位置、隔离和鉴定间充质干细胞从成人人类汗腺

文摘

汗腺(SGs)分布在几乎整个人体表面和温度调节是必不可少的。从理论上讲,组织干细胞(TSSCs)是优秀的候选人细胞再生的SGs由于其遗传稳定性和分化能力。在此,我们试图隔离TSSCs源自成人汗腺(ahSGs)。ahSGs本地化和被他走时染色,双重免疫荧光染色,透射电子显微镜(TEM)和immuno-TEM。我们发现人口的细胞具有干细胞特征(SGSCs),位于基底肌上皮细胞的分泌部分电磁灯泡。表达的SGSCs alpha-smooth肌肉肌动蛋白(αsma)和显示典型的间充质干细胞(msc)的特点,积极抗原CD44概要,CD73, CD90、CD105, multilineage成骨细胞和脂肪细胞分化潜力。此外,孤立αsma阳性细胞保持稳定表型和增殖周期在12通道。这是第一个报告成功的隔离从ahSGs MSC-like细胞,这可能导致伤口修复和SG再生。

1。介绍

在人类中,SGs(外分泌腺的腺)是迄今为止最丰富的腺体结构。他们对温度调节至关重要1,2]。当SGs不能严重皮肤损伤后再生,如严重烧伤和其他原因,未能调节体温在炎热的气候条件下或在运动可以导致高热,中风,甚至死亡。因此,有必要引起SG损伤后再生。

msc是一种很有潜力的治疗策略对于许多疾病,如糖尿病、心脏病、和伤口愈合3- - - - - -6]。它们可以被孤立的人类各种各样的来源,包括骨髓、脂肪组织、脐带、肌肉(7),和毛囊。我们小组一直在研究SG再生利用干细胞多年。我们先前表明,人类可以诱导骨髓msc像一个国网公司表型,SGs移植后可以再生的伤口SGC-like细胞(8]。移植MSC-induced国网公司可以解决SG深度烧伤后消耗的问题。msc与其他组织可能代表一个干细胞再生的水库,以供将来使用SGs (9- - - - - -11]。

然而,许多实验表明变化msc不同组织来源的分化能力(12]。已经有研究人体毛囊msc,在头发的新陈代谢,修复皮肤损伤和细胞疗法的应用和再生医学13,14]。SGs和毛囊是皮肤附属物,及其胚胎发育是相似的。因此,我们推测可能有msc在SGs,这可能将更有效的区分为SGs和促进SG再生。然而,研究关于隔离的SCs SGs是罕见的。当前结果显示SCs,包括SGSCs保持静止状态保持未分化状态,这样他们就可以提供体内平衡和功能修复组织损伤如果必要15- - - - - -17]。大多数在活的有机体内研究集中在国网公司的贡献表皮修复后表面的皮肤损伤(18]。虽然这些研究表明,SGs包含SCs,精确的定位和描述的TSSCs ahSGs到目前为止还没有解决。

在这里,我们调查的位置、隔离性文化,源自ahSGs SCs的识别。这项工作的目的是探讨SGSCs的存在,建立技术平台从ahSGs TSSCs分离和培养的,这将提供一个新的源msc和提示促进创伤修复和SG再生的新方法。

2。材料和方法

2.1。皮肤样品

样本获得完整的皮肤厚度的膝盖,腹部,棕榈,额头成年人(年龄范围:19-51岁)在塑料和化妆品或外科手术后获得吉林大学伦理委员会的批准,患者知情同意。病人是列在表的详细信息S1。

2.2。抗体

免疫荧光,immunoelectron显微镜和FCM(流式细胞术;美国BD生物科学),表中列出的抗体S2。

作为第二抗体,我们使用FITC-conjugated多克隆山羊Fab片段定向到鼠标和RITC-conjugated多克隆山羊Fab片段定向到兔免疫球蛋白(1:100;bios,中国)。

