间充质干细胞在面向PLGA / ACECM复合支架加强Structure-Specific透明软骨的再生兔模型

文摘

关节软骨缺乏血液供应和神经。因此,在骨科关节软骨再生仍然是一个主要挑战。脱细胞细胞外基质(ECM)基于策略最近受到了特别的关注。本机软骨的结构展示复杂的区域异质性。具体地说,组织工程支架的发展模仿天然软骨的取向结构的软骨再生的效用而言。以前,我们面向制造的PLGA / ACECM(自然、nanofibrous、关节软骨ECM)复合支架。体外,我们发现支架不仅引导种子细胞增殖以一致的方式,也表现出较高的生物力学强度。检测是否面向体内软骨再生是可能的,我们使用间充质干细胞(MSC) /脚手架结构修复软骨缺损。结果表明,软骨缺陷可以完全再生。组织学检查这些成为充满透明软骨和软骨下骨。 Moreover, the aligned structure of cartilage was regenerated and was similar to that of native tissue. In conclusion, the MSC/scaffold constructs enhanced the structure-specific regeneration of hyaline cartilage in a rabbit model and may be a promising treatment strategy for the repair of human cartilage defects.

1。介绍

关节软骨缺损是非常常见的由于越来越多的患者创伤性损伤和骨关节炎(OA) [1]。软骨自然缺乏血液供应和神经(2]。因此,修复软骨损伤是非常困难的因为可怜的愈合能力。目前临床软骨修复方法是有限的3]。与传统的治疗方法,如软骨下钻孔和微裂缝,组织工程成为一个非常有前途的替代治疗软骨损伤(4]。

脚手架、种子细胞和生物化学或生物力学刺激的性质的三个关键要素是组织工程和再生医学(5,6]。天然和合成聚合物已被广泛调查作为软骨组织工程支架材料(7]。最自然的聚合物保护或模拟的基本生化成分原生组织(8]。表面附着的特定信号肽可提高细胞依附,扩散和再分化9]。因此,生物活性给予的总是比合成聚合物。脱细胞细胞外基质(ECM)是最受欢迎的生物材料用于软骨再生(10- - - - - -12]。然而,这种支架的力学性能是不够的。合成聚合物具有良好的生物力学性能、良好的生物相容性,可控生物降解率(13]。然而,大多数合成聚合物疏水和缺乏内在的生物活性;因此,他们并没有促进细胞播种或干细胞软骨形成(14]。

仿生结构类似于脚手架本地组织的工具制造(15- - - - - -19]。关节软骨展览区域差别在细胞分布和胶原纤维结构。值得注意的是,结构的深层软骨组织运行垂直对齐的软骨下骨20.]。一些研究表明,支架对齐可能有重大影响的方向软骨再生(21,22]。

结合合成和天然高分子材料的优势,我们之前开发的面向PLGA / ACECM复合支架使用一种改进的热诱导相分离方法(21,23]。我们不仅证实了复合支架细胞表现出良好的亲和性和生物力学能力但还出现软骨的形成,是结构一致。

软骨细胞是关节软骨的(独特的)功能细胞(24]。然而,软骨细胞收获是创伤,足够的体外扩增的细胞是很困难的。干细胞再生策略在软骨组织工程中扮演至关重要的角色(25]。间充质干细胞(msc)的优势容易收获,身体的最小要求入侵,相对良好的增殖能力,以及从事体外软骨形成能力(26- - - - - -28]。然而,没有软骨再生的体内研究使用msc加载到面向PLGA / ACECM复合支架还没有出现。

在目前的研究中,我们首先来源于msc的孤立的自体骨和播种面向这些细胞在PLGA / ACECM复合支架。然后我们植入cell-scaffold构造成软骨缺陷兔子(图中创建1)。我们发现cell-scaffold结构促进软骨再生;再生是24周postimplantation明显的保持一致。

