文摘

背景。心脏病的细胞疗法已被证明安全有效,尽管可怜的细胞保留在注射区域。提高细胞保留假设增加治疗效果。在目前的研究中,人类脂肪基质细胞(对asc)交付在一个原位形成海藻酸凝胶后在大鼠急性心肌梗死(AMI)。方法。对ASC是ASC表型转导与荧光素酶测试。在裸大鼠AMI堂,随后注入生理盐水(控制),1×10⁶对asc在盐水或1×10⁶对asc在1% (w/v藻酸盐凝胶。对asc追踪的生物发光和功能测量是通过磁共振成像(MRI)和评估^82年铷正电子发射断层扫描(PET)。结果。对asc海藻酸盐和水凝胶的射血分数显著增加(7.2%和7.8%在14天,7.2%和8.0%在28天,职责)。28天后,倾向于减少梗死面积和增加灌注,而控制。没有观察到显著差异之间的海藻酸盐水或水凝胶也保留和功能性打捞。结论。AMI后对asc改善心肌功能,但政府在藻酸盐凝胶没有进一步提高保留的细胞或心肌功能。

1。介绍

世界上死亡的主要原因是心血管疾病。大约有一百万人遭受心肌梗死(MI)每年仅在美国。尽管在治疗这些病人大改进,越来越组患者还患有心脏衰竭(1]。

在过去的二十年里,细胞治疗使用间充质基质细胞(msc)治疗心脏疾病已被证明安全、能适度提高心脏的功能(2,3]。msc可以从几乎每一个组织在体内,但大多数研究使用脂肪msc(对asc)或骨髓msc (4]。治疗的效果是由于潜在的旁分泌msc (5,6]。检查参与组成分泌腺msc能够适应他们的需要他们的环境。修改免疫反应的能力,启动血管生成,并提供营养因素破坏原生细胞使msc治疗心肌梗死的一个完美的候选人6]。然而,管理msc还只出现在心脏的短暂时间,10%的证据保留24小时后,保留下降在接下来的几周7- - - - - -9]。增加移植细胞的保留使用各种方法导致增加功能获得比常规治疗在临床前模型(10]。的许多应用方法增加细胞保留比直接翻译成探索性诊所。因此,msc的依赖修改或coinjection复杂的合成支架使翻译更加困难(11]。临床应用的细胞产品必须从原来的表现型最小修改,每次修改支架或水凝胶使监管过程更加困难。作为政府最可翻译的选择,我们调查了一个原位形成海藻酸凝胶配方目前在临床试验中作为单一疗法对急性心肌梗死(AMI) (12- - - - - -14]。这种水凝胶的独特功能是由于制造的可流动的海藻酸交联网络,经过凝胶成水凝胶在Ca的存在^{2 +}离子浓度可用梗塞的心脏(15]。

我们之前已经证明对asc保持高生存能力在文化在这种海藻酸水凝胶,这对asc修改他们的表型,表现出增强的旁分泌免疫调节功能嵌入到海藻酸水凝胶(16,17]。

在目前的研究中,我们调查是否注射转导对asc在原位形成海藻酸水凝胶会增加保留的细胞和大鼠AMI后改善心肌功能。

为此,我们跟踪对asc的生物发光(BLI),使用心脏磁共振成像(MRI)来评估心脏卷和泵功能,和使用^82年铷正电子发射断层扫描/计算机断层扫描(^82年Rb-PET / CT)来评估心脏灌注。我们所知,我们是第一个申请^82年Rb-PET / CT在小动物模型来评估治疗心肌梗死的影响。

2。方法

2.1。实验设计

人类对asc转导表达荧光素酶和特征在体外。实验急性心肌梗死(AMI)大鼠模型建立与注入生理盐水(控制),对asc在盐水中,或对asc海藻酸凝胶后梗塞。功能测量得到心脏磁共振成像(MRI)和^82年rubidium-PET / CT (^82年Rb-PET / CT) 1天,手术后14日和28。细胞生物荧光成像(BLI)进行跟踪的天1、3、7、14、21治疗后(图1)。治疗是随机的,结果评估被蒙蔽。

2.2。细胞培养

Lipoaspirate是从两个健康人的捐助者(女性,37岁,55年)。使用lipoaspirate国家伦理委员会批准的协议数h - 3 - 2009 - 119和知情同意书签署的捐助者。

