文摘
人牙髓干细胞(HDPSCs)的特殊相关性在未来再生牙科治疗。描述细胞毒性和基因毒性由牙髓学的材料需要评估受伤组织的再生潜力在未来策略结合再生和根管治疗。本研究探讨了细胞毒性和基因毒性氧化应激介导的三个牙髓学的材料被广泛用于HDPSCs:三氧化矿物聚合(MTA-Angelus白色),一个环氧树脂密封胶(AH-Plus水泥),和一个MTA-based水泥封口机(MTA-Fillapex)。细胞生存能力和细胞死亡率被流式细胞术进行评估。氧化应激被OxyBlot测量。通过免疫印迹的抗氧化酶水平进行评估。基因毒性研究了量化的表达水平DNA损伤传感器如ATM和RAD53基因和DNA损伤修复传感器RAD51和PARP-1等。结果表明,AH-Plus细胞凋亡增加,氧化应激和基因毒性HDPSCs标记。MTA-Fillapex是最细胞毒性氧化压力感应器和基因毒性物质preincubated HDPSCs在长时间的细胞培养基和MTA-Angelus比AH-Plus更少的细胞毒性和基因毒性和MTA-Fillapex化验。
1。介绍
牙科的进展与进步在牙科材料和新的再生疗法的设计。都恢复有关的设计可以使牙髓学的材料的生物相容性,这应该不会影响到细胞,直到修复受伤的组织已经开始。使用人类牙髓干细胞再生疗法(HDPSCs)是目前获得利益,因为这些细胞分化成成的潜力和成骨细胞(1- - - - - -3),这两个有能力取代受伤的骨和牙髓组织和健康组织,从而恢复牙齿的功能(4]。HDPSCs可以迁移到牙髓病变的站点来替代受损细胞,进而有助于愈合过程(5]。因此,建议材料在odontological干预不干预细胞信号由HDPSCs。
生物相容性是牙髓学的材料最重要的一个要求。体外研究评估牙髓学的材料的生物相容性通过细胞毒性分析之前的研究焦点。牙髓学的材料会产生氧化应激(6,7导致基因毒性。然而,很少有研究这些材料如何破坏DNA和DNA损伤信号响应由他们(8]。
在材料用于牙髓学、根管密封材料(rcs)作为根充材料在经典牙髓学的治疗。然而,rcs可以挤出periarticular区域通过顶端孔或侧和配件的运河。通过这种方式,他们可以建立直接接触根尖周的组织,在那里他们可以刺激炎症反应(9,10)和延迟愈合过程(11]。即使没有挤压,这些材料可以允许释放可溶性的物质(12)可以有毒牙根尖周组织和影响当地骨代谢和伤口愈合过程13]。
AH-Plus RCS广泛用于牙髓学,包含环氧树脂和胺(14,15)可以调节细胞毒性和基因毒性16]。MTA-Fillapex是一个包含MTA的RCS和合成disalicylate树脂。创建以结合材料具有优良的生物相容性和生物活性等潜在MTA与另一种物质很好的合成树脂等物理性质。然而,最近的研究提供了相互矛盾的结果对于这个封口机关于细胞毒性和基因毒性17- - - - - -20.]。
三氧化矿物骨料MTA-Angelus根修复材料由钙silicate-based液压水泥,它被描述为生物相容性,常用于修复纸浆接触和根的穿孔,在其他应用程序(21]。先前的研究已经表明,MTA-Angelus不是不会在很短的时间22]。然而,它缺乏适当的物理属性用作RCS,因为它没有足够的流动性和难以操作和运输内部的行为(23]。
我们建议使用HDPSCs描述细胞毒性和基因毒性由氧化应激产生的牙髓学的材料,由于其特殊的受伤组织和再生能力的相关性在干细胞再生疗法。此外,HDPSCs可用于再生治疗牙髓组织的细胞移植到根管或髓室,加强评估的必要性HDPSCs这些材料的影响。
在这项研究中,我们检测了细胞毒性,DNA损伤反应(DDR)和氧化应激产生的三个牙髓学的材料(HDPSCs MTA-Angelus, AH-Plus和MTA-Fillapex)。细胞凋亡和坏死是评估通过流式细胞术,基因的表达中存在参与DDR,氧化应激和抗氧化酶水平免疫印迹。