2。材料和方法

2.1。隔离和msc的文化

工作后批准的动物保健和实验委员会中国人民解放军总医院,来源于msc的骨头被隔绝麻醉成熟新西兰白兔(体重2.5 - -3.0公斤)和培养如前所述29日]。简要8毫升的从髂骨骨髓抽出物是收获,其次是Lymphoprep梯度离心法在2000 rpm在室温下了25分钟。单核细胞分离,洗两次汉克的解决方案。这些细胞是resuspended正常生长介质与血糖水平较低(杜尔贝科修改鹰的中低葡萄糖(DMEM-LG);美国Sigma-Aldrich)补充10% (v/v)胎牛血清(美国Gibco的边后卫),然后镀1×10的密度⁶细胞/厘米²在湿润的气氛中低于5% (v/v)有限公司₂在37°C。媒介改变了曾经在接下来的3天,直到细胞融合达到80%。细胞被deattached使用0.25% (w/v)胰蛋白酶解决方案和扩大在一个常规生长介质的初始浓度1×10⁴细胞/厘米²。msc没有受到chondrogenic感应,并通过细胞用于以下实验。

2.2。制备的PLGA / ACECM复合支架和细胞播种

2.2.1。面向制造的PLGA / ACECM复合支架

以前,我们成功地面向制造的PLGA / ACECM复合支架(21,23];因此,我们描述了制造只是短暂的。PLGA(70/30)是10%(溶解在二氧六环w/v)。同样重量的ACECM被添加到该解决方案形成泥浆。固体浓度调整到7% (w/w)的二氧六环。混合浆注入到4毫米直径圆柱形模具,然后垂直插入一个金属板和举行−20°C为30分钟。后成为完全冻结,模具进一步举行2 h−20°C,转移到冷冻干燥器,在真空冻干48 h。支架从模具中取出,交联的情况下进行在258 nm紫外线4 h。支架被浸在95% (v/v()酒精含有50 mM 1-ethyl-3) - 3-dimethylaminopropyl碳化二亚胺盐酸盐(EDAC)和20毫米N-hydroxysuccinimide(美国Sigma-Aldrich) 24小时在4°C。过度的EDAC一再被冲走,磷酸盐(PBS)。支架在triple-distilled洗水去除残留二氧六环,然后进行冷冻干燥。支架终于消毒⁶⁰有限公司γ-射线(5 mRad)和存储在4°C之前使用。

2.2.2。细胞播种

msc resuspended培养基。面向PLGA / ACECM复合支架(4毫米直径,厚度1.8毫米),由环氧乙烷消毒,被放置到井24-well培养板。整除(50μL)的细胞悬液(大约2×10⁶细胞)被添加到支架完全饱和了,然后孵化低于5% (v/v)有限公司₂在湿润的气氛中为4 h在37°C允许细胞粘附,外加20μL DMEM (10%v/v每30分钟]的边后卫)每个支架。24-well的每个好培养基培养板收到额外的1毫升、和文化持续了3天。

2.3。外科手术

研究协议是动物保健和实验委员会批准我们的医院。成年新西兰白人男性兔子(16周)在2.5和4.0之间公斤被用于这项研究( )。每个兔膝关节开放通过内侧parapatellar方法在全身麻醉下。全层圆柱形缺陷深度(直径3.5毫米,1.5毫米)创建两腿节的膝凹槽(到达软骨下骨,用最小的出血,但不穿透骨髓腔;我们使用角膜环钻钻;图2)。

手术进行了双边扼杀关节,关节,接受了同样的治疗。兔子被随机分为三组:一个面向MSC-loaded PLGA / ACECM composite-scaffold集团(MSC /复合支架植入软骨缺陷),一个面向PLGA / ACECM复合scaffold-alone集团(只有插入支架),和一个对照组。每组软骨缺陷的数量如表所示1。软骨组织工程构建的媒体都融入了缺陷没有额外的固定。术后,所有的动物都被允许自由行动就恢复了意识。预防感染,所有的动物收到肌肉内注射青霉素800000单位的手术当天,每一个未来3天。兔子安乐死在12和24周时间均为评估。

2.4。宏观检查和评分

兔子是牺牲时间均在12和24周,和膝关节收获。评价都是由三个独立的个体被分组。维修质量估计使用标准的国际软骨修复社会宏观评价软骨修复。包括评级使用的评分系统修复的程度,与边界区域,集成和宏观外观(表2)[30.]。

2.5。Microcomputed层析评估软骨下骨形成

Microcomputed断层摄影术(ct机;美国通用电气)被用来定量和定性评估软骨下骨再生手术后在12和24周。体积感兴趣的定义在每个缺陷的软骨下骨地区网站。软骨下骨再生的估计骨体积/组织体积(BV /电视)和小梁厚度(Tb.Th)。

