骨代谢标志物的变化与再生治疗长骨骨折不愈合的方法

文摘

在本临床试验中,我们调查了如果骨代谢生化生化标记(BTM)改变根据自体骨愈合的过程诱导MSC扩大患者结合双相磷酸钙长骨骨折延迟愈合或不愈合。骨形成标志物、骨吸收标记和破骨细胞调控蛋白测定的酶免疫测定手术前6之后,12和24周。得到一个满意的骨愈合在23个24例。九个学科已经达到一个好的整合在12周,他们认为是“早期整合”组。我们发现骨特异性碱性磷酸酶(BAP)、I型胶原(PICP), c端前肽的胶原蛋白和βcrosslaps (CTX)改变后的再生治疗,BAP和CTX相关成像结果收集在12和24周,和软面包卷变化治疗课程不同的患者有早期的整合。“显著降低BAP和观察PICP时间点在一个病人经历了治疗失败,但BTM变化不能确定的预测价值。我们的研究表明,BTM承诺工具监测细胞疗法疗效骨不愈合,但研究更大的病人数量需要确认这些初步结果。

1。介绍

成人正常骨折愈合发生通过膜内的或软骨内骨形成,根据骨折部位的主要稳定:如果保持稳定是通过严格的固定和一个完美的减少,治疗可以通过膜内的机制进行有限的软骨骨痂形成(1]。骨折后骨愈合是一个复杂的过程精细,几种类型的细胞因子,分子配合局部恢复组织的连续性和函数。骨修复的“生物学”,也就是说,生化和分子信号的进展在骨愈合,描述了几位作者2,3]。能力评估细胞和分子参与了骨折愈合过程中骨代谢会帮助修复过程监控和预测治疗的结果。尽管骨为自愈的能力,相当高发病率的延迟和长骨骨折不愈合是记录,也由于伴随的因素,如糖尿病、骨质疏松症、代谢疾病,感染,和吸烟4]。实际上,愈合过程是随着年龄的增长减缓,可能由于较低的间充质干细胞的数量,减少他们的促有丝分裂的潜力或不良反应的治疗干预措施(5]。

传统治疗骨折不愈合的治疗方法包括自体骨移植,与内部/外部固定相结合,合成骨替代品,包括resorbable钙磷酸盐,和牵引。佐剂对这些治疗方法,如骨形成蛋白,富含血小板血浆,和低强度脉冲超声波,用来促进当地生物(6,7]。

细胞——和/或增长的因素策略在骨组织工程和再生医学越来越应用替代标准手术,病人常常实质利益(8,9]。MSC提高局部治疗的疗效在不同临床证明,和积极的结果已报告使用集中骨髓(BM)吸入10,11],即使更多的好处可能从扩大获得间质细胞(12]。这两种策略旨在增强积极的间充质细胞的比例,因为众所周知,大英博物馆的骨祖细胞送气音很少(1在10⁸细胞),随着年龄增长,其数量和质量稳步下降(13),而他们的数量在骨缺损的愈合过程14]。

MSC的旁分泌活动,释放细胞因子,趋化因子,和其他活跃分子,已经被认为是一个效应最近20年以来的组织修复和描述为骨再生的主要机制(15,16]。然而,分子和因素的复杂网络的行为治疗部位避免容易识别,而且,更重要的是,这些测量是侵入性的,不能用于人类17]。

事实上,再生疗法的疗效,也就是说,骨形成,目前正在评估主要由x射线和microcomputed断层扫描成像,以及临床检查,而其他指标,定量测量,可能是必需的。生物标记的识别帮助监测治疗效果可能促进病人的管理。通过血清学,治疗部位产生的分子水平,进入循环之后,可能测量并希望提供一个生物监测骨折合并。然而,到目前为止没有在这个问题上的研究。

