文摘gydF4y2Ba
多能间充质基质细胞(msc)参与形成的骨髓造血干细胞利基市场。捐赠的msc可以作为源领域的复苏患者移植失败后(GF)同种异体骨髓(BM)移植。因为只有几个msc到达大英博物馆静脉注射后,msc被植入棘。8 GF allo-BMT后,患者的另一个造血干细胞移植同时植入msc从各自的捐助者的松质骨。BM是吸气的髂骨这些患者在1 - 2,4 - 5个,9个月后intraosseous注入捐赠者msc。病人的msc栽培,嵌合现象。6 8例,供者造血恢复。供者细胞(9.4±3.3%)被发现在msc。因此,移植msc保持网站的本地化管理,不失去增殖的能力。这些结果表明,msc可以参与捐助造血细胞恢复利基市场或有免疫调节作用,防止重复移植物的排斥。 Perhaps, intraosseous implantation of MSCs contributes to the success of the second transplantation of hematopoietic stem cells and patient survival.
1。介绍gydF4y2Ba
同种异体移植的造血干细胞(allo-HSCT)仍然是许多hematoblastosis患者唯一的治疗方法。gydF4y2Ba
移植失败allo-HSCT (GF)是一种严重的并发症。与主要GF骨髓调节(MAC)的情况下,病人的造血作用从来没有恢复,唯一的选择就是重复allo-HSCT。降低强度的调节(RIC),有一个潜在的病人造血恢复(gydF4y2Ba1gydF4y2Ba]。女朋友的发生率为3.8 -5.6%。研究表明,GF是经典的结果接受者的免疫细胞的免疫反应(特别是T细胞),它仍然是移植前调节后,供体抗原(gydF4y2Ba1gydF4y2Ba]。此外,GF患者长期发育不全,造血微环境可能会严重受损,基质细胞无法支持造血作用[gydF4y2Ba2gydF4y2Ba]。allo-HSCT后,基质微环境遭受的影响化疗药物(gydF4y2Ba3gydF4y2Ba,gydF4y2Ba4gydF4y2Ba]。化疗不仅损害骨髓基质但白血病细胞也骨髓里适应自己的需求,改变基质微环境(gydF4y2Ba4gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba6gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba
基质微环境的结构包括间充质干细胞、多能间充质基质细胞(msc),成纤维细胞克隆形成单位(CFU-F)和成熟细胞。gydF4y2Ba
msc自2000年以来一直用于治疗各种血液和自身免疫性疾病,包括急性移植物抗宿主病(aGvHD)。自2008年以来,在全国血液学研究中心,研究利用msc aGvHD预防进行了(gydF4y2Ba7gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba9gydF4y2Ba]。从那时起,对于每一个病人,从骨髓msc捐助者已经单独培养。在这项研究中,绝大多数的其他研究使用msc,细胞被注射静脉注射(IV), msc注入静脉注射是首先被困在肺部(gydF4y2Ba10gydF4y2Ba,gydF4y2Ba11gydF4y2Ba]。不可能检测到供体msc在人体静脉注射后7 - 10天gydF4y2Ba12gydF4y2Ba,gydF4y2Ba13gydF4y2Ba]。骨髓造血细胞进入根据CXCL12的梯度(SDF1) [gydF4y2Ba14gydF4y2Ba]。趋化因子的趋化因子受体CXCR4受体在msc弱表达。因此,骨髓msc第四介绍几乎没有达到[gydF4y2Ba15gydF4y2Ba,gydF4y2Ba16gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba
当msc IV cotransplanted allo-HSCT时,供体msc在骨髓基质(未找到gydF4y2Ba13gydF4y2Ba,gydF4y2Ba17gydF4y2Ba]。虽然,在注射后,msc可能迁移到炎症的焦点,研究已经表明,他们的迁移能力很小(gydF4y2Ba18gydF4y2Ba,gydF4y2Ba19gydF4y2Ba]。此外,当使用msc骨头和软骨再生,主要问题是在适当的网站本地化msc (gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba
msc参与造血干细胞形成的利基市场,因此元素支持造血作用[gydF4y2Ba21gydF4y2Ba,gydF4y2Ba22gydF4y2Ba]。等基质祖细胞克隆形成单位成纤维细胞(CFU-Fs),间充质干细胞的后代,参与骨髓基质的形成(gydF4y2Ba23gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba25gydF4y2Ba]。msc和CFU-Fs都能够增殖并分化为骨、软骨、脂肪组织。gydF4y2Ba
