文摘

与年龄相关的回归在造血干/祖细胞(HSC /手持电脑)限制的补充血液和免疫系统,因此有助于造血疾病和免疫力下降。在这项研究中,我们使用D-gal-induced衰老小鼠模型,观察当归多糖(ASP)的抗衰老的作用,当归的主要活性成分(中国当归),本来⁺HSC /手持电脑体内。ASP治疗防止HSC /手持电脑衰老与降低血清的年龄水平,减少了SA -β加阳性细胞,促进CFU-Mix形成D-gal管理鼠标。我们进一步发现,涉及多种机制:(1)ASP治疗阻止氧化损伤总抗氧化能力和水平的提高活性氧(ROS), 8-OHdG,和4-HNE下降,(2)ASP的表达减少γ-H2A。X是一个DNA双链断裂(双边带)标记和减少后续的异位表达p16的效应器rb和p19p21衰老途径,(3)ASP抑制Wnt的过度激活/β连环蛋白信号在HSC /手持电脑,岁的表达式β连环蛋白,phospho-GSK-3β,TCF-4下降,cyto-nuclear易位β连环蛋白抑制。此外,与维生素E的积极控制相比,ASP表现出更好的抗衰老的效果,一个较弱的抗氧化能力,暗示小说ASP在造血系统的保护作用。

1。介绍

造血病理生理变化如慢性贫血、降低适应性免疫能力,增加白血病的发病率与年龄密切相关(1]。组织干细胞和祖细胞的分化替换磨损和损坏的细胞维持正常稳态控制,提出,造血系统的失衡伴随老化可能源于减少和/或功能障碍的造血干/祖细胞(HSC /手持电脑)(1,2]。HSC /手持电脑与自我更新和multilineage潜力是所有血液细胞和淋巴细胞的祖先。探索的可能性和潜在机制推迟HSC /手持电脑衰老可能提供有前途的方法来治疗老年性造血疾病,提高生活质量的高级。

当归(橄榄)一昼夜的(当归)是一个著名的中医治疗血液和妇科疾病的世纪。当归多糖(ASP)是一种主要成分在当归与显著的生物活性,如抗氧化、抗肿瘤、抗衰老的,antihepatotoxic、免疫调节、神经保护作用[3]。我们最近的研究表明ASP的一个非凡的抗衰老的作用,保护手持电脑对HSC / X-ray-irradiation-induced衰老通过抑制氧化应激损伤(4),减缓DNA损伤和端粒酶活性(5]。但它仍然需要调查更physiological-like老化模型和分子机制的进一步探索。

细胞衰老,不可逆状态增长逮捕,可以由多个触发机制如氧化应激、端粒缩短,和DNA损伤。D-galactose (D-gal)是一种生理还原糖与氨基酸的自由胺反应生成高级糖化终端产品。过剩D-gal产生氧化应激的产生活性氧(ROS)通过氧化代谢的D-gal以及糖化终端产品。啮齿动物慢性系统性接触D-gal导致加速老化,包括骨髓回归和造血系统(6,7]。因此,它被认为是一个理想的模型来研究肝星状细胞衰老。

在最近的几十年,多个分子和相应的信号通路在干细胞衰老被发现。p16的视网膜母细胞瘤(Rb)通路和p19-Mdm2-p53-p21通路,可以引起DNA损伤反应和调节细胞周期阻滞,是重要途径调节细胞衰老(8]。此外,Wnt /β连环蛋白信号通路还参与调节干细胞衰老。规范化Wnt信号由守恒的蛋白质的庞大网络,广泛影响胚胎发生和产后反应(9]。成人,Wnt信号介导的分化,维护,和众多干细胞增殖类型,包括肝星状细胞,并与多个信号转导网络在干细胞的衰老过程,像TGFβ、刺猬和Notch信号(10- - - - - -13]。

在目前的研究中,我们采用D-gal-induced衰老小鼠模型来进一步探讨ASP的延缓衰老的作用在HSC /手持电脑体内。我们的数据表明,ASP通过减轻氧化应激有重要的抗衰老的影响,防止DNA损伤,抑制过度的与年龄相关的信号通路的激活。一般来说,它增强了ASP的潜力,当归中的主要活性成分,对HSC /手持电脑衰老和血液疾病。

