有效促进自噬和血管生成使用间充质干细胞疗法增强的低能冲击波治疗勃起功能障碍

文摘

背景。间充质干细胞疗法(多层)和散焦低能量冲击波治疗(ESWT)已被证明可以改善勃起功能障碍(ED)。然而,行动之间的相互作用和影响多层和ESWT仍然知之甚少。在这项研究中,我们调查了机制的联合治疗与多层ESWT在糖尿病大鼠模型。材料和方法。八周大的男性Sprague-Dawley老鼠被随机分为2部分。由链脲霉素诱导糖尿病大鼠(65毫克/公斤)被随机分为4组:糖尿病对照组(1),(2)DM + ESWT组,(3)DM +多层组,(4)DM + ESWT +多层组。虚假的集团是一个正常对照组(没有链脲霉素)。多层ct和(或)ESWT分别为每组8周的建议。后立即记录intracavernous压力(ICP),阴茎就收获的组织学分析,ELISA和免疫印迹。结果。ICP /地图的比例明显高于DM + ESWT +多层组比ESWT或多层治疗组( )。此外,治疗刺激阴茎海绵体血管生成和血管舒张( )。ESWT msc在阴茎海绵体的数量增加,也诱导msc表达更多的VEGF在体外和体内 ),激活PI3K / AKT / mTOR和NO / cGMP阴茎海绵体的信号通路。结合的方法刺激阴茎海绵体中自噬和减少细胞凋亡。神经生长因子、脑源性神经营养因子表达更高的DM + ESWT +多层组比对照组DM ( )。此外,治疗促进了MSC招聘的诱导表达更PECAM SDF-1阴茎组织。结论。LI-ESWT和多层的组合可以得到一个更好的结果比单一治疗表达VEGF可以参加自噬通过触发PI3K / AKT / mTOR信号通路。这种合作治疗ED治疗提供新的研究方向。

1。介绍

糖尿病患者患勃起功能障碍(ED)的发病率更高,比非糖尿病患者对药物个体,这糖尿病(DM)勃起功能障碍(看看)严重影响糖尿病患者的生活质量(1- - - - - -3]。现在,磷酸二酯酶5抑制剂(PDE5I)代表艾德的一线治疗,但仍有一些看看患者疗效不佳(4- - - - - -6]。所以它是非常迫切需要找到一个新的治疗方法来治疗drug-useless看看病人。

作为一个相对新颖的方法在再生医学、散焦低能量冲击波治疗(DL-ESWT)已经显示出巨大的潜力和前途的证据,特别是用于治疗各种疾病,如组织创伤和缺陷(7- - - - - -11]。目前,ESWT已应用于临床治疗ED,和许多研究表明ESWT可以达到满意的治疗效果12- - - - - -14]。ESWT认为的主要机制可以刺激血管生成,恢复血液循环障碍区,通过促进再生和修复(15]。Hayashi等。(7)报道,各种proangiogenic因素的表达,如血管内皮生长因子(VEGF)和内皮一氧化氮合酶(以挪士),可以调节DL-ESWT糖尿病老鼠。使用DL-ESWT ED治疗的另一个原因是,它可以提高招聘的内皮祖细胞移植基质细胞衍生因子- 1 (SDF-1)伤口组织(16]。李等人。17]发现DL-ESWT可以促进内源性的招聘祖细胞和雪旺细胞的活化,与血管生成,组织,神经一代盆腔神经与血管的损伤大鼠模型。

现在,一些研究人员(18- - - - - -20.)表明,作为一种新的方法,间充质干细胞(MSC) ED的治疗是一个很好的补救方法。Gokce et al。21)认为ED干细胞疗法的原因和机制,干细胞可以刺激血管内皮细胞增殖和抑制内皮细胞凋亡旁分泌机制。但msc通过intracavernous注入存活率仍然是一个问题。刘等人。22看看老鼠模型中考虑到高血糖可以诱导细胞凋亡,但氧化应激也可以增加MSC自噬细胞自卫,自噬可以减少细胞凋亡增加,延长MSC生存,提高MSC-based看看治疗效果。此外,一些研究[23,24证明不是所有的msc、通过intracavernous注入,将凋亡,立即死亡,或流动被迁移进入循环系统。所以我们相信,间充质干细胞疗法(多层)将是一个潜在的和有前途的治疗。