2.6。组织学检查和评分

样本固定、脱钙脱水,嵌入在石蜡和分段(5μ米厚片)。接下来,切片苏木精和伊红染色,甲苯胺蓝和红色染料o .图像从每组记录通过亮场显微镜(日本尼康)。每个再生软骨层的厚度(从软骨表面潮标)测量并与周围原生的软骨。甲苯胺蓝和红色染料染色的程度是评估通过计算集成光密度(IOD)单位/染色区(μ米²)借助ImageJ软件(美国国立卫生研究院)。分级进行盲法的方式由三个独立的个体。修复程度的评估是基于国际软骨修复社会分级系统。组织学分级的评价涉及表面的规律性,矩阵染色,细胞分布,细胞生存能力,和其他物品(表3)[31日]。

2.7。免疫组织化学染色

再生软骨胶原蛋白II型的表达是通过免疫组织化学染色法检测12和24周postimplantation。胶原蛋白II型是彩色immunohistologically使用鼠标anti-collagen II型多克隆抗体(美国圣克鲁斯)根据制造商的指示。总之,水平和垂直部分被封锁peroxidase-blocking解决方案10分钟,其次是三个与PBS洗5分钟,然后每个部分是孵化与50μL anti-collagen II型多克隆抗体的解决方案(1:50工作稀释)一夜之间在4°C。部分被清洗和孵化与生物素化的二次anti-mouse抗体(Maixin,中国),其次是发展diaminobenzidine (Maixin,中国)。部分与苏木精复染色和显微镜下检查(尼康、日本)。II型胶原免疫组织化学染色法是通过计算评估IOD每染色面积(μ米²)的帮助下ImageJ软件。

2.8。生物力学评估

再生软骨的力学性能是由压痕测试评估使用专用设备(ElectroForce 3320;美国Bose),如前所述,在手术后12和24周。杨氏模量是使用以下公式计算:E=P(1−ν²)/ 2awk(P作用力;ν泊松比;一个硬度计压头半径;w,变形;k,area-aspect比率一个/小时(h、软骨厚度)(32]。

2.9。统计分析

所有的数据分析了借助SPSS软件(版本。16;美国SPSS,芝加哥,IL)和±标准差的值表示为手段。单向方差分析之后,图基的事后多重比较测试应用于识别组之间的显著差异的后评估的异同方差。值< 0.05被认为反映了统计学意义。

3所示。结果

3.1。兔子在关节健康和一般的观察

3.1.1。兔子的健康

1星期参与,兔子减少他们的活动水平,似乎比以前更低的精神状态;他们吃得更少但展出近关节活动的正常范围。1只兔子死于麻醉反应,五死后一周内由于手术创伤,三个死于腹泻1月内,两个死于2个月内耳螨的感染,和一个安乐死是因为联合感染。所有的兔子,死在牺牲其他动物所取代。所有剩下的兔子都牺牲了及时,和膝关节。

3.1.2。在收获之前一般联合观测

在收获之前,膝盖的皮肤是完整和疗愈好;我们观察到没有肿胀或发烧,也没有不正常的分泌。联合液体很清楚。synoviae缺乏增厚和挛缩。再生和周围的软骨表现没有明显的剥落或增生,没有髌骨脱位,没有明显的关节不稳定。

3.2。宏观检查和评分

在12周参与,软骨表面未经处理组明显低于本地软骨组织。此外,贫困与周围软骨是明显的集成,和最小cartilage-like组织再生(图3(a))。骨软骨缺损主要在横断面视图(图明显3(g))。scaffold-alone组,缺陷面积几乎是充满新组织和边界出现明显(图3(c))。然而,在剖视图,中央区域的缺陷并没有完全装满了新组织和再生是不连续(图3(我))。缺陷测试组,面积几乎完全充满了新的软骨组织,相对透明、光滑的外观。边界是区分,表现出良好的与健康的软骨(图的集成3(e))。然而,软骨下骨没有重组完全在中部地区,所透露的横断面形态(图3(k))。

在24周postimplantation,治疗组中有缺陷的区域增加了大小和集成仍然贫穷。此外,新组织明显不同于本机软骨(图3(b))。在横截面,缺陷区域小于12周(图3scaffold-alone组(h)),软骨lesional边境仍明显,但地区已变得模糊。修复组织表现出相对光滑的表面和与本地集成组织(图3(d))。在横断面形态评价,比在12周的连续性和光滑性,但缺陷边界仍然有些不均匀(图3(j))。相比之下,在cell-loaded composite-scaffold集团缺陷区域完全装满了再生组织,这是非常相似的邻近健康软骨在颜色和纹理。软骨缺陷边界是模糊的,和良好的集成与周边原生组织(图就非常明显3(f))。在横断面视图,从本地软骨修复区没有明显差异(图3(左))。宏观数据和修复关节软骨的分级图所示3(m),宏观scaffold-alone组的分数和cell-loaded支架组优于治疗组的12和24周(包括时间均 )。

