重塑人类成年干细胞利基为再生医学应用

文摘

干细胞及其周围的微环境之间的交互关键决定组织内稳态和干细胞更新或分化和再生在活的有机体内。自从1978年他们假设,干细胞利基市场已经在许多胚胎和成年组织识别和特征。综合研究在过去几十年帮助阐明干细胞利基市场的关键部件,包括细胞、细胞外,生物化学、分子、监管机构和身体。这种知识直接影响其固有的再生潜力。临床应用需求现成的细胞来源,在控制条件下,提供一个特定的治疗功能。因此,转化医学的目的是优化在体外或在活的有机体内利基的各种组件和复杂的体系结构,利用其治疗的潜力。因此,目标是重建自然生态位微环境细胞疗法过程中发展和密切符合监管机构的要求。在本文中,我们审查的最新进展转化医学方法目标成人干细胞再生医学应用程序自然利基微环境。

1。简介:强调翻译的成年干细胞利基概念到治疗性应用程序中

多功能干细胞再生医学biotherapeutics至关重要,因为他们的天生能力恢复成人受损组织或器官的结构和功能。事实上,自我更新,clonogenicity, multipotentiality成体干细胞的主要共同特征。从临床前研究过渡到临床应用,然而,我们应该考虑控制干细胞的障碍和实施面向临床的方法来控制干细胞的命运和功能。

利基市场是一个高度动态的微环境,能够适应生理或患病的条件(1,2]。的兴趣针对干细胞利基成长和重塑的机会代表一个潜在的有价值的再生医学治疗的目标(3- - - - - -5]。在内源性利基,多功能干细胞是彻底与周围环境和接收常数输入,引导他们的命运。体外培养条件可以修改细胞的特点对他们的命运和进一步加强他们的再生潜力。良好的成人领域不同大小和复杂性:人类成体干细胞可以驻留在单个细胞在利基市场分布在整个组织。在其他情况下,多个干细胞集群标识,如毛囊的隆起或前脑subventricular区。暂时来说,成人干细胞可以占领一个不变的利基在产后的生活,例如,在中枢神经系统;相反,造血干细胞不断从一个骨髓间到另一个循环,进一步激活造血骨髓利基市场,如肝脏和脾脏在压力条件下,例如在造血系统恶性肿瘤(6,7]。这些策略也符合这个概念的动态人体先天的再生能力。

针对干细胞利基,它可能需要调节它的各种部件,如细胞间接触,细胞细胞外基质的相互作用,机械和电气刺激在时间与空间上的监管方式(8,9]。控制所有利基组件是一个遥不可及的目标;然而,这种生物复杂性转化成引人注目的制造工艺可靠,质量有保证,为干细胞疗法具有成本效益的产品10]。

制造业的细胞治疗产品(茶多糖)等临床应用通常需要具有挑战性的步骤的具体身份的定义,每个CTP的效力和纯度。这些定义在很大程度上是依赖治疗。对这一目的,美国食品和药物管理局(FDA)释放当前良好生产规范(cGMP)准则和协调国际会议(我)引入了一个系统化的方法来处理基于科学知识生产和产品管理和风险评估2,11]。在开发一个健壮的制造过程,总的来说,至关重要的是识别的关键特征,以确保产品质量,直接关系到其安全性和有效性。干细胞扩张可能是一个关键的步骤来确定CTP质量。干细胞身份的可变性、效力和纯度尤其相关CTP生产,和每一个尝试减轻这种可变性的来源。因为这一原因,CTP生产中所使用的试剂不断改善。许多茶多糖,以前培养的动物血清或支线层,现在培养化学定义,xenofree或无血清,cGMP条件,减少产品的特定目的变化(12,13]。这是一个关键的挑战在当前临床翻译维持体外的精确特征确定干细胞及其周边微环境(14,15]。

在下面几节中,我们讨论的主要挑战限制成年干细胞产品差异性,我们描述我们所知,最近进展的临床翻译。一般来说,我们强调这样一个事实,“很明显,基本的科学和医学问题驻留在利基”(16开发有效的干细胞治疗产品。

2。模仿自然物理微环境:构成细胞外基质的临床应用

接触细胞外基质(ECM)和与其他细胞代表一个重要的机制,成体干细胞的微环境和决定他们的命运17]。细胞生物物理微环境的精确设计是一种很有前途的方法与控制干细胞行为的目的18,19]。此外,干细胞命运的调制在体外通过人工微环境可以有效地避免直接基因操作的需要,这是更多的临床应用问题。采用人工ECM旨在重新创建在活的有机体内三维(3 d)微环境。

无细胞的利基市场代表第一次尝试定义体育发展的条件。最近的进展治疗应用包括合成bioinformative基板设计的发展在微观和纳米级水平(20.]。微貌和nanotopography调节细胞行为包括粘附、自我更新、增殖、分化和代表新兴强大的工具。物理约束的微环境,包括微,甚至纳米尺度的几何信息,检测到细胞:刚度,刚度和几何的基质影响干细胞的行为21- - - - - -23]。这些技术都是改编自微电子工业和使用技术,如表面缩微成像,化学腐蚀,和软光刻技术来获取组织模式和常规的几何图形,微流体,nanoscale-engineered三维(3 d)高通量研究仿生支架。Lutolf等人表明,底物的三维地形,协同其定义矩阵组成,可以促进干细胞分化和对齐,如果临床需要24,25]。纳米级、微型图象和高度灵活的膜可用于制定微创植入视网膜色素上皮细胞层内眼(26]。截至今天,nanotopography同样重要的是定义培养基配方在干细胞培养条件的优化27- - - - - -29日]。