因为ESWT和多层ct可以治疗ED的方法通过旁分泌生长因子促进细胞增殖,我们有理由相信,两者的结合治疗ED将得到一个更好的结果。在这个报告中,我们证明了LI-EWST和多层可能是一个更好的方法来提高教育通过促进血管再生,再生和自噬。我们的研究也证明ESWT可以驱动归航的msc。另外,这个合作治疗结合干细胞与机器诊所治疗提供理论和实验依据。

2。材料和方法

2.1。细胞培养

msc来自冷冻细胞在细胞银行的剩余库存(SL BIGEN、凭借、韩国)。细胞培养在一个特殊的介质(间充质干细胞增殖媒体;SL BIGEN)和维持在37°C公司为5%₂在湿润的气氛中。两天后,不依从细胞和新鲜培养基添加删除。培养基是改变每2天。细胞通过当他们到达大约90%汇合。培养的msc的ESWT是由一个体外冲击波机器(Urontech、韩国华城、韩国)。冲击波探针一直接触包含附着msc的培养瓶的水垫覆盖着常见的超声波凝胶。细胞受到200脉冲的能量通量密度的ESWT 0.09 mJ /毫米²频率为120 /分钟(如前所述25]。ESWT进行细胞后附件。每一代只接受ESWT一次。

2.2。ESWT对msc在体外激活的影响

我们量化细胞培养上清液中的VEGF特异性的VEGF免疫测定ELISA试剂盒(欧洲研发系统,阿宾顿、英国)根据制造商的指示。ESWT之后,msc(每个播种同样数量的msc和从第一段到第五段msc被播种的离散6厘米培养皿)在恒温培养箱培养12 h,然后1毫升中收集和储存在−80°C到使用。吸光度是阅读在波长450纳米的标仪(美国Biotek协同H1 M)。至少3单独的盘子每个克隆的细胞被化验。

2.3。实验动物和研究设计

男性Sprague-Dawley八周大鼠体重270 - 300克(东方生物有限公司,凭借韩国)被用于这项研究。所有动物实验研究机构批准的动物保健和使用委员会的天主教大学。DM是诱导的腹腔内注射链脲霉素(STZ Sigma-Aldrich化学公司,美国)的剂量65毫克/公斤体重(STZ准备在50 mM柠檬酸盐缓冲液pH值4.5)如前所述[26),和虚假的老鼠注射同等车辆(0.1 mol / L citrate-phosphate缓冲区,pH值4.5)。72 h后,证实了糖尿病血糖水平高于300 mg / dL,确定由Accu-Chek活跃血糖监测(瑞士巴塞尔罗氏公司有限公司),和血液样本从尾静脉注射STZ后(糖尿病动物的比例大约是70%)。不健康的老鼠显示折边的头发,可怜的外表,发声,缺乏食欲并不包括在我们的实验。12周后,这些老鼠勃起功能进行评价和大鼠与正常勃起功能被排除在外。总之,体外实验老鼠放到饲育舍与成年雌性大鼠。如果精液污渍没有发现在笼子里在1周,实验老鼠是包括在接下来的过程。如果被发现的污点,老鼠被排除在外。包括老鼠被随机分为4组( 糖尿病对照组每组):(1),(2)DM + ESWT组,(3)DM +多层组,和(4)DM + ESWT +多层集团和虚假的集团( ,没有STZ)是正常对照组。

