加速伤口愈合的成纤维细胞分化人类胚胎干细胞间充质干细胞在压力溃疡动物模型

文摘

成纤维细胞合成和分泌真皮胶原蛋白、基质蛋白,生长因子和细胞因子。这些特征的成纤维细胞提供了一个潜在的方法对成纤维细胞疗法治疗皮肤溃疡更有效地比传统疗法,如细胞因子治疗和负压伤口治疗。然而,纤维母细胞治疗的障碍商业化供应有限的细胞质量一致。在这项研究中,我们测试是否人类胚胎干细胞(hESC-MSCs)间充质干细胞可以分化为成纤维细胞,分化率高的特点,无限的增殖可能从一个殖民地,和同质性。因此,hESC-MSC-derived成纤维细胞(hESC-MSC-Fbs)有显著提高的表达我和III型胶原,纤连蛋白,fibroblast-specific蛋白1 (FSP-1)。此外,血管形成和伤口愈合在hESC-MSC-Fb-treated增强皮肤组织相比,PBS——或者hESC-MSC-treated皮肤组织,以及降低il - 6表达在4天之后形成的压力溃疡伤口在老鼠模型中。针对有限的可用的细胞来源成纤维细胞疗法,hESC-MSC-Fbs显示一个有前途的潜在商业细胞疗法治疗皮肤溃疡的来源。

1。介绍

皮肤损伤,如烧伤、压力溃疡、擦伤、刺伤,擦伤,破坏皮肤屏障,导致感染、创伤和疤痕1,2]。因此,一个适当的伤口愈合过程包括免疫和周围的皮肤细胞之间复杂的相互作用是必需的。参与伤口愈合是一个主要的细胞类型真皮成纤维细胞,在受伤的网站迁移到和增殖反应释放生长因子,如表皮生长因子(EGF),血小板源生长因子(PDGF)和转化生长因子-β1 (TGF -β1)(3,4]。一旦受伤的现场,成纤维细胞合成和沉积各种细胞因子和细胞外相关矩阵大分子,包括胶原蛋白、纤连蛋白(FN)、加速伤口愈合(5]。

一般来说,有两种类型的皮肤伤口、急性创伤(例如,刺伤和烧伤)和慢性伤口(如褥疮、糖尿病溃疡、和疤痕)(2,3,6]。慢性伤口的愈合过程并不能反映急性伤口愈合的一般过程包括止血、炎症、增生、上皮形成,组织改造(7,8]。因此,慢性伤口的特点是低的成纤维细胞增殖能力和生长因子水平降低或缺陷的一个合适的蛋白质矩阵在真皮7,8]。因此,纤维母细胞治疗提供了一种可能性来弥补缺陷成纤维细胞在慢性皮肤伤口。先前的研究表明,纤维母细胞治疗是有效治疗隐性瘠薄表皮松解大疱(RDEB) [9- - - - - -12和皮肤溃疡13,14),而也有反驳的一项研究表明人类fibroblast-derived真皮替代(Dermagraft)没有显示出多少好处下肢静脉溃疡患者来说(15]。

迄今为止,单一细胞因子疗法(16,17),连续的细胞因子疗法(18],负压治疗[19),和纤维母细胞疗法13,14)已应用于治疗压疮。但最重要的是,最高的成纤维细胞疗法有可能修复压力溃疡与其他治疗方法相比由于成纤维细胞合成和分泌人类真皮胶原蛋白、基质蛋白,生长因子,细胞因子和创造正常的皮肤包含新陈代谢活跃,活细胞(12]。尽管有这些优点,有几个障碍商业化的纤维母细胞疗法。首先,创建另一个伤口是如果得到了自体成纤维细胞在正常的病人遭受压力溃疡(20.]。第二,成纤维细胞不合适的细胞来源伤口疗法由于其数量有限,寿命21,22]。因此,如果可以获得足够的成纤维细胞通过特定分化技术,成纤维细胞疗法可能商业化,从而允许他们招聘到伤口网站,促进伤口愈合。