从lipoaspirate对asc是孤立的,其他地方描述(18]。短暂,lipoaspirate洗两次与磷酸盐(PBS)之前(Gibco,生活技术)与0.6 PZ U /毫升胶原酶消化NB 4(美国赛瓦)溶解在汉克的平衡盐溶液(2 l更易与Ca^{2 +}45 - 55分钟,热费希尔科学),而在37°C的环境恒定旋转。胶原酶灭活了的胎牛血清(的边后卫)介质(最低基本培养基α调制(αMEM)、青霉素、链霉素1%,10%辐照的边后卫(从Gibco热费希尔科学))。悬架是离心机,单核细胞被指望NucleoCounter nc - 100 (ChemoMetec)、播种密度为4.5×10⁶细胞/ T75烧瓶(热费希尔科学)的边后卫血压得到较好的控制介质,在标准条件和孵化37°C, 5%的公司₂,21%的人啊₂湿润的空气。经过三天的文化中被移除,烧瓶用PBS的不依从细胞的清除。媒介改变了每周两次,直到达成融合和PBS的细胞被洗,分离与3毫升TrypLE选择(Gibco,生活技术),离心机,享年300岁为5分钟。额外的文化通过后,对asc统计,在液态氮冷冻1×10的密度⁶细胞/毫升10%二甲亚砜(WAK-Chemia医疗),90%的边后卫。

2.3。标签

L2T质粒是由Gambhir教授,斯坦福大学,一个质粒可以找到其他地方的详细描述(19]。短暂,L2T质粒由萤火虫荧光素酶2序列由短链接器连接td番茄序列,泛素启动子和zeocin阻力。

在噬菌体L2T质粒是传播。包装质粒的慢病毒粒子,HEK293T细胞被播种在第一天在杜尔贝科修改鹰的介质(DMEM), 10%胎牛血清(来自采购、体外技术)、谷氨酰胺、青霉素、链霉素。第二天,HEK293T细胞转染用的东西₄转染与pFUG L2T向量和两个辅助质粒PDMG.2和8.91(从迪迪埃Tromo实验室,日内瓦),分别负责信封和包装。第二天进行的转染有限公司10%₂,条件有限公司更改为3%₂直到第三天。在第三天,中被改变和孵化公司仍在5%₂。媒介收集在第五天,透过一个0.45μl滤波器和集中使用Vivaspin过滤器(截止100.00米的20倍_W)。

慢病毒颗粒的转导进行30.000对asc在每个在6-well盘子的边后卫中包含25毫克病毒的效价每聚凝胺。经过两天的检疫、转导对asc被转移到T75烧瓶和文化扩张,血压得到较好的控制人类血小板溶解产物(hPL)介质(αMEM、青霉素、链霉素1%和5%库克Regentec Stemulate)。L2T-ASCs被扩展为一个通道之前按tdTomato表达式,使用FACSJazz流cytometry-activated细胞分选仪(BD生物科学)流式细胞术在哥本哈根大学的核心设施。对asc L2T-transduced随后被扩展为两个通道,完成总共5段落从原来的隔离间质血管分数,在冷冻前,如前所述20.]。

两到三周之前转导对asc注射的动物,他们解冻和hPL培养基中培养T75烧瓶血压得到较好的控制在标准孵化条件。因此,对老鼠收到L2T-ASCs 7 - 8。

2.4。描述对asc L2T-Transduced

2.4.1。表面标记表达式

的表面标记表达式并对asc流式细胞术的特点。下面的抗体(所有从BD购买生物科学):使用CD105-Brilliant紫- 421 (BV421)(266年克隆),CD90-allophycocyanin (APC) (5 e10汽油),CD73-APC (AD2) CD13-phycoerythrin-cyanin 7 (PE-Cy7) (WM15) CD45-fluorescein异硫氰酸酯(FITC) (2 d1), CD34-APC(581),和HLA-DR, DP, DQ-BV421 (Tu39)。可以解决的,可行的污点780 (FVS780)(猫。565388号)被用来区分死细胞和活。收获后,细胞在PBS洗两次,沾FVS780 10分钟。随后,细胞被洗的流式细胞仪PBS(医院药学)含1%乙二胺四乙酸(EDTA)(医院药学)和10%新生牛血清(Gibco热费希尔科学)和彩色30分钟在室温,防止光。最后,这些细胞被洗的流式细胞仪PBS和resuspended PBS。至少4000个细胞在Navios流式细胞分析仪测定和分析使用Kaluza软件版本1.5(贝克曼库尔特)。碎片,紧身衣,和死细胞被排除在分析之外。