2.4。MSC注入和ESWT

所有实验大鼠(包括DM控制、DM + ESWT, DM +多层和DM + ESWT +多层组)进行双边intracavernous注入。短暂,动物实验群体被吸入的2.0%异氟烷麻醉,然后每个老鼠都放置在后面位置的小腹剃和阴茎是包皮。MSC注入之前,我们标记荧光染料的MSC (CellTracker™CM-DiI;分子探针,尤金或)跟踪msc的位置根据制造商的协议。老鼠在DM + ESWT和DM + ESWT +多层组织收到的双边intracavernous注入200μ包含1×10 L PBS溶液⁶msc (P3)如前所述23,27),和糖尿病控制和DM + ESWT组收到双边intracavernous注入只有200μL PBS。多层每周重复1次,共4周时间。

MSC注射后,老鼠在DM + ESWT和DM + ESWT +多层组与冲击波治疗。在麻醉下,阴茎是包皮的仰卧位。超声波凝胶应用于阴茎,然后激波器(Urontech、韩国华城、韩国)放在阴茎。每个阴茎受到300脉冲能量通量密度的ESWT 0.1 mJ /毫米²120 /分钟的频率根据其他研究[17,28]。ESWT重复了3次每周一天的休息,总共4周时间。

2.5。勃起功能评价

在麻醉下,颈动脉和神经通过中线剖腹手术暴露海绵。阴茎的阴茎海绵体是空心25蝴蝶针充满肝素(250 U /毫升)通过插入在下肢。套管连接压力传感器(草模型S48 K;Astro-Med Inc .)、西沃里克,RI)连续评估和记录intracavernous (ICP)的压力。BD Intramedic PE-50油管(BD,富兰克林湖,新泽西)插入到测量颈动脉的地图。ICP和平均动脉血压(地图)连续记录如前所述23,29日,30.]。刺激参数1.5 mA, 20赫兹,脉冲宽度0.2毫秒,50年代和持续时间。计算最大ICP在神经电刺激的等距测力传感器和记录在电脑PowerLab商业数据采集系统(广告工具,但尼丁,新西兰)。ICP映射的比率是用来评估水平的勃起功能。阴茎收获组织学分析,ELISA和免疫印迹。

2.6。组织学和免疫荧光染色

动物牺牲与戊巴比妥钠腹腔内注射(50毫克/公斤),紧随其后的是双边胸廓切开术。阴茎midshaft组织是刚收获和固定23),免疫荧光染色法进行如前所述[31日]。阴茎海绵体石蜡部分是应用VEGF(稀释1:200圣克鲁斯生物技术,圣克鲁斯,美国),神经元一氧化氮合酶(nNOS,稀释1:200圣克鲁斯生物技术,圣克鲁斯,CA),脑源性神经营养因子(BDNF,稀释1:200;Abcam,剑桥,英国),神经生长因子(NGF对于稀释1:200;Abcam,剑桥,英国),基质细胞衍生因子- 1 (SDF-1稀释1:200;Abcam,剑桥,英国),特异性神经元β三世微管蛋白(稀释1:200;Abcam,剑桥,英国)和安装4,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI;向量实验室Inc .,伯林盖姆,CA)细胞核染色。胶原蛋白和血管平滑肌组织染色后评估与马森三色的技术使用先前描述的方法(32]。数字图像获得使用蔡司LSM 510元共焦显微镜(蔡司、从、德国)和平均强度计算使用禅宗2009(蔡司)。

2.7。分析细胞凋亡和自噬体内

我们评估了凋亡体内使用免疫印迹试验poly-ADP-ribose聚合酶(PARP)如前所述33]。我们也分析了自噬在阴茎组织免疫印迹检测轻链3 (LC3) [34]。PARP和LC3的抗体在免疫印迹分析上市。