3.3。组织学检查和评分

组织学上称为宏观效果验证。在术后12周,缺损区域未治疗组仍然凹,没有明显的与本地集成组织。没有明显的软骨组织或软骨下骨再生,除了一些纤维组织(图的发展4(a))。scaffold-alone组中,充满了完全修复组织缺损区域和边界区域表现出持续集成与健康的软骨,虽然它有点不均匀(图4(c))。Cartilage-specific矩阵染色不均匀(数字5(f) -5(j)),再生组织无序(数字6(一)-6(c))。然而,cell-loaded支架组,软骨缺损区域光滑连续,边界区域与邻近组织(图集成4(e))。修复软骨的染色强度强于scaffold-alone组,但弱于本机软骨(数据5(k) -5(o))。大多数在深区软骨细胞是一致的(数字6(d) -6(f))。

在24周参与、集成仍然可怜的治疗组中,一些细胞矩阵被染色。大多数只包含纤维组织再生区域。此外,没有明显的软骨下骨再生;同样,只有纤维组织明显(图4(b))。相反,scaffold-alone组修复区域表现出表面光滑,与正常软骨(图集成4(d))。比本地软骨修复组织薄得多,但再生软骨结构(数据保持一致6(g) -6(我))。再生软骨基质染色强度弱于本机的软骨(图7(f) -7(j))。cell-loaded支架组,修复组织了一个连续的和光滑的表面,与周围软骨(图集成4(f))。此外,再生软骨的厚度没有不同于邻近的软骨,matrix-specific染色的程度是类似于健康的软骨(数字7(k) -7(o))。另外,大多数在深区软骨细胞组织在列(数字6(j) -6(p))。

甲苯胺蓝、红色染料O和免疫组织化学染色法对胶原蛋白II型12和24周时间均证明chondrogenic体内分化(数字5- - - - - -7)。在术后12周,scaffold-alone组和cell-loaded支架组显示为胶原蛋白II型阳性染色。cell-loaded支架组表现出更多的胶原蛋白类型II-positive细胞比scaffold-alone小组12和24周。此外,胶原蛋白II型染色水平与正常软骨相似在24周。然而,II型胶原蛋白不表达治疗组。粘多糖(GAG)表达在所有组验证了甲苯胺蓝和红色染料O染色时间均在12和24周。GAG沉积随时间与II型胶原的表达。碘/彩色区域胶原蛋白II型免疫反应性,甲苯胺蓝和红色染料染色,在12和24周显示较高的胶原蛋白II型和插科打诨比scaffold-alone cell-loaded支架组和治疗组(所有 ;数据6(问)6(s))。关节软骨修复的组织学评分图所示7(p)。cell-loaded支架组的得分显著优于其他两组的12和24周postimplantation(所有 )。

3.4。Microcomputed软骨下骨的层析成象特性

ct机系统被用来估计的质量和数量软骨下骨再生(图8)。提高水平的软骨下骨形成明显的在所有三组12和24周后植入。的骨体积分数(BV /电视),治疗组表现出缺陷区域不显眼的再生在12和24周术后的迹象。scaffold-alone组和cell-loaded支架组表现出高水平的软骨下骨修复在12和24周(所有时间均 ),但是这两个组织在两个时间点(两个显著不同 )。BV /电视比率明显高于比scaffold-alone cell-loaded支架组和治疗组在两个时间点(所有 ;图8(g))。在结核病方面。Th价值,所有三组表现出趋势对软骨下骨再生在12和24周(所有时间均 ),但(所有时间点之间的显著差异明显 )。结核病。Th值明显高于比scaffold-alone cell-loaded支架组和治疗组在12和24周(所有时间均 ;图8(h))。

3.5。再生软骨厚度

再生软骨的厚度在12和24周评估术后(图7(问))。这是最大的cell-loaded支架组在两个时间点( )。此外,从12到24周后植入、软骨厚度增加只有cell-loaded支架组( ),而不是在其他两组( )。