仿生利基的地形信息的机制影响干细胞的行为并不完全理解;他们似乎涉及到细胞骨架组织和结构的变化,主要是在细胞膜的整合蛋白的水平对ECM的几何形状和尺寸。这种交互激活伴随细胞内的信号级联、引导干细胞行为(30.,31日]。此外,定义的表面,如合成肽包含Arg-Gly-Asp (RGD)细胞附件图案仍然是相当新的细胞扩张和代表一个成功的选择(32- - - - - -34]。

一般来说,合成肽和表面提供动物的优势组件自由(ACF)和潜在的可伸缩性。基底膜基质,不好定义复杂的ECM孤立于小鼠Engelbreth-Holm-Swarm肿瘤,不会是临床应用的理想选择35,36]。重组版本的single-ECM蛋白质、纤连蛋白、层粘连蛋白等,存在,提供设计整体ACF细胞环境的机会。然而,目前,重组蛋白仍然是大规模细胞疗法产品制造成本高昂。

生物相容性hydrogel-based ecm是用于干细胞的文化。水凝胶是3 d高分子亲水的平台获得的交联聚合物。胶原蛋白、纤维蛋白、透明质酸、海藻酸葡聚糖、壳聚糖和琼脂糖作为组件用于水凝胶(37,38]。然而,细调制的机械性能,降解率,和再现性是一个挑战。因此,水凝胶聚合等合成(化学定义)肽polylactic-glycolic酸(PLGA)或聚乙二醇(PEG)的开发(39,40]。可生物降解的合成hydrogel-based许多产品被FDA批准用于临床使用,它们是专门为每个临床应用。这些仿生ecm定义有效地创建一个足够的成人干细胞微环境;然而,他们似乎并不足以保证长期维护的干细胞在体外。因此,我们进一步分析了额外的重要组成部分干细胞利基进入临床应用。

3所示。向细胞疗法的标准化产品:化学微环境定义

在体外,培养细胞受到环境的主要组件是衬底,培养基,大气和细胞间的相互作用。这些组件参与复杂网络的信号通路,最终确定干细胞命运(22,23]。干细胞文化被广泛应用于基础研究和优化生产扩大细胞临床相关数据(28,32]。文化媒体和补充提供最基本的营养培养细胞:必需氨基酸,碳源(通常是葡萄糖和半乳糖),基本的盐,脂质,金属离子,缓冲系统保持pH值,一个铁载体(如转铁蛋白),生长因子或激素。媒体补充提供粘附因子和有利于防止剪切力(例如,通过表面活性剂或白蛋白)。总的来说,媒介及其组件模拟尽可能多的情况在活的有机体内。

普遍最优文化条件不存在,因为干细胞都是不同的。干细胞培养参数为每个干细胞类型定义和设计预期的治疗使用41,42]。支线层供给生长因子、细胞因子和其他细胞外基质成分如白血病抑制因子(生活)、苯丙酸诺龙,Wnt,骨形成蛋白(bmp)、胰岛素样生长因子(IGF),层粘连蛋白,vitronectin保持未分化状态。这些细胞培养条件定义不清晰:马龙等人报道,馈线细胞显示批次变化来维持人类胚胎干细胞(hESC)自我更新和扩大文化有限43]。负面结果相关xenotransmission也发现在长期的文化44]。这说明细胞人选的支线层作为一种文化组件。feeder-free的发展,因此,研究可能无血清,强烈鼓励和理化定义文化系统。

良好的细胞培养实践(GCCP)和良好生产规范(GMP)代表细胞疗法的主要指导方针,建立标准化的协议和再生医学45]。事实上,完全的设计定义媒体具备干细胞能够保持,或者诱导向明确的表型分化,是干细胞的主要兴趣点今天文化。化学定义媒体用于增长的中国仓鼠卵巢(CHO)代表一个有益的教训。

定义媒体的优势,除了理想的道德减少或完全没有胎牛血清的边后卫,精确的化学成分,从而促进文化环境选择性控制细胞的生长。定义文化条件允许定义和karyotipycally表型上的建立和维护稳定的细胞。

细胞培养条件进一步优化的实现特定的干细胞补充,即重组生长因子或细胞因子。媒介的选择添加剂及其浓度,特别是生长因子,是至关重要的,因为它可以不定地影响培养细胞。成体干细胞需要交货vivo-specific生长因子,模仿他们的原生微环境。

生长因子作为有丝分裂原刺激细胞增殖和在某些情况下是至关重要的维持细胞特征。最常用的生长因子在ACF或xenofree (XF)媒体对人类成体干细胞包括基本成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、转化生长因子-β、血管内皮生长因子、血小板源生长因子(46,47]。这些生长因子可作为重组蛋白,广泛用于细胞疗法的应用程序。

生长因子的特异性,其浓度和协同效应发挥着至关重要的作用在实现优化,特异性,定义的培养基。值得注意的是,生长因子的需求可以不仅特异性,而且物种特定:生活支持鼠标但是ESCs不是人类的扩张。分泌的分子,如集落刺激因子和干细胞因子(装备配体),扮演了一个重要的角色在细胞的生存。