2.3。组织学和免疫荧光染色分析

脱蜡和水化后,切片样本被封锁与10%牛血清白蛋白(BSA;美国σ)30分钟。部分是孵化主要抗体,癌胚抗原(CEA) /α15 (CK15) / sma和细胞角蛋白αsma在一夜之间在4°C。部分被孵化FITC / RITC-conjugated二级抗体在室温下1 h。核沾染了赫斯特33342年(美国表达载体)。荧光信号检测的激光扫描共聚焦显微镜(LSCM;奥林巴斯、日本)。

2.4。TEM

TEM分析,组织块在0.01磷酸盐前缀(PBS) (pH值7.3)包含2.5%戊二醛2小时,洗在PBS,与1%的水溶液中OsO后缀₄和1.5% K₄铁(CN)₆1小时,脱水,最后嵌入在环氧树脂812 (Catalys、瑞士)。超薄部分(约50 - 70 nm)收集对铜网格与4%醋酸双氧铀和3%柠檬酸铅和检查TEM (TEI,美国)。Immunoelectron显微镜是用来检测的表达αsma在ahSG分泌部10纳米胶体金作为第二抗体(bios,中国)。

2.5。隔离ahSG电磁灯泡

皮肤样本存储在包含100 0.01 PBSμ青霉素g / ml和100年μg / ml链霉素(美国HyClone)在4°C前24小时内使用。部分皮肤样本在10%福尔马林固定石蜡的制备部分。ahSG电磁灯泡位于真皮网状层,与皮下组织密切相关,周围的疏松结缔组织和脂肪。外科解剖,皮下组织包裹ahSG螺线管外的灯泡在无菌条件下被删除。皮肤组织包含ahSG电磁灯泡被切成大约1毫米³小块,消化在DMEM / F-12(1: 1)介质(美国Gibco)含有2% (g / ml)胶原酶II(美国英杰公司)在4°C。6到8小时后,ahSG电磁灯泡从皮肤组织中提取立体显微镜。

2.6。分离和纯化ahSGCs文化

提取的片段在DMEM / F-12清洗和培养(1:1)介质(美国Gibco)含有10% (v/v)胎牛血清(的边后卫;美国HyClone)。可见的结果后,细胞被用0.1%胰蛋白酶消化和1毫米EDTA(美国表达载体)1分钟。当大多数纤维母细胞的收回和SG上皮细胞附着,同等体积的培养基含有10% (v/v)的边后卫了然后继续文化。媒介是每2 - 3天更换一次。细胞被广泛传播当他们到达大约70 - 80%的融合。观察细胞形态不同的段落在倒置显微镜(日本奥林巴斯)。

2.7。Immunofluorescent细胞化学的染色分析

细胞在盖玻片固定在4%多聚甲醛10分钟permeabilized Triton x - 100 0.1%(美国σ)在室温下20分钟。随后,10% BSA被用来阻止非特异性结合。细胞培养与初级抗体在4°C。抗体使用如下:αsma,东航,CK15 FITC-CD44、FITC-CD73 FITC-CD90, FITC-CD105 FITC-CD34, FITC-CD45。的样本αsma、CEA和CK 15作为主要的抗体被孵化与二次抗体在室温下1 h。核沾染了赫斯特33342年。

2.8。由FCM Immunophenotypic表征

细胞收获和resuspended 0.01 PBS的密度1×10⁶细胞/毫升。其次,细胞被固定在2%多聚甲醛10分钟。东航的样本,CK 15,αsma主要抗体是permeabilized Triton x - 100的0.1%。所有样品(g / ml)然后使用10% BSA阻止非特异性结合孵化了20分钟,在室温下与1 h抗体。东航的样本、CK15和αsma主要抗体是在二级抗体FITC-conjugated 30分钟在4°C。洗两个步骤后,细胞resuspended使用300年μl对FCM PBS。