间充质干细胞(msc)的特点是简单的隔离和扩张,安全,和分化潜能multilineage,自导作用,免疫调节功能,缺乏道德问题(23,24]。因此,msc是细胞疗法的广泛使用的来源在再生医学领域(23,25]。然而,msc有限细胞数量和复制的寿命和不同分化潜力依赖个人(24,26]。另一方面,人类胚胎干细胞间充质干细胞(hESC-MSCs)不仅都msc的优点,还可以产生足够数量的早期通过msc与一致的质量(27]。

hESC-MSCs,建立并研究了最近27,28),表达典型的MSC表面标记如CD29、CD44, CD90和有可能包括脂肪细胞分化为间充质细胞,骨细胞和软骨细胞27]。这些细胞也被证明是安全的治疗应用程序通过核型分析在活的有机体内畸胎瘤形成试验(27]。此外,它已被证明,hESC-MSCs显示端粒末端转移酶的活动和再生医学治疗的好处28- - - - - -30.]。因此,hESC-MSCs可能成纤维细胞分化的潜能,可以无限的细胞来源的成纤维细胞,他们克服目前现有的压疮的治疗方法的缺点,考虑到人类的msc可以分化为成纤维细胞使用结缔组织生长因子(CTGF;也称为CCN2) (31日,32]。

在这项研究中,我们调查了成纤维细胞分化的可能性使用hESC-MSCs和测试的有效性hESC-MSC-derived成纤维细胞(hESC-MSC-Fbs) hESC-MSCs在一起在活的有机体内鼠标压力溃疡模型。

2。材料和方法

2.1。试剂

主要的抗体β肌动蛋白(sc - 47778)是来自圣克鲁斯生物技术(圣克鲁斯、钙、美国)。主1型胶原抗体(Col1;234167)是来自默克(达姆施塔特,德国)。主要抗体alpha-smooth肌肉肌动蛋白(αsma;从Sigma-Aldrich a5228)购买(圣路易斯,密苏里州,美国)。主要抗体VEGFA (ab46154)和FN (ab6328)获得Abcam(英国剑桥)。主要抗体CD31 (PECAM-1;TA313338)获得OriGene(罗克维尔市,医学博士,美国)。里帕缓冲区(R2002)获得Biosesang(韩国首尔)。蛋白酶和磷酸酶抑制剂鸡尾酒(11697498001)从Sigma-Aldrich购买(圣路易斯,密苏里州,美国)。

2.2。细胞培养和体外hESC-MSCs纤维分化

hESC-MSCs Eun居提供的请李(韩国首尔国立大学医院),在微血管内皮细胞培养媒体2 (cc - 3162, Lonza、巴塞尔、瑞士)。对于纤维分化,hESC-MSCs被播种在4.5×10⁵细胞/ (6-well板块)。媒介改变了4周每周两次,含2%胎牛血清,50μg / mL抗坏血酸和各种CTGF浓度(10、50和100 ng / mL)。动物实验中,hESC-MSC-Fbs分化从10 ng / mL hESC-MSCs CTGF。

2.3。RNA分离和定量实时聚合酶链反应(PCR)分析

总RNA是孤立的使用简单的蓝色试剂(内含生物技术、韩国)根据制造商的协议。Gene-specific引物在表表示1。所有放大进行了最后的反应混合物(20μL)包含500海里gene-specific引物,2 x SYBR,和6μL(模板在下列条件:变性在95°C 5分钟,40 95°C的周期10年代,15秒58°C, 72°C 15年代和最后一个在72°C扩展了5分钟。反应进行了使用罗氏LC480仪器(罗氏诊断,潘茨堡,德国)。在下列条件下实时PCR结果验证:在95°C变性5分钟;周期(17FN和β肌动蛋白;19岁的Col1;21Col3;23CD44;和25 fibroblast-specific蛋白1 (FSP-1)95°C的30年代,30年代58°C, 72°C 30年代和最后一个在72°C扩展使用相同的互补和引物5分钟。PCR产品2%琼脂糖凝胶上分离和溴化乙锭染色的可视化。

2.4。马森的三色的染色

马森的三色的染色(结缔组织染色)执行根据制造商的指示(# ss1026 -马伯- 500,癌症)。短暂,cryosection幻灯片被安置在预热Bouin流体的60分钟,其次是10分钟冷却时间。幻灯片在自来水冲洗直到部分完全清楚然后在蒸馏水清洗一次。幻灯片被沾染了相同量的Weigert 5分钟的A和B,并与运行自来水冲洗2分钟。接下来,幻灯片被暴露于Biebrich scarlet-acid碱性品红溶液为15分钟,用蒸馏水冲洗。幻灯片分化在磷钼/磷钨酸溶液直到胶原不再是红色,然后用蒸馏水冲洗。没有进一步的清洗,幻灯片处理苯胺蓝解决方案5 - 10分钟,接着用1%乙酸3 - 5分钟,快速脱水95和100%乙醇的两个变化。最后,幻灯片和香脂孵化二甲苯和安装。