涉及其他类的细胞间相互作用的分子也很重要:弗酪氨酸激酶受体之间的相互作用及其Ephrin跨膜配体调控成年干细胞增殖和迁移48]。

有效的干细胞制造在体外保证长期的疗效至关重要在活的有机体内。这个关键问题上增加我们的知识有效的干细胞微环境调节和转化研究有效的和可再生的临床试验。

4所示。生物反应器:3 d机械力模拟控制氧灌注在干细胞领域

几十年来,细胞培养在大气中的氧气压力远远高于一个经验丰富的在他们的领域在活的有机体内。细胞培养孵化器通常保持大气部分氧气压力(警察乙)约为150毫米汞柱(21%啊₂)。在活的有机体内、生理警察乙范围50至5毫米汞柱(7 - 0.7%)。因此,术语“normoxia”指标准细胞培养系统并不指生理条件。降低了警察乙有利于各种成人干细胞类型(49]:Wion等人报道,骨髓间充质干细胞扩张更有效率在2%警察乙(50]。此外,警察乙发现成年干细胞利基市场是可变的。

干细胞培养基是动态的,变化迅速的释放和/或消费大量的代谢物。出于这个原因,连续灌注新鲜媒介控制的细胞培养生物反应器被认为是一个有价值的选择标准化cell-manufacturing流程。生物反应器利用机械力影响密切控制条件下生物过程。他们提供空间细胞均匀分布;提供相关生理浓度的氧气、二氧化碳和营养培养基;并提供物理刺激调控干细胞分化和增殖。在生物反应器中,干细胞是扩大灌注在搅拌容器或支架,和他们的文化pH值和氧值监控。这个控制过程是有益的干细胞扩张和分化与传统静态培养条件相比,尽管自分泌和旁分泌循环可能干扰(51]。敏感的监测系统和控制算法的实现是需要增加细胞产品的重现性。各种类型的生物反应器存在和用于制造干细胞疗法的产品。

5。减少动物组件:血清培养及其对小微环境的影响

血清是一种混合了大量的组件,和它的组成部分是无特征。细微变化的成分影响细胞的关键属性,因为他们是高度敏感的文化条件。因此,血清介绍一个未知变量到文化系统,这是一个挑战来生成一致的和有质量保证的细胞clinical-scale生产(52,53]。

在细胞培养中,使用胎牛血清(的边后卫)作为媒介补充是最普遍的。血清在干细胞文化媒体的主要功能是提供对应的多个元素在活的有机体内条件:荷尔蒙因素对细胞生长和扩散运输的蛋白质激素,矿物质,微量元素(如铁传递蛋白),脂质(如脂蛋白)。此外,它与因素抑制蛋白酶(如稳定pH值α抗胰蛋白酶或α2-macroglobulin),供应细胞外基质的粘附分子,和包含的因素,防止剪切力54,55]。

关键问题的存在的边后卫在干细胞文化批次变化,波动可用性、意想不到的细胞特征,和潜在的细胞毒性无特征因素(56- - - - - -58]。Gstraunthaler等人提出的几个伦理问题有关的使用和收藏的边后卫(59,60]。最重要的是,免疫原性的细胞培养的边后卫已经被证明是具有挑战性的治疗策略的使用。

多数监管机构允许使用异种的组件在文化媒体在第一阶段临床试验。然而,后来试验阶段需要采用无血清或至少xenofree媒体。Mendicino等人最近报道的边后卫是制造业中使用超过80%的试验性新药(印第安纳州)间充质干细胞(MSC)产品申请提交给FDA (61年]。的边后卫的浓度范围从2到20%,10%的边后卫是最常见的浓度。血清消费每年平均增加10% - -15%,这表明血清的需求很快就会超过实际的可用性。安全问题表示声音的原因寻找血清替代品或无血清媒体(62年- - - - - -64年]。

建立无血清细胞培养系统的主要好处是标准化的方向,也就是说,细胞疗法的产品差异性,限制和消除潜在的污染源65年,66年]。值得注意的是,无血清媒体通常更特定细胞。

成体干细胞无法生存在没有serum-specific生长因子以及血清中的其他不明因素。在血清培养,一个单独的附件衬底是必需的。人血浆纤连蛋白是一种常见的粘附基质用于无血清系统(67年]。人类血小板溶解产物(hpl)被认为是一个有价值的边后卫选择成年干细胞扩张(68年]。血小板颗粒含有各种生长因子和细胞因子,可以释放冻结/ thaw-mediated消散,声波降解法,或化学治疗。由于血小板的伤口愈合财产在活的有机体内生长因子,如血小板源生长因子(PDGF)、转化生长因子-β(TGF -β),纤维母细胞生长因子(FGF)、胰岛素样生长因子- 1 (igf - 1)、血小板源表皮生长因子(EGF)、血管内皮生长因子(VEGF),连同附件因素(纤连蛋白和vitronectin),和蛋白酶抑制剂可以供他们使用69年]。然而,hPL准备接受donor-to-donor变化。

汇集人类AB血清(赤潮)是一种额外的选择:它支持人类间充质基质细胞的增殖(hMSCs)和维护他们的特点在体外扩张(70年]。此外,人类脐带血清(hUCBS)富含可溶性生长因子。hUCBS支持增长、增殖和分化的居民在胎儿血液干细胞群。脐带血定义不同的特征线血液干细胞,这补充可能构成一种独特的微环境来支持体外成体干细胞(文化71年]。然而,hUCBS各种各样的缺点,同样其他血液替代品的边后卫。一般来说,从外源污染代理的可能性,lot-to-lot可变性,和限制收集量仍然是一个挑战。污染问题都由严格遵守血库质量标准控制。