2.9。细胞周期分析

细胞周期分析的膜联蛋白V-FITC /π凋亡检测设备(南京凯基生物,中国)。细胞使胰蛋白酶化成单个细胞悬浮液在4°C和70%乙醇固定过夜。与PBS洗后,细胞resuspended染色溶液中含有核糖核酸酶和propidium碘和孵化了30分钟。使用细胞DNA含量分析了流式细胞仪石中剑追求软件(美国BD生物科学)。

2.10。细胞增殖检测

细胞增殖测定使用实时细胞分析(RTCA) iCELLigence分析仪(究其;杭州、中国)和EdU分析工具包(RiboBio;广州,中国)。RTCA,细胞不同段落的胰蛋白酶消化和收获0.1% EDTA和1毫米。这些细胞被播种到E-Plate 18文化板块2×10⁴每口井的细胞和培养一个星期。根据电阻可变数据观察,分析了细胞增殖能力RTCA和细胞生长曲线绘制不同段落(P)。实验都是在双完成,和两个独立的进行重复实验。

EdU公司分析,细胞培养24-well盘子48 h在37°C,然后50μ米的EdU添加到每个。培养更多12 h后37°C,细胞与4%多聚甲醛固定15分钟然后接受0.5% Triton x - 100 20分钟在室温下透化作用。与PBS三次洗涤后,阿波罗反应鸡尾酒是添加到每个细胞培养在室温下30分钟。然后,细胞被沾染了赫斯特33342年30分钟和可视化荧光显微镜下(奥林巴斯、东京、日本)。EdU的比例掺入率表示为EdU阳性细胞(绿色),赫斯特33342阳性细胞(蓝色)。每个样本随机统计三个字段,平均计算样本的数量。

2.11。感应的α从ahSGs sma阳性细胞分化成成骨的和脂肪形成的血统

分化的潜力ahSGα评估sma阳性细胞培养成骨细胞和脂肪形成的媒体。细胞诱导成骨的介质包含L-DMEM 4周,10%的边后卫,0.1μ地塞米松,200μM抗坏血酸,10毫米b-glycerol磷酸(19]。感应后,造骨细胞经细胞化学的染色和40毫米茜素红S染料(pH值4.2)检测矿化矩阵根据先前描述的协议(20.,21]。一旦细胞融合达到了80%,他们在脂肪形成的培养基培养2周。中包括L-DMEM补充10%的边后卫,1μmol / L地塞米松,50μmol / L消炎痛、0.5毫米3-isobutyl-1-methylxanthine和10μM胰岛素。的文化,这些细胞被固定在4%多聚甲醛20分钟和沾油红O解决方案显示诱导细胞中脂滴(19,22]。所有实验完成了一式三份,三个独立重复实验。

2.12。统计分析

方差分析是用来分析immunophenotype的差异在不同的样品和段落的细胞。数据表示为平均值±标准偏差(SD)。结果被认为是重要的 。

3所示。结果

3.1。组织结构特点ahSG电磁灯泡

ahSGs组成的四个部分:表皮内的导管,直皮内管,盘绕皮内注射导管,并分泌部(图1(一))。ahSG电磁球包括盘绕皮内管和分泌部。通过圆)染色、电磁球被发现位于连接部分的真皮和皮下结缔组织(图1 (b))。盘皮内管由一个双层的小立方形的细胞。分泌部出现的不规则排列的细胞。一个内层ahSG上皮细胞的分泌部被一层扁平的肌上皮细胞包围。

确定细胞ahSG电磁灯泡之间的组成和结构特点及其周围组织,我们使用双重免疫荧光CK15或CEA检测皮肤组织学部分αsma。αsma扮演核心角色绑定的肌肉收缩和肌上皮细胞质的重要组成部分。CK15被认为是非常“年轻”的一个标志人类皮肤和增殖是表达的基底层和SCs的皮肤。CK15表皮内稳态的是一个有用的指标,因为它是几乎完全表达了在稳态表皮基底角质细胞(23]。东航,广泛表达于消化道的癌症和消化道的正常胚胎,表示在ahSGs [24]。结果显示在SG上皮细胞CEA的表达,选择性的表达CK15的上皮细胞,和表达的αsma在SG的肌上皮细胞分泌部(数字1 (c)和1 (d))。αsma表达ahSG在几乎所有的肌上皮细胞分泌部分和周围的血管壁。注意,盘绕皮内管区域表示只有东航αsma和CK15表达式。