2。材料和方法
2.1。样品制备
每个牙髓学的封口机(MTA-Angelus、AH-Plus MTA-Fillapex)制备表明制造商的指示。每个牙髓学的材料的成分补充表所示可以在网上https://doi.org/10.1155/2017/8920356(补充材料)。组成的测试样品预处理细胞培养基是准备根据ISO 10993 - 12:2007 [24]。简要解释说,100毫克的每个新拌RCS (AH-Plus和MTA-Fillapex)和100毫克的MTA-Angelus粉都沉浸在1毫升的血清血糖过低DMEM(擤鼻涕,裁判:l0060 - 500),补充了抗生素和杀真菌剂。这些样本孵化不同时期由24小时、48 h, 7天,15天,30天在孵化器37°C和缺氧条件下3%的O2和5%的公司2。0.40获得提取过滤后使用μm过滤器和存储,直到他们的使用。最初的样品被认为是100%的股票中。之前他们在实验中,使用预先处理这些媒体补充10%胎牛血清。对于每个实验执行,1:2稀释股票的媒介。预先处理每个介质的pH值测量用酸度计(配偶C1010,劈刀科学有限公司,沃里克郡,英国)。一式三份的预处理中准备独立为了执行每个试验三个独立的复制。
2.2。细胞培养
HDPSCs是玛丽亚El Alami和胡安Gambini教授提供的(生理、医学和牙科学校,瓦伦西亚大学)。HDPSCs得到从提取的牙齿健康受试者签署知情同意后,获得伦理委员会批准的瓦伦西亚大学的研究实现了赫尔辛基宣言的原则。HDPSCs被积极的间叶细胞多能性特征标记,如STRO1 OCT1, CD133, CD34,巢蛋白和CD45的负面信号,确认细胞守恒的间充质干细胞的特性25]。HDPSCs是生长在低糖DMEM(擤鼻涕,裁判:l0060 - 500),补充10%胎牛血清(HyClone,裁判:SV30160.03), 100年μ100年青霉素g / mLμ0.25 g / mL链霉素,μg / mL两性霉素在37°C和细胞培养孵化器在缺氧条件下3%的O2和5%的公司2。进行细胞毒性和基因毒性实验中,HDPSCs被孵化与媒介准备与牙髓学的材料样品制备部分中描述。组定义为控制暴露只是补充DMEM培养基。
2.3。细胞毒性试验
每个牙髓学的材料的细胞毒性评估使用sulforhodamine B (SRB)测定。该协议被Vichai和Kirtikara前面描述的26]。简要解释,HDPSCs培养24 h 96孔板。之后,这些细胞被暴露24额外的小时1:预先处理2稀释介质与牙髓学的材料如前一节所述。细胞生存能力计算是基于测量的基本氨基酸含量使用0.4% SRB在1%醋酸与吸光度测量在492 nm,减去背景测量在620海里。每个条件进行了实验,在三个独立的样品一式三份。
2.4。流式细胞术
细胞凋亡测定的膜联蛋白V工具包(Immunostep,萨拉曼卡,西班牙)后,制造商的规范。106细胞被resuspended在100年μL的稀释1 x膜联蛋白V绑定缓冲(膜联蛋白V绑定缓冲,10倍,0.1消息灵通的氢氧化钠(pH值7.4),1.4 M氯化钠、氯化钙和25毫米)和彩色5μL膜联蛋白V-FITC和5μL propidium碘(PI)在黑暗中在室温下15分钟。在400年的潜伏期μL 1 x膜联蛋白V绑定缓冲了。对于每一个样本,4000染色细胞分析流式细胞术使用FACS-Verse血细胞计数器(美国加利福尼亚州圣何塞,正欲)和Infinicyt软件(Cytognos,圣玛尔塔故事情节,萨拉曼卡,西班牙)。每个条件进行了一式三份。
2.5。氧化OxyBlot的蛋白质分析技术
确定蛋白质羰基化合物,我们提出的程序执行Shacter et al。27]。简要解释说,10μg蛋白的变性和derivatized使用10毫米DNPH酸溶液。反应混合物中和,由SDS /页面并转移到硝化纤维膜。