MSC再生搜索“信号”的能力,我们前瞻性的评估病人受到长期影响骨延迟愈合或不愈合参加“第七框架计划”(FP7)之下欧洲项目和处理再生疗法扩大自体MSC +合成骨替代品。我们分析了一组血清骨代谢标志物的变化(BTM),通常用于监控改造过程(18- - - - - -20.),以固定的时间点根据时间表的临床协议。我们旨在寻找关系(如果有的话)的治疗效果,也就是说,通过临床和放射学评估骨折合并到一年。

2。患者和方法

2.1。研究参与者和治疗

在这项研究中,患者受到延迟愈合或不愈合的长骨头,18 - 65岁,在未来的招募,控制,多中心,第一阶段/活动花絮,介入临床试验资格”的疗效和安全性评价自体msc结合生物材料来增强骨愈合(OrthoCT1)”(ClinicalTrials.gov标识符:NCT01842477)。

18岁入选标准是:到65年,两性;延迟愈合或不愈合创伤至少3个月,孤立、封闭或开放,生长板或metaphysodiaphyseal长骨骨折。排除标准:怀孕或哺乳妇女,育龄女性,而不是练习足够的避孕,参与另一个治疗试验在前3个月;延迟愈合或不愈合与医源性原因;节段性骨丢失需要特定的疗法(骨运输、大型结构性同种异体移植物,megaprosthesis,等等);血管或神经损伤;其他与负重骨折造成干扰;感染的皮肤、软组织、骨骼或任何远程感染,也就是说,牙科,肺,和妇科;内脏损伤的疾病干扰愈伤组织形成(cranio-encephalic创伤等);历史在髂嵴骨收获禁忌骨髓愿望; corticoid or immunosuppressive therapy more than one week in three months prior to study inclusion; history of prior or concurrent diagnosis of HIV, hepatitis B, or hepatitis C infection; history of neoplasia or current neoplasia in any organ; insulin-dependent diabetes; obesity (BMI > 30); autoimmune inflammatory disease; and current treatment by bisphosphonate or stopped in the three months prior to inclusion.

再生的方法包括在一个微创的自体骨髓细胞扩大政府良好生产规范(GMP)设施(Fondazione IRCCS Ca '奶奶Ospedale马焦雷亲自,米兰,意大利;杜Etablissement法语唱(EFS),图卢兹,法国;EFS、完成、法国;输血医学研究所的乌尔姆,德国;和细胞生产单位医院Hierro-Majadahonda门”,马德里,西班牙)和外科手术植入合成双相磷酸钙,也就是说,20%的羟基磷灰石(HA)和80%的β磷酸三钙(βtcp), 1 - 2毫米的颗粒(MBCP +, Biomatlante SA Vigneux-de-Bretagne,法国)(数据1(一)和1(b))。

骨髓收获了在手术室麻醉,从后髂嵴,通过皮肤穿刺套管针。骨髓是吸气的分数2 - 4毫升heparin-prefilled 20毫升注射器,然后转移到GMP设备,按照标准程序为运输和细胞扩张之前确定(21,22)(图1(c))。

一个标准的应用程序在移植手术。在手术室里,200×10⁶扩大MSC混合10毫升的MBCP +颗粒为60分钟,然后植入骨头缺陷通过使用两个5毫升注射器(图1(d))。临床前研究表明,少于5% BM-MSC仍在60分钟后上层清液或连接到容器和磷酸钙颗粒细胞能够形成骨(23]。

骨愈合的过程是评估在6、12、24周后植入(图2),通过临床和放射学评估,包括视觉评估分数(血管)疼痛,数字x光(XR)和螺旋状的计算机断层扫描(CT)成像,功能恢复(完全负重步态),当地及相关并发症。主要结果测量是整合的时间,也就是说,3 4或2 3在外侧皮质和额叶的观点,与成像证实骨桥接(24]。

