形态从D0删除监控。

为了研究STAT3的删除是否影响EBs的形成,EBs STAT3时形成的形态是删除从第0天开始从ESCs首次观察到心肌细胞分化。Cre-inducible EBs 48小时后的照片阿霉素诱导显示两者STAT3 KO EBs的大小并没有明显比如果EBs(图1 (b)),这表明STAT3没有影响细胞生长和形态学的EBs STAT3被删除时形成的。

时间进程中存在建议删除STAT3导致减少的表达中胚层的标记,如T-Brachyury Mesp1, Fgf5, Hand1在分化与uninduced EBs(图1 (c))。需要在一起,这些结果表明STAT3 ESC分化成cardiac-committed早期中胚层。

3.5。STAT3删除可能会影响心肌细胞分化

时间进程中存在显示删除的STAT3导致显著减少心脏转录因子的表达,比如GATA4 Mef2c Nkx2.5, GATA6(图5(一个))。接下来,D13 EBs costained STAT3和心脏特定标记Actn2检查STAT3的表达,当阿霉素在D0的ESCs的心肌细胞分化。Immunofluorescent染色的STAT3 KO EBs表明STAT3的表达减少,心脏特定的标记,Actn2 uninduced EBs(图相比5(b))。需要在一起,这些结果表明STAT3 ESC分化成心脏血统。

(一)”name=
(一)
(b)”name=
(b)
图5
STAT3删除可能会影响心肌细胞分化。(a)删除STAT3导致的表达显著减少心脏转录因子STAT3删除时从第0天起ESCs的心肌细胞分化,表明STAT3 ESCs的心肌细胞分化需要。(b)减少STAT3的表达和Actn2 STAT3在D0删除。EB克隆用于qPCR数量30 EBs在每个时间点。

4所示。讨论

研究表明STAT3信号是至关重要的在ESC多能性维护、胚胎发生和细胞命运决定哺乳动物。然而,很难分析STAT3函数的起始cardiomyogenesis因为STAT3基因敲除导致早期embryonically致命的心肌细胞形成E7.5-E8.5 [1,20.]。同样,很难说明使用哺乳动物胚胎发生的早期分子事件在活的有机体内哺乳动物的系统。因此,ESC是理想的替代模型研究的作用和/或目标STAT3在胚胎发生分化的ESCs的细胞类型定义。

在目前的研究中,我们已经建立了一个在体外诱导STAT3基因敲除和pSTAT3过表达ESC系统中STAT3的表达可以通过强力霉素严格控制刺激,促进研究的直接目标函数或ESC分化(图的STAT3在调制2(一个))。基因分型的诱导STAT3 KO ESCs 24小时后显示删除的STAT3等位基因(图阿霉素刺激2 (b)),类似于之前的研究[45]。这是进一步证实了免疫印迹pSTAT3和STAT3蛋白水平显著降低在InSTAT3 KO ESCs极大的调节(图阿霉素后InSTAT3 CA的ESCs刺激4)。到目前为止,我们的研究提供了第一个全面系统研究STAT3在ESC多能性维护使用的函数在体外诱导STAT3基因敲除和pSTAT3过表达ESC系统。

此外,我们已经进行了微阵列实验分析转录组概要文件在Dox-inducible STAT3 CA和STAT3 KO制阿霉素诱导后(未公开的数据)。监管的一些基因已经被存在验证,如抑制细胞因子信号3 (SOCS3), dna结合蛋白1 (Id1)抑制剂,GATA-binding蛋白6 (GATA6)。SOCS3表达调节在过度pSTAT3当表达下调STAT3 KO(图的时候S2)。Id1 STAT3(引起的直接目标基因的转录46]。在我们的研究中,Id1表达调节在过度pSTAT3当表达下调STAT3 KO的时候。同样,GATA-4 5和6是在心脏组织中表达47)和葡萄糖组织(48- - - - - -51]。使用基因敲除小鼠的研究已经证明GATA4和GATA6心脏早期发育的关键。失活的转基因老鼠GATA4导致胚胎致命一天8和9之间发布coitum由于心管形成的失败,暗示GATA4是心脏的正常发展的关键52,53]。GATA6缺陷小鼠胚胎会死前不久心感应E5.5-E7.5 [54,55]。因此,表达GATA4 GATA6在当下研究可以用来跟踪心脏分化(图的发展5(一个))。