最后,膜对anti-DNP抗体所描述的制造商OxyBlot工具包(OxyBlot蛋白质氧化检测装备,微孔Inc . Billerica,马。美国)。免疫印迹和OxyBlot实验重复两次。
2.6。抗氧化酶的表达,免疫印迹
MnSOD和过氧化氢酶的蛋白质水平研究了免疫印迹,用20μg细胞裂解后获得的总蛋白提取,如前所述,我们在以前的论文(28]。使用的抗体是anti-catalase(美国圣路易斯σ)和anti-MnSOD(美国Stressgen,安阿伯市,MI)的稀释1:1% (1000w/v)脱脂奶粉TBS-Tween一夜之间在4°C。β肌动蛋白(圣克鲁斯生物技术1:1000年,美国)被用作加载控制和二次抗体和anti-rabbit免疫球蛋白(美国Calbiochem,圣地亚哥,CA)是结合辣根过氧化物酶的稀释1:1% (2500w/v在室温下)脱脂奶粉1 h。检测过程进行了使用Amersham RPN 2106 ECL免疫印迹检测试剂(通用电气医疗集团生物科技AB,乌普萨拉,瑞典)。图像被使用了通用电气医疗集团las - 4000系统。
2.7。使用中存在基因表达分析的方法
从细胞总RNA分离使用巴黎™(蛋白质和RNA隔离系统)设备(美国Ambion、奥斯汀、TX)。逆转录(RT)反应,400 ng纯化RNA与高容量使用随机五个一reverse-transcribed cDNA逆转录工具包(P / N 4322171,应用生物系统公司,促进城市,美国)。
mRNA水平由定量实时PCR分析使用ABI棱镜7900 ht快速实时PCR系统(美国应用生物系统公司,培育城市,CA)。TaqMan gene-specific底漆对和探针的基因表达分析(热费希尔):ATM (Hs01112355_g1,应用生物系统公司),RAD53或CHEK2 (Hs00200485_m1,应用生物系统公司),RAD51 (Hs00947967_m1,应用生物系统公司),PARP-1 (Hs00242302_m1;应用生物系统公司),GAPDH (Hs02758991_g1,应用生物系统公司),和一起TaqMan普遍使用PCR主混合(P / N 4304437)和reverse-transcribed RNA在20个样本μL反应卷。PCR条件10分钟在95°C酶激活,紧随其后的是40两步周期(15秒95°C;1分钟60°C)。GAPDH表达的水平测量规范化RNA的差异在所有样本输入,RNA质量和反转录效率。分析了每个样本一式三份,和相对表达式计算根据2−ΔΔCt方法(29日]。
2.8。统计数据
三个独立实验的数据,导致9个独立样本,表示为平均值±标准偏差(SD)。对于实验有三个或更多组,比较了使用单向方差分析(方差分析)来确定组织的区别(流式细胞术和基因表达存在)。当交互效应被发现,多个比较使用Student-Newman-Keuls事后测试进行。被认为具有统计显著性差异 。GraphPad软件v6.0是用于统计分析和图形表示。
3所示。结果
3.1。HDPSC AH-Plus和MTA-Fillapex细胞凋亡增加
流式细胞术分析细胞生存能力和细胞死亡在HDPSCs先决条件的存在3种不同的媒介和对照组,所描述的材料和方法部分。
凋亡细胞的平均孵化后和样品预处理媒介24小时显著不同的4组之间比较(单向方差分析,)(图1(一))。如表所示1,当进行多重比较,大多数细胞毒性介质在24小时AH-Plus,与早期细胞凋亡显著增加(ea。19.9±2.1)和晚期凋亡(la。25.5±1.1),而对照组(ea。2.5±1.2;洛杉矶。10.0±1.8),MTA-Angelus (ea。6.5±0.7;洛杉矶。12.9±0.3),MTA-Fillapex (ea。3.5±0.2;洛杉矶。11.6±0.7)。