3.6。生物力学评估再生软骨

再生软骨的生物力学特性进行评估通过计算杨氏模量在12和24周术后(图7(r))。抗压模量治疗组之间没有显著差异12和24周术后( )。相比之下,压模scaffold-alone和cell-loaded支架组从12到24周时间均增加( )。此外,抗压模量cell-loaded支架组显著高于其他两组在两个时间点( )。

4所示。讨论

膝关节的关节软骨缺损是非常普遍的在一般和体育人口(32]。软骨损伤修复不良,引发长期OA (33]。许多外科干预措施,包括微裂缝和骨软骨自体或同种异体移植物,开发治疗软骨缺损(34,35]。然而,不满意的治疗。许多组织工程软骨的方法已经开发再生软骨缺陷。支架的制作是在这种方法中最重要的一个步骤。脚手架必须不仅为组织再生创造一个合适的微环境,也是生物抵抗正应力的力量。我们之前开发的一个面向PLGA / ACECM复合支架,结合天然和合成聚合物的优势。然后结合自体msc与面向PLGA / ACECM复合支架修复软骨缺损。值得注意的是,软骨再生完全与PLGA / ACECM复合支架装载应用msc。此外,新软骨和软骨下骨的结构和功能类似于本机的软骨。我们建议我们的再生策略可以用来修复人类软骨缺陷。

cell-loaded支架组,软骨缺损修复几乎完全通过形成新的软骨外观相似的相邻正常软骨。组织学检查再生软骨整合与邻近组织。甲苯胺蓝、红色染料O和免疫组织化学染色法进一步证实cell-loaded支架组包含更多GAG-expressing和胶原蛋白类型II-positive细胞在12和24周参与。值得注意的是,新成立的软骨展出lacuna-like结构特点,提供间接证据表明cell-loaded支架促进chondrogenic体内分化。另外,大多数细胞深层软骨缺损区域组织在列。软骨厚度和软骨下骨形成cell-loaded支架组类似于本地的组织。此外,从功能的角度看,再生软骨生物力学。

修理好了scaffold-alone MSC-loaded支架组群。一些修复软骨明显scaffold-alone组在术后12周;然而,新成立的组织染色仅略呕吐和II型胶原蛋白。此外,这一组的细胞是随机安排的。一些研究表明,ECM降解产物提高了招聘和扩散multipotential祖细胞(36]。我们推测细胞scaffold-alone组可能已经被降解ECM体内。然而,MSC-loaded支架组,msc另外可能通过以下机制促进组织再生(s)(图9)[37]。首先,msc可以直接分化成原生细胞;第二,细胞可能通过分泌的生长因子或激素发挥旁分泌作用,拯救受伤的组织;第三,细胞可以通过隧道传输线粒体纳米管或微泡;第四,细胞可能分泌特定液或微泡,影响周围的细胞。因此,特定的染色和修复软骨的厚度MSC-loaded支架组比scaffold-alone组。自体msc可能在这些方面加强软骨和软骨下骨再生。在24周,修复软骨更成熟比12周scaffold-alone组,值得注意的是,再生软骨是一致的。然而,特定的染色、软骨厚度和软骨下骨再生MSC-loaded支架组比在scaffold-alone组。显然,软骨再生scaffold-alone组和MSC-loaded支架组明显表明,自体msc可以参与软骨niche-specific再分化和再生细胞受到刺激时,周围的ECM体内(因此,在缺乏特定生长因子)。 Previous studies have shown that an aligned scaffold can induce oriented cartilage regeneration [15,21,22),证实了对齐明显scaffold-alone组和MSC-loaded支架组在这个研究。特别是,更好的生物力学能力MSC-loaded支架组与scaffold-alone组提供更好的功能性再生。

比scaffold-alone Stem-cell-loaded scaffold-based策略更有效策略(25),因为他们不仅诱导软骨再生对齐,也增强软骨下骨形成。的更高的分数cell-loaded支架组与scaffold-alone组相比,获得的蒙蔽宏观和组织学评估,进一步支持这一结论。然而,我们的研究有一定的局限性。首先,它将更好的标签添加的msc移植之前,使测定的具体角色扮演的这些msc在软骨缺损再生。其次,较长的观察时间会显示再生软骨是否能长期保持良好的功能,防止办公自动化的发展。第三,大型动物(例如,山羊或绵羊)模型应该用于进一步评价软骨再生的功效。