2.4.2。三重微分

转导对asc是三重分化使用StemPro分化工具包(Gibco热费希尔科学)根据制造商的指示。去验证了油红O染色(Sigma-Aldrich)脂滴,茜素红S成骨分化的钙沉积,并由阿尔新蓝chondrogenic分化8 gx葡糖氨基葡聚糖(Sigma-Aldrich)。

2.4.3。β牛乳糖染色

评估如果生成的整个过程并对asc导致细胞衰老,内生β牛乳糖活动调查使用β加染色设备(热费希尔科学)根据制造商的协议。半乳糖苷制备新鲜在N, N-dimethylformamide (Sigma-Aldrich Chemie GmbH)染色方案。细胞被孵化24小时标准孵化条件和染色观察使用一个IX51显微镜(奥林巴斯)。

2.5。藻酸盐凝胶铸造

2.6%海藻酸的解决方案(VLVG海藻酸钠、NovaMatrix融合生物聚合物)是在无菌水和部分交联3%葡萄糖酸钙溶液(hemicalcium D-gluconic酸盐,Sigma-Aldrich) [21]。这种混合随后被稀释到1%w/v海藻酸和0.3葡萄糖酸钙溶液无菌水。政府之前,离心细胞颗粒resuspended在藻酸盐的解决方案。

2.6。动物

在这项研究中,97年无胸腺的裸大鼠(Crl: Foxn1^rnu)是包括在内。无胸腺的裸体鼠选择基于证据的低水平的心中巨噬细胞浸润,改善长期移植保留与其他菌株相比(9,22]。动物实验动物实验都通过丹麦检查员(许可证号码2012-15-2934-00064和2016-15-0201-00920)。动物被安置在核心动物设施在哥本哈根大学,丹麦,与12:12小时光/暗周期,21岁±2°C,和获得水和啮齿动物的食物随意。动物适应至少一个星期前被包括在实验。为了测试一个细胞产品尽可能靠近诊所,我们选择了人类对asc在无胸腺的裸大鼠异种移植。

2.7。MI感应和治疗

心肌梗死是诱导其他地方描述(23]。总之,动物麻醉在3 - 5%七氟醚(AbbVie、丹麦)感应室在气管插管前16 G Venflon导管(Vasofix®安全,布劳恩,丹麦)与6 - 8毫升空气/钝针和通风通风,在频率80 - 90通风/分钟(UNO microventilator-03、荷兰)。0.05毫克/公斤的动物皮下注射丁丙诺啡(Temgesic®, Indivior,英国)和1毫升生理盐水。左胸廓切开术在第四或第五肋间空间。心包温柔地删除和冠状动脉左前降枝(小伙子)永久性结扎尾的起源与6 -聚丙烯缝线。缺血被变色的证实视觉,心肌的运动障碍。小伙子结扎后,0.1毫升液体注射的是2 - 3注入变色区域的边界地带。动物收到生理盐水1×10⁶对asc在盐水或1×10⁶对asc在藻酸盐凝胶。虚假的动物经历了同样的过程,结扎的心肌,而不是童子。胸腔、肌肉层和皮肤与4 - 0 Vicryl缝合线被关闭。动物服用0.05毫克/公斤丁丙诺啡每天皮下注射三次,口头或每天两次,下面的72小时。

2.8。生物荧光

D-Luciferin (SynChem、德国)腹腔注射剂量30毫克/公斤的天1、3、7、14天MI后感应和治疗。此外,老鼠的子集在21天扫描。图片被收购新®腔XR(美国PerkinElmer卡尺Lifesciences)和生活图像®软件v.4.3.1(美国PerkinElmer) 3分钟的曝光时间,有大量装箱,在F8 f制光圈。成像的最佳时间根据有多少细胞出现在不同的动物。第一周,收购的最佳时间是35分钟后注入,而15分钟后14天,可以解释为缺氧环境和氧依赖生物荧光反应。类似规模的感兴趣的地区被用来收集劳保局数据作为发光。背景的动物是减去之前的数据分析。BLI数据分析一样意味着发光计数或发光的第一天。