2.2。血液样本收集和存储

每个中心参与临床试验按计划收集血液样本,也就是说,在从髂骨骨髓收获(参观1),术后,6(访问4),12(访问5),24周(访问6)手术后的自体MSC / MBCP +插入骨折(图2)。早上空腹采血进行,只要有可能。血液样本离心收集,2小时内1000 g在室温下15分钟。血清转移到12 cryotubes(0.5毫升每cryotube血清)贴上小标签显示项目名称,缩写临床中心的访问数量、日期,和病人的包含数字。cryotubes被冻结在20或80−−摄氏度4小时内离心。后,6个冻cryotubes被送往骨科病理生理学和再生医学单位一副骨科研究所所有immunoenzymatic化验进行。

2.3。Immunoenzymatic化验的BTM

执行immunoenzymatic试验的实验室人员不知道样品的来源,都标有数字代码。BTM循环使用商用水平测定试剂基于夹心酶免疫测定技术,制造商的协议后,每个样本重复测试。表1显示的列表BTM选择与试剂的来源的简要描述和技术笔记。

2.4。计算和统计分析

使用StatView 5.0.1执行统计分析软件SAS研究所Inc .卡里,NC)。数据被表示为平均值±标准平均误差的分析物浓度在不同的时间点和变化的基线值以骨髓收成。随时间的变化,计算如下:

在访问1 (BM收获):1−(BTM访问1 / BTM访问1)= 0(基线)。在访问4:1−1][BTM访问4 / BTM访问。在访问5:1−1][BTM访问5 / BTM访问。在访问6:1−1][BTM访问6 / BTM访问。

的非参数配对分析数据(Wilcoxon符号秩测试)的患者应用检测BTM的变化随着时间的推移,从访问1到6。的Mann-WhitneyU测试是用来强调两个独立变量之间的显著差异。值< 0.05被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。临床结果

收集血液样本从26个临床试验受试者承认,其人口和临床特点如表所示2。两个病人退出后访问1和访问5。

得到一个满意的骨愈合在23个24例,当一个病人没有一个完整的治疗被列为“失败”在访问6。九个学科达到良好的整合已经在访问5,他们认为是“早期整合”组。

代表放射观点给出图3。

3.2。BTM水平显著变化后观察再生治疗

BTM一直以患者的循环水平访问1,但突出的变化随着时间的推移,我们认为只有24名患者的前瞻性评估。在每个时间点,BTM值不是正态分布,所有标记的观察和高可变性。除了PICP OC,完整的或裂解,访问1,BTM水平往往高于健康人的引用值(表1)。验证如果植入引起的重大变化的BTM扩大MSC / MBCP +,操作比较(表3)。从手术6和12周后,观察BAP浓度显著增加,而CTX, int-OC降低。还N-mid OC和PICP下降6周后,在一个重大改变的时刻RANKL 12周后检测。在24周,集中所有BTM之前所观察到的类似待遇。

3.3。一些BTM与放射性的发现在同一时间点

BTM变化计算了每个病人,并表示如前所述,也就是说,作为一个比率血清浓度测量在每个时间点和基线(参观1)。

BTM变化之间的关系在12和24周和治疗状态同时成像点搜索。CTX变异患者表现出超过基线水平(图12周骨桥接4(一)),而减少在学科不完整的整合。在24周,BAP增加发现的大部分患者不太明显的情况下一个完整的治疗(图4 (b))。

3.4。BTM患者“早期整合”变化和不同的时间

BTM变化和主要结果之间的关系,也就是说,通过临床和放射学评估骨折合并到一年,如图5。在这最后的时间点,23日的24例显示出积极的结果,与8患者得分为“早期整合”患者和15在一年内积极的结果。

早期患者的“整合”,BAP水平已经显著增加了6周,在12周的进一步增加,在患者合并在一年内,增加显著BAP观察之后,也就是说,在12和24周。

PICP、int-OC N-mid OC显著减少在24周后6周的病人痊愈,增加之后,变化不显著不同基线值。功能是随着时间的增加,但未发现显著变化,而RANKL在12周减少患者合并在一年内在24周“早期患者合并。“然而,之间没有显著差异被发现的8个病人在12周内愈合(早期合并)和15个受试者愈合。图5也显示了差异与基线观察单一经历了一个治疗失败的病人。这个病人有显著减少软面包卷和PICP时间点,而功能下降后6周和RANKL急剧增加到12周。