2。材料和方法

2.1。动物治疗和伦理语句

雄性C57BL / 6 j小鼠年龄在6到8周从医学实验动物中心购买了重庆,中国,住在一个房间温度和光控与免费的水和食物。所有的实验都是按照制度和国家指导方针和规定执行,经重庆医科大学动物保健和使用委员会。戊巴比妥钠麻醉下进行手术,所有的努力都是尽量减少痛苦。

40小鼠随机分为4组:D-gal组小鼠与D-gal管理(120毫克/公斤·bw), qd×42皮下注射;D-gal + ASP集团,从8日D-gal注入,老鼠给ASP(200毫克/公斤·bw), qd×35同时腹腔注射;D-gal +轻快地集团(积极的控制),从D-gal注射的第八天,老鼠注射维生素E(100毫克/公斤·bw), qd×35同时腹腔注射;对照组的小鼠皮下注射生理盐水的体积与D-gal 42天腹腔注射生理盐水的体积和ASP 8天的治疗。

2.2。试剂

ASP(纯度≥95%)购买从Ci元生物技术有限公司陕西(西安,中国)和溶解在盐水20毫克/毫升的浓度和消毒通过超滤。IMDM媒体:的边后卫从Gibco购买(美国CA)。的Anti-Sca-1⁺微珠工具包是来自Miltenyi生物技术有限公司(Bergisch格拉德巴赫,德国)。

2.3。的本来就⁺HSC /手持电脑

老鼠被颈椎脱臼处死,收集股骨。骨髓单核细胞(BMNC)从每组中提取,和本来就积极(本来⁺)HSC /手持电脑被磁激活细胞分选分离(mac)技术作为我们先前描述的14]。

2.4。SA -β加细胞化学的染色

的本来就⁺HSC /手持电脑收集处理后,和senescence-associatedβ牛乳糖(SA -β加)染色法是根据制造商的指示(Beyotime生物技术研究所、上海、中国)。简单地说,1×10⁵与PBS纯化细胞被洗两次,与0.5%戊二醛固定在室温下15分钟。然后,细胞被洗和SA - PBS和孵化β加染色溶液为12小时37°C没有有限公司₂和光。约1×10⁴细胞分离每个幻灯片,400细胞被完全分析每组。SA -的百分比β加计算阳性细胞计数蓝色细胞的数量和除以总数量的细胞。

2.5。CFU-Mix的本来就⁺HSC /手持电脑文化

治疗后,本来⁺HSC /手持电脑收集。混合克隆形成单位(CFU-Mix)文化是表现如前所述14]。简单地说,4×10⁵本来就⁺HSC /手持电脑混合甲基纤维素半固体培养基(美国干细胞技术)和培养24-well板块7天的孵化器有限公司为5%₂在37°C。然后,混合殖民地的数量在每组数。

2.6。ROS水平的测量

的本来就⁺HSC /手持电脑收集后治疗和活性氧(ROS)水平分析了活性氧测定工具包(Beyotime生物技术研究所、上海、中国)根据制造商的指示。总之,1×10⁶本来就⁺HSC /每组手持电脑收集,清洗,PBS和荧光探针孵化,2′,7′二氯荧光素二乙酸(DCFH-DA), 20分钟有限公司为5%₂在37°C。然后,细胞被细胞无血清培养基洗。最后,ROS水平被流式细胞仪检测。

2.7。检测T-AOC内容

的本来就⁺HSC /手持电脑收集后治疗。声波降解法和离心后得到的上层清液。BCA可溶性蛋白质浓度测定的过程。总抗氧化能力(T-AOC)的细胞检测到的化学比色分析铁减少等离子体的能力在593 nm使用酶分析工具包(Beyotime生物技术研究所、上海、中国)根据制造商的指示。

2.8。免疫印迹分析

检测β连环蛋白表达,蛋白质在细胞质和细胞核提取,从本来就分别⁺HSC /手持电脑核和胞质蛋白提取工具包(Beyotime生物技术研究所、上海、中国)根据制造商的指示。总蛋白提取检测目标蛋白。BCA可溶性蛋白质浓度测定的过程。