使用TEM,我们研究的特性ahSG分泌部在超微结构水平(图1 (e))。SG上皮细胞停留在肌上皮细胞或直接在基板上。肌上皮细胞含有大量的收缩肌动蛋白丝,安排在并行计算和对齐。他们的核异染色质丰富。ahSG分泌部分被紧密连接(图连接S1)。接下来,我们利用immunoelectron显微镜进一步确保该网站αsma是积极的SGSCs分泌部(图1 (f))。分泌部的基底一侧,色散黑胶体金颗粒在肌上皮细胞的细胞质可见除了丰富的细胞外基质(ECM)的存在。

αsma阳性细胞被发现只有在ahSG分泌部,与上皮细胞紧密连接,丰富ECM包围。这个结构提供了一个依据分离SG电磁灯泡从皮肤组织。

3.2。隔离和ahSG电磁灯泡的主要文化

)染色和透射电镜,我们收集完整的皮下组织厚度的皮肤,这是丰富的电磁灯泡被切成碎片,然后沉浸在胶原酶解决方案。SG立体显微镜下电磁灯泡被选中。这些灯泡包含薄管和略显臃肿的分泌部分与不同的折射率(图有关2(一个))。)染色SG电磁分离灯泡的显示,他们显然从相邻的结缔组织(图分离2 (b))。由于酶消化,电磁灯泡的完整性结构被破坏。少量的结缔组织,坐落在SG分泌部和导管,包括血管,已经消失了。免疫荧光显示,CK15和CEA位于腔αsma在地下室,与标记表达ahSGs一致在活的有机体内(数据2 (c)和2 (d))。没有发现维管组织)染色或免疫荧光试验。基于TEM分析然后,电镜下观察,获得相同的结果在活的有机体内(数据2 (e)和2 (f))。因此,我们确保了电磁灯泡整体分离成年人体皮肤,包括αsma阳性细胞,CK15——或者CEA-positive细胞和导管细胞与消极的表达αsma、CK15和CEA。

组织培养这些SG碎片后2 - 5天,有两种类型的细胞,从外植体,包括典型的上皮细胞(假设一个鹅卵石形态)和纤维母细胞长轴(图3(一个))。免疫荧光结果显示,纤维母细胞表达αsma,上皮细胞表达CK15(图的一部分3 (b))。没有coexpressionαsma和CK15位于相同的单元中。通过免疫荧光染色CK15和αsma主要抗体,一些上皮细胞CK15是积极的,所有的纤维母细胞αsma阳性(图3 (b))。有趣的是,我们发现不同形态细胞对胰岛素的敏感性不同。与上皮细胞相比,αsma阳性细胞对胰岛素更敏感,很容易消化。因此,我们可以使用这个微分消化方法获得净化αsma阳性细胞。已经证明,在初代培养大约1周后,纤维母细胞被胰蛋白酶消化,高纯度的表达αsma的FCM在体外。结果是,超过99%的细胞表达αsma表达但没有CK15 FCM。

鉴于目前结果只表明肌上皮细胞αsma在孤立的SGs,积极αsma阳性细胞只能来源于ahSG肌上皮细胞。在接下来的实验系列,我们的生物学特性进行了探讨α从ahSGs sma阳性细胞。