捐赠者msc在女朋友的情况下可以作为源造血细胞利基市场的复苏。在长时间的骨髓发育不全,3例intraosseously收到造血细胞捐献者的骨髓msc。MSC政府平均2周后,患者恢复自己的造血作用。供体MSC被发现在受体骨髓MSC移植后三到五个月。之前的研究表明,功能足够的捐赠msc生存很长一段时间在病人的骨髓gydF4y2Ba26gydF4y2Ba]。在这些情况下,患者没有cotransplanted从供体造血干细胞。然而,恢复自己的造血作用表明,msc执行营养功能和有助于恢复自己的造血作用。这项工作的结果成为造血干细胞移植的基础结合intraosseous注入msc来源于骨髓的造血细胞捐献者。gydF4y2Ba
在骨髓移植,8 GF同种异体骨髓移植后患者(allo-BMT)观察。这些病人收到相同的捐赠者,第二allo-HSCTs msc注射intraosseously试图恢复基质微环境。捐赠者的长期存在在这些患者的骨髓msc。6个病人恢复捐赠造血作用。gydF4y2Ba
2。材料和方法gydF4y2Ba
2.1。病人gydF4y2Ba
八GF allo-BMT后观察患者的骨髓移植(表gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)。所有患者接受allo-BMT完全缓解。GvHD预防病人收到环孢霉素结合甲氨蝶呤,另外一些病人收到霉酚酸酯。gydF4y2Ba
8例,第一来源的造血干细胞是骨髓,而第二个来源的造血干细胞后外周血干细胞来自同一个捐赠者通过g - csf动员。所有患者接受第二allo-HSCTs和msc注入intraosseously(表gydF4y2Ba2gydF4y2Ba)。在第一次移植,不少于2×10gydF4y2Ba8gydF4y2Ba病人每公斤体重有核细胞注射,第二次移植,不少于3×10gydF4y2Ba6gydF4y2Ba每公斤CD34 +细胞被注入。除了病人2,没有移植物抗宿主病病例发生。gydF4y2Ba
在第二次移植,msc allo-HSCT前服用1 - 6小时在局部麻醉的情况下在左、右两侧髂波峰后收到来自病人的知情同意。鉴于政府的msc是来自几个段落,这些细胞被解冻,洗从二甲亚砜(DMSO) (Sigma-Aldrich、Steinheim、德国)和悬浮在2毫升6%右旋糖酐(Poliglukin贸易名称,由公众公司Biochimik,俄罗斯)。这些细胞被引入骨组织在100 - 200年的小整除gydF4y2BaμgydF4y2Bal通过2穿刺皮肤和骨膜的多个穿刺。gydF4y2Ba
所有作品进行符合赫尔辛基宣言(1964年)。本研究经当地伦理委员会批准,捐助者和病人提供书面知情同意。临床试验(gydF4y2BaNCT03389919gydF4y2Ba)一直在持续的自2016年以来全国血液学研究中心。gydF4y2Ba
2.2。mscgydF4y2Ba
骨髓msc来自25 - 30毫升收到首先从造血细胞移植捐赠者在捐赠。分离的单核细胞,骨髓与同等体积的混合alpha-МЕМ媒体(美国HyClone)含0.2%甲基纤维素(1500 cP, Sigma-Aldrich Steinheim,德国)。40分钟后,红细胞和粒细胞主要是沉淀,而单核细胞保持悬浮。上面的分数(暂停)吸气和离心10分钟450gydF4y2BaggydF4y2Ba。沉积物是悬浮在栽培介质组成的alpha-MEM补充4%捐献血小板(gydF4y2Ba27gydF4y2Ba),2 mМ谷酰胺(美国HyClone), 100 U /毫升青霉素(Ferein、俄罗斯)和50gydF4y2BaμgydF4y2Bag / ml链霉素(Ferein、俄罗斯),和2gydF4y2BaμgydF4y2Ba美国/毫升肝素(σ)。细胞培养在27×10gydF4y2Ba6gydF4y2Ba细胞每T175厘米gydF4y2Ba2gydF4y2Ba培养瓶(美国Corning-Costar)。当一个汇合的单层细胞的形成,细胞用0.02% EDTA(美国σ)在生理溶液(Sigma-Aldrich、Steinheim、德国),然后使胰蛋白酶化(MP生物医学、法国)。细胞随后被播种在4×10gydF4y2Ba3gydF4y2Ba细胞每厘米gydF4y2Ba2gydF4y2Ba瓶的区域。文化是在缺氧条件下保持在37°C公司5%gydF4y2Ba2gydF4y2Ba和5%啊gydF4y2Ba2gydF4y2Ba的气氛。msc是收获与10% DMSO 6%右旋糖酐和低温贮藏。gydF4y2Ba