在脊椎动物中,不同类型的心脏转录因子来控制基因表达在发展中所代表的心,是叫家人,同源框的Nkx2.5转录因子,和肌细胞增强因子2 (Mef2)转录因子。Nkx2.5和Mef2c个人突变体显示早期胚胎杀伤力和失败在心脏循环形态发生56- - - - - -59]。此外,一些研究已经表明,Nkx2.5和Mef2c法案相结合来调节心脏发展(60,61年]。此外,基本的存在叫结合位点增强剂的报道Nkx2.5和Mef2c62年- - - - - -64年]。因此,存在一个积极的监管GATA之间循环,Nkx2.5, Mef2c调节cardiomyogenesis。

几项研究已经表明,中胚层后基本helix-loop-helix转录因子1 (Mesp1)显著促进心血管在胚胎发育和分化多能干细胞分化。重要的是,事实证明,Mesp1驻留顶部的细胞和转录层次结构,协调多功能心血管祖(MCP)规范(65年,66年]。因此,Mesp1心脏中胚层的具体特征,结果表明,可以调制Mesp1 STAT3表达(图1 (c))。同时,函数的基本helix-loop-helix转录因子(Hand1)和T-box转录因子Brachyury (T-Brachyury)与心脏形态发生和心肌细胞分化[67年- - - - - -71年]。

重要的是,心脏分化的诱导ESCs的功能简要检查。结果表明,InSTAT3 KO制可以分化成心肌细胞在跳动EB文化的第九天。虽然STAT3在第0天删除(在第0天阿霉素的加入),没有观察到跳动的心肌细胞。根据这些观察,因此可以得出结论,STAT3参与心脏分化ESCs的初始阶段。总之,诱导STAT3 CA和STAT3 KO ESC系统建立在本研究可以提供一个很好的工具来演示的功能或目标STAT3在调制ESC分化成特定组织的祖细胞。此外,据报道,抑制STAT3活动的关键的差别会导致对这些特定的心脏基因(26]。同样,另一项研究表明,特定的剂量制药业和BMP2可以有效区分制成心肌细胞通过协同STAT3信号转导通路的激活72年]。此外,事实证明,STAT3在ESC自我更新和增殖中发挥着关键作用通过与其他干细胞因素互动,比如Oct4 Nanog,尤其是STAT3发现绑定的ESCs丰富基因和发育ESCs压抑的基因(73年,74年]。虽然STAT3信号通路在ESC监管机制深入研究[75年- - - - - -79年),STAT3信号通路的直接目标尚未充分阐述。STAT3表达的控制系统研究提供了机会找出STAT3基因和通路直接调制的维护ESC多能性和细胞命运的决心。

此外,通过部分获得或丧失方法,STAT3的表达的转录概况的ESCs报道。鼠标STAT3 overexpressing ESCs组成的整个编码区域的鼠标STAT3增加整体STAT3的表达是异形80年,81年]。因此,磷酸化STAT3的易位需要STAT3核调节基因的表达。而ESCs的InSTAT3 CA在这项研究能持续表达磷酸化STAT3在细胞核,使STAT3直接函数的ESCs的监管网络。同样,另一个对转录组的分析资料进行了STAT3显性负突变的ESCs只减少了50%的内生STAT3激活发生在不完全沉默STAT3的表达(26,82年,83年]。同时,在一些研究中,JAK1和JAK2抑制剂用于识别STAT3信号通路机制间接ESCs及其下游目标调节自我更新(84年,85年]。类似地,JAK2抑制剂或STAT3抑制剂被用来表明STAT3在ESC分化至关重要(72年,86年]。同样,RNAi技术是用来检查如果STAT3对神经元分化至关重要87年]。尽管如此,与这些策略相关的主要缺点是特异性的抑制剂和核因此遭受脱靶效应(88年,89年]。此外,STAT3活动并非完全废除使用这些方法。另外,在目前的研究中,这是表明STAT3在InSTAT3 KO细胞完全删除,因此,影响的因素是多方面的,完全是因为STAT3的删除,而不是其他未知的非标靶。综上所述,ESCs的诱导STAT3在目前的研究将提供一个独特的工具进行调查的直接目标和途径,即STAT3调节干细胞的发育和分化成体细胞祖细胞。