(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
的治疗更长(48小时和7、15、30天),血细胞计数结果显示MTA-Fillapex成为最预先处理细胞毒性较高的介质平均凋亡细胞(表1),与其他条件在统计上有显著差异的比较评估(数字1 (b),1 (c),1 (d),1 (e))。
化验条件,MTA-Angelus至少是细胞毒性的牙髓学的材料和显示细胞生存能力值最高(表进行了研究1)。
细胞生存和凋亡的HDPSCs可能与细胞培养介质的pH值的变化产生的牙髓学的材料。因此,样品制备过程中pH值在不同的时间测量(表2)。我们的研究结果表明,获得了最基本的pH值为MTA-Angelus (pH值8.6±0.5)和MTA-Fillapex pH值(8.6±0.4)在24 h。的酸碱AH-Plus仍接近生理分析pH值(7.8±0.3)。结果表明,细胞死亡并不是预先处理的pH值直接影响DMEM因为AH-Plus最相似的生理pH值和最高的细胞凋亡在24 h。此外,MTA-Angelus pH值和MTA-Fillapex相似的时刻分析;然而,细胞凋亡是MTA-Fillapex比MTA-Angelus更高,表明pH值没有参与细胞的细胞毒性。
3.2。牙髓学的材料在HDPSCs诱导氧化应激
氧化应激引起牙髓学的材料HDPSCs使用OxyBlot技术进行了分析。我们选择的实验条件增加观察细胞凋亡在24 h AH-Plus和MTA-Fillapex。HDPSCs孵化时的先决条件在中等和牙髓学的材料AH-Plus MTA-Fillapex 24 h,氧化相比在控制条件下蛋白质含量增加。此外,低信号观察氧化蛋白质MTA-Angelus,表明这种材料没有产生氧化应激在24 h(图2(一个))。
(一)
(b)
(c)
由于观察到细胞凋亡增加HDPSCs当细胞被孵化MTA-Angelus 7天,我们还决定探讨氧化应激在这些条件。我们发现MTA-Angelus产生氧化应激在同一水平AH-Plus MTA-Fillapex,这或许可以解释细胞凋亡的增加(图中观察到这些条件2 (b))。此外,MTA-Angelus的浓度在细胞培养基提高评估效果更高浓度的牙髓学的材料通过观察氧化蛋白质含量增加。
这些结果表明,MTA-Angelus是牙髓学的材料诱导氧化应激在HDPSCs少。
3.3。牙髓学的材料改变抗氧化酶的表达
之后,我们想知道如果氧化应激引起牙髓学的材料HDPSCs是由于关键抗氧化酶的抑制作用。利用免疫印迹,我们继续评估MnSOD的蛋白质含量和过氧化氢酶抗氧化酶参与解毒超氧化物自由基和过氧化物,分别(图2 (c))。当HDPSCs孵化与牙髓学的预先处理这些媒介材料AH-Plus和MTA-Fillapex 24 h,过氧化氢酶和MnSOD都比控制条件和MTA-Angelus表达下调。此外,我们没有观察到MnSOD和过氧化氢酶表达的变化和MTA-Angelus MTA-Angelus 50%和100%之间,因此表明这个牙髓学的材料没有改变抗氧化酶的表达(图2 (c))。
这些结果表明,HDPSCs保护区下方与氧化应激在AH-Plus MTA-Fillapex,虽然MTA-Angelus并不影响在HDPSCs抗氧化防御系统。
3.4。牙髓学的材料影响HDPSCs DNA损伤反应
以来的主要影响细胞毒性分析流式细胞术被发现在细胞培养基preincubated AH-Plus 24 h,也观察到MTA-Fillapex孵化也产生了细胞凋亡的48小时,我们决定研究DNA损伤反应只在这些时间。