2.8。ESWT与多层组合体内的效果

60毫克的阴茎组织从正常控制和实验动物沉浸与350毫升0.1 M盐酸和硅珠被添加(BioSec Enviro Inc .圭尔夫,加拿大)。对样本均质2毫升溶解产物缓冲区(Precellys 24;贝尔坦公司技术、Montigny-le-Bretonneux法国)和14000×g离心10分钟在4°C,然后它的上层清液中提取。每个样本的蛋白质浓度是由bicinchoninic酸(BCA)分析根据制造商的指示。环鸟苷酸(cGMP)直接免疫(K372 BioVision,旧金山,美国)是用于检测海绵cGMP水平根据制造商的协议。

2.9。免疫印迹分析

阴茎海绵体组织使用冰冷的均质里帕缓冲区(细胞信号技术,丹弗斯,我们)包含ethylenediaminetetraacetic无酸的蛋白酶抑制剂鸡尾酒和磷酸酶抑制剂(罗氏诊断GmbH)。均质样品当时离心机在12000 g×10分钟4°C和它的上层清液中提取。这个上层清液在NuPAGE 4% - -12% bis-Tris凝胶电泳(表达载体,卡尔斯巴德,CA),然后转移到一个硝基膜。转移后,膜被5%的脱脂牛奶在室温1小时,然后孵化与主抗体包括内皮一氧化氮合酶(以挪士稀释1:500圣克鲁斯生物技术,圣克鲁斯,CA),磷酸化内皮一氧化氮合酶(p-eNOS稀释1:500圣克鲁斯生物技术,圣克鲁斯,CA),一种蛋白激酶(稀释1:500;细胞信号技术,丹弗斯,美国),p-AKT(稀释1:500;细胞信号技术,丹弗斯,美国),PARP(稀释1:500;Abcam,剑桥,英国),LC3(稀释1:500;Abcam,剑桥,英国),血小板内皮细胞粘附分子(PECAM,稀释1:500;Abcam,剑桥,英国),β肌动蛋白(稀释1:1000;Abcam,英国剑桥)。之后,膜是孵化与二次抗体结合辣根过氧化物酶在室温下1小时。增强化学发光法(Amersham,阿灵顿高地,IL)是用于蛋白质检测。由此产生的图像进行了分析使用ImageJ(美国国家卫生研究院,马里兰州贝塞斯达)来确定每个蛋白质的集成密度乐队。

2.10。图像和统计分析

图像被ImageJ量化和Image-Pro +(美国马里兰州银泉的媒体控制论)。结果分析了使用SPSS 20.0软件(美国SPSS Inc .,芝加哥,IL)。提出了测量数据 偏差(SD)和多组进行了比较(方差分析)其次是Tukey-Kramer事后测试比较。数据表示为x平方分布检验的比例进行了评估。的值 被认为是表明一个统计上的显著差异。

3所示。结果

3.1。ESWT +多层ct可以改善显著

ICP结果如图1。从图我们可以看出1(一),的ICP结果DM + ESWT +多层组明显高于糖尿病对照组的结果。(图的定量结果1 (b)虚假的集团)是0.73±0.08。实验团体包括DM控制,DM + ESWT, DM +多层和DM + ESWT +多层组织,,0.21±0.08,0.43±0.07,0.41±0.11,0.59±0.09。ESWT和多层ct可以改善教育;DM的定量结果高于对照组( )。ICP /地图的比例明显高于DM + ESWT +多层组比DM + ESWT和DM +多层组( )。的定量结果DM + ESWT +多层组织非常接近虚假的结果。所以我们可以认为ED的治疗更有效,DM + ESWT +多层比单一方法(ESWT或多层)。