3.3。干细胞的相关特征的识别α从ahSG sma阳性细胞碎片

细胞通过每隔4 - 5天最多12通道不显示任何一个倒置显微镜(图下形态学变化4(一))。主要通过细胞所有显示典型的呈形态学特征与梭状形状,漩涡或鱼一样的安排。几乎所有细胞表达αsma根据免疫荧光,通过FCM(图97.00%±3.70%是正面的4 (b))。因此,高纯度αsma阳性细胞从ahSG 12代肌上皮细胞获得稳定。据报道,肌上皮细胞的来源SGSCs [25]。

根据细胞形态和组织来源,我们发现SC-relevant这些细胞的形态学特性。CD44、CD73 CD90、CD105是公认的标记来识别msc。首先,我们用免疫荧光量化MSC-related immunophenotypeα从ahSGs sma阳性细胞。表达的细胞CD44、CD73 CD90、CD105;然而,他们负造血谱系标记CD31、CD45、CK15、CEA表达ahSG上皮细胞没有发现(图4 (c))。第二,我们重复使用流式细胞仪测定不同样品和段落的细胞。与免疫荧光流式细胞仪结果一致的结果:超过90%的细胞表达CD44 (98.78%±2.13%), CD73 (97.99%±1.91%), CD90(97.34%±3.06%),和CD105(98.36%±0.29%)但不是CD34 (0.79%±0.36%), CD45 (0.47%±0.20%), CK15(0.61%±0.13%),或CEA(0.36%±0.13%)(图4 (c)和图S2)。结果被认为是重要的 。因此,αsma阳性细胞从ahSGs msc immunophenotype一样来自其他组织,如骨髓。

检测细胞增殖和自我更新能力,我们收集细胞周期测量。FACSCalibur DNA含量进行检测和分析细胞任务P3软件和票数通过细胞(图5(一个))。结果表明,细胞DNA合成阶段的比率(S期和G2 / M期)(活跃的增殖阶段)为15.1±2.9%,剩下的细胞G0 / G1期(静止阶段,84.9%±2.9%)(图5(一个))。接下来,细胞的生长动力学由RTCA决定。所有的增长曲线从四个不同的段落(P3、P6、P9和P12)显示静止的初始阶段,在前两天在文化、日志阶段以指数的速度从3到5天,紧随其后的是一个高原阶段。增长率没有显著差异在不同段落的细胞(图5 (b))。细胞显示强大的生殖活动从P3 P12和稳定。接下来,我们调查的增殖状态αsma阳性细胞数量相对的S期细胞检查EdU标签。EdU公司后24 h,有60.24±6.65%的细胞积极表达EdU通过免疫荧光和在此期间也发生分裂和增殖(图5 (c))。EdU公司分析为我们提供了一个直观的视图状态的细胞分裂和增殖。

SCs有两个要求:自我增殖和分化潜能。从上面的结果,我们知道了αsma阳性细胞增殖能力强。进一步描述他们多能——我们测试这些ahSG的分化能力αsma阳性细胞的成骨的和脂肪形成的感应能力。在成骨培养基培养2周,αsma阳性细胞多边形,形成集群的安排;在4周成骨的媒介,培养他们出现分化成osteoblast-like细胞。茜素红S染色进行检测骨结节的形成。结果表明,αsma阳性细胞有能力分化成骨头(图6(一))。脂肪形成的诱导后3天,从一个长梭形细胞形态学改变成一个多边形的形状。一周后,小泡泡状的出现在部分细胞脂滴。脂滴的大小增加了两周后,和大多数的分化细胞出现红色油红O染色后的脂质滴整个细胞质(图6 (b))。这表明这些细胞能够分化成脂肪。

从这些数据,我们得出的结论是,α从ahSGs sma阳性细胞增殖和自我更新,他们有可能分化成脂肪和骨头,类似于msc的生物学特性。

4所示。讨论

TSSCs有稳定的分化和增殖能力,从而保持组织内稳态(26,27]。他们发挥着无与伦比的作用其他来源细胞治疗疾病和组织修复(28,29日]。SGs,皮肤附属物,是一种迷你器官的重要功能。损伤后很难再生。近年来,研究人员试图发现理想的干细胞来源的细胞疗法修复和重建SG伤口。然而,在SGSCs进展甚微。然而,它已被证明有SCs SGs,这些SCs附着在基底膜腺泡的腺近端区域的SGs和有能力促进损伤修复和维持内环境稳定的转基因小鼠模型(25,27,30.,31日]。