5。结论

总之,目前的研究提供了一个在体外诱导STAT3基因敲除和pSTAT3中ESC系统中STAT3表达水平可以严格控制阿霉素的刺激。这使得研究STAT3在ESC多能性维护功能。此外,它提供了另一个独特的工具展示STAT3功能参与ESC分化成不同的细胞谱系。总的来说,这项研究的结果提供了机会和基础的进一步细化机制,即STAT3维护ESC多能性和调节哺乳动物器官发生期间ESC分化。

缩写

CA-STAT3: 本构激活STAT3
互补脱氧核糖核酸: 互补脱氧核糖核酸
阿霉素: 强力霉素
ESCs: 胚胎干细胞
海尔哥哥: 胚状体的身体
绿色荧光蛋白: 绿色荧光蛋白
GOI: 感兴趣的基因
柯: 基因敲除
生活: 白血病抑制因子
Nanog: Nanog同源框
OCT4: Octamer-binding转录因子4
聚合酶链反应: 聚合酶链反应
存在: 定量反向transcriptase-PCR
SH2: Src-homology2
soc: 抑制细胞因子的信号
SOX2: SRY-related HMG盒
统计: 信号传感器和转录的激活
STAT3 pY705: 705年酪氨酸磷酸化
TetR: Tetracycline-control转录激活。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

确认

这项工作得到了新加坡癌症科学研究所的资助(批准号713001010271);NMRC(批准号IRG09may057);新加坡教育部(moe2010 - t2 - 1 - 084);中国的主要国家基础研究发展计划(973计划)(批准号2014 cb965101);中国国家自然科学基金(国家自然科学基金委)(批准号81670286)。

补充材料

图S1: pTRE3G-IRES Tet-on系统和主要构造pTRE3G-IRES Tet-on系统。图S2:验证InSTAT3 KO和CA酶斯卡灵SOCS3基因的存在。表S1:列表中使用的引物pcr。表S2:列表中使用的引物存在。表S3:列表在这项研究中使用的抗体。(补充材料)