样品含有50毫克蛋白sds - page分离和转移到PVDF膜(美国微孔)。一夜之间,膜被孵化在4°C主要抗体β连环蛋白,GSK-3β,Phospho-GSK-3βTCF-4,γ-H2A。X (all purchased from Cell Signaling Technology, USA, catalog number: 9562, 9832, 9336, 2566, 2577), p16、Rb、p53、p21,β美国从圣诞小腿肌动蛋白(所有购买的产品目录号:sc - 73434, sc - 1538, sc - 99, sc - 397, sc - 130656),和4-HNE(美国Abcam ab46545),分别。HRP-conjugated二级抗体稀释在1:5000年TBST。膜是可视化使用增强化学发光检测系统(皮尔斯,美国)。的水平β肌动蛋白是作为内部控制。相对强度量化使用数量(生物Rad)之一。

2.9。免疫荧光染色

本来就⁺HSC /手持电脑聚集后的治疗和PBS洗两次。细胞悬液的分散到玻片上。免疫荧光分析,细胞被固定为4% PFA 10分钟,洗和TBS 0.3% Triton x - 100紧随其后的是屏蔽10%山羊血清在室温下了40分钟。幻灯片与抗体被孵化β连环蛋白(1:100)(细胞信号技术,美国)一夜之间在4°C。然后,细胞被洗和孵化Cy3-labeled二级抗体(1:500年,Beyotime生物技术研究所、上海、中国)1 h在37°C。π是用于核染色。所有幻灯片都将直接在荧光显微镜下(LSM510;卡尔蔡司,德国耶拿)。

2.10。RNA提取和实时定量rt - pcr

的本来就⁺HSC /手持电脑收集后治疗。总RNA分离使用试剂盒试剂(美国英杰公司)根据制造商的协议。第一链cDNA是由Taqman RT试剂(美国应用生物系统公司)。定量实时PCR进行使用SYBR绿色Supermix (BioRad) iCycler实时检测系统(cfx96 BioRad)。表达水平mRNA的规范化β- - - - - -肌动蛋白比较和分析的周期阈值方法。意味着±SD三个独立的实验测定。PCR引物使用提供的支持文件信息(表S1 S1网上补充材料https://doi.org/10.1155/2017/3508907)。

2.11。通过ELISA测定8-OHdG和年龄表达式

每组治疗后,血清收集,和8-OHdG的水平和年龄都检测到酶联免疫试剂盒(上海原液生物技术,中国上海)后,制造商的指示。浓度测定比较OD值标准曲线。

2.12。统计分析

使用SPSS 19.0统计分析软件SPSS, Inc .,芝加哥,美国)。单因素方差分析被用于比较平均值的团体,是由LSD多重比较检验。被认为是重要的。

3所示。结果

3.1。ASP防止本来就⁺HSC /手持电脑D-Gal-Induced衰老小鼠的衰老

积累先进的糖化终端产品(年龄)血清和组织是一个重要的生物学指标评价身体的老化(15]。治疗后,我们收集小鼠的血清ELISA和年龄检测浓度。D-gal组、内容的年龄明显高于对照组。然而,D-gal + ASP组,年龄明显减毒浓度相比D-gal组(表1)。

SA -β加染色细胞衰老是另一个经典的生物标志物评估(6]。衰老细胞SA -β用蓝色加积极和染色。控制相比,SA -的比率β加积极的本来就⁺HSC /手持电脑D-gal组显著增加(%与%),而在D-gal + ASP集团(比%)相比显著降低D-gal组(图1(一))。

能力形成CFU-Mix可以反映HSC的潜力/手持电脑的自我更新和multipotential分化,它随衰老的手持电脑(HSC /16]。因此,我们也表现CFU-Mix文化和multipotential造血祖殖民地的数量计算。与一致性,CFU-Mix D-gal组比对照组显著降低(与),但ASP恢复CFU-Mix数量D-gal管理老鼠()(图1 (b))。

senescence-associated的所有三个分析测试表明,ASP显著缓解D-gal-induced本来⁺HSC /手持电脑体内衰老。相比D-gal +轻快地组,有趣的是,独特的抗氧化剂维生素E作为一个积极的控制,ASP是等价的抗衰老的效果,甚至会更强,特别是在CFU-Mix形成(与)(图1 (b))。