3.2。ESWT +多层刺激血管生成和血管舒张看看老鼠的阴茎海绵体

马森染色(图的结果2(一个))表明,血管平滑肌的DM + ESWT +多层组显然更多,与血管平滑肌的DM组相比。这些结果表明,EWST和多层ct可以刺激血管生成,而德集团( )。结果是显著提高DM + ESWT +多层组比DM + ESWT或DM +多层组( ),这证明了DM + ESWT +多层ct可以刺激血管生成和血管舒张,明显。它也强调,血管生成和血管舒张(图2(一个)在DM + ESWT +多层组近似于虚假的组。糖尿病的一个主要原因是血管损伤引起的氧化应激反应和高血糖症(35,36]。血液供应不足的结果血管损伤导致埃德。因此增加血管生成和血管恢复功能是恢复勃起功能的关键。现在,PDE5I ED的一线治疗,但仍有一些看看患者疗效不佳尤其是在受损的血管内皮(4- - - - - -6]。从我们的结果我们可以看出(图2),ESWT +多层ct能明显提高阴茎海绵体的血液供应。所以我们相信ESWT +多层后,看看患者的勃起功能明显改善。

3.3。ESWT msc在阴茎海绵体的数量增加

MSC intracavernous注射后,我们做了一个多层先后。在我们的结果(图3),我们发现ESWT可以增加的数量明显msc在阴茎海绵体。所以我们做了一个染色结果的定量分析。我们可以看到从定量结果(图4 (c)),我们发现MSC intracavernous注射后MSC与多层的数量高于MSC的数量没有EWST ( )。这个结果告诉我们,ESWT可以增加msc。

3.4。ESWT诱导msc可以表达更多的VEGF在体外和体内

后我们发现ESWT msc可以表达更多的VEGF(图4(一)比没有体外(ESWT) )。为了研究影响的ESWT msc体内,我们msc注入阴茎海绵体看看老鼠然后ESWT进行。从结果(数据3(一)和3(D)),我们发现DN +看看+ ESWT组中VEGF的表达高于其他人( )。ESWT后我们认为,msc可以表达VEGF体内。从数据3(D)和3(d),我们发现阴茎组织看看老鼠几乎VEGF表达。这种现象会导致内皮细胞增殖缓慢,血管生成几乎没有。但在DM + ESWT或DM +多层组织,还有一些VEGF在阴茎海绵体。这就是为什么ESWT和多层ct可以提高看看。

3.5。VEGF激活PI3K / AKT / mTOR和NO / cGMP信号通路在阴茎海绵体

一些研究人员(37,38相信VEGF可以激活mTOR / PI3K / AKT通路,所以我们发现一种蛋白激酶的表达量和p-AKT。结果(数据5(一个)和5 (b))表明,ESWT +多层,p-AKT / AKT的表达量明显高于其他( )。结合(图的结果3(D)),我们考虑后ESWT +多层丰富VEGF触发PI3K / AKT / mTOR通路看看阴茎海绵体。一些研究人员(39)认为没有调节血管舒张增加可溶性鸟苷酸环化酶(国网公司)在血管平滑肌。根据没有/ cGMP通路(40),我们发现的数量以挪士/ p-eNOS nNOS, cGMP表达式。结果(数据4 (b),5,6)表明,ESWT +多层,p-eNOS /以挪士和cGMP的数量明显高于其他人( )。结合(图的结果3(D)),我们相信,在ESWT +多层,VEGF激活NO / cGMP通路。在上面,我们相信ESWT +多层ct可以增加VEGF的表达,以及大量的VEGF可以触发PI3K / AKT / mTOR和NO / cGMP通路。

3.6。ESWT +多层ct可以刺激阴茎海绵体自噬,减少细胞凋亡

一些研究人员(20.,41,42]相信PI3K / AKT激活/ mTOR途径可以诱导自噬通过减少机械的雷帕霉素靶复杂(mTORC) 1激酶活性和Rheb水平。作为一种自卫,自噬可以抵消损失引起的细胞凋亡(22]。我们发现(图4 (c)ESWT后),msc的数量显著增加( )。所以我们做了一个假设ESWT诱导msc表达VEGF,然后VEGF引发了PI3K / AKT / mTOR途径增加自噬。自噬和凋亡测定(图的结果7)表明,ESWT可以激活自噬的阴茎组织和有效减少细胞凋亡。同时,我们发现,神经生长因子(数字3(一)和3(一))和脑源性神经营养因子(数字3(c)和3(C))表达在DM + ESWT +多层组高于糖尿病组( ),这被认为是保卫细胞凋亡(43,44]。这些结果证明了我们的假设,ESWT可以刺激阴茎海绵体自噬和凋亡减少。