要克服的问题收集可用性有限,形式的重组人血清白蛋白是商用。重组人血清白蛋白(r-HSA)是用来代替提纯人血清白蛋白(HSA) (72年]。r-HSA HSA结构相同但从病毒和朊病毒污染,它是免费的,它保证高批次一致性。重组白蛋白更可能是符合监管要求和可能对细胞疗法作为ACF辅助产品和再生医学应用(56,61年]。的主要缺点是价格r-HSA比纯化HSA高上几倍。

几无血清媒体也商业化。不幸的是,商用专用无血清的成分媒体通常是未知的。制造商通常不披露这些信息,通常是要求监管当局在临床的设置。

无血清培养系统开发过程的媒体或干细胞无血清培养基适应复杂和费时。然而,这些定义的发展应该鼓励媒体针对他们的临床应用。随着干细胞疗法行业进步和临床试验达到他们的后阶段,文化工艺验证、扩大,和质量保证的关键原材料高度要求。

解决这种需求导致重大改变当前培养有益技术转向更多合格的和引人注目的疗法。表1显示当前选择的临床应用概况。

6。心脏干细胞在再生医学

细胞外基质(ECM)成分正是监管在正常心脏发展及其在结构和功能失调的结果心脏疾病。

的心是一个生物力学的器官机械应力对心肌细胞主要源自血流动力学负荷。失调的预加载在舒张或收缩后负荷导致先天性或成人心脏病的发病机理。在成人心肌干细胞的微环境包括心肌细胞、血管、间质细胞和细胞外基质,每个人代表一个潜在的目标,增强心脏损伤后的再生潜力。

心血管疾病是一个重大的公共卫生优先事项。具体地说,患有心肌梗死的患者可能会遇到不良重塑,最终导致心力衰竭。心力衰竭的患者预后影响很差,5年死亡率接近50%。尽管心力衰竭的临床治疗方面取得了重大进展,近年来,仍然需要心脏移植,以避免死亡的结果必然心脏功能下降。尽管如此,精神障碍与心脏移植和器官供应有限的需求开发新的干细胞再生医学的方法(82年- - - - - -84年]。

人类心脏的器官再生较低的身体,或者至少,其再生潜力明显低于小肠,肝脏,骨骼,或皮肤(85年]。然而,必须认识到某种程度的心肌细胞更新(86年,87年]。尽管增殖率明显小,很难检测,他们提出质疑这种天生的流程可以增加和治疗。鉴于这些观测,心脏再生医学的主要目的是取代受损的心脏细胞,因此,恢复生理器官的结构和功能88年,89年]。各种临床试验采用成人干细胞再生心脏。过去的十年中强调了最有意义的干细胞研究心脏疾病。这些第一代成年干细胞治疗心肌再生在小动物模型但前途有益人类的更温和的(90年]。因此,第二代治疗方法的目标是增强细胞特性和生存恢复心肌的正常功能。

目前的调查处理结合的方法,采用多种干细胞类型。预处理干细胞在体外与生长因子、缺氧治疗或延缓衰老的试剂提高细胞移植,生存和分化之前。这种有价值的方法的一个例子涉及到“cardiopoietic”指导的多能成体干细胞:贝尔法等人采用特定的心原性的鸡尾酒对人类间充质干细胞通过操纵他们的文化环境91年]。作者评估这种方法C-CURE试验(ClinicalTrials.gov识别器:NCT00810238)和更大的图1 (ClinicalTrials.gov识别器:NCT01768702)临床试验治疗缺血性心力衰竭。到目前为止,初步结果表明积极的虽然不是治疗组的显著趋势。

心肌组织工程支架代表3 d成年干细胞文化;这种方法包括合成多孔支架或scaffold-free细胞表增加心脏收缩性和输出。为了使用物理化学定义的组件,重组体人层粘连蛋白和重组人类纤连蛋白在我们的手中(图1,未发表的结果)(92年]。

复杂的3 d ECM,包括ECM获得脱细胞的心,提供了一个优越的微环境/单2 d ECM组件对心脏干细胞组织结构和功能(93年- - - - - -95年]。水凝胶是一种有效的替代支架:他们创建一个合成细胞的微环境在体外和随后管理到心肌补丁或注入心脏的受损区域。3 d生物打印最近成为一个令人兴奋的技术进步3 d心肌组织建设:现在可以打印本地心脏组织或定制的特定的设备进行心血管疾病。

液携带非编码rna在细胞间通讯的重要球员的心。小分子核糖核酸(microrna)和长非编码rna (lncRNAs)作为关键心脏发育和疾病的监管机构:他们需要实现为未来努力模仿心脏微环境在体外。miR-15, mir - 17, mrr - 133 a, mir - 199 a, mir - 210, mir - 451, mir - 499提高缺血或梗死后心肌结构和功能。

未来的模型可能会扩展到基因疗法:分析单核多倍体细胞天然再生组织代表一个最近的方法(96年]。

7所示。结论

几项研究在过去几十年突出的重要性,人类干细胞生长的微环境和维持其特有的特征。各种组件的人类干细胞利基澄清,并重新创建一个适当的原生微环境的目标是当前再生医学的目的。

制造人类成体干细胞疗法最好应该表现在动物部分流或减少动物组件系统,以避免人畜共患病的风险。理想情况下,细胞培养系统工程为此将减少暴露于动物细胞和蛋白质主要通过人类或重组人类组件。此外,它是非常可取的采用理化定义文化媒体,可能缺乏复杂的混合物,比如动物或人类的血清。