2.9。核磁共振成像

与PET / CT扫描、MRI进行1天,14日和28 MI后归纳。动物镇静期间如前所述的宠物,使用临床前7特斯拉扫描仪进行扫描(力量Pharmascan,力量医疗、德国)与水平孔和一个60毫米收发两用机线圈。飞行员侦察图像(3片,1毫米厚度,视野3.5×3.5毫米,重复时间(TR) 85 ms,回波时间(TE) 1.5 ms)被用来验证定位和形象的心2 -和4-chamber长轴图像,以及垂直短轴的形象。一堆短轴cine-FLASH序列覆盖收购心室1毫米厚片和切片之间的0.5毫米。呼吸和心电图Cine-FLASH序列是封闭的,5.0×5.0厘米的视野,矩阵大小为256×256,TR 4.8毫秒,TE 2.0毫秒,带宽4566.7赫兹,150重复,翻转10°角。多层的T1 FLASH序列被用来可视化的面积增加了后期钆增强(LGE) 20分钟后静脉管理钆对比(gadobutrol 0.1摩尔/公斤,Gadovist®,拜耳谢尔制药公司,德国)。T1序列是1毫米厚片使用0.5毫米多嘴,视野6×6厘米,矩阵规模256×256,TR 70 ms, TE 2.8毫秒,翻转角度30°。

图片被导出为DICOM和分析使用专用软件(4.0.1 cvi42与圆心血管成像,加拿大)。总共5 - 7的短轴电影图像被用于计算心卷:左心室射血分数(LVEF),舒张末期容积(类别)、收缩末期容积(ESV),和心肌质量。片相似的位置之间的老鼠心脏被用于分析收购天。收缩和舒张手动为每个片评估从15 - 20帧。心内膜和心外膜轮廓手工绘制在每个可行的收缩和舒张。梗塞面积的计算,指导自动cvi42 LGE映射是使用。梗塞的区域被定义为超过2.5个标准差偏离心肌的引用。梗塞区在14天、28天的被定义为明显不同的区域从常规心肌厚度,和梗塞厚度测量的平均长度至少5手动梗塞厚度测量在不同的位置。

2.10。^82年Rubidium-PET / CT成像

老鼠麻醉有4%七氟醚在天1日14日和28日手术后PET和MRI成像。PET成像是使用一个专门的执行临床PET / CT扫描仪(美国西门子Inveon)。背静脉后中空永久24 G导管,老鼠维持在0.5 - -4.0%七氟醚在扫描。老鼠被放置在水加热床上卧姿,呼吸和心电图监测。正确的定位是通过初始CT侦察图像进行验证。一个^82年Rb发生器(cardiogen - 82、Bracco诊断Inc .)、美国),只是过期的临床使用,配备一个三通阀,使控制注入到老鼠的数量(24根据制造商的建议),和校准。大约30 - 150兆贝可收到的动物^82年Rb在1.25 - -1.75毫升生理盐水,10分钟列表模式宠物收购后不久就开始了。动物被注射1.5毫升CT对比(Omnipaque 350毫克,通用电气医疗集团,丹麦)在CT扫描进行了解剖参考衰减校正。最小化^82年Rb活动从血池,宠物列表模式数据直方图分为两个时间段:第一个45秒,剩下的555秒。随后,先前描述的图像重建(23]。

PMOD心脏工具版本3.3 (PMOD技术有限责任公司、瑞士)是用于宠物的处理和分析数据。最初,PET和CT的融合图像被创建来验证对衰减校正心脏的位置。宠物图像调整到短,垂直和水平长轴。心肌轮廓是半自动地决定,通过设置标记指导基底和左心室的顶端点,其次是目视检查和可能的修正。当地心肌灌注是量化^82年Rb活动的比例最大心肌活动。这些相对价值得到心肌部分根据17(美国心脏协会(AHA)段23),作为整个心脏的活动。扫描之间的数据比较个人的老鼠,在团体之间进行了比较。