3.7。ESWT能促进诱导MSC招聘的阴茎组织表达更多的SDF-1和PECAM

最后,为了探索其他原因ESWT可以增加msc,我们发现SDF-1和PECAM。Fandel et al。23相信SDF-1可以吸引intracavernously注射干细胞。PECAM趋化因子SDF-1和可以直接细胞贩运。我们的结果(图3(b)和3(B)和5ESWT后)表明,有很多SDF-1阴茎海绵体和PECAM表达( )。所以结合图4 (c),我们认为ESWT可以招募msc。

4所示。讨论

DL-ESWT和多层ct研究治疗ED好几年的45- - - - - -47]。一些调查结果48,49)一直在临床上用作小说ED治疗,但翻译,多层研究诊所依然缓慢,和LI-ESWT效应的分子机制仍然困惑(50]。所以我们要为临床治疗提供更多的理论和实验基础。在我们的研究中,我们发现DL-ESWT骨髓间充质表达可能会刺激更多的VEGF在体外和体内。我们还发现ESWT +多层可能比由一个更好的ED治疗方式。我们还证实,VEGF参与了PI3K / AKT / mTOR信号通路诱导自噬和激活没有/ cGMP信号通路诱导血管舒张和体内血管生成。与此同时,我们的研究证实,ESWT可以增加阴茎海绵体的msc的数量。

看看有很多原因,但主要原因是血管损伤引起的氧化应激反应和高血糖35,36]。一方面,血管损伤可以导致阴茎血液供应不足导致勃起障碍。另一方面,氧化应激反应可以导致神经细胞损伤和血管内皮细胞凋亡,从而减少以挪士和nNOS阴茎海绵体,这些可以减少没有然后导致看看(51,52]。Tepekoylu et al。53]证明ESWT可以诱导血管生成,导致内源性内皮细胞的动员。普列托et al。54)表明,多层ct可以刺激血管生成在血管内稳态,和我们的研究也显示了类似的后果。更重要的是,我们的研究结果表明,ESWT +多层ct可以改善勃起功能更有效地比单一方法。因此,这些结果证实我们的假设,结合ESWT和多层ED治疗都将得到更好的结果比单一方法。在我们的结果中,我们发现在体外和体内msc ESWT后可以表达更多的VEGF。所以我们认为阴茎组织中VEGF含量是勃起功能恢复的关键。

在一些研究23,24],msc注射后的数量将迅速减少,只有少数几个msc能到达目标区域。他们认为大多数msc会流掉通过迁移进入循环系统。但在这个实验中,我们证实ESWT可以增加阴茎海绵体的msc的数量。此外,这些msc可以为ED治疗是有益的。Fandel et al。23]认为神经节神经损伤调节SDF-1表达式,从而吸引intracavernously注射干细胞。他们msc注入阴茎组织和检测到标记msc的主要盆腔神经节。在我们的研究中,同样我们注入了msc阴茎组织,在ESWT之后我们发现了一个高表达SDF-1和PECAM,可以驱动msc在阴茎海绵体。我们还发现ESWT msc的数量增加后阴茎海绵体。所以证明ESWT可以推动招募msc。这就是为什么ESWT充分可以保持阴茎海绵体的msc。