我们正在接近生产干细胞疗法的产品非常有限的接触动物产品,从而更好的候选人用于再生疗法。虽然前方还有很多挑战在CTP的工业化生产,我们找到很多理由感到乐观。几十年的经验与工业细胞系文化进程奠定基础工程茶多糖等生物反应器扩大,分析细胞新陈代谢,媒体设计、优化的扩张策略和过程控制。与此同时,我们理解细胞如何与他们的环境正在改善,和控制系统,模拟细胞微环境产生重要数据集越来越集中在分子和细胞的信息。在平行,我们一般理解干细胞的分子基础,包括粘附特性、代谢需要,clonogenicity,和扩散控制,是进步的。这些发现强调多学科方法的重要性工程产品的发展,涉及许多学科如连接的细胞和分子生物学、材料科学、生物医学工程和医学。全球视角的实现全面的细胞疗法产品包括定义的无血清培养基,灌注系统,生物传感器,微型飞行器或nanoscale-designed支架模仿尽可能的利基微环境调节干细胞的功能。未来可能发展的三维模块化仿生系统组装根据干细胞的最终目的文化,例如,具备干细胞维护或控制对临床相关的细胞表型的细胞分化。

这个巨大的开发需要的时间和资源,还可能涉及到显著变化实现到原始的制造过程。此外,最终的完整描述干细胞产品过程开发更改之后验证可比性最初的产品是至关重要的。关键也要仔细检查质量,安全,和可用性实现的特定组件的系统来确保选择满足需求的进一步扩大过程和产生的治疗产品。

茶多糖的未来依赖于细胞制造成本效益的技术的发展。鉴于茶多糖的固有复杂性及其生产工艺,适当的设计方法将在今天的实验茶多糖转化成基本可用的治疗。

知识的进步和优化整体组件的人类干细胞利基工具在这个雄心勃勃的目标。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