资格标准msc的临床应用包括纺锤状形态,没有可见的凝块,标准immunophenotype [gydF4y2Ba28gydF4y2Ba)表面分子(gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba区分,证明能力gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba在成骨和脂肪形成的血统gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba]。msc也检查了细菌、病毒、支原体污染使用前作为一个常规的标准程序。gydF4y2Ba
我们对患者进行骨髓穿刺1 - 2,4 - 5,同时捐赠MSC移植后9个月。我们从1 - 4独立收集2 - 3毫升的骨髓穿刺的棘为每一个病人。收获的骨髓,分离、培养msc根据上述标准协议,外加10%胎牛血清(FCS)(美国南部洛根Hyclone,热科学)而不是等离子体富含血小板。从这些骨髓样本,分析了CFU-Fs根据标准协议(gydF4y2Ba9gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba
2.3。嵌合现象分析gydF4y2Ba
嵌合基因的比例在病人的msc决心在章节1 - 3。msc从通道0并不包括在分析由于潜在的捐赠者外加剂巨噬细胞(gydF4y2Ba31日gydF4y2Ba]。msc的immunophenotype通道1确定。超过99%的细胞在每个样本CD90 + / CD105 +和消极的造血细胞标记(CD45、CD33 CD117、CD13和CD34)。gydF4y2Ba
细胞DNA被隔离的标准方法提取和盐沉淀用乙醇。分析了msc的嵌合STR-PCR方法(与一组引物聚合酶链反应短串联重复序列基因座的)。多元分析的协议使用试剂19 STR标记和人类amelogenin轨迹(心脏的加上C1000热循环)。片段分析3130基因分析仪。数据处理进行了使用GeneMapper v.4-0。信息位点预选监控嵌合在观察病人(表gydF4y2Ba3gydF4y2Ba)。捐赠者嵌合的百分比计算使用几个标准公式(gydF4y2Ba32gydF4y2Ba]。最小的比率荧光信号噪声小的DNA检测2和更高。基本噪声峰值的比值约为200。的灵敏度极限嵌合现象调查通过STR-PCR片段分析这种情况大约是1%。gydF4y2Ba
3所示。结果与讨论gydF4y2Ba
在描述所有的病人,观察GF(白细胞的数量在+ allo-HSCT后30天0.02 - -0.3×10gydF4y2Ba9gydF4y2Ba/ L)。患者全血细胞减少症和骨髓发育不全。大多数患者混合或自己的造血作用,在某些情况下,分子嵌合现象不能确定由于极其稀缺的骨髓细胞样本的数量。第二次移植,当天执行第一个allo-BMT 45 - 147天后,患者的外周血的白细胞数量是0.01到0.4×10gydF4y2Ba9gydF4y2Ba/ L。第二移植造血干细胞前,所有患者接受intraosseous msc捐献的造血干细胞。试图造血祖细胞直接注入到骨髓,希望加速移植,进行20年前(gydF4y2Ba33gydF4y2Ba]。随机轨迹比较intraosseous和静脉注射骨髓移植后20年的随访透露,intraosseous造血细胞注入的过程是安全的,结果是类似从当前临床实践的静脉输液(gydF4y2Ba34gydF4y2Ba]。最近,MSC intraosseous注射的安全性证明(gydF4y2Ba35gydF4y2Ba,gydF4y2Ba36gydF4y2Ba]。这些数据让我们使用intraosseous注射间充质基质细胞。没有并发症观察intraosseous MSC移植后的患者。gydF4y2Ba
检测到供体造血重建的6 8例intraosseous注射后的msc。在2例,没有造血恢复。一个病人死于感染性并发症在76天内。第二个病人是活着,然而,白细胞计数为0.01×10gydF4y2Ba9gydF4y2Ba/ L。在剩下的6例,白细胞的数量范围从1.3到3.1×10gydF4y2Ba9gydF4y2Ba/ L +第二次移植后30天。gydF4y2Ba
尽管临时恢复造血作用,2例死于感染性并发症。在一个病人(4 f),供体白细胞增加到1.3×10gydF4y2Ba9gydF4y2Ba/ L +第二次移植后30天,但随后下降到0.5×10gydF4y2Ba9gydF4y2Ba/ L由于混合感染性并发症病因(病毒、细菌、真菌)和第二移植术后病人去世63天。在第二个病人(2 p),白细胞计数在移植后,一个月是1.5×10gydF4y2Ba9gydF4y2Ba/ L, 4天后,胃肠道急性移植物抗宿主病二级诊断,免疫抑制治疗就开始了。白细胞的数量下降到0.1×10gydF4y2Ba9gydF4y2Ba/ L。病人死于传染性并发症第二移植后68天。gydF4y2Ba
剩下的病人还活着并留住捐赠造血作用。gydF4y2Ba