2.5。免疫印迹

与冰冷的细胞被洗两次磷酸盐(PBS),细胞溶解适量的组织裂解缓冲(里帕缓冲区包含蛋白酶和磷酸酶抑制剂鸡尾酒),在冰上孵化30分钟,在13000转离心10分钟在4°C。接下来,30μg总蛋白质的加载,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳分离。蛋白质被转移到聚乙二烯二氟化物膜,阻止1 h和脱脂奶粉5% Tris-buffered Tween-20盐水(TBS)和0.05% (TBS-T),和适当的初级抗体孵育TBS含有1%牛血清白蛋白在一夜之间在4°C。膜是洗几次TBS-T孵化和辣根peroxidase-conjugated二级抗体(0.1μg / mL;美国杰克逊ImmunoResearch实验室、西树林、PA)。免疫反应性检测使用一个增强化学发光检测系统(WSE 6100 LuminoGraph我;阿,日本东京)。

2.6。免疫荧光染色

细胞生长和分化在圆形玻璃盖玻片24-well板固定和permeabilized 100%冷甲醇为10分钟。固定细胞孵化1 h PBS中含3%牛血清白蛋白阻塞,其次是2 h的孵化与特定的主要抗体。与TBS-T细胞被洗了三次,然后孵化Cy2-conjugated山羊anti-rabbit /鼠标免疫球蛋白(杰克逊ImmunoResearch实验室)或Alexa 594 -共轭山羊anti-rabbit /鼠标免疫球蛋白(分子探针,尤金,或者美国)要求根据主要的抗体。细胞DNA与4复染色 ,6 - - - - - -diamidino-2-phenylindole (0.2μ在PBS g / mL)。

2.7。流式细胞术分析

细胞(5×10⁵)和PBS洗两次,沾有以下二次抗体共轭荧光团:PE-29(12-0299-41,表达载体),FITC-CD47(11-0478-41,表达载体),PE-CD73(550257年,BD生物科学),APC-CD90(559869年,BD生物科学),PerCP-CD91(46-0919-41,表达载体),PE-CD105(560839年,BD Pharmigen)和PE-CD166 (1 h。560903年,BD Pharmigen)的抗体信息负控制如下:PE-IgG(555749年,BD Pharmigen) APC-IgG(555751年,BD生物科学),PerCP-IgG(46-4714-82,英杰公司),和FITC-IgG(11-4714-81,英杰公司)。PBS的细胞被洗了两次,用流式细胞术FACSCalibur (BD生物科学)。使用FlowJo软件获得的数据进行了分析。

2.8。伤口评估

每一个伤口的长度和宽度是评估在指定的时间与一个电子数显卡尺(三丰公司的款单被装、日本)来衡量每一个伤口的长度和宽度。

2.9。免疫组织化学

免疫组织化学分析,皮肤组织和10%福尔马林固定,浸泡在30%蔗糖保护解决方案,cryosectioned到8μ米厚的部分,并与苏木精和伊红染色测定细胞的分布。此外,部分是应用anti-CD31和anti-VEGFA抗体与苏木精复染色评估血管生成。

2.10。在体外细胞因子的数组

多种炎症相关细胞因子的表达进行了分析使用鼠标炎症抗体阵列C1(美国AAM-INF-1-4 RayBiotech, GA)其次是制造商的指示。简单地说,数组与300年进行μ每组g皮肤组织溶解产物( )与细胞治疗后4天之后压力溃疡形成。点的量化图像,细胞因子水平在每个膜是由计算机辅助图像分析计算使用NIH ImageJ软件(美国马里兰州贝塞斯达)。每组的相对表达水平是由一个简单的算法提供了从制造商的协议。 P1在哪里的平均信号密度(地区)积极控制地方引用数组(平均NT组积极的控制),是指信号密度(区域)的积极控制斑点数组””(PBS的平均积极控制、hESC-MSC或hESC-MSC-Fb集团),和和是归一化的信号强度(地区)点”“数组””。