生产中不同类型的损伤DNA双链断裂(双边带)和单链断裂(下面)有诱变的潜力,因为他们可以严重影响DNA的完整性(30.]。双边带检测到复杂的信号转导机制不同的酶机械参与,最重要的一个是ATM激酶(Ataxia-telangiectasia-mutated蛋白激酶)31日]。DNA损伤反应的另一个组件是丝氨酸/苏氨酸激酶感受器激活,Rad53 (酿酒酵母)的一个最相关的酶或相关的(这是与人类的)(32]。下面是被PARP-1 [33),信号修复的过程(34]。在蛋白质Rad51双边带修复,也称为FANCR,参与DNA链的指导在同源重组(人力资源)35]。
在24 h,结果表明,蛋白激酶RAD53(1.7±0.3)(图3(一个))和ATM激酶(2.0±0.2)(图3 (b))过表达与AH-Plus HDPSCs孵化时介质与对照组相比。增加ATM基因的表达也观察到其他生物材料(MTA-Angelus 1.4±0.1和MTA-Fillapex 1.3±0.3)相比,对照组(1.0±0.1)虽然主要作用是进一步增加时,介质preincubated AH-Plus (2.0±0.2)。此外,当参与DNA修复基因进行了分析,观察RAD51表达增加与AH-Plus HDPSCs孵化时(1.9±0.1)和MTA-Fillapex(1.3±0.3)相比,控制(1.0±0.1)和MTA-Angelus(1.3±0.4)(图3 (c)),增加了PARP-1表达式被认为与AH-Plus HDPSCs孵化时(1.8±0.1)比其他条件的相对表达PARP-1类似于对照组(1.0±0.1)(图3 (d)在24小时)。结果表明AH-Plus诱导双边带和下面,而MTA-Fillapex仅产生双边带修复的激活。
(一)
(b)
(c)
(d)
然而,在48 h,当细胞与牙髓学的先决条件孵化与介质材料,增加了细胞培养观察这些基因的表达与MTA-Fillapex AH-Plus(在较小程度上,MTA-Angelus(图4))。
(一)
(b)
(c)
(d)
这些结果表明,牙髓学的材料对双边带和SSBs激活DNA修复机制。然而,最高的DNA损伤激活传感器Rad53(2.1±0.7)和ATM(1.9±0.5)被发现MTA-Fillapex当结果比较的控制和其他条件。根据这些结果,DNA修复的最高效应信号(由Rad51和PARP-1)还发现MTA-Fillapex (Rad51 3.5±0.5;PARP-1 1.7±0.3)。这些基因的相对表达发现其他组低于MTA-Fillapex发现,控制(Rad51 (1.0±0.2), PARP-1 (1.0±0.2)), MTA-Angelus (Rad51 (1.2±0.0), PARP-1(1.4±0.0)),和AH-Plus (Rad51 (1.5±0.0), PARP-1 (1.4±0.1))。总之,结果表明MTA-Fillapex HDPSCs最基因毒性物质。
4所示。讨论
在我们的研究中,我们使用间充质干细胞从牙髓(HDPSCs),具有优于其他细胞系能够分化成成(1和成骨细胞2]。HDPSC与生理特性是同源细胞模型的主要组织牙髓学的材料接触。此外,HDPSCs等优势扩散的大容量,能够维持很长一段时间,细胞表型和应对毒素的敏感性36,37]。此外,HDPSCs承诺细胞系可用于修复受损组织再生医学,他们有潜在的适用性牙齿组织工程和再生治疗的牙科组织(38]。对于这些上述原因,HDPSCs可以被视为一个相关细胞模型评价牙髓学的材料的影响。