4所示。讨论

最近报道,5 - 15%的受损的骨愈合,骨折端额外手术需求,即使不愈合发生率显著变化根据解剖位置和用于定义骨折不愈合的临床标准。高能创伤、骨折固定不当、大型骨质流失,低血液供应,骨折不愈合和感染被报道为主要原因(25,26]。fracture-delayed工会的发病率相当高或不愈合了的“orthobiologics”,包括间充质基质细胞,以及生长因子或合成药物加速整合和预防或治疗延迟愈合或不愈合27,28]。

任何MSC-based治疗干预骨后,组织的再生量不能可靠地预测。吉尼说的et al .,放射图像可能高估的程度在再生骨形成,但“true”的识别网站的新骨再生,通过组织学和histomorphometry“体内”模型,是人类不可行的29日]。生物标志物的骨重建的活动可能提供额外的信息除了影像学评估,但到目前为止,生物因素对骨愈合的临床监测有用尚未确定(30.]。骨代谢标志物通常用于诊断或治疗监测几个骨骼疾病,骨质疏松症或佩吉特氏病等,显示出与临床结果和骨骼成像(31日]。此外,他们还研究了监测骨折的愈合过程和骨折愈合障碍的早期检测32- - - - - -34]。

在这项研究中,我们假设循环BTM能反映愈合过程诱导的再生促进扩大MSC结合磷酸钙,BTM随时间的变化可以预测治疗的结果,也就是说,骨骼病变的整合。

为了完成我们的目标,一组7个标记属于BTM的三个主要类别,即骨形成的标志(软面包卷,PICP、intact-OC N-mid OC),骨吸收标记(CTX、intact-OC N-mid OC),和破骨细胞调控蛋白(功能和RANKL),被选中(18- - - - - -20.,32- - - - - -35]。

软面包卷在早期表达间充质祖细胞向成骨细胞的分化,似乎和它的循环水平直接关系到成骨细胞的数量和分化状态(32]。PICP直接反映了I型胶原蛋白的形成率,通常,在最初PICP水平,减少骨折患者的I型胶原蛋白的营业额显示随着时间的推移逐渐上升(36]。完成矩阵的图像合成、OC, noncollagenous蛋白释放的分化成骨细胞,测定。OC纳入有机骨基质,只有一小部分是循环的。即使它被广泛接受为标志的成骨细胞的活动(37),骨吸收过程中,OC滞留在矿化矩阵被释放,这样的血清浓度也反映了溶骨的过程;因此,OC被认为是骨代谢的一个标志,而不是一个特定的骨形成的标志。完整的OC(氨基酸1-49)不稳定是由于蛋白酶促进氨基酸之间的乳沟43和44岁而N-mid片段(氨基酸1)更加稳定38]。

功能和RANKL被视为破骨细胞分化和功能的主要监管机构。公布的RANKL pro-osteoclastogenic因素是成熟的成骨细胞,以激活吸收和启动改造周期基本多细胞单位。成骨细胞产生功能,充当诱饵受体和调节RANKL活动,为了保持平衡骨形成和骨吸收39]。

在愈伤组织改造,预计增加骨吸收的标志(33]。作为一个标记,我们选择CTX来源于消化1型胶原蛋白介导的组织蛋白酶K由破骨细胞(32,40]。

所有的标记,但CTX,都直接或间接与成骨细胞分化有关,因此,他们可能有助于体内骨再生推行基于间充质基质细胞的细胞疗法。

根据临床试验的最终结果,只有一个招募的病人没有达到一个稳定的整合在一年内的再生治疗。因此,没有机会计算BTM的预测价值。然而,我们的数据允许验证如果BTM水平(i)改变后再生疗法基于体外扩大MSC, (ii)相关的成像结果访问5和访问6,和(3)不同的患者有一个“早期整合。”