引用

  1. 施k .武田k .野口w . et al .,“鼠标Stat3基因的靶向破坏导致早期胚胎杀伤力,“美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷94,不。8,3801 - 3804年,1997页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  2. 美国佐野伊,k .武田et al .,“Keratinocyte-specific消融的Stat3展品受损肌肤重塑,但不影响皮肤形态发生,”在EMBO杂志,18卷,不。17日,第4668 - 4657页,1999年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  3. r·s·查普曼·c·Lourenco大肠吨et al .,“抑制乳腺上皮细胞凋亡和延迟退化条件敲除小鼠Stat3的”基因与发展,13卷,不。19日,2604 - 2616年,1999页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  4. t . Alonzi d . Maritano b . Gorgoni g . Rizzuto c . Libert诉波里,“关键作用的STAT3在急性期反应的控制了诱导基因失活(修正激活)在肝脏,”分子和细胞生物学,21卷,不。5,1621 - 1632年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  5. s . Murase e . Kim l .林d·a·霍夫曼和r·d·麦凯”失去信号传感器和转录激活3 (STAT3)信号在高架活动导致海马神经元,漏洞”《神经科学杂志》上,32卷,不。44岁,15511 - 15520年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  6. 公元Panopoulos x o·杨,r . Nurieva et al .,“STAT3调节cytokine-mediated代炎症辅助T细胞,”《生物化学》杂志上,卷282,不。13日,9358 - 9363年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  7. k .武田T Kaisho:吉田,j .武田T .岸本和美国彰,”负责IL-6-dependent Stat3激活T细胞增殖通过阻止细胞凋亡:生成和特征(T)特异性Stat3-deficient老鼠,”《免疫学,卷161,不。9日,第4660 - 4652页,1998年。视图:谷歌学术搜索
  8. 徐y, y松崎m . Ikegami et al .,“需要Stat3 cytoprotection adenoviral期间呼吸道上皮细胞的感染,”免疫学杂志,卷177,不。1,第537 - 527页,2006。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  9. d . Hilfiker-Kleiner a Hilfiker h·德雷克斯勒,“许多好处STAT3在心脏,”药理学和治疗,卷107,不。1,第137 - 131页,2005。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  10. d·e·利维和j·e·达内尔”统计数据:转录控制和生物的影响,”自然评论分子细胞生物学,3卷,不。9日,第662 - 651页,2002年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  11. 问:l ., j . Nichols室,和a·史密斯,”BMP诱导Id蛋白质抑制分化和维持胚胎干细胞自我更新与STAT3合作,”细胞,卷115,不。3、281 - 292年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  12. d·h . Yu Pardoll, r .木星”统计在癌症炎症和免疫:STAT3的领导角色,”自然评论癌症,9卷,不。11日,第809 - 798页,2009年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  13. h .羽t .体细胞杂种,我室和a . Smith“多能胚胎干细胞的自我更新是通过激活介导STAT3的”基因与发展,12卷,不。13日,2048 - 2060年,1998页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  14. r·拉兹·c·k·李,l·a·坎尼扎罗p d 'Eustachio d·e·利维,”重要作用的STAT3胚胎干细胞多能性,”美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷96,不。6,2846 - 2851年,1999页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  15. t .松田,t .中村k中et al .,“STAT3激活足以维持小鼠胚胎干细胞的未分化状态,”在EMBO杂志,18卷,不。15日,第4269 - 4261页,1999年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  16. l·a·波伊尔t . i . Lee m . f .科尔et al .,“核心转录调控电路在人类胚胎干细胞,”细胞,卷122,不。6,947 - 956年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  17. 黄懿慧Loh,吴,j . l .咀嚼et al .,“Oct4和Nanog转录网络调节在小鼠胚胎干细胞多能性,”自然遗传学,38卷,不。4、431 - 440年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  18. j .建筑师,d . v . d . m . Messerschmidt et al .,“遗传和发育途径从STAT3 OCT4-NANOG电路对ICM血统体内的维护至关重要,”基因与发展,27卷,不。12日,第1390 - 1378页,2013年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  19. m·恩斯特,诺瓦克,s e·尼科尔森j·e·莱顿和a·r·邓恩的羧基末端域gp130-related细胞因子受体抑制胚胎干细胞分化所必需的。