一些研究人员(55,56)认为没有可以触发海绵平滑肌细胞放松,期间可以让血液进入血窦性唤起。他们表示,这是一个至关重要的原因增加不可能改善。但根据最新的研究,吉田et al。57)认为的水平没有在阴茎海绵体可以诱导血管舒张,刺激血管生成,这是另一个重要原因,没有可以改善。NO / cGMP通路的基础上(40,58),我们相信nNOS和cGMP可以改善ED,有效率。小森等。59)认为VEGF可以刺激血管生成通过激活没有/ cGMP信号通路。我们发现ESWT和多层后,VEGF表达高于没有ESWT或多层。所以我们相信经过ESWT和多层NO / cGMP应该激活信号通路在阴茎海绵体。吴et al。60)断定,VEGF起着重要的作用在任何/ cGMP信号通路激活的过程中促进血管生成。同样,我们的研究结果表明,nNOS和cGMP阴茎组织增加,阴茎组织的水平不可能增加,从而放松血管,促进血管生成,然后改善勃起功能。总结以上观点,我们可以得出结论,ESWT +多层ct可以成为一个伟大的ED治疗因为更好的再生和修复而单个ESWT或多层。

一些研究人员(22,61年)认为,有一个重要的细胞凋亡和自噬的关系,这意味着自噬可以减少细胞凋亡增加。在看看老鼠的阴茎海绵体,氧化应激反应(凋亡22]。细胞凋亡加剧阴茎海绵体缺血然后削弱勃起功能(62年]。自噬(63年,64年)是一种细胞自我保护可以维持生存所需营养素,细胞自噬是一个重要的自我调节系统,抑制细胞凋亡。我们的研究结果显示,在DM + ESWT +多层组细胞凋亡在阴茎海绵体的数量低于其他群体,这是接近正常组。所以我们认为ESWT +多层ct可以增加自噬保卫细胞凋亡在看看老鼠的阴茎海绵体。魏et al。37认为VEGF可以激活mTOR / PI3K / AKT信号通路,然后刺激自噬。在我们的结果中,我们发现,在DM + ESWT +多层组p-akt / akt表达高于其他人。所以我们认为VEGF起着重要的作用在PI3K / AKT / mTOR信号通路的过程中改善勃起功能。简而言之,我们相信,接受治疗后DL-ESWT和多层,VEGF的阴茎海绵体可以表达很多,而这些VEGF可以绑定在阴茎海绵体VEGF受体。一方面,VEGF能刺激PI3K / AKT / mTOR信号通路,诱导自噬,然后改善勃起功能。另一方面,VEGF可以触发没有/ cGMP信号通路,激活血管舒张血管生成,然后改善。我们测试每组VEGF表达,和结果表明,该表达式DM + ESWT +多层组高于其他组。这个结果也证明LI-ESWT和多层ct可以表达VEGF高于单一治疗。VEGF能达到细胞表面,并通过旁分泌VEGF受体结合,激活调节自噬和凋亡的PI3K / AKT / mTOR和NO / cGMP信号通路。这也解释了为什么LI-ESWT和多层ct可以诱导血管舒张和血管生成,提高。在接下来的实验中,我们要进一步测试VEGF和这两个通路之间的关系。我们将阻止VEGF受体在细胞表面,这不能使VEGF和VEGF受体的总和。 These experiments will find out if VEGF can trigger the PI3K/AKT/mTOR and NO/cGMP pathways exactly. Berrak et al. [65年)抑制mTOR / PI3K / AKT通路测试在前列腺癌的细胞自噬和细胞凋亡之间的关系,和一些研究人员66年)抑制NO通路检测内皮细胞的增殖能力。接下来我们将分别抑制PI3K / AKT / mTOR和NO / cGMP途径,找出这两种途径的影响。如果这些结果与我们的结果在这个报告中,我们将得出结论,结合LI-ESWT和多层ct可以是一个巨大的潜力,并承诺改善ED的方法通过激活mTOR / PI3K / AKT通路可增加自噬和减少细胞凋亡和NO / cGMP通路可以诱导血管舒张和血管生成。