因此,本研究致力于探索和分离SG-specific干细胞。我们开始与SGs的组织结构,以确定可能的网站SCs位于SGs。通过观察SGs的结构,很明显,有一个丰富的异染色质肌上皮细胞核,这些细胞可能SCs。同时,SG电磁灯泡周围丰富的ECM,和内部细胞被紧密连接(图紧密相连的S1)。如果结果显示,联合的表达αsma和东航/ CK15 ahSG电磁灯泡的位置,但血管只表示αsma阳性。这个表达式特性提供了结构基础的分离ahSG电磁灯泡从皮肤组织。然后,我们采用酶消化有效分离SG电磁灯泡获得SCs ahSGs;这种方法可以保护SGSCs的活动,导致后续SCs的净化。在先前的研究中,研究人员试图孤立和SGSCs文化;长梭形细胞偶尔存在和被认为是成纤维细胞32]。这些细胞被视为杂细胞和删除。我们推测,SGSCs的特定的解剖位置主要分布在SG和酶消化很长一段时间将会影响这些细胞的生物活性。这可能是SGSCs的主要原因是很难获得。在我们的实验中,我们严格控制胶原酶的消化时间。因此,该方法显著降低SGSCs受损,导致我们最终成功从ahSGs分离msc。

这个组织培养方法的优点是一个简单的方法,可以获得大量的细胞;然而,获得的细胞类型复杂。细胞组织培养获得的SG电磁灯泡至少三种类型,即αsma阳性肌上皮细胞和上皮细胞CK15正面或负面。的αsma阳性细胞对胰蛋白酶敏感,容易分离的上皮细胞。孤立的初级SGSCs被确定αsma,他们积极率超过99%。这表明αsma阳性细胞从ahSGs获得高纯度。这些细胞稳定超过12代,在细胞形态、分子表型、增殖能力和分化潜能都符合msc的生物学特性。

我们的研究是第一个成功分离msc ahSGs纯度高;msc能够被放大成倍增长。已经清楚地确定SG的肌上皮细胞分泌部是ahSG-MSCs的重要来源。我们完成了隔离、文化和识别ahSGs从六个不同年龄皮肤标本后,相同的实验过程和证实的存在αsma阳性ahSGs多功能干细胞。在这里,我们有证明αMSC特色sma阳性细胞存在于SGs作为分散人口本地化SG基底层的近端腺泡的地区。一个技术平台建立了隔离从ahSGs msc。

我们的研究结果还指出,一些腺体上皮细胞从ahSG表示CK15电磁灯泡。CK15是表皮干细胞的标记(33];因此,表明这些CK15-positive细胞可能含有SG上皮干细胞。然而,进一步分离和鉴定培养SG上皮细胞并不表现在这个实验中,因为现在的隔离方法和局限性。来自不同来源的msc显示诱导后再生汗腺的能力。因此,我们假设组织msc SGs也可能导致SG再生。因此,其进一步的分化能力,尤其是其分化成SGs的能力,促进皮肤再生,并促进其它细胞转换为国网公司,将在我们的进一步研究。此外,自体移植的细胞是首选设置,避免免疫排斥反应的风险。如果SG肌上皮细胞和腺上皮细胞可以从一个个体,同时被放大和培养的细胞来自同一个人,我们可以建立一个unrejected SG。如果是这样的话,个人组织重建的可能。