STAT3的参与。”生物化学杂志,卷274,不。14日,第9737 - 9729页,1999年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  20. s . a .邓肯z中,z,和j·e·达内尔”STAT信号在哺乳动物早期发育仍然很活跃,”发展动态,卷208,不。2、190 - 198年,1997页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  21. Chakraborty和d . j . Tweardyabc Stat3和G-CSF-induced骨髓分化,“白血病和淋巴瘤,30卷,不。5 - 6,433 - 442年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  22. 松井,t .木下光男,t . Hirano t .横田和a . Miyajima”STAT3下调表达的细胞周期素D在肝癌的发展过程中,“《生物化学》杂志上,卷277,不。39岁,36167 - 36173年,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  23. p . Rajan和r·d·g·麦凯,中枢神经系统中的多个星形分化的途径。”《神经科学杂志》上,18卷,不。10日,3620 - 3629年,1998页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  24. d . Valdembri g . Serini a . Vacca d . Ribatti和f . Bussolino”体内激活JAK2 / STAT-3在gm - csf引起的血管生成途径,”美国实验生物学学会联合会杂志,16卷,不。2、225 - 227年,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  25. s . v . Kotenko l . s . Izotova b p波拉克et al .,“其他激酶可以代替Jak2移行细胞信号转导,”《生物化学》杂志上,卷271,不。29日,第17182 - 17174页,1996年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  26. k . Foshay g·罗德里格斯,b . Hoel j . Narayan g . i加里卡诺,“JAK2 / STAT3指导cardiomyogenesis在小鼠胚胎干细胞在体外,”干细胞,23卷,不。4、530 - 543年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  27. a,诉Novotny-Diermayr, w .扁et al ., " LIM / homeodomain蛋白质Islet1新兵Janus酪氨酸激酶和信号传感器和转录激活3和刺激他们的活动,“细胞的分子生物学,16卷,不。4、1569 - 1583年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  28. a·g·史密斯,”Embryo-derived干细胞:人鼠之间”,细胞和发育生物学的年度审查,17卷,不。1,第462 - 435页,2001。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  29. j·a·汤姆森j . Itskovitz-Eldor s s·夏皮罗et al .,”来自人类囊胚的胚胎干细胞系。”科学,卷282,不。5391年,第1147 - 1145页,1998年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  30. g·r·马丁“孤立的多能细胞线从早期小鼠胚胎培养介质条件的畸胎癌干细胞,”美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷78,不。12日,第7638 - 7634页,1981年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  31. m·j·埃文斯和m·h·考夫曼”建立在文化从小鼠胚胎多能细胞,”自然,卷292,不。5819年,第156 - 154页,1981年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  32. a·布拉德利·m·埃文斯·m·h·考夫曼和e·罗伯逊”形成细胞嵌合体embryo-derived畸胎癌细胞系,”自然,卷309,不。5965年,第256 - 255页,1984年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  33. v . b . Teif y Vainshtein, m . Caudron-Herger et al .,“全基因组核小体定位在胚胎干细胞的发展过程中,“《自然结构和分子生物》上,19卷,不。11日,第1192 - 1185页,2012年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  34. c . m .《c .散粒。l .与et al .,“胚外内胚层分化的动态蛋白质组分析在小鼠胚胎干细胞,”干细胞,33卷,不。9日,第2725 - 2712页,2015年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  35. m . Yazdani r . Deogracias j .家伙,r·a·a·鸟,和y . a .巴德,”疾病建模使用胚胎干细胞:MeCP2调节神经元,核大小和RNA合成”干细胞,30卷,不。10日,2128 - 2139年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  36. j . c . Garbern r·t·李,“心脏干细胞疗法和心脏再生的承诺”细胞干细胞,12卷,不。6,689 - 698年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  37. f .张和k . b . s . Pasumarthi“胚胎干细胞移植:承诺和心脏病的治疗进展,”BioDrugs,22卷,不。