我们的实验确实有一些需要改进的地方。首先,8周大鼠在我们的实验中,我们不知道LI-ESWT MCST对老看看老鼠有相同的影响。其次,msc的数量在阴茎海绵体intracavernous注入每个看看老鼠很难控制,所以很难避免错误。最后,通路,我们只进行了动物实验,但没有细胞实验。下一步,我们将抑制PI3K / AKT / mTOR和NO / cGMP通路和控制相关的基因表达来验证我们的动物实验。

5。结论

我们的实验证明,LI-ESWT和多层ct可以得到一个更好的结果比单一方法作为小说ED治疗。这是因为LI-ESWT和多层的组合可以表达VEGF高于单一治疗,可以参加自噬通过触发PI3K / AKT / mTOR信号通路。LI-ESWT和多层ct可以诱导血管舒张和血管生成通过激活没有/ cGMP信号通路。我们的研究证明,ESWT自导阴茎海绵体的msc可以开车。我们的研究为临床治疗提供了理论和实验基础。这种合作疗法结合干细胞和机器也在ED的治疗提供了新的研究方向。

缩写

BCA:	Bicinchoninic酸
脑源性神经营养因子:	脑源性神经营养因子
cGMP:	环鸟苷酸
DAPI:	4,6-Diamidino-2-phenylindole
DL-ESWT:	散焦低能冲击波疗法
看看:	糖尿病勃起功能障碍
艾德:	勃起功能障碍
以挪士:	内皮细胞一氧化氮合酶
ICP:	Intracavernous压力
神经生长因子:	神经生长因子
没有:	一氧化氮
PDE5I:	磷酸二酯酶5抑制剂
SDF-1:	基质细胞衍生因子- 1
LC3:	轻链3
地图:	平均动脉血压
msc:	间充质干细胞
多层:	间充质干细胞治疗
mTORC:	机械的雷帕霉素复杂的目标
nNOS:	神经元一氧化氮合酶
PARP:	Poly-ADP-ribose聚合酶
PECAM:	血小板内皮细胞粘附分子
国网公司:	可溶性鸟苷酸环化酶
STZ:	链脲霉素
VEGF:	血管内皮生长因子。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的结果包括在本文中。

伦理批准

所有动物实验研究机构动物保健和使用委员会批准韩国天主教大学(cumc - 2014 - 0141 - 01)。水合氯醛麻醉下进行手术,所有的努力都是尽量减少动物的痛苦。

信息披露

Woong金博士在之前的研究中,英国宇航系统公司和Sae Woong金教授做了一些有意义的工作和一些初步结果已经于2018年性医学在世界会议上讨论。抽象提出了在《泌尿学杂志》,2018年。”作者还要感谢康博士唱分钟他的帮助在设计动物实验。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

关群朱,第一作者,负责概念、设计数据分析和解释,手稿写作。Seung圆全负责收集和汇编的数据和数据分析。Woong金Bae负责概念和设计,汇编的数据,数据分析和解释,并修订手稿。Sae Woong崔Hyun Cheol桢,康一口金,金苏金负责数据的收集和汇编。Hyuk锦秋,Syn哈,唱Hoo香港,Eun Bi Kwon负责提供学习材料和动物模型。李记的你们是负责概念和设计,数据分析和解释。Sae Woong金,通讯作者,负责和设计概念,金融支持,起草和修订手稿,手稿的最终批准。所有作者阅读和批准最终的手稿。

确认

这项研究受到了韩国卫生技术研发项目的资助通过韩国健康产业发展研究所(KHIDI),由卫生部和福利,大韩民国(格兰特HI17C1944)。

补充材料

图1:治疗后免疫荧光染色的代表图像的ESWT阴茎海绵体。箭头代表colocalization领域。原来放大:×200。图2:代表图像的免疫荧光染色的ESWT治疗后阴茎海绵体。箭头代表colocalization领域。原来放大:×200。(补充材料)

引用

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