在所有患者捐赠造血作用,时诊断穿刺、骨髓从1 - 4网站位置附近的MSC注入分析基质祖细胞的嵌合。CFU-Fs和msc是由这些病人的骨髓。在2例骨髓造血恢复由于低细胞计数(只有200000 - 300000细胞被用于种植),文化msc和CFU-Fs无法获得。gydF4y2Ba
总细胞生产研究msc 3通道的患者显著降低整个观测期间比捐助者和病人一个同种异体移植后(图gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)。血液恶性肿瘤患者的数据后allo-HSCT [gydF4y2Ba3gydF4y2Ba)和平均值的累积MSC生产研究患者比较。gydF4y2Ba
治疗后的病人在移植之前,msc的细胞总产量下降相比,在健康的捐赠者。1日移植后,MSC细胞生产显著减少1.5倍,减少了所有的研究点。是不可能研究msc GF第二移植前患者因为极度贫困的骨髓细胞组成。第二次移植后,MSC细胞生产相比,在第一减少3 - 5倍。不太可能调节氟达拉滨和美法仑有着极强的破坏效应。最有可能的是,这是一个致命的损害后果基质祖细胞在第二移植之前,这可能是女朋友的原因。在5恢复患者捐献造血作用,供体基质细胞中检测到msc和CFU-Fs 1 - 9个月后第二次移植。在所有患者中,超过99%的msc在通道1 CD90 + / CD105 +和CD45阳性细胞,CD33, CD117、CD13、CD34没有检测到。供者细胞不同的比例从骨髓msc培养,同时吸气髂骨的从不同的网站。数据在骨髓的嵌合,msc, CFU-Fs(平均值±标准错误)展示在表gydF4y2Ba4gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
在病人的骨髓样本,捐赠者的比例CFU-Fs(65.5±4.5%)显著高于msc的比例,表明基质祖细胞(CFU-F) - - - msc的后代捐赠origin-predominate和更比自己的祖细胞功能活跃。gydF4y2Ba
它长期以来一直认为女朋友的主要原因是排斥移植的宿主细胞毒性t细胞(gydF4y2Ba37gydF4y2Ba,gydF4y2Ba38gydF4y2Ba]。有证据表明收件人的基质细胞由供体淋巴细胞攻击,失去支持造血的能力(gydF4y2Ba39gydF4y2Ba,gydF4y2Ba40gydF4y2Ba]。在GvHD,干细胞的骨髓里可能损坏(gydF4y2Ba41gydF4y2Ba]。这是证明,基质祖细胞不转让通过静脉注射gydF4y2Ba13gydF4y2Ba];然而,当植入皮肤下或肾胶囊,这些细胞形成造血异位病灶的基质微环境包括供体细胞和造血细胞的受体(gydF4y2Ba42gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba44gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba
重复的同时引入allo-HSCT捐赠msc intraosseously GF患者进行骨髓移植的基于可用数据的潜在损害的基质微环境和检测供体骨髓msc在几个月后植入到骨组织(gydF4y2Ba26gydF4y2Ba]。6 8例接受这个MSC移植,供体造血恢复。值得注意的是,该网站收集骨髓的患者和供体的MSC注入只有大约一致。嵌合在这方面,所有的数据都是相对的,经嵌合现象的显著变化的骨髓msc观察同步采样后从几个点。捐赠者的骨髓msc的检测患者长期植入后表明,这些细胞执行不仅营养功能,而且分享和参与造血微环境的建设,支持捐赠造血作用。平均只有245±33×10gydF4y2Ba6gydF4y2Bamsc在每个病人植入。相比之下,整个造血区域,包含大约5%的基质细胞,这个剂量是一个微不足道的金额。2患者没有恢复造血,msc,因为无法获得低的骨髓细胞结构。患者恢复造血作用,从他们的骨髓msc孤立在1 - 9个月后第二次移植数量至少在3通道文化。gydF4y2Ba
msc在这些患者的细胞产量显著低于捐助者(6.8±1次)和病人与正常恢复单个骨髓移植后供者造血(3.8±0.4倍)gydF4y2Ba4gydF4y2Ba]。少量的捐赠管理msc足以恢复捐赠这些患者的造血作用。平均9.4±3.3%的捐赠骨髓msc观察所有患者样本在所有时间点。gydF4y2Ba
4所示。结论gydF4y2Ba
因此,捐赠者msc可能改善患者和基质微环境的参与捐助造血作用的恢复。本研究的结果建议的可能性使用intraosseous注射骨髓捐赠者的msc治疗患者的女朋友。gydF4y2Ba
的利益冲突gydF4y2Ba
作者没有相关的利益冲突声明。gydF4y2Ba
确认gydF4y2Ba
作者感谢工作人员他们富有同情心和骨髓移植部门主管护理的病人。作者要感谢新墨西哥州Kapranov immunophenotyping msc。这项研究是在经济上支持通过俄罗斯科学基金会的资助,项目没有。16-15-00102。gydF4y2Ba