引用

1. g·b·亚当斯和d . t . Scadden“干细胞疗法,一个利基机会”基因治疗,15卷,不。2、96 - 99年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. g·b·亚当斯,r·p·马丁,i r .巷et al .,“治疗针对干细胞利基,”自然生物技术,25卷,不。2、238 - 243年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. m·l·韦斯m . s . Rao r .院长和p . Czermak制造细胞临床使用,“干细胞国际卷,2016篇文章ID 1750697, 5页,2016。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. l .佐恩“转化研究:路径将发现病人,”细胞干细胞,14卷,不。2、146 - 148年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. a . j .赌注”,干细胞在再生医学”,细胞干细胞,10卷,不。4、362 - 369年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. d·巴塔查里亚答:采用d·j·罗西的a·g·Ooi d .因此,i l .斯曼。“利基回收通过division-independent造血干细胞的出口,”《实验医学杂志》上,卷206,不。12日,第2850 - 2837页,2009年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. 美国贾斯瓦尔,c . h . Jamieson w·w·庞et al .,“CD47是调节循环造血干细胞和白血病细胞吞噬作用,”细胞,卷138,不。2、271 - 285年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. y Reinwald、j·布拉特和a . El麦加朝圣“多能干细胞及其动态的利基市场,”章从书中多能干细胞诊所InTechOpen细胞从板凳上InTech,的哲理,里耶卡,2016,http://irep.ntu.ac.uk/id/eprint/31093/。视图:谷歌学术搜索
9. d·l·琼斯和a·j·赌注”,没有比家更好的地方:解剖和功能的干细胞利基,”自然评论分子细胞生物学,9卷,不。1,乳,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. 公元着陆器,j .金布尔h .聪明的et al .,“什么干细胞利基的概念今天真正的意思吗?”BMC生物学,10卷,p。19日,2012年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. 美国食品和药物管理局”,指导工业:处置(R2)医药发展,”2009年,http://www.fda.gov/downloads/Drugs//Guidances/ucm073507.pdf(国际会议协调)。视图:谷歌学术搜索
12. j .卡门·s·r .汉堡,m . McCaman和j·a·罗利”发展中分析解决身份,效力,纯度和安全性:细胞特征的细胞疗法过程开发,“再生医学,7卷,不。1,第100 - 85页,2012。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. r . c . Nordberg和e . g . Loboa,“我们的未来:脂肪转化脂肪干细胞疗法,”干细胞转化医学,4卷,不。9日,第979 - 974页,2015年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. m . k .木匠,“监管考虑多能干细胞疗法,”大脑研究的进展卷,230年,第163 - 151页,2017年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. j . Tarnowski d·克里希纳l . jesper et al .,“提供先进的疗法:大型制药公司的方法,”基因治疗,2017,https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=J。克里希纳+ Tarnowski % 2 c + d + % 2 c + l + jesper + 2017。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. 美国j·莫里森和a·c·Spradling干细胞利基:机制,促进干细胞一生中维护,”细胞,卷132,不。4、598 - 611年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. j .张和l .李“干细胞利基:微环境,”《生物化学》杂志上,卷283,不。15日,第9503 - 9499页,2008年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. d . j . Prockop c·a·格雷戈里和j·l·spe”一个细胞和基因治疗策略:利用成人干细胞来修复组织的力量,”美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国补充1卷。100年,第11923 - 11917页,2003年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. f . Guilak d·m·科恩,b·t·埃斯蒂斯j . m .平衡台w·利特克和c . s . Chen”控制干细胞的命运由物理与细胞外基质的相互作用,”细胞干细胞,5卷,不。1,17-26,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. t .不借,y森美国Ito et al .,“微型图象聚合物nanosheets本地交付工程上皮单层的,”先进材料26卷,第1705 - 1699页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. a . j .断森,h·l·斯威尼d·e·迪斯凯尔,“弹性矩阵指导干细胞谱系规范”细胞,卷126,不。4、677 - 689年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. s . j .希腊和p . Rameshwar微环境因素在人类间充质干细胞再生疗法的应用,”生物制剂:目标和治疗,卷2,不。4、699 - 705年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. 美国Eshghi d·v·谢弗,“工程微环境控制干细胞的命运和功能,”StemBook(互联网)哈佛干细胞研究所,剑桥(MA), 2008。视图:谷歌学术搜索
24. m . p . Lutolf和j·a·哈贝尔”,合成生物材料作为组织工程形成指导细胞外微环境,”自然生物技术,23卷,47-55,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. n . Gjorevski n (goldman Sachs)、a . Manfrin et al .,”设计师矩阵对肠道干细胞和瀑样文化,”自然,卷539,不。7630年,第564 - 560页,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. 雅斯曼斯基l, m . j ., a·g·巫女“视网膜色素上皮细胞工程使用合成可生物降解的聚合物,”生物材料,22卷,不。24日,第3355 - 3345页,2001年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. j·巴特,h . Ozcelik带领,m . Hindie a . Ndreu-Halili a·哈桑和n . e . Vrana”细胞微环境工程和监控组织工程和再生医学:最近的进步,”生物医学研究的国际ID 921905条,卷。2014年,18页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
28. h, s .戴j . Bi和k·k·刘,“仿生三维微环境控制干细胞的命运。”接口的焦点,1卷,不。5,792 - 803年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
29. m . Hosseinkhani r . Shirazi f . Rajaei m . Mahmoudi n .穆罕默迪和m . Abbasi”工程的胚胎和成年干细胞利基市场,”伊朗红新月会医学杂志,15卷,不。2、83 - 92年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
30. p . j . Kshitiz公园,w . Kim et al .,“控制干细胞的命运和功能的工程物理微环境,”综合生物学(综眼),4卷,不。9日,第1018 - 1008页,2012年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
31. s . Even-Ram诉Artym, k . m .山田“矩阵控制干细胞的命运,”细胞,卷126,不。4、645 - 647年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. j . h . Jordahl l . Villa-Diaz p h . Krebsbach和j·Lahann,“人类干细胞微环境工程,”目前干细胞的报道,2卷,第84 - 73页,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
33. r . Rakian t . j ., s m . Johnson et al .,“原生细胞外基质间充质干细胞保存”具备干细胞和分化潜在血清培养条件下,“干细胞研究与治疗》第六卷,235页,2015年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
34. f . Gattazzo a Urciuolo, p . Bonaldo”细胞外基质:干细胞小生境的动态微环境,”Biochimica et Biophysica学报,卷1840,不。8,2506 - 2519年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