2.11。组织学

动物祭祀麻醉期间被斩首后,心被切除,在盐水洗,从主动脉进行逆行灌注生理盐水4%多聚甲醛紧随其后。心脏被放置在甲醛24小时并存储在70%乙醇在石蜡包埋前。心被剪的短轴切片机,并使用以下执行免疫组织化学:CD31(罗福斯生物,nb100 - 2284)、CD68 (Abcam, 125212),马森的三色的苏木精和伊红())。抗原抗体染色之前,检索了使用柠檬酸缓冲和微波治疗。获得的图像是一个×20目的扫描和随后的缝合,生产整个短轴切片的图像。纤维化马森的三色的染色使用ImageJ量化(斐济)整个心脏。CD31 peri-infarct地区集群从1 - 4分,和CD68在整个计算梗死面积和归一化的计算区域。

2.12。统计数据

对于功能测试,测量参数的变化使用成对的群体内部进行了评估t以及与Bonferroni调整,而对比组使用单变量分析执行第一天协变量和图基事后测试。保留用重复测量方差分析比较图基事后测试。所有统计数据进行使用SPSS (IBM SPSS统计诉22)。

3所示。结果

3.1。AMI感应和生存

共有97只动物被包括在这项研究中,其中37 AMI过程没能活下来。其他动物死亡或被安乐死由于麻醉期间扫描( )或外部伤口( )。老鼠加权266±15 g时的过程,259±17 g在第一天,在第14天273±16 g, 300±16 g至28天。

共有51个老鼠完成整个实验周期。不是所有的MRI和PET图像的最优质量,和数据从一些老鼠不能由于这种分析。先生的数据,共38个老鼠用于分析:虚假的( )、控制( 对asc),盐( 在藻酸盐凝胶对asc), ( )。对于BLI数据,共38个老鼠用于分析:对asc在盐水( 在藻酸盐凝胶对asc)和( )。19老鼠对于灌注数据,用于分析:虚假的( )、控制( 对asc),盐( 在藻酸盐凝胶对asc), ( )。

3.2。藻酸盐凝胶对细胞的影响保留

BLI信号强度无显著差异或保留在ASC治疗组之间。对asc在盐水一般对asc BLI信号强度高于生产海藻酸水凝胶( )。相比之下,有一个倾向于对asc在藻酸盐凝胶更好的保留( )(图2)。

3.3。在治疗组改善功能恢复

LVEF明显增加在随访期间两个治疗组(生理盐水对asc:从42.6%到50.3%在第14天, 在28天,至49.5%, ;对asc在藻酸盐凝胶:从45.0%到50.9%在第14天, 在28天,至50.8%, ),而这并不是在对照组(从42.6%到43.2%在第14天,NS, 43.9%在28天,NS)(表1和图3)。组间比较LVEF的变化时,变化是显著提高治疗组与对照组相比,从第一天到28天(对asc盐水与控制: ;对asc在藻酸盐凝胶与控制: ),而不是从第一天到第14天(对asc盐水与控制: ;对asc在藻酸盐凝胶与控制: )。ASC之间没有区别ΔLVEF观察治疗组( )。

不包括老鼠小梗死灶时,定义为在第一天LVEF > 50%,意味着效益在28天的治疗更明显,与ΔLVEF从6.7%上升到7.2%和5.7%到8.0%生理盐水对asc ( )和藻酸盐凝胶( ),分别为(表1)。没有观察到显著差异在两组之间(表1),在没有区别LVEF两ASC或ESV细胞株用于治疗( )。

3.4。梗塞大小

梗塞区之间的比例在28天第一天和梗塞区域被用作衡量心肌梗塞抢救。有一个倾向于更大的梗塞抢救治疗组与控制相比,但这并不重要(在生理盐水对asc: ;对asc在藻酸盐凝胶: )。对asc梗塞厚度(也是明显在盐: ;对asc在藻酸盐凝胶: )(图4)。

3.5。灌注

^82年Rb-PET / CT显示,全心灌注在梗塞的老鼠从第一天增加到28天(控制和对asc盐: 在藻酸盐凝胶对asc: )。全心灌注的增加(百分点)在28天往往要高于治疗组(对asc盐水与控制: ,对asc在海藻酸水凝胶与控制: )。在节段的基础上,往往有顶端增加灌注在28天的ASC治疗组相比虚假的组(生理盐水对ASC: 在藻酸盐凝胶对asc: 控制: ),但治疗组之间没有显著差异和控制( 对ASC治疗组(图)5)。