总之,本研究显示有组织msc ahSGs表达αsma。因此,还需要进一步的研究来调查从ahSGs msc是否可以直接促进SG再生或恢复与SG交互时更好的SG功能上皮细胞。我们的研究结果表明,腺上皮干细胞可能存在于成人汗腺。从ahSGs TSSCs可能为SG再生提供新的机遇。在未来,我们将假设TSSCs ahSGs,包括SMA阳性msc、可以结合SG上皮细胞获得人工SGs类似于成熟的SGs利用3 d打印技术。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突,关于这篇文章的出版。

作者的贡献

李盈芝马和美容了同样的工作。

确认

本研究支持部分由中国国家自然科学基金(81721092)、中国国家重点研发项目(2017 yfc1103300和2017 yfc1104700),和海南的重点研发项目(ZDYF2016135和ZDYF2017095)。

补充材料

图S1: ahSG部长的内在细胞由紧密连接紧密相连的部分(白色箭头)通过TEM(酒吧:5μ米)。图S2: msc在P6和P12的表型特征。表S1:皮肤样品的特性。表S2:在这项研究中使用的抗体的细节。(补充材料)

引用

1. k .佐藤w·h·康k传奇,和k . t .佐藤汗腺的生物学和疾病。二世。障碍的汗腺功能”,美国皮肤病学会杂志》上5,卷。20日,第1部分,713 - 726年,1989页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. k .传奇”,结构和功能的人类汗腺组织化学与细胞化学研究”组织化学与细胞化学的进展,37卷,不。4、323 - 386年,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. s .黄g . Lu y吴et al .,“间充质干细胞在microsphere-based工程皮肤导致皮肤伤口愈合和汗腺修复,”皮肤病学的科学杂志,卷66,不。1,29-36,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. 黄h . j . Liu, h . et al .,“缺氧调节间充质干细胞通过加强自我吞噬的治疗潜力,”下肢伤口的国际期刊,14卷,不。1,第72 - 63页,2015。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. r . Abdi·菲奥莉娜c . n . Adra m·阿特金森和m·h·伊丽莎白”由间充质干细胞免疫调节:1型糖尿病的一种很有潜力的治疗策略,”糖尿病卷,57号7,1759 - 1767年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. 诉Russo美国年轻,a·汉密尔顿,b . g . Amsden l·e·弗林,“间充质干细胞交付策略促进心脏再生缺血性损伤后,“生物材料,35卷,不。13日,3956 - 3974年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. t . e . Okumachi郑胜耀Lee Niikura et al .,“比较分析大鼠间充质干细胞来源于骨骼肌缓慢而快在体外”,国际整形外科,39卷,不。3、569 - 576年,2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. 傅x, z盛s Cai et al .,“再生功能汗水稍结构移植骨髓间充质干细胞分化,“伤口修复和再生,17卷,不。3、427 - 435年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. m . j . Hoogduijn大肠Gorjup, p . g .日内瓦”比较特征的毛囊真皮干细胞和骨髓间充质干细胞,”干细胞与发展,15卷,不。1,49-60,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. s Tanimura y Tadokoro, k Inomata et al .,“毛囊干细胞提供一个功能适合黑素细胞的干细胞,“细胞干细胞,8卷,不。2、177 - 187年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. 问:赵,y, z . y . Liu t . z太阳,k . Ma和x赋,“未来毛囊干细胞的应用:能够分化成汗腺细胞,”中国医学杂志,卷126,不。18日,第3552 - 3545页,2013年。视图:谷歌学术搜索
12. d . Mushahary唾沫,c . Kasper诉韦伯,诉Charwat,“隔离、栽培和人类间充质干细胞的特性,“血细胞计数部分,卷93,不。1胜38负页。2018。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. c . f . p . Li Liu吴et al .,“人类头发的可行性follicle-derived间充质干细胞/ CultiSpher^®在再生医学- g结构”,细胞和组织的研究,卷362,不。1,第86 - 69页,2015。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. z . c .徐、张问:和h·李”工程的人类与毛囊干细胞体外血管壁,“分子医学报告,15卷,不。1,第422 - 417页,2017。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. c . Blanpain和e·福克斯在组织再生上皮干细胞的可塑性,”科学,卷344,不。6189年,1242281条,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. n .