35. m .长冈k . Si-Tayeb t Akaike, s . a .邓肯“文化人类多能干细胞的使用完全定义条件重组上皮下层,”BMC发育生物学,10卷,p。2010。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
36. n . t . Kohen l . e .太少,k·e·希利”特征的人工基底膜接口定义人类胚胎干细胞培养期间,“Biointerphases,4卷,不。4、69 - 79年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
37. m·麦肯齐·d·贝茨a . Suh Bui, k l·d·金和h .曹”Hydrogel-based药物水溶性差的药物传递系统。”分子,20卷,不。11日,第20408 - 20397页,2015年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
38. y y, b . Wang赵et al .,“胶原蛋白支架微环境调节细胞谱系分化的骨髓细胞的承诺到监管树突细胞,”科学报告第42049条,卷。7日,2017年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
39. 大川,m . Caiazzo y . a . Ranga a . Piersigilli y Tabata,和m . p . Lutolf”定义的三维微环境刺激诱导多能性,”自然材料,15卷,不。3、344 - 352年,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
40. 原位n Brandenberg和m . p . Lutolf”模式的3 d cell-laden水凝胶、微流体网络”先进材料,28卷,不。34岁,7450 - 7456年,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
41. y y Lipsitz:大肠Timmins, p . w . Zandstra“细胞疗法的制造质量设计”自然生物技术,34卷,不。4、393 - 400年,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
42. b·范德Sanden m . Dhobb f·伯杰和d . Wion”优化干细胞的文化。”细胞生物化学杂志》上,卷111,不。4、801 - 807年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
43. b s -马龙,刘贤公园,k . g . Chen r·s·汉密尔顿,r·d·麦凯,“人类胚胎干细胞对xeno-free文化”,国际生物化学与细胞生物学杂志》上,38卷,不。7,1063 - 1075年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
44. 答:施耐德,d . Spitkovsky p·里斯et al .,“好的锅,坏的收成!——新技术免费从支线细胞,干细胞”《公共科学图书馆•综合》,3卷,不。11篇文章e3788 2008。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
45. t·哈m .球,c . Bardouille et al .,“好的细胞培养实践。备选方案良好的细胞培养实践工作组报告1”替代实验动物,30卷,第414 - 407页,2002年。视图:谷歌学术搜索
46. f·Ng,鲍彻,s . Koh et al .,“PDGF TGF-β,FGF信号是重要的分化和生长的间充质干细胞(msc):转录分析可以识别标记和信号通路中重要的msc分化成脂肪形成的,chondrogenic,成骨的血统,”血,卷112,不。2、295 - 307年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
47. c·兰格f . Cakiroglu a . n .这位h . Cappallo-Obermann j . Dierlamm和a·r·詹德“加速和安全扩张的人类间充质基质细胞无血清培养系统在动物移植和再生医学”细胞生理学杂志,卷213,不。1,18-26,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
48. p . Goichberg r . Kannappan m . Cimini et al .,“与年龄有关的缺陷EphA2信号削弱人类心脏祖细胞的迁移,”循环,卷128,不。20日,第2223 - 2211页,2013年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
49. m . Csete氧气在干细胞的培养,“纽约科学院上卷,1049年,页1 - 8,2005。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
50. d . Wion t . Christen e·l·巴比尔,阿宝和j·a·科尔斯。₂在干细胞的文化。”细胞干细胞,5卷,不。3、242 - 243年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
51. j·a·w·m·米勒,王”生物反应器开发干细胞扩张和控制的区别,”当前化学生物学的观点,11卷,不。4、394 - 398年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
52. Allickson o . Karnieli o . m . Friedner j·g . et al .,“共识介绍血清替代品和血清媒体的细胞疗法,”Cytotherapy,19卷,不。2、155 - 169年,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
53. j . van der Valk d Brunner k·迪斯美特et al .,“优化化学定义细胞培养media-replacing胎牛血清在哺乳动物体外方法,”毒理学体外,24卷,第1063 - 1053页,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
54. 荣格,a . Sen, l·罗森博格和l . a . Behie”标识的增长和依恋因素人类间充质基质细胞的无血清隔离和扩张,”Cytotherapy》12卷,第657 - 637页,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
55. c . e . Jochems j·b·范德Valk f·r·Stafleu诉鲍曼,“胎牛血清的使用:道德或科学问题吗?”替代实验动物,30卷,第227 - 219页,2002年。视图:谷歌学术搜索
56. g . Gstraunthaler”替代胎牛血清的使用:无血清细胞培养,“ALTEX,20卷,第281 - 275页,2003年。视图:谷歌学术搜索
57. d·a·布林德利n·l·戴维·e·j . Culme-Seymour c·梅森·d·w·史密斯和j·a·罗利”高峰血清:影响血清供应细胞疗法制造业,”再生医学,卷7,7 - 13,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
58. c·l·达·席尔瓦起草指导工业和食品和药物管理局员工医疗设备包含材料来源于动物来源(体外诊断设备除外)、设备、Ed。美国卫生和人类服务部,食品和药物管理局,设备和放射卫生中心传染性海绵状脑病工作组,合规办公室,办公室设备评估,罗克维尔市,医学博士,美国,2014年,https://www.fda.gov/downloads/MedicalDevices/DeviceRegulationandGuidance/GuidanceDocuments/UCM381491.pdf。
59. g . Gstraunthaler t采用,j . van der Valk”请求减少或取代胎牛血清在细胞培养基,”Cytotechnology卷,65年,第793 - 791页,2013年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
60. r . j . van der Valk d·梅勒品牌et al .,“人道的胎牛血清和无血清细胞和组织培养的可能性,”毒理学体外,18卷,不。1、1 - 12,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
61. m . Mendicino a . m .贝利k . Wonnacott r·k·普里和s r·鲍尔”MSC-based临床试验产品描述:FDA的角度来看,“细胞干细胞,14卷,第145 - 141页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
62. ESAC”, ESAC声明FCS的使用和其他动物补充,“2008:https://eurl-ecvam.jrc.ec.europa.eu/about-ecvam/archive-publications/publication/ESAC28_statement_FCS_20080508.pdf。视图:谷歌学术搜索
63. k·古普塔,a . Rispin k . Stitzel s Coecke和j . Harbell“保证质量的体外替代测试方法:问题和答案,“监管毒理学和药理学,43卷,不。3、219 - 224年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
64. e . j . Culme-Seymour n·l·戴维·d·A·布林德利s Edwards-Parton和c·梅森,“十年的细胞疗法的临床试验(2000 - 2010),“再生医学7卷,第462 - 455页,2012年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
65. 荣格,k . m . Panchalingam l·罗森博格和洛杉矶Behie”体外无血清培养系统定义人类间充质干细胞的扩张媒体,”干细胞国际ID 123030条,卷。2012年,21页,2012。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