6,361 - 374年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  38. m·戈森和h . Bujard”,严格控制哺乳动物细胞的基因表达tetracycline-responsive推动者,”美国国家科学院院刊》上,卷89,不。12日,第5551 - 5547页,1992年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  39. r·勒夫n .亨氏m . Hampf h . Bujard和m·戈森“改善Tet-responsive推动者最小化背景表达,”BMC生物技术,10卷,不。1,p。81年,2010。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  40. s . Urlinger男爵,m . Thellmann m·t·哈桑h . Bujard和w·Hillen”探索tetracycline-dependent转录激活物的序列空间:小说突变产生扩大范围和灵敏度,”美国国家科学院院刊》上,卷97,不。14日,第7968 - 7963页,2000年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  41. 周x m . Vink的卡b b . Berkhout和a·t·达斯”优化Tet-On系统的调节基因表达通过病毒进化,”基因治疗,13卷,不。19日,1382 - 1390年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  42. j .马t . Zhang诉Novotny-Diermayr, A . l . c . Tan和曹x”小说的卷曲螺旋域序列Stat3必不可少的核转位,”生物化学杂志,卷278,不。31日,第29260 - 29252页,2003年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  43. Schulze t高桥,b .主,p . c . et al .,“抗坏血酸提高胚胎干细胞的分化成心肌细胞,”循环,卷107,不。14日,第1916 - 1912页,2003年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  44. 刘y . t . Zhang Lin, j . et al .,“Rbm24调节可变剪接开关在胚胎干细胞心脏谱系分化,“干细胞,34卷,不。7,1776 - 1789年,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  45. j·j·雅各比,a . Kalinowski m·g·刘et al。”Cardiomyocyte-restricted淘汰赛的STAT3导致更高的灵敏度炎症、心肌纤维化和心脏衰竭与先进的时代,“美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷100,不。22日,第12934 - 12929页,2003年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  46. h . Yu x, y赵et al .,“生活消极调节肿瘤抑制通过Stat3 p53 / ID1 / MDM2在结肠直肠癌,”自然通讯,5卷,不。1,p。5218年,2014。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  47. c·戈夫·m·沃姆斯利,美国Nijjar et al .,”表达的GATA-6非洲爪蟾蜍胚胎心脏前体的块分化,“在EMBO杂志,16卷,不。2、355 - 368年,1997页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  48. r . j . Arceci a . a .国王,m·c·西蒙和d·b·威尔逊,s·h·奥尔金”鼠标GATA-4:视黄acid-inducible GATA-binding转录因子表达的内胚层的衍生组织和心脏,”分子和细胞生物学,13卷,不。4、2235 - 2246年,1993页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  49. a·c·Laverriere c . MacNeill c·穆勒r . e . Poelmann j·b·伯奇和t·埃文斯“GATA-4/5/6,亚三个转录因子转录在发展中心脏和肠道,”《生物化学》杂志上,卷269,不。37岁,23177 - 23184年,1994页。视图:谷歌学术搜索
  50. e·e·Morrisey h . s . Ip m . m . Lu和m . s . Parmacek”GATA-6:锌指转录因子表达在多个细胞血统来自横向中胚层,”发育生物学,卷177,不。1,第322 - 309页,1996。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  51. e·e·Morrisey h . s . Ip, z, m . m . Lu和m . s . Parmacek”GATA-5:转录激活因子表达小说暂时和spatially-restricted模式在胚胎发育过程中,“发育生物学,卷183,不。1,21-36,1997页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  52. c·t·郭e·e·Morrisey r . Anandappa et al .,“GATA4转录因子需要腹形态发生和心脏管形成,”基因与发展,11卷,不。8,1048 - 1060年,1997页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  53. j . d . Molkentin林,s . a .邓肯e·n·奥尔森,”要求的转录因子GATA4心管的形成和腹形态发生,”基因与发展,11卷,不。8,1061 - 1072年,1997页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  54. m . Koutsourakis a . Langeveld病人r, r·贝丁顿和f . Grosveld”的转录因子GATA6早期胚胎外的发展是至关重要的,”发展,卷126,不。9日,第732 - 723页,1999年。视图:谷歌学术搜索