3.6。组织学

马森的梗塞厚度测量的三色的控制:655±126μ对asc m,在盐水:730±118μ对asc m,在藻酸盐凝胶:831±404μm。没有差别比例的纤维化:控制:33±8日对asc在盐水:36±17日对asc和藻酸盐凝胶:31±8%, 对ASC治疗组与控制。更多CD31-positive容器集群,以及大型船只的梗死面积,发现治疗组,但不显著。有一个无意义的CD68少的趋势⁺细胞治疗组梗塞的面积(控制:18±12,在盐水对asc: 10±4, 与控制,对asc在藻酸盐凝胶:14±3 CD68⁺细胞/毫米², 和控制)。样本图像的每个染色可以在补充图S1。

4所示。讨论

4.1。转导细胞的验证

为了增加外部验证的研究中,我们使用一个以上的细胞系。没有差别的功效和细胞系之间保留。L2T-transduced ASC细胞系能够三重微分和共同ASC表面标记表达水平与正常对ASC [25]。此外,细胞没有任何衰老的迹象,这是符合我们实验室以前的结果(26]。

4.2。保留

我们没有观察到细胞的增加保留使用海藻酸水凝胶为ASC管理,而对ASC注射生理盐水。大型动物的研究与治疗慢性梗死MSC保留两周后还没有发现影响使用1%海藻酸水凝胶,在我们的研究中,但显示改进保留使用2%海藻酸水凝胶(27]。别人已经发现增加保留使用其他水凝胶或配方。杨等人。发现改进保留syngenic移植对asc Sprague-Dawley使用纤维蛋白水凝胶。他们发现>增加20% BLI信号与生理盐水注射后14天,BLI检测纤维蛋白组在28天(28]。Danoviz等人显示保留增加纤维蛋白水凝胶和胶原蛋白水凝胶后24小时内注射在大鼠(29日]。

4.3。细胞治疗心肌功能恢复的影响

提高LVEF从第一天在ASC治疗组明显已经14天之后,虽然没有显著增加与对照组相比,由于数据点在第14天少于28天。有证据表明,细胞疗法是最有效的大缺陷和低LVEF (30.- - - - - -32]。因此,我们做了一个亚组分析的动物在第一天与LVEF低于50%,表明小梗死,导致更加明显ASC 28天(表后治疗效果1)。功能改进符合最近的荟萃分析的结果为小型和大型动物的研究。这些研究发现MSC治疗心肌梗死在鼠标AMI和提高LVEF 7.5% ~ 8%,大型动物MI (33- - - - - -35]。

4.4。梗塞大小和灌注缺陷

报告的MSC治疗大鼠AMI的积极结果,除了增加LVEF (36- - - - - -40),研究人员发现治疗增加血管密度(36,37,39和疤痕厚度40),而减少细胞凋亡(37,39,40),梗死大小(36,40),和纤维化36,40]。这些通常是用组织化学观察。符合这一点,我们观察到的趋势增加疤痕厚度和减少梗死面积使用MRI和组织学。然而,我们没有观察到任何改变在应对ASC纤维化治疗。这可能是。此外,我们观察了治疗尽管缺乏的功能效益显著的证据增加梗死厚度和减少梗塞大小与控制。

灌注缺陷减少心肌梗死后第一天后随着时间的推移,倾向于减少更多的控件组相比,治疗组虽然不显著。这是符合更频繁的观察血管peri-infarcted地区的集群治疗组(补充材料),曾被观察到的细胞治疗心肌梗死(41]。灌注对asc的海藻酸凝胶没有明显增加从基线,和灌注的变化从第一天到28天并不明显高于骗局。这是由于小的动物数量在这个集团( )。这是由于技术上的挑战,这巧合发生在藻酸盐凝胶组的扫描。