巴克a van Oudenaarden, h .聪明”确定肠道隐窝干细胞:策略和陷阱,”细胞干细胞,11卷,不。4、452 - 460年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. k .伊藤”,代谢和细胞命运的控制决策和干细胞更新,“细胞和发育生物学的年度审查,32卷,不。1,第409 - 399页,2016。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. t·比德尔曼l . Pontiggia s Bottcher-Haberzeth et al .,“人体外分泌腺的汗腺细胞能重建表皮层状,“皮肤病学研究杂志》上,卷130,不。8,1996 - 2009年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. x, y l .李郭x, x r . Wang和y妞妞,“间充质干细胞并由PLEGFP-N1逆转录病毒载体维持其生物特性和分化,“中国医学杂志,卷118,不。20日,第1734 - 1728页,2005年。视图:谷歌学术搜索
20. y . d . Halvorsen d·富兰克林,a . l .债券et al .,“细胞外基质矿化和由人类脂肪tissue-derived基质细胞,成骨细胞基因表达”组织工程,7卷,不。6,729 - 741年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. 李h . g . Liu, y . et al .,”评价的可行性和成骨分化人类脂肪中提取干细胞冻存,“低温生物学卷,57号1 - 24岁),2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. p·a·祖克m·朱h .美津浓et al .,“Multilineage从人类脂肪组织细胞:细胞疗法,”组织工程,7卷,不。2、211 - 228年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. l . Pontiggia t·比德尔曼m . Meuli et al .,”标记来评估设计的质量和自我更新潜能人类皮肤替代品在体外移植后,“皮肤病学研究杂志》上,卷129,不。2、480 - 490年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
24. f . Noel g . e . Pierard p . Delvenne p . Quatresooz·亨伯特和c . Pierard-Franchimont“免疫组织化学汗腺概要文件,”美容皮肤科学杂志》,12卷,不。3、179 - 186年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. y Leung) e . Kandyba y . b . Chen鲁芬,和k . Kobielak”标签保留(荣誉奖)和肌上皮细胞特征的近端定义干细胞汗腺腺泡的地区,”《公共科学图书馆•综合》,8卷,不。9篇文章e74174 2013。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. n .巴克“成人肠道干细胞:上皮内稳态的关键驱动和再生,”自然评论分子细胞生物学,15卷,不。1,19-33,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. c·p·卢,l .波兰人罗查et al .,“鉴定干细胞种群汗腺和导管显示角色在体内平衡和伤口修复,”细胞,卷150,不。1,第150 - 136页,2012。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
28. b . Zimdahl t .伊藤,a·布莱文斯et al .,“Lis1调节不对称分裂在造血干细胞和白血病,”自然遗传学,46卷,不。3、245 - 252年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
29. 美国j·福布斯,s·古普塔和a . Dhawan“细胞治疗肝脏疾病:从肝移植细胞工厂,”肝脏病学杂志,卷62,不。1,S157-S169, 2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
30. r . Kurata s Futaki i Nakano et al .,“隔离和表征人类皮肤的汗腺肌上皮细胞,”细胞结构和功能,39卷,不。2、101 - 112年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
31. m .中村和y Tokura外分泌腺的腺label-retaining细胞的定位”,皮肤病学研究杂志》上,卷129,不。8,页2077 - 2009。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. x y高,m . Li Zhang et al .,“隔离、文化和人类汗腺上皮细胞的表型特征,“国际分子医学杂志》上,34卷,不。4、997 - 1003年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
33. a . Bose m·t·格兰i c·麦肯齐和a·瓦萨姆”角质k15表皮干细胞的生物标志物,”国际分子科学杂志》上,14卷,不。10日,19385 - 19398年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

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