  55. e·e·Morrisey z . Tang k Sigrist et al .,“GATA6需要调节HNF4和内脏内胚层分化的小鼠胚胎,”基因与发展,12卷,不。22日,第3590 - 3579页,1998年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  56. 里昂,l·m·帕森斯·l·哈特利et al .,“肌原性的心管和形态形成缺陷的小鼠胚胎缺乏homeo框基因Nkx2-5”基因与发展,9卷,不。13日,1654 - 1666年,1995页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  57. m .田中z . Chen Bartunkova,山崎裕n, s出云国,“心脏Csx / Nkx2同源框基因。多个基因的5个谎言基因上游核心发展至关重要,”发展,卷126,不。6,1269 - 1280年,1999页。视图:谷歌学术搜索
  58. 问:林,j·施瓦兹、c . Bucana和e·n·奥尔森“控制老鼠心脏的形态发生和转录因子MEF2C肌细胞生成,“科学,卷276,不。5317年,第1407 - 1404页,1997年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  59. l . h . Vong m·j·拉古萨和j·j·施瓦兹”一代的条件Mef2cloxP / loxP老鼠时间和组织分析,“《创世纪》,43卷,不。1,43-48,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  60. i s Skerjanc h . Petropoulos a·g·山脊路和美国威尔顿,“肌细胞增强因子2 c和Nkx2-5调控彼此的表达和启动cardiomyogenesis P19细胞,”生物化学杂志,卷273,不。52岁,34904 - 34910年,1998页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  61. j . w . Vincentz r·m·巴恩斯b . a . Firulli s . j .康威和a . b . Firulli Nkx2的合作互动。5和Mef2c转录因子在心脏发育。”发展动态,卷237,不。12日,第3819 - 3809页,2008年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  62. r·d·瑟西e·b·文森特·c·m·Liberatore和k . e . Yutzey”一个GATA-dependent nkx - 2.5监管元素激活早期心脏基因表达的转基因老鼠,”发展,卷125,不。22日,第4470 - 4461页,1998年。视图:谷歌学术搜索
  63. C.-L。留置权,c .吴美世,r·韦伯j·a·理查森和e·n·奥尔森,“控制早期心脏转录Nkx2-5 GATA-dependent增强剂,”发展,卷126,不。1,第84 - 75页,1999。视图:谷歌学术搜索
  64. e . Dodou m . p . Verzi j·p·安德森,s m .徐和b . l .黑色“Mef2c直接目标ISL1和GATA转录因子在小鼠胚胎发育在前心领域,“发展,卷131,不。16,3931 - 3942年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  65. r·大卫·c·布伦纳,坏人j . et al .,“MesP1驱动器脊椎动物心血管分化通过Dkk-1-mediated wnt信号的封锁,“自然细胞生物学,10卷,不。3、338 - 345年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  66. a . Bondue和c . Blanpain Mesp1:心血管疾病的关键调节器血统的承诺,“循环研究,卷107,不。12日,第1427 - 1414页,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  67. l . p . Riley Anaon-Cartwight, j . c .交叉”的Hand1 bHLH转录因子对胎座式和心脏形态发生至关重要,”自然遗传学,18卷,不。3、271 - 275年,1998页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  68. p·r·赖利·m·Gertsenstein k .道森和j·c .交叉”的早期排斥hand1-deficient从不同区域的左心室心肌细胞嵌合体小鼠胚胎,”发育生物学,卷227,不。1,第168 - 156页,2000。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  69. d·g·麦克费登a·c·巴博萨j·a·理查森m·d·施耐德d·斯利瓦斯塔瓦和e·n·奥尔森“Hand1 Hand2转录因子调控基因胚胎心脏心室的扩张是剂量依赖性的方式”发展,卷132,不。1,第201 - 189页,2005。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  70. t·王,r·s·p·贝丁顿和n . a .布朗”的角色brachyury对心脏发育基因在鼠标左右规范,”机制的发展,卷79,不。1 - 2,29-37,1998页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  71. a·l·埃文斯,T . Faial m·j·吉尔et al .,“基因组的目标Brachyury区分小鼠胚胎干细胞(T),“《公共科学图书馆•综合》,7卷,不。第三条e33346, 2012年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  72. j . Rajasingh e .巷道h .岩漠et al .,“STAT3-dependent小鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞:分析心肌细胞的分子信号和治疗效果precommitted mES移植小鼠模型的心肌梗死,”循环研究,卷101,不。