实际上,BTM改变随着时间的推移,所有变化,但功能,在一个或多个时间点,统计上显著的高峰在6周时从手术5 7标记显示显著变化。观察BAP浓度的增加,虽然PICP, CTX, OC倾向于减少。这张照片是在中点(12周)维持的RANKL水平明显降低,但在24周,所有BTM返回值观察到基线。

我们预计我们的结果能反映动力学BTM骨折愈合期间,即使文献数据在这个很有争议的话题。4周的BAP增加,断裂了一年之后,许多研究也证实了(33,41- - - - - -44]。等BTM CTX, PICP, OC,已被证明增加骨折后初步下跌后(32,33),但是我们没有发现这个结果在我们的案例中。很少有研究分析了血清水平的RANKL和功能在骨折愈合过程中,和高可变性的结果被发现(45- - - - - -47]。因此,我们的研究结果表明,骨修复步骤后生理骨折愈合或再生治疗在一定程度上有所不同。

然后,它验证了BTM之间是否存在关系的变化在12和24周和治疗状况评估XR或CT在同一时间点,我们发现CTX和软面包卷与成像结果。CTX变化超过基线值在12周的病人已经痊愈,而负的值被记录在一个不完整的患者合并。在24周,增加软面包卷中发现大部分的病人,但整合时达到上升不明显。这些结果反映预计在年底骨愈合过程,当成骨的阶段逐步沉默和重构阶段盛行34,48]。

最后,我们试图理解如果整个BTM变异患者的治疗过程是不同早期整合。类似的整体BTM趋势是由患者在12周愈合,共享与后来合并,但重大的改变显示已经在6周的“早期”。基于这些发现,我们可以表明BTM动力学影响愈合速度,但不幸的是,我们的假设是不支持的其他研究处理BTM水平和愈合的时间之间的关系。但不能排除,愈伤组织形成率和愈合的可能的原因之一的高个人可变性的BTM观察到骨折,说在的论文数量(25,32,49]。

在单个病人没有达到终点的整合,BAP和PICP的变化,也就是说,骨形成标志物,不同一直从其他学科。类似的图片所描述的作者回顾了血清生化标记的作用和潜在的骨折愈合障碍的指标(33,34,36,50,51]。理论上,上面的分子可以反映一个贫穷的反应再生治疗,但这不能确定在我们的研究由于缺乏失败的情况下。

总结再生治疗的可行性和有效性,使用大量的扩展MSC与综合分析材料的主要目标这一阶段I /花絮”临床试验,但关注的角色时,也出现了一些限制BTM变化的“信号”MSC再生能力。综上所述,我们的研究结果证明BTM监测是可行的,并建议一个可能与临床结果相关,但是真正的贡献的移植MSC / MBCP +观察BTM变化只能猜测。事实上,BTM可以改变也没有MSC移植,但不幸的是,对照组接受标准治疗没有生物补充是不包括在临床协议。

此外,虽然所有病人再生的治疗方法是均匀的,也就是说,MSC剂量相同,生物材料体积,和MSC /生物材料比,临床异质性,也就是说,骨折的类型,流动性,和固定设备,可能会影响BTM水平。无论如何,在考虑所有变量时,病人招募的数量在我们的试点研究并不足以获得统计证据。

5。结论

骨折不愈合等细胞疗法的主要适应症骨修复在日常实践(30.]。nonsubjective评估骨愈合,可能在早期阶段,由临床医生热切期待预测治疗效果,但是目前没有可靠的方法来预测哪些患者将受益于再生方法。我们评估小组的BTM反映愈合率,用作补充监视或预测整合的标志。我们的数据表明,BTM (i)改变MSC / MBCP +再生疗法后,(ii)关联成像结果在某些随访时间点,和(3)不同的患者有一个“早期整合。“然而,尽管在骨形成标志物显著差异,BTM变化的预测价值不能确定,因为一个失败观察,也就是说,大约5%的治疗情况。最近批准试验一系列大的情况下,控制人口接受标准技术可以克服的局限性研究和评估如果BTM用于监测细胞治疗骨不愈合的疗效。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