通过流式细胞术结果显示MTA-Angelus至少是细胞毒性的材料随着时间的推移,相比AH-Plus MTA-Fillapex。我们的结果类似于那些通过周et al。39]。这些作者研究了MTA的影响在人类牙龈成纤维细胞用流式细胞仪和观察到MTA稀释介质不会增加细胞凋亡或坏死。相比之下,罗维奇et al。40]发现MTA-Angelus细胞毒性使用50%稀释介质MRC5细胞系人类肺成纤维细胞组成。在我们的实验中,我们观察到的最大细胞凋亡为媒体准备AH-Plus在24 h和MTA-Fillapex 48 h。关于AH-Plus,一些研究表明,这种牙髓学的材料增加细胞毒性在24小时41,42),可能由于其成分(胺的存在43]。MTA-Fillapex本是最细胞毒性物质,同意周et al。44)观察到MTA-Fillapex是细胞毒性对人类牙龈成纤维细胞用50%稀释介质preincubated这种材料为1到4周的时间。
氧化应激可以调节细胞毒性和基因毒性,不同的牙髓学的材料已经证明了他们的能力产生氧化应激(6,45]。因此,我们有兴趣评估氧化损伤和抗氧化防御系统来评估氧化应激在我们的样本。
我们的研究结果表明,MTA-Angelus没有诱导氧化应激在HDPSCs孵化24小时。然而,AH-Plus MTA-Fillapex HDPSCs在这些条件下增加氧化应激。与我们的结果,一项由Camargo et al。46评估生产活性氧(ROS)在转染HDPSCs MTA的白色和灰色。ROS的结果由细胞暴露在生产1:1提取1小时显示,白色和灰色MTA并没有导致活性氧的增加产量。然而,一项由Chang et al。47]MTA-Angelus的能力和其他牙髓学的钙silicate-based材料诱导活性氧的形成和激活内源性抗氧化防御证明MTA-Angelus诱导活性氧的生产后3天的孵化一个人类牙髓的永生化细胞系。AH-Plus含有双酚A的缩水甘油醚(徽章),和一些有争议的结果可以在文献中找到表明徽章可以释放少量的双酚A (BPA) (48- - - - - -51]。然而,尽管没有公布BPA的起源细胞毒性,它可以认为徽章可以调节细胞毒性效应在不同的细胞模型,如淋巴细胞(52)和Caco-2细胞(53]。
金的研究等。54)获得的人获得了类似的结果,当研究AH-Plus的细胞毒性及其产生活性氧的能力在一个老鼠MC-3T3 E1成骨细胞细胞系,在媒介培养补充AH-Plus 30%浓度24小时。
此外,Camargo et al。55]分析了AH-Plus所产生的细胞毒性效应在50%浓度和由活性氧在人牙髓成纤维细胞系。
50% MTA-Fillapex产生氧化应激的机制和基因毒性可能是由二氧化钛的存在(二氧化钛)在其成分,已被证明能够产生活性氧,导致DNA的氧化损伤(56]。一个体内研究Zmener et al。57)评估MTA-Fillapex引起的炎症反应在Wistar鼠皮下植入后的生物材料。结果显示严重反应10天后,维持在30天,90天。这些作者推测,细胞毒性可能是由于有毒元素的浸出MTA-Fillapex由于溶解度较高。
我们的研究结果表明,HDPSCs接受AH-Plus和MTA-Fillapex 24 h,过氧化氢酶和MnSOD都比控制条件和MTA-Angelus表达下调。维伦纽夫等人所描述的精细平衡细胞生存和死亡之间通过控制ROS水平通过Nrf2和p21 [58]。作者提出,在轻微的氧化应激条件下(比如MTA-Angelus可能发生在我们的研究),细胞可以激活反应Nrf2表达式和下游靶基因(如抗氧化剂酶过氧化氢酶和MnSOD)。然而,在高水平的氧化应激(如可能发生啊+和MTA Fillapex)(图2 (c)),可以推测,Nrf2必须抑制抗氧化反应途径诱导细胞凋亡,因为细胞凋亡需要ROS(数据的积累2(一个)和2 (b))。其他可信的解释是,Nrf2系统在任何情况下被激活,但氧化压力超过酶抗氧化剂的能力,当细胞接受AH-Plus MTA-Fillapex。
因此,由于这些材料可以产生氧化应激,这对评估基因毒性的机制是至关重要的。在这方面,我们研究了不同的基因表达的调节细胞反应和DNA修复DNA损伤后归纳。我们分析了传感器和效应器的DNA损伤反应,如ATM RAD53 RAD51, PARP-1。