2.11。动物实验

2.11.1。维护的老鼠

雄性ICR小鼠(Hsd: cd - 25 - 30克,8周大)被保留在当地动物保健设施根据机构的指导方针。57老鼠包含在这些实验:3小鼠正常组和18每治疗组小鼠(接受pbs组、hESC-MSC-treated组,hESC-MSC-Fb-treated集团)的压力溃疡模型。老鼠笼分别在动物实验室受控条件下优化动物保健。老鼠随意访问啮齿动物饲料和水在标准实验室条件下。

2.11.2。在小鼠皮肤压疮的形成

压力溃疡的形成,是应用于小鼠剃背的皮肤使用两种截然相反的磁性磁盘(约1200 G磁力)12 h,造成局部缺血(我)。磁磁盘然后删除了12 h,导致再灌注(R)。这些步骤(I / R)循环重复三次。

14。DiI-Stained细胞的制备

动物实验通过细胞注射了三次。其中,动物实验使用DiI-stained细胞做了两次,独立。hESC-MSCs hESC-MSC-derived成纤维细胞和使胰蛋白酶化和中和完成媒体。然后每个细胞和无血清悬浮媒体1×10⁶细胞/毫升,混合着DiI染料(5μL /毫升;细胞标记方案,v - 22885,表达载体),孵化为5分钟37°C。标记细胞在1500转离心5分钟。之后,上层的移除,这些细胞被轻轻resuspended完全媒体。清洗过程重复两次。

2.11.4。压疮的治疗与细胞

3 I / R后周期,老鼠被分为四组,在伤口皮下注射一次利润如下:正常对照组,接受pbs组、hESC-MSC-treated组(5×10⁵细胞/网站),hESC-MSC-derived fibroblast-treated组(5×10⁵细胞/网站)。这种动物研究是按照指南进行审批制度动物保健和使用委员会Hallym大学(Hallym - 2010 - 78)。

2.12。统计数据

提出了图形数据的平均值±标准错误的意思。组间显著差异决定使用一个或双向方差分析(方差分析),其次是Bonferroni的事后,分别。

3所示。结果

3.1。成纤维细胞分化hESC-MSCs

因为骨骨髓来源msc可以分化成纤维母细胞(31日,32],hESC-MSCs服用fibroblast-inducing介质包含CTGF和抗坏血酸。正常皮肤成纤维细胞(551年底特律)也作为一个积极的控制。一般来说,主要的成纤维细胞表达类型我和III胶原蛋白(Col1和Col3),纤连蛋白(FN)和fibroblast-specific蛋白1 (FSP1) [31日]。因此,Col1的表达水平,Col3, FN,和FSP1 mRNA hESC-MSCs评估治疗后,10日,50和100 ng / mL CTGF确认分化为成纤维细胞的谱系。连同形态变化、mRNA水平的Col1 Col3 FN1, FSP1增加条件下诱导成纤维细胞分化(数字1(一)和1 (b))。同样,免疫印迹分析证实纤维发生的标记的蛋白表达水平,包括FN、FSP-1,和Col1增加了治疗CTGF(图1 (c))。CTGF刺激,hESC-MSC-Fbs马森阳性的三色的(MT)染色而未经处理的hESC-MSCs(图1 (d))。由于胶原蛋白染色的蓝色和红色的肌肉纤维,hESC-MSCs被分化为成纤维细胞。此外,Col1 hESC-MSC-Fbs表达(图1 (e))。因此,hESC-MSC-Fbs显示合成胶原蛋白的能力。此外,我们进行流式细胞术测定细胞表面标记物的表达hESC-MSC-Fbs(图1 (f))。结果表明,hESC-MSC-Fbs表达更多fibroblast-specific细胞表面标记物如CD47 [33]和CD91 [34),hESC-MSCs相比。相比之下,hESC-MSC-Fbs高度表达的细胞表面标记物表达了msc和成纤维细胞,如CD29、CD73, CD90、CD105,存在,类似于hESC-MSCs [35,36]。

3.2。最小化的皮肤伤口大小使用hESC-MSC-Fbs压力溃疡引起的

接下来,我们使用hESC-MSCs hESC-MSC-Fbs评估hESC-MSCs的功效和hESC-MSC-Fbs来源的细胞疗法三I / R周期压力溃疡(PU)小鼠模型。治疗和hESC-MSCs hESC-MSC-Fbs有效减少压力溃疡伤口的大小(图2(一个))。特别是,伤口大小hESC-MSC-Fb-treated组明显减少在聚氨酯后15天,相比接受pbs组或hESC-MSC-treated组的苏木精和伊红染色(图2 (b))。此外,伤口的大小在不同时间点用自动卡尺测量每组每组小鼠(4)和定量分析(图的图形表示2 (c))。结果表明,只有hESC-MSC-Fbs显示治疗组显著减少伤口大小在聚氨酯后15天,导致优秀的压力ulcer-induced伤口愈合。