4.5。保留和功能效益

保留已发现和功能增加了夏等。热敏的水凝胶,保留增加同种异体msc在2小时,第一天,28天老鼠AMI模型。水凝胶组表现出增加毛细血管密度和LVEF,以及减少间质纤维化与生理盐水组相比。LVEF的增加与对照组相比增加了一倍以上的水凝胶组(增加~相比增加13% ~ 30%生理盐水组和水凝胶组,分别地。)(42]。同样,林等人的保留增加骨髓单核细胞通过自组装多肽纳米纤维在猪模型的AMI。与夏et al .,功能方面的治疗效果提高LVEF被保留的增加(增加了一倍多43]。

细胞保留之间的联系和功能好处是反映在我们的研究中,具有类似ASC治疗组的治疗效果和保留。的海藻酸凝胶没有显著增加ASC保留可能是因为它是专为冠脉内注射后临床AMI和没有心肌内的管理44]。

5。限制

这一事实对asc是AMI后立即注射意味着没有功能测量AMI后和在治疗之前。如果有一个治疗效果已经24小时后,治疗的功能效益的结果会因此减弱。

我们不包括一组与海藻酸水凝胶对asc没有。可能会有一个功能应用海藻酸凝胶的影响没有对asc,但我们没有研究这个问题,因为我们主要是感兴趣的潜在对asc的保留和功能。我们的结果不建议一个独立的影响海藻酸水凝胶应用直接心肌内的注入,尽管它可以预防扩张型心肌病,当应用在AMI的猪模型通过冠状动脉(44]。

梗死不均匀,导致大变化中的组。这可能掩盖了最终结果。为了显示全貌和减少社会团体内部的变化,我们已经提出了结果与所有数据包括,以及数据纠正LVEF 50%以上的第一天。

保留对大多数动物的第一测量24小时后管理。这可能是可能表明我们只测量接种细胞的一小部分,因为只有10%的注射细胞肌内注射后1小时保留(7]。然而,其他研究人员发现保留使用24小时的差异作为第一BLI时间点,可以改善心脏功能的差异联系在一起(9,28]。

的^82年Rb-PET / CT灌注成像技术挑战性的在小动物模型中,由于高正电子同位素和小尺寸的范围。此外,成像只是在休息,提供数据的灌注区域但不是冠状流储备。然而,这种方法已被证明与壁运动以MRI在大鼠AMI模型(24]。

6。结论

本研究首次调查如果政府对asc的人类在临床上可翻译1%海藻酸水凝胶可以增加注射细胞的保留,如果这将影响再生效果的治疗大鼠AMI模型。我们发现没有显著影响共同的保留。管理人类对ASC海藻酸水凝胶相比显著增加泵功能参与AMI,但只有水平与ASC没有海藻酸凝胶治疗。

的利益冲突

Smadar科恩对海藻酸水凝胶组成美国专利申请中。所有其他作者没有商业、专有或财务利益冲突。

确认

作者感谢老人安德森博士和埃里克Santoni-Rugiu病理学系,Rigshospitalet,哥本哈根,丹麦,组织学上的支持和解释的结果。作者感谢助理教授从DanStem金旸,丹麦,哥本哈根大学教授Gambhir从斯坦福大学,美国,请允许我们使用luciferase2-TdTomato (L2T)质粒。作者感谢教授Søren我校组织的免疫学和微生物学,哥本哈根大学,丹麦、传播的质粒,感谢副教授弗雷德里克Vilhardt Vilhardt集团,哥本哈根大学的转导L2T质粒进入人类ASC线。作者感谢安德斯副教授榆树皮德森的免疫学和微生物学,丹麦,哥本哈根大学和Liselotte Rothmann Norup流式细胞术的核心设施哥本哈根大学,丹麦,他们帮助细胞排序L2T-positive hASCs。作者感谢与尼尔森Kasper帮助动物和米歇尔Westergaard Kaijer和乐天Kellemann Kristensen优秀的援助与组织学,集群的所有分子成像,丹麦哥本哈根大学的。作者感谢给Joo安德森和Mojdeh Lotfi心脏病干细胞中心实验室协助。这项工作是由丹麦创新基金以及由克里斯汀·og弗雷迪约翰森喜欢。

补充材料

组织学染色提供了一个辅助图的图像。一)CD31-positive血管。B) CD68-positive巨噬细胞。C)马森的三色的。D)的面具马森纤维化的三色的进行分析。(补充材料)