5。结论

总的来说,结果表明,自体msc加载到一个面向PLGA / ACECM复合支架增强structure-specific透明软骨和软骨下骨的再生兔模型。这种方法可能成为一个有前途的治疗策略对人类软骨缺损修复。

伦理批准

本研究作者的机构审查委员会批准。

的利益冲突

所有参与本文作者声明没有利益冲突有关的出版。

作者的贡献

所有作者都参与这项研究和批准它的最终版本。郭音译和Xifu郑贡献同样这项工作。

确认

这项工作得到了国家自然科学基金(81472092),中国高技术研究发展计划(2012 aa020502 2015 aa020303),中国国家重点研发项目(2017 yfc1104102 2017 yfc1103404)和北京科学技术发展基金会(Z161100005016059)。

引用

1. c·博热粗厚呢,k .各州使用成人干细胞软骨组织工程:现状和未来的发展,“干细胞国际ID 438026条,卷。2015年,14页,2015。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. c·l·周a·l·里维拉诉威廉姆斯et al .,“千分尺规模间充质干细胞形成指导面向结构的大规模组织工程软骨,”Acta Biomaterialia,60卷,第219 - 210页,2017年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. g .戴尔'Osso m . Ghilardi诉Bottai g . Bugelli g .圭多和s . Giannotti”最新的审查和病例报告的膝盖软骨的缺陷治疗ACI技术:clinical-instrumental和组织学结果,“外科手术技术国际26卷,第323 - 317页,2015年。视图:谷歌学术搜索
4. b·约翰斯通m . Alini m . Cucchiarini et al .,“为关节软骨组织工程修复——艺术的状态,”欧洲细胞和材料25卷,第267 - 248页,2013年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. r·兰格和j·p·文森提“组织工程”,科学,卷260,不。5110年,第926 - 920页,1993年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. y, s .陈,潘安”生物力学信号指导干细胞软骨工程:从分子适应组织功能,“欧洲细胞与材料31卷,59 - 78年,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. j .廖施k,问:叮,瞿y, f·罗和z .钱,“最近的事态发展在scaffold-guided软骨组织再生,”生物医学纳米技术杂志》,10卷,不。10日,3085 - 3104年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. a·奥尔森,a .严重和d·格兰德”为关节软骨修复支架,”杂志医学植入体的长期影响,22卷,不。3、219 - 227年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. e·a·Kiyotake e·c·贝克和m . s . Detamore“软骨细胞外基质作为软骨再生,生物材料”纽约科学院上,卷1383,不。1,第159 - 139页,2016。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. k . e .弯管机,p . r . van Weeren s . f .贝狄拉克d . b .纱丽,w . j . Dhert和j . Malda”细胞外基质支架软骨和骨骼再生。”生物技术的发展趋势没有,卷。31日。3、169 - 176年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. h·康j .彭s . et al。”在活的有机体内软骨修复使用脂肪干细胞cell-loaded脱细胞软骨基质支架,”组织工程和再生医学杂志》上,8卷,不。6,442 - 453年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. 问:杨,j .彭问:郭et al .,”一个软骨ECM-derived三维多孔非细胞矩阵为体内软骨组织工程支架PKH26-labeled chondrogenic骨骨髓来源间充质干细胞,”生物材料卷,29号15日,第2387 - 2378页,2008年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. d . Kosuge w . s .汗,b•哈达德·d·马什,“生物材料,在骨骼和肌肉骨骼支架工程。”目前干细胞研究和治疗,8卷,不。3、185 - 191年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. t . Trzeciak m级,w . Suchorska et al .,“细胞和生物材料的应用组织工程方法治疗软骨、半月板和韧带受伤,”国际整形外科,40卷,不。3、615 - 624年,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. h·v·阿尔梅达,b . n . Sathy Dudurych, c·t·巴克利f . j . O ' brien和d·j·凯利,“各向异性形状记忆藻酸盐支架携带I型和II型胶原为软骨组织工程”组织工程部分,23卷,不。1 - 2,55 - 68、2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. p·d·Tatman w . Gerull s Sweeney-Easter j·戴维斯,a . o .哎呀,和d·h·金,“多尺度关节软骨的生物制造:bioinspired和仿生方法,”组织工程B部分:评论,21卷,不。6,543 - 559年,2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. m . Younesi v . m . Goldberg和o . Akkus,“基于micro-architecturally仿生为间质胶原模板冷凝软骨再生,”Acta Biomaterialia,30卷,第221 - 212页,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. t . j . Levingstone a·拉梅什·r·t·布雷迪et al .,“多层游离collagen-based支架展示层具体的功能在山羊的关节骨软骨组织再生,”生物材料卷,87年,第81 - 69页,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. w . s .