这项工作是由欧盟第七框架计划(FP7)之下,通过REBORNE项目,没有授予协议。意大利卫生部241879年和部分,Ricerca Corrente,项目”策略di rigenerazione ossea:达尔'interazione炉/小房戴尔riparativi 'osso人工智能标记”(2013 - 2016)。

引用

1. p .兆”的分类没有工会,“受伤卷,36 S30-S37, 2005页。视图:谷歌学术搜索
2. r . Marsell和t·a·艾因霍恩骨折愈合的生物。”受伤,42卷,第555 - 551页,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. f .法则中,l·a·科尔多瓦j . Pajarinen t·h·林z姚明,和美国b·古德曼”炎症、骨折和骨修复”,骨卷,86年,第130 - 119页,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. c . Copuroglu通用Calori, p . v . Giannoudis“骨折无工会:风险是谁?”受伤,44卷,第1382 - 1379页,2014年。视图:谷歌学术搜索
5. r·格鲁伯·h·科赫,b . a .娃娃,f . Tegtmeier t·a·艾因霍恩和j . o .霍林格”审查。在老年患者骨折愈合实验老年学41卷,第1093 - 1080页,2006年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. p . Kostenuik和f . m .殿下,”骨折愈合生理和寻求治疗延迟愈合和不愈合,”骨科研究期刊》的研究,35卷,第223 - 213页,2017年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. r . Nandra l·格罗弗·k·波特,“流行病学和治疗,骨折无工会”创伤卷。18日,3-11,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. e . Gomez-Barrena p .安全,d . Lozano j . Stanovici c . Ermthaller和f . Gerbhard”骨折愈合:延迟愈合和不愈合的细胞疗法,”骨卷,70年,第101 - 93页,2015年。视图:谷歌学术搜索
9. j .妈,s . k .两个f·杨et al .,“简洁的评论:细胞策略在骨组织工程和再生医学,”干细胞转化医学,3卷,第107 - 98页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. l·伽罗瓦,d . Bensoussan j .勤奋et al .,“自体骨髓移植长骨头的延迟和不愈合的情况要和治疗:技术方面,“生物医学材料工程,19卷,第281 - 277页,2009年。视图:谷歌学术搜索
11. j·b·格罗斯,j .勤奋,d . Bensoussan l .伽罗瓦j . f . Stoltz和d . Mainard“经皮自体骨髓注射治疗长骨的延迟和无工会:45例回顾性研究,“生物医学材料工程,25卷,不。1增刊,187 - 197年,2015页。视图:谷歌学术搜索
12. h·d·伊斯梅尔·Phedy大肠Kholinne et al .,“间充质干细胞移植的萎缩性骨不长骨头:平移的一项研究中,“骨头和联合研究5卷,第293 - 287页,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. ai Caplan,“为什么msc治疗?新的数据:新的洞察力,”病理学杂志卷,217年,第324 - 318页,2009年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. f p . Hernigou a . Poignard Beaujean h . Rouard骨折不愈合的“经皮自体骨髓移植。祖细胞的数量和浓度的影响,“《骨与关节外科(美国)卷,87年,第1437 - 1430页,2005年。视图:谷歌学术搜索
15. 人工智能卡普兰和j·e·丹尼斯,“间充质干细胞作为营养介质,”细胞生物化学杂志》上卷,98年,第1084 - 1076页,2006年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. w·l·格雷森b·a·邦内尔·e·马丁,t·弗雷泽b . p .挂和j·m·平衡台“基质细胞和干细胞在临床骨再生,”自然评论内分泌学11卷,第150 - 140页,2015年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. k·d·Hankenson g·齐默尔曼,r . Marcucio“延迟骨折愈合的生物的观点,”受伤卷,45 S8-S15, 2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. r . Eastell p . Garnero c Audebert, d . l . Cahall”参考区间健康绝经前女性:骨代谢标志物的结果从一个横断面研究欧洲,”骨,50卷,第1147 - 1141页,2012年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. d . j . Leeming p . Alexandersen m . a . Karsdal p . Qvist夏勒,和l . b . Tanko”更新对骨代谢的生物标志物及其效用在生物医学研究和临床实践中,“欧洲临床药理学杂志》上卷,62年,第792 - 781页,2006年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. m . j . Seibel“骨代谢生化标记物的临床应用”,Arquivos巴甲de Endocrinologia & Metabologia,50卷,第620 - 603页,2006年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. e·韦罗内西a . Murgia a Caselli et al .,“交通条件提示使用体外扩大和新收获clinical-grade骨髓间充质基质/干细胞骨再生,”组织工程。C部分,方法,20卷,第251 - 239页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. n . Fekete m . Gadelorge d·福斯特et al .,“血小板溶解产物从全血液汇集血小板浓缩液和apheresis-derived血小板集中隔离和扩张的人类骨髓间充质基质细胞:生产过程、内容和确定活性成分,”Cytotherapy,14卷,第554 - 540页,2012年。视图:谷歌学术搜索
23. m·A。布伦南,a . Renaud j . Amiaud et al .,“骨再生的临床前研究与人类的骨髓基质细胞和两相的磷酸钙,”干细胞研究与治疗,5卷,p。114年,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
24. d . j . (s . s . Lee和j·a。古利特,“成功交换铰髓内钉治疗股骨骨折不愈合或延迟愈合,”《骨科创伤,14卷,第182 - 178页,2000年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. d . j . (d•菲茨帕特里克j . a .主教et al .,“延迟愈合和不愈合:流行病学、临床问题,和金融方面,“受伤卷,45 S3-S7, 2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. m . Ollivier a . m .同性恋,a . Cerlier a . Lunebourg j . n . Argenson和s Parratte”才能实现使用钻石概念没有骨移植骨愈合顽固的胫骨骨折不愈合吗?”受伤,46卷,第1388 - 1383页,2015年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. m . s . Virk和j·r·利伯曼,”生物佐剂对骨折愈合。审查,”关节炎研究和治疗,14卷,不。6,225年,页2012。视图:谷歌学术搜索
28. k . m . Emara r·a·迪亚布和a . k . Emara”最近的生物骨折无工会管理的趋势,“世界整形外科杂志》第六卷,没有。8,623 - 628年,2015页。视图:谷歌学术搜索
29. 吉尼,m .发现:阿布拉莫夫et al .,“骨祖细胞由骨髓未加工证明的直接成骨分化成骨的潜力在体外和体内,”生物学研究开放获取,1卷,不。2、69 - 78年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
30. p .安全、f . Deschaseaux和p . Layrolle“细胞治疗骨修复,”骨科创伤学:手术和研究卷。100年,S107-S112, 2014页。视图:谷歌学术搜索
31. m·b·格林布拉特j . n .蔡,m . n .葡萄酒“骨代谢标志物在代谢性骨病的诊断和监测,“临床化学卷,63年,第474 - 464页,2017年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. g·考克斯·t·a·艾因霍恩c . Tzioupis p v Giannoudis,“在骨折愈合,骨代谢标记”《骨与关节外科(英国),卷92,不。3、329 - 334年,2010页。视图:谷歌学术搜索
33. m . o . Coulibaly d l . Sietsema t . a .汉堡,j·梅森,b·o·威廉姆斯和c·b·琼斯”最新进展的使用血清学骨形成标志物监测愈伤组织发展和骨折愈合,”真核基因表达的关键评论,20卷,不。2、105 - 127年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
34. c·p·苏萨i r·迪亚斯·m·lopez pena et al .,“骨代谢标志物骨折愈合早期检测的干扰:科学文献的回顾,“巴西科学院上卷,87年,第1061 - 1049页,2015年。视图:谷歌学术搜索
35. r·d·Chapurlat和c . b . Confavreux”小说骨的生物标记:从骨新陈代谢骨生理学、”风湿病学(牛津),55卷,不。10日,1714 - 1725年,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
36. p . Klein h . j .保释h . Schell et al .,“骨代谢标记有能力预测骨愈合过程中愈伤组织整合?”钙化组织国际卷。75年,40至49,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