3.3。hESC-MSC-Fbs替代真皮成分在压力Ulcer-Induced皮肤伤口

首先,我们要确定注射细胞的存在和位置。因此,hESC-MSCs和hESC-MSC-Fbs沾DiI染料,然后注入聚氨酯后伤口边缘。然后,剩下的细胞在伤口区域被确定在红色荧光显微镜下观察DiI荧光波长。因此,我们确认在伤口处hESC-MSCs和hESC-MSC-Fbs仍然在12天后PU(图3(一个))。有趣的是,DiI-positive细胞内受伤的皮肤仍然是可见的在4周后注射DiI-stained细胞(数据未显示)。接下来,皮肤样本应用αsma,主要表达在myofibroblasts和血管平滑肌细胞,可视化的安排后受伤的皮肤在12天内myofibroblasts聚氨酯(图3 (b))。值得注意的是,hESC-MSC-Fb-treated皮肤样品表达αsma,类似于一个正常的皮肤。然而,伤口面积在PBS和hESC-MSC-treated皮肤样品没有痊愈,和的表达αsma是最小的。因此,这些数据暗示hESC-MSC-Fbs可能参与皮肤损伤的重排的压力溃疡改善伤口愈合。

3.4。有效的压力hESC-MSC-Fbs Ulcer-Induced皮肤伤口的愈合

此外,我们测试了早期炎症基因的表达小鼠皮肤组织细胞治疗后后压力溃疡形成,因为减少初始炎症伤口愈合至关重要(3,37]。四天三I / R的应用周期后,炎症基因的mRNA表达包括白介素- 1 (IL)β、il - 6和il - 12β普遍增加。即使是没有统计学意义的mRNA的表达il - 6、il - 1等炎症基因的表达β可以,il - 12β,il - 6大幅减少受伤的皮肤组织的hESC-MSC-Fb-treated老鼠(图4(一))。此外,炎症细胞因子数组进行检查PU-induced皮肤组织中炎性细胞因子的表达。炎性细胞因子的表达包括KC(处于)LIX, MIP-1α,il - 6在PU-induced显著增加皮肤组织(图4 (b));相对表达式如图4 (c)。il - 6水平持续下降两个信使rna调节(图4(一))和蛋白质合成(数字4 (b)和4 (c)受伤的皮肤组织的hESC-MSC-Fb-treated老鼠。il - 6是一种炎症细胞因子参与调控和参与伤口愈合的一个重要因素38,39]。减少表达il - 6在胎儿无疤修复伤口愈合密切相关(40]。因此,我们猜测,治疗hESC-MSC-Fbs减毒il - 6表达诱导后早期炎症反应压力溃疡,导致无疤伤口愈合。

此外,我们执行CD-31 (PECAM-1)和VEGFA疣状确认hESC-MSC-Fbs促进血管生成来改善皮肤伤口的愈合(数字4 (d)和4 (e))。应用程序的三个I / R后12天周期,血管的形成是刺激与hESC-MSC-Fbs治疗受伤的皮肤组织,但不是PBS或hES-MSCs。因此,这些发现表明,hESC-MSC-Fbs减毒在早期炎症反应时间点的开发过程中压力溃疡在之后的时间点,促进了血管生成。

4所示。讨论

随着社会老龄化,慢性伤口患者如静脉、动脉、压力,和糖尿病溃疡增加了(41- - - - - -43]。压力溃疡,一个典型的慢性伤口,可以分为四个阶段根据伤口深度。第三和第四阶段压力溃疡包括皮下组织损伤和坏死,包括真皮全层皮肤的损失(44,45]。一般来说,压力溃疡伤口清创术治疗最初的,伤口清洗和敷料。特别是,额外的治疗如细胞因子疗法(16,18],负压治疗[19),或成纤维细胞疗法(13,14)将在第三和第四阶段是有益的压力溃疡愈合的皮肤失去了(44]。因此,确定一个最佳的治疗方法来治疗皮肤溃疡是至关重要的。