细胞培养基与AH-Plus准备24小时是最不会HDPSCs和ATM和RAD53(图的过度生产3)。AH-Plus也诱导的超表达RAD51和PARP-1在相同的条件。我们的结果是同意我们通过流式细胞术结果,证实AH-Plus基因毒性效应。这个牙髓学的材料可能是相关的结果在聚合(甲醛的释放59),这是极其被动,会导致生物分子间交联(60]。我们的结果同意那些通过Candeiro等人在人类牙龈成纤维细胞的模型61年)和结果由Camargo et al。16这个牙髓学的材料)。有趣的是,范Landuyt et al。62年)研究了基因毒性和细胞毒性效应由AH-Plus牙龈成纤维细胞的模型,他们没有观察水平的提高gamma-H2AX (DNA双链断裂的标志)。然而,他们发现的细胞毒性增加1:3和1:10稀释介质与AH-Plus先决条件。在我们的研究中,AH-Plus能够诱导的DNA损伤和DNA修复激活双边带和下面,被检测到的超表达RAD51 PARP-1,分别。
当我们与牙髓学的材料介质preincubated使用48 h,我们的研究结果表明,MTA-Fillapex进一步增加了表达DNA损伤信号通路介导的ATM和RAD53传感器和PARP-1 RAD51效应器的DNA修复基因,这表明MTA-Fillapex可以产生SSBs和双边带。结果也与获得的结果通过流式细胞术和指示MTA-Fillapex细胞毒性、基因毒性的潜力。MTA-Fillapex的基因毒性可能与二氧化钛的内容,之前已经证明了诱导微核的形成(56组成)和水杨酸盐的存在,这被证明体外诱导的DNA损伤和细胞凋亡在纤维肉瘤细胞系(63年]。本等。64年]证明了基因毒性和细胞毒性MTA-Fillapex体外使用国成纤维细胞和低浓度的MTA-Fillapex比在我们的研究中使用。
我们的结果指出使用一个适当的细胞系的相关性研究细胞毒性、基因毒性、牙髓学的材料的生物相容性。特别是,MTA广泛的可能性在牙髓学的治疗65年)由于其临床使用涉及生物材料的直接接触与periradicular和牙髓的组织,不仅造成细胞毒性、基因毒性、扩散也成和成骨细胞的分化66年,67年]。
5。结论
AH-Plus和MTA-Fillapex最细胞毒性、基因毒性材料HDPSCs在这项研究中。基因毒性是由氧化应激增加的差别,对这些基因的抗氧化防御系统。另一方面,MTA-Angelus是最小的细胞毒性和基因毒性物质在所有化验时间抗氧化酶的表达水平并没有改变。这是特殊的相关性特征的生物相容性和生物材料的细胞毒性和基因毒性效应的相关来源细胞再生治疗。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突有关的出版。
作者的贡献
Alejandro Victoria-Escandell和何塞·圣地亚哥Ibanez-Cabellos同样这项工作。
确认
Jose Luis Garcia-Gimenez和费德里科•诉Pallardo支持的研究所的经济竞争力和卫生部通过CIBERER卡洛斯三世(生物医学中心的网络研究罕见疾病和菲德尔的甘蔗2010计划共同投资基金从欧盟),以及由大学的瓦伦西亚(1090569000)和西班牙国家科学和技术研究和创新计划(aib2010 - se - 00333)。何塞Ibanez-Cabellos圣地亚哥是一个“Atraccio de人才”(瓦伦西亚大学)。
补充材料
表S1。组成MTA-Angelus白色(祈祷,Londrina、公关、巴西),AH-Plus (Dentsply德特雷,康斯坦茨,德国)和MTA-Fillapex(祈祷,Londrina、公关、巴西)。