贾l . Liu锅et al .,“面向软骨细胞外matrix-derived为软骨组织工程支架,”生物科学和生物工程杂志》上,卷113,不。5,647 - 653年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. s . Camarero-Espinosa b . Rothen-Rutishauser e·j·福斯特和c·韦德,“关节软骨:从形成到组织工程”,生物材料科学,4卷,不。5,734 - 767年,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. 贾,t, z, w·潘,j . Liu和w .太阳,“面向体内评价小说scaffold-BMSC构造加强全层关节软骨修复兔模型,”《公共科学图书馆•综合》,10卷,不。12篇文章e0145667 2015。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. e·l·德·穆德g . Hannink t·h·范·Kuppevelt w·f·Daamen和p . Buma”类似hyaline-like软骨修复骨软骨缺损在兔子使用各向同性和各向异性胶原蛋白支架,”组织工程部分,20卷,不。3 - 4、635 - 645年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. x郑,f·杨,s . Wang et al .,“制造和细胞亲和力的仿生结构PLGA /关节软骨基质复合支架,”材料科学杂志:材料在医学,22卷,不。3、693 - 704年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
24. a . r . Phull s . h . Eo阿巴斯,m·艾哈迈德和s . j . Kim”chondrocyte-based软骨组织工程的应用:概述”,生物医学研究的国际ID 1879837条,卷。2016年,17页,2016。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. b . j .黄、j . c .胡和k . a . Athanasiou”细胞组织工程策略中使用的临床修复关节软骨,”生物材料卷。98年,22页,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. p·罗比”、“间充质干细胞”:事实还是虚构的,在他们的治疗用途和影响,“F1000Research》第六卷,2017年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. s·m·理查森,g . Kalamegam, p . n . Pushparaj et al .,“间充质干细胞在再生医学:专注于关节软骨和椎间盘再生,”方法卷,99年,第80 - 69页,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
28. h .阴王y, z太阳et al .,“诱导间充质干细胞chondrogenic分化和功能形成软骨microtissue体内软骨再生的软骨细胞外matrix-derived粒子,“Acta Biomaterialia33卷,第109 - 96页,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
29. 朱j . z . Chen, j . et al .,“Chm-1基因修饰骨髓间充质干细胞维持chondrogenic表型的组织工程化软骨,”干细胞研究与治疗,7卷,不。1,p。70年,2016。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
30. m . p . van den承担:j . Raijmakers j . Vanlauwe et al .,“国际社会软骨修复软骨(icr)和得以宏观评价分数验证用于自体软骨细胞移植(ACI)和微裂缝,“骨关节炎和软骨,15卷,不。12日,第1402 - 1397页,2007年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
31. p . Mainil-Varlet t . Aigner m . Brittberg et al .,“软骨修复的组织学评估:组织学端点委员会的一份报告国际软骨修复协会(icr)”《骨与关节Surgery-American体积补充2卷。85年,45-57,2003页。视图:谷歌学术搜索
32. t . Rasanen和k Messner地区差异的压痕硬度和厚度正常兔膝关节关节软骨,”生物医学材料研究杂志》上没有,卷。31日。4、519 - 524年,1996页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
33. d·科雷亚,s . a . Lietman关节软骨修复:当前需求,方法和研究方向,”研讨会在细胞和发育生物学卷,62年,第77 - 67页,2017年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
34. g . Knutsen l . Engebretsen t . c . Ludvigsen et al .,“自体软骨细胞移植与膝盖微裂缝。随机试验”,《骨和关节手术,卷86,不。3、455 - 464年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
35. a·c·DiBartola b·m·赖特r . a . Magnussen和d . c . Flanigan临床结果在青少年的自体软骨细胞移植后膝盖:系统回顾”,关节镜检查:《关节镜和手术有关,32卷,不。9日,第1916 - 1905页,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
36. j . j . e .再保险l . Zhang Myers-Irvin et al .,“细胞外基质的降解产物影响细胞迁移和增殖,”组织工程部分,15卷,不。3、605 - 614年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
37. j·l·spe r·h·李和c·a·格雷戈里,“间充质干细胞/基质细胞功能的机制”,干细胞研究与治疗,7卷,不。1,p。125年,2016。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

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