3.2。ASP在本来就抵抗氧化应激⁺HSC / D-Gal-Induced衰老小鼠的手持电脑

氧化应激的ROS是细胞衰老的主要原因之一。活性氧的积累会导致氧化损伤细胞成分包括蛋白质、脂质、核酸,导致过度生产的硝基酪氨酸,4-hydroxynonenal (4-HNE)和8-hydroxydeoxyguanosine (8-OHdG) [17]。总抗氧化能力(T-AOC)代表身体的酶和非酶的防御系统抗自由基。通过评估ROS水平4-HNE内容,8-OHdG, T-AOC本来⁺HSC /手持电脑我们探讨了ASP的抗衰老的效果是否通过减轻氧化应激介导的。

与对照组相比,细胞T-AOC内容拒绝(表2);同时细胞ROS水平和4-HNE 8-OHdG内容D-gal组显著升高(图2(一个)、表2)。然而,D-gal + ASP组,细胞T-AOC内容显著升高,细胞ROS水平和4-HNE 8-OHdG内容被拒绝与D-gal组相比(图2(一个)、表2)。它演示了ASP的强有力的抗氧化效果。

意外,不像其深刻的抗衰老的效果,ASP对氧化应激的影响比维生素E(图2、表2)。我们推测其他机制参与ASP的antisenescence效果。

3.3。ASP减少本来就DNA损伤⁺HSC / D-Gal-Induced衰老小鼠的手持电脑

与衰老细胞DNA损伤积累,导致衰老。磷酸化H2A。X (γ-H2A.X)被认为是DNA损伤反应的一个敏感指标(DDR) [18]。我们发现γ-H2A。X的表情本来就⁺HSC /手持电脑通过免疫印迹分析调查ASP对DNA损伤的影响。它表明,γ-H2A。X表达增加D-gal组与对照组相比。然而,ASP显著下降γ-H2A。X D-gal + ASP组中表达,暗示ASP减少D-gal-induced本来就DNA损伤⁺HSC /手持电脑(图2 (b))。此外,相比D-gal +轻快地组,这种影响更深远的比维生素E,虽然不显著)。

3.4。ASP对p16的影响^INK4arb和p19^{东盟地区论坛}-Mdm2-p53-p21^{Cip1 / Waf}信号在本来就⁺HSC / D-Gal-Induced衰老小鼠的手持电脑

p16的rb通路和p19-Mdm2-p53-p21途径是必要的方法来调节细胞衰老(8]。我们进一步探讨ASP的antisenescence效果是否也由两个途径。中存在的分析,表明mRNA的表达p16^INK4a和p21^{Cip1 / Waf1}在D-gal组显著增加,比较控制;然而,mRNA表达减少ASP治疗(数字3(一个)和3 (b))。这表明一个ASP和两个信号通路之间的关系。我们通过免疫印迹分析进一步证实了猜测。它表明,蛋白p16的表达p21, Rb,,p53 D-gal组显著高于对照组,而所有在ASP + D-gal组显著下降(数字3 (c)- - - - - -3 (e))。此外,相比D-gal +轻快地组,ASP更深刻的影响。

3.5。的影响在Wnt / ASPβ在本来就连环蛋白信号通路⁺HSC / D-Gal-Induced衰老小鼠的手持电脑

有研究表明,过度激活Wnt /β连环蛋白信号会引起不同程度的干细胞衰老(19,20.]。的影响在Wnt / ASPβ连环蛋白信号在HSC /手持电脑是有趣的。我们评估的关键信号分子的表达Wnt /β连环蛋白通路是否参与ASP的延缓衰老的作用。

作为一个关键信号分子的水平β连环蛋白表达是一种常见的指数检测规范Wnt信号通路的激活21]。除此之外,β连环蛋白本身已被证明有一个角色在HSC /手持电脑维护和自我更新在小鼠模型(12]。在镇压Wnt信号,β连环蛋白在细胞质和核水平低,维护β连环蛋白水平升高在细胞质和积累在核激活下游靶基因表达活跃Wnt信号(10]。所示的存在,mRNA的表达β- - - - - -连环蛋白是调节D-gal组,控制相比,显著减毒的ASP + D-gal组(图4 (c))。此外,我们从本来的细胞质和细胞核提取蛋白质⁺HSC /手持电脑,分别检测到β连环蛋白表达蛋白免疫印迹分析。如图4(一)所示的表达β连环蛋白显著增加细胞质和核提取物D-gal组与对照组相比。然而,在D-gal + ASP集团β连环蛋白表达显著降低与D-gal组相比,特别是在核提取物。我们进一步证实了易位β连环蛋白通过cytoimmunofluorescence一致的结果(图4 (b))。

糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)是一种重要的Wnt /负监管机构β连环蛋白信号通路,参与退化β连环蛋白的规范化途径(10]。GSK-3的失活β通常要求Ser9磷酸化(21]。我们进一步探讨GSK-3β和Ser9-phosphorylated GSK-3β(phospho-GSK-3β)表达在本来就⁺HSC /手持电脑通过免疫印迹分析。它表明,GSK-3β表达下调,phospho-GSK-3β表达调节D-gal组与对照组相比。然而,ASP治疗显著逆转ASP + D-gal集团(数据5(一个)- - - - - -5 (c))。它建议GSK-3β端依赖退化β连环蛋白增强了ASP治疗D-gal-induced本来就变老了⁺HSC /手持电脑。

当Wnt /β连环蛋白信号被激活,β连环蛋白把原子核,它激活目标基因表达与DNA-bound转录因子的相互作用,如T细胞因子/淋巴增强因子(TCF (LEF) [22]。因此,我们进一步发现TCF-4表达蛋白免疫印迹分析。正如所料,TCF-4表达调节D-gal组与对照组相比,虽然其异位表达拒绝D-gal + ASP组(图5 (d))。

总的来说,这些结果表明,过度激活Wnt /β连环蛋白/ TCF-4信号参与本来的D-gal-induced衰老⁺HSC /手持电脑,ASP治疗可以抑制激活抵制干细胞衰老。此外,与D-gal +轻快地集团代表抗氧化剂的化学物质的影响,ASP显示在这一过程中更重要的潜在(图5)。

4所示。讨论

HSC /手持电脑不断补充血液细胞组成,包括免疫系统。数据从小鼠支持HSC下降与年龄相关的函数,表明年长的肝星状细胞是不足以应付生产血液和免疫系统的需求(23,24]。Well-maintenance振兴的干细胞提供了方法来延缓衰老的效果。在这里,D-gal-induced衰老小鼠的体内模型,我们发现,ASP,当归的主要活性成分,对本来就产生深远的延缓衰老的影响⁺HSC /手持电脑。除了强大的抗氧化能力,ASP显著影响多个伴随老化信号,包括Wnt /β连环蛋白/ TCF-4 p16rb, p19-Mdm2-p53-p21,表明这是一种很有前途的分子推迟衰老。

ASP是最初的提取溶剂的当归的根(橄榄)一昼夜的水。这是一个β-d-pyranoid多糖72900 Da的平均分子量。ASP已被证明有有利影响多个疾病模型包括癌症、白血病、贫血、炎症(3,25- - - - - -27]。在这些影响中,ASP的抗氧化能力起着重要的作用。具体来说,ASP保护培养的神经细胞H₂O₂全身的细胞毒性和减少细胞内ROS升高,而且还可以防止体内氧化损伤和改善缺血性脑损伤大鼠28]。它也表明,ASP变弱伴刀豆球蛋白A-induced肝损伤减少ROS和增加抗氧化酶活性(29日]。

衰老是一个多因素的过程。尽管各种各样的假设来解释老化过程,氧化应激/自由基理论一直被视为老化的主要原因在过去几十年的文献。氧化应激理论使活性氧的积累过程,促进细胞衰老的中心(30.]。高活性ROS的自然副产品在线粒体的能源生产。体内抗氧化剂和内源性抗氧化酶退化ROS派生而来。ROS生产和退化之间的不平衡导致氧化应激,导致主要过氧化膜脂肪酸链,修改DNA、蛋白质巯基和羰基化反应,细胞凋亡率(31日,32]。氧化压力最终导致细胞衰老和在脊椎动物生活史密切相关33]。具体地说,据报道,异常增加活性氧可以扰乱HSC静止通过刺激进入细胞周期,包括肝星状细胞的自我更新能力和导致过早的疲劳34- - - - - -36]。我们之前的研究表明,超氧化物损伤积累在肝星状细胞衰老的自然进展(37]。