37. p·d·德尔b . Demiaux l . Malaval m . c . Chapuy c·爱德华、莫尼耶p . j .,“血清骨伽马carboxyglutamic acid-containing蛋白在原发性甲状旁腺功能亢进和恶性高钙血症。与骨histomorphometry。”临床研究杂志卷,77年,第991 - 985页,1986年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
38. k·荣格和m . Lein“骨代谢标志物血清和尿液的诊断,预后和监测生物标志物的骨转移,”Biochimica et Biophysica学报卷,1846年,第438 - 425页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
39. j . Kular j . Tickner s·m·詹和j .徐”的概述骨重建在细胞层次的规定,“临床生物化学,45卷,第873 - 863页,2012年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
40. p . Garnero m·费雷拉·m·a·Karsdal et al .,”I型胶原蛋白片段ICTP和CTX揭示不同的骨骼胶原降解酶途径,”骨和矿物质研究杂志》上18卷,第867 - 859页,2003年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
41. s . a . Bowles n . Kurdy a . m .戴维斯和m . w .法国,“改变血清骨特异性碱性磷酸酶胫骨骨折后,“《临床生物化学34卷,第691 - 690页,1997年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
42. a . Emami a·拉尔森m . Petren-Mallmin和s·拉尔森,“血清髓内固定胫骨骨折后骨标记,”临床骨科卷,368年,第229 - 220页,1999年。视图:谷歌学术搜索
43. s . w . Veitch s c·a·j·哈默尔芬德雷a . Blumsohn r . Eastell和b . m .炉火,“骨量和骨代谢的变化后胫骨轴断裂,“国际骨质疏松症,17卷,第372 - 364页,2006年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
44. k Stoffel, h断、m .工业和w·Riesen“下肢骨折后生化标记物的改变。”临床化学53卷,第134 - 131页,2007年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
45. d . Marchelli l . p . Piodi c . Corradini l . Parravicini c . Verdoia和f . m . Ulivieri“萎缩性骨折不愈合轴功能增加血清。”骨科及创伤学杂志》上,10卷,不。2,55-58,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
46. y . k . x f . Wang, z s . Yu和j·l·周”的角色血清RANKL /功能比在老年患者股骨粗隆间骨折的愈合,”分子医学报告,7卷,不。4、1169 - 1172年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
47. j . Kottstorfer a·托马斯·m·Gregori et al .,”功能和RANKL参与人类骨折愈合吗?”骨科研究期刊》的研究,32卷,不。12日,第1561 - 1557页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
48. t·a·艾因霍恩和l . c . Gerstenfeld骨折愈合:机制和干预,”自然评论风湿病学卷。11日,45 - 2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
49. p .塞贝克,h . j .保释,c .报告》等,“做血清学组织营业额标记代表骨折愈合过程中骨痂形成?”骨,37卷,不。5,669 - 677年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
50. 穆贾达姆,穆勒,h·j·罗斯,a . Wentzensen p . a . Grutzner g·齐默尔曼,“TRACP 5 b和CTX骨骨折延迟愈合的标志、“受伤,42卷,第764 - 758页,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
51. Pountos, t . Georgouli s Pneumaticos, p . v . Giannoudis“骨折无工会:生物标志物可以预测结果吗?”受伤,44卷,第1732 - 1725页,2013年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

版权

版权©2017多娜泰拉·Granchi et al。这是一个开放的分布式下文章知识共享归属许可,它允许无限制的使用、分配和复制在任何媒介,提供最初的工作是正确引用。