商业化的纤维母细胞治疗会使治疗慢性伤口如果目前的纤维母细胞疗法的问题解决。最近开发hESC-MSCs安全等有几个优势形成畸胎瘤,一成不变的核型,增殖潜力从一个殖民地,同质性、和multidifferentiation潜力(27,28]。以前的研究也表明,他们有一个治疗效果在各种动物疾病模型27,28,30.,46]。还有其他功能,允许hESC-MSCs不诱导细胞凋亡在治疗物质特别是杀死人类胚胎干细胞(47]。因此,我们想测试是否hESC-MSCs及其分化成纤维细胞有愈合的影响作为细胞疗法治疗慢性伤口的来源。我们实现了纤维母细胞分化hESC-MSCs和获得大量的成纤维细胞来源于一个殖民地的细胞治疗。4周后获得的成纤维细胞,观察到不同属性的成纤维细胞冷冻和解冻时没有改变为目的的文化(数据未显示)。我们应用hESC-MSCs和hESC-MSC-Fbs压力溃疡动物模型建立了通过三个I / R (12 h / 12 h)循环使用磁磁盘(48,49),并证实了hESC-MSC-Fbs导致压力增强血管形成和伤口愈合溃疡动物模型。但是,我们认为这将是一个更为理想的实验设计如果正常成纤维细胞是积极的控制实验。在未来,我们也想调查是否分化成纤维细胞分泌细胞因子,考虑到细胞因子治疗压疮治疗是有效的。

5。结论

总之,这项研究的结果表明,hES-MSCs很容易分化成纤维母细胞在治疗水平较低的比BM-MSCs CTGF [32]。此外,hESC-MSC——或者hESC-MSC-Fb-treated伤口在12和15天而接受pbs小伤口。此外,受伤的皮肤组织hESC-MSC-Fb-treated组显示最有效的基于测量伤口愈合伤口大小的老鼠在我们实验小组。也,我们发现hESC-MSC-Fbs被招募进伤口,是合成矩阵如胶原和FN的蛋白质。此外,受伤的皮肤组织hESC-MSC-Fb-treated老鼠降低炎性细胞因子的分泌(摘要意思β、白细胞介素6、IL12β3 I / R)在4天后周期。我们猜测,治疗hESC-MSC-Fbs减白细胞介素6的表达在早期诱导后的时间点压力溃疡,导致无疤痕愈合考虑到先前的研究表明,无疤修复密切相关,il - 6的表达减少胎儿伤口愈合(40]。在未来,这被认为是必要的来确认是否增加myofibroblasts受伤部位的,从注入的细胞如hESC-MSCs和hESC-MSC-Fbs或从外围正常成纤维细胞。综上所述,我们的研究结果表明,hESC-MSC-Fbs可能的临床应用的细胞治疗压疮。

缩写

hESC-MSCs:	人类胚胎干细胞间充质干细胞
hESC-MSC-Fbs:	从人类胚胎干细胞的成纤维细胞分化的间充质干细胞
TGF -β1:	转化生长因子-β1
FN:	纤连蛋白
RDEB:	隐性营养不良的表皮松解大疱
CTGF:	结缔组织生长因子
I / R周期:	缺血/再灌注周期
上校:	胶原蛋白
FSP1:	Fibroblast-specific蛋白1
αsma:	Alpha-smooth肌肉肌动蛋白
IL:	白介素
BM-MSCs:	骨骨髓来源间充质干细胞。

数据可用性

所有的数据用于支持本研究的发现可以从相应的作者。

的利益冲突

作者声明没有潜在的利益冲突。

作者的贡献

DY负责收集和汇编的数据和数据分析。DY还负责数据的收集和汇编。海关负责的贡献基本试剂或工具。IH协助英语编辑和数据分析。JSL负责设计和解释的研究,写论文。WC还负责设计的研究和解释。Ji-Seon李和钟旭Chun这项研究同样起到了推波助澜的作用。

确认

这项研究受到了韩国国家研究基金会的基金(NRF;格兰特。2017 r1a2b4002536和联盟- 2015 - r1d1a3a01017832)和韩国研究疾病控制和预防中心(2018 er610300)。

补充材料

补充图1:形态学图像成纤维细胞分化人类胚胎干细胞的间充质干细胞(hESC-MSCs)在刺激结缔组织生长因子(CTGF)。补充图2:原始数据的数据1(一),2 (c),4(一),4 (c),4 (d),4 (e)。补充图3:CD31染色的图片从每组进行统计分析。(补充材料)

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