9日,第918 - 910页,2007年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  73. h . x Chen徐,p元et al .,“整合与核心转录网络外部信号通路在胚胎干细胞,”细胞,卷133,不。6,1106 - 1117年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  74. b·l·基德,j·杨,帕默,“Stat3和全基因组的原癌基因启动子入住率在胚胎干细胞中,“《公共科学图书馆•综合》,3卷,不。12篇文章e3932 2008。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  75. h . Chen Aksoy, f . Gonnot et al .,“强化STAT3活动让人类胚胎干细胞naive-like多能性,”自然通讯》第六卷,没有。1,p。7095年,2015。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  76. 黄g . h, s, c,和问:l .应“STAT3磷酸化酪氨酸在705年和727年丝氨酸不同调节小鼠ESC的命运,”干细胞,32卷,不。5,1149 - 1160年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  77. k·霍金斯,l . Mohamet s Ritson c . l . r .快乐和c . m .病房,“钙粘蛋白,在其缺席N-cadherin促进Nanog表达式通过STAT3磷酸化在小鼠胚胎干细胞,”干细胞,30卷,不。9日,第1851 - 1842页,2012年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  78. j·m·科德宝s Ghosh b . l . Lackford et al .,“严重损耗Tet1-dependent 5-hydroxymethylcytosine水平损害生活/ Stat3信号,结果就会引起胚胎干细胞的身份,“核酸的研究,40卷,不。8,3364 - 3377年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  79. l . Ho·e·l·米勒,j·l·罗南·w .问:Ho r . Jothi和g·r·瑰柏翠”esBAF促进通过调节基因组多能性的生活/ STAT3信号和调节polycomb函数”自然细胞生物学,13卷,不。8,903 - 913年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  80. p . Cinelli e·a·卡萨诺瓦美国Uhlig et al .,“表达分析在转基因FVB / N胚胎干细胞overexpressing STAT3,”BMC发育生物学,8卷,不。1,57页,2008年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  81. e·a·卡萨诺瓦,o .夏克霍娃,s . s . Patel et al .,“Pramel7介导的生活/ STAT3-dependent在胚胎干细胞自我更新,“干细胞卷,29号3、474 - 485年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  82. d . Sekkai g .粥,m .掠夺et al .,“微阵列分析制药业/ Stat3转录目标在胚胎干细胞中,“干细胞,23卷,不。10日,1634 - 1642年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  83. k . m . Foshay g . i加里卡诺,“监管的Sox2 STAT3发起神经前体细胞命运的承诺,“干细胞与发展,17卷,不。2、269 - 278年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  84. l·t·l·g . Tan Cheng Chen Yu和y Tan“Foxm1介导的生活/ Stat3-dependent在老鼠胚胎干细胞自我更新和对诱导多能干细胞的生成至关重要,”《公共科学图书馆•综合》,9卷,不。4篇文章e92304 2014。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  85. j . Hu z, j . Wang et al .,“氯化锌是暂时性的维护老鼠胚胎干细胞多能性通过激活stat3信号”《公共科学图书馆•综合》,11卷,不。2篇文章e0148994 2016。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  86. 霍瓦特j . Pachernik诉,l . Kubala·德沃夏克a . Kozubik和a . Hampl”神经分化会使白血病抑制因子通过STAT3信号在老鼠胚胎性癌细胞,”叶形线Biologica,53卷,不。5,157 - 163年,2007页。视图:谷歌学术搜索
  87. m·斯奈德X.-Y。黄,j·j·张,“Stat3是必不可少的神经元分化通过直接Sox6基因的转录调控,”2月的信,卷585,不。1,第152 - 148页,2011。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  88. a·l·杰克逊,s·r·巴茨j . Schelter et al .,“RNAi表达分析显示非标靶基因调控,”自然生物技术,21卷,不。6,635 - 637年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  89. 克鲁格,t . Bergauer b·考夫曼et al .,“洞察有效RNAi获得大规模核验证筛选,“寡核苷酸,17卷,不。2、237 - 250年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

版权©2018余黄黔等。这是一个开放分布式下文章知识共享归属许可,它允许无限制的使用、分配和复制在任何媒介,提供最初的工作是正确引用。

更多相关文章

PDF 下载引用 引用
下载其他格式更多的
ePub
XML
订单打印副本订单
的观点1508年
下载528年
引用

相关文章

文章奖:2020年杰出的研究贡献,选择由我们的首席编辑。获奖的文章阅读。