66. c . Tekkatte g . p . Gunasingh k . m . Cherian和k . Sankaranarayanan领导”“人性化”干细胞培养技术:动物血清争议,”干细胞国际文章ID 504723卷,2011年,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
67. l . g .追逐Lakshmipathy,洛杉矶Solchaga, m . s . Rao和m . c . Vemuri”小说无血清培养基在人类间充质干细胞的扩张,“干细胞研究与治疗,1卷,不。1,p。8日,2010。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
68. n . Fekete m . Gadelorge d·福斯特et al .,“血小板溶解产物从全血液汇集血小板浓缩液和apheresis-derived血小板集中隔离和扩张的人类骨髓间充质基质细胞:生产过程、内容和确定活性成分,”Cytotherapy,14卷,不。5,540 - 554年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
69. n . Fekete m . t . Rojewski r . Lotfi和h . Schrezenmeier”基本组件间充质基质细胞的体外增殖,”组织工程部分C,方法,20卷,不。2、129 - 139年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
70. 诉t·多斯桑托斯a . Mizukami m·d·奥雷利亚纳et al。”描述人力AB血清间充质基质细胞扩张,”输血医学和血疗法,44卷,不。1,乳,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
71. p . Shetty k .启动,诉Tanavde“人类脐带血清可以取代胎牛血清在间充质干细胞的文化,“细胞生物学国际没有,卷。31日。3、293 - 298年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
72. g·l·弗朗西斯”、白蛋白和哺乳动物细胞培养:对生物技术应用,”Cytotechnology,卷62,不。1,硕士论文,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
73. k .马克·m·里g .级别的et al .,“一种新型合成与循环RGD肽聚合物图案anchorage-dependent细胞无血清培养系统支持附件,”Bioconjugate化学,19卷,不。9日,第1766 - 1757页,2008年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
74. e·贾科梅利,m . Bellin l·萨拉et al .,“三维心脏microtissues由心肌细胞和内皮细胞co-differentiated人类多能干细胞”发展,卷144,不。6,1008 - 1017年,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
75. 林y, k . l . Linask b -马龙et al .,“肝素促进心脏的人多能干细胞分化化学定义albumin-free介质,使心肌细胞制造一致,”干细胞转化医学》第六卷,没有。2、527 - 538年,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
76. d·杨,陈,高c . et al .,“化学定义无血清条件从人类胚胎干细胞软骨再生,”生命科学卷。164年,9-14,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
77. 诉Sovkova k . Vocetkova m . Rampichova et al .,“血小板溶解产物作为血清替代皮肤细胞培养仿生PCL纳米纤维,”血小板26卷,1 - 11,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
78. a·c·波拉·t·m·马丁斯a Zonari et al .,“人类脂肪tissue-derived干细胞培养xeno-free文化条件增强细胞原癌基因的表达增加扩散但绕过自发转化,“干细胞研究与治疗》第六卷,76页,2015年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
79. c n c . Lobo Gedye, a . j . Apostoli et al .,“有效的代patient-matched恶性和正常透明细胞肾细胞癌患者原代细胞培养:临床相关研究模型和个性化医疗”BMC癌症,16卷,p。485年,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
80. s . b . Poudel g·巴特s h .怪人et al .,“重组人类igf - 1由转基因植物细胞悬浮培养提高颅顶的缺陷的新骨形成,”生长激素与IGF研究36卷,1 - 10,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
81. a . Fernandes-Platzgummer j·g·卡梅隆,c·l·达·席尔瓦和j·m·卡布拉尔”Clinical-grade制造治疗人类间充质干细胞/基质细胞在microcarrier-based文化系统中,“分子生物学方法卷,1416年,第388 - 375页,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
82. k . Turksen“成人干细胞和心脏再生,”干细胞的评论,9卷,不。5,537 - 540年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
83. g .卡尼亚k . r . Boheler Landmesser,和w·Wojakowski“干细胞心脏衰竭。”干细胞国际文章ID 193918卷,2011年,3页,2011。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
84. a . Atmanli和i . j .域”,重建的心脏在多能干细胞微环境模型人体生理学和疾病,”细胞生物学的趋势,27卷,不。5,352 - 364年,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
85. m·a·Laflamme和c·e·默里“心脏再生,”自然卷,473年,第335 - 326页,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
86. m·a·Laflamme s Zbinden s e·爱泼斯坦和c·e·默里,“细胞治疗心肌缺血和梗死:病理生理机制,“年度回顾的病理,2卷,第339 - 307页,2007年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
87. Povsic和c . m . O ' connor,“细胞治疗心力衰竭:需要新的治疗策略,”心血管治疗的专家审查,8卷,不。8,1107 - 1126年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
88. r·s·惠兰诉Kaplinskiy, r . n . kitsi”细胞死亡在心脏病的发病机理:机制和意义,”年度回顾的生理卷。72年,19-44,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
89. 诉f·塞格尔和r·t·李,“干细胞治疗心脏病,”自然,卷451,不。7181年,第942 - 937页,2008年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
90. r . Sanz-Ruiz e·古铁雷斯伊班人a . v . Arranz m·桑托斯·e·费尔南德斯·l·费尔南德斯和f . Fernandez-Aviles”使用成人干细胞临床试验阶段》,“干细胞国际文章ID 579142卷,2010年,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
91. a·贝法尔山田,r . Crespo-Diaz et al .,“引导cardiopoiesis增强治疗造福人类骨髓间充质干细胞在慢性心肌梗死”美国心脏病学会杂志》上卷,56号9日,第734 - 721页,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
92. A . k . Patel公元Celiz, d . Rajamohan et al .,”一个定义合成基质人类干细胞衍生的血清培养心肌细胞与改进功能成熟度确认使用组合材料芯片,”生物材料卷,61年,第265 - 257页,2015年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
93. d·f·托奇亚纳”(盯住水凝胶):基于聚乙二醇的合成密封剂:潜在的用于心脏手术,”心脏外科杂志》,18卷,不。6,504 - 506年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
94. i m . El-Sherbiny和m·h·雅库巴“水凝胶为组织工程支架:进展和挑战,”国际心脏病学科学和实践,卷2013,不。3、316 - 342年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
95. 哈桑,a·哈达·m·a·伊斯兰et al .,“可注射水凝胶在心肌梗死后的心脏组织修复,”先进的科学(Weinheim),卷2,不。11日,1500122条,2015年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
96. k·m·布劳顿和m·a·苏斯曼”对人类心肌再生——修改进化生物学和操纵,”循环杂志,卷81,不。2、142 - 148年,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

版权

版权©2017西尔瓦娜Bardelli和马可Moccetti。这是一个开放的分布式下文章知识共享归属许可,它允许无限制的使用、分配和复制在任何媒介,提供最初的工作是正确引用。