D-gal管理模型是一种模拟老化模型与自由基和浪费物质代谢的积累。D-Galactose (D-gal)是一种生理营养和还原糖与氨基酸在蛋白质的自由胺反应,形成先进的糖化终端产品通过非酶的糖化。,供应过剩的D-gal可能导致代ROS通过氧化代谢的D-gal以及糖化终端产品(7]。同样,自由基的积累逐步损害肝星状细胞功能在自然衰老,而啮齿动物慢性系统性接触D-gal导致加速老化,包括骨髓造血系统的回归(6,7]。理性是ASP的杰出的抗氧化功能可以增强抵抗力的HSC /手持电脑D-gal-induced老化(图1、表1,图2(一个)、表2)。在这项研究中,我们也使用维生素E,一个共同的外生,diet-derived抗氧化,抗氧化剂积极控制。有趣的是,尽管ASP的抗氧化能力大不如维生素E(图2(一个)、表2),ASP在抗衰老(图显示一个更深远的影响1、表1)。它提出了一个重要的潜在ASP作为抗衰老的药物和其他潜在的机制可能涉及。

在衰老的过程中,内部和外部因素,包括增加氧化应激和端粒侵蚀,导致积累细胞DNA损伤和DDR激活,启动和维护衰老增长逮捕[8]。如果DNA损伤超过某个阈值,细胞注定要经历凋亡或衰老(38]。此外,DNA双链断裂(双边带)是特别有效的衰老诱导物(8]。ASP对表达的影响γ-H2A。X,双边带的标志,加强了ASP(图的延缓衰老的作用2 (b))。DDR随后触发p16rb和p19-Mdm2-p53-p21途径,这是两个成熟衰老途径参与细胞周期调控。ASP的异位表达显著缓解两个途径(图的主要组件3),和其对双边带的影响是一致的。然而,衰老由p16p21和激活也可以非耦合的DDR [8),留下了一个可能性,ASP对DDR和细胞周期的影响衰老信号是独立的。值得注意的是这两个通路可能最终订婚在持续的衰老,因为DNA损伤最初通过p19细胞周期进程停止-Mdm2-p53-p21;如果病变持续下去,这个激活p16Ink4a分子通过p38-MAPK-mediated线粒体功能障碍和活性氧的生产(39]。因此,欣喜的发现是ASP的抗衰老的效果打断了复发阶段(图6)。

作为主流假设老化的原因,老化的氧化应激理论最近在辩论,因为实验和相关研究并不总是支持的假设高氧化应激导致更短的寿命(40]。新兴的证据表明,变更引起的信号通路干细胞微环境的变化是衰老的重要原因之一12]。其中,Wnt /规范的作用β连环蛋白信号通路在干细胞衰老是有趣的19,20.]。老年小鼠的血清可以激活Wnt /β连环蛋白信号传导,激活β连环蛋白执行细胞周期进入肝星状细胞,从而导致长期干细胞池枯竭。此外,过度的β连环蛋白在成年小鼠肝星状细胞导致multipotential分化的能力受损,疲惫的肝星状细胞,并拒绝造血作用[12,41]。在目前的研究中,ASP显著减毒的过度激活Wnt /β连环蛋白/ TCF-4本来D-gal-induced衰老的信号⁺HSC /手持电脑。此外,GSK-3的磷酸化β,使其失去活性β连环蛋白降解,抑制了ASP治疗(图5)。更重要的是,作为Wnt通路的主要组件之一,GSK3β也是一个相声多个信号转导网络的积分器。例如,GSK3β与Notch信号和PI3K / Akt信号相互作用,这是所有参与干细胞老化(10]。此外,研究表明Wnt和Notch通路属于监管网络电路控制HSC池(42]。因此,除了经典的衰老氧化应激理论,ASP的抗衰老的机制可能是更广泛,它需要进一步调查。

肝星状细胞的衰老与多种造血疾病密切相关。在目前的研究中,我们发现一个非凡的抗衰老的ASP对肝星状细胞的影响,以及影响是由多个机制,包括减少氧化剂压力和DNA损伤和调节伴随老化信号通路。一般来说,ASP,初步提取根的一个主要的组成部分,凸显出中国当归的造血的和免疫原性元素。

相互竞争的利益

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

作者的贡献

新沂μ和yap王的构思和设计实验。张Yanyan静李Jieyu夏,Xiongbin陈做了实验。欣怡μYanyan张分析数据。鹏威京,肖颖的歌,和王陆造成试剂/材料/分析工具。欣怡μ写道。yap王修改了手稿。

确认

这项研究得到了国家自然科学基金(